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1 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 23, 38(5) DOI:.3969/j.issn MicroRNA-2 在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用 杨琼, 杨侃, 李安莹 2, 谭文鹏 (. 中南大学湘雅三医院心内科, 长沙 43;2. 广州医学院第三附属医院心内科, 广州 55) [ 摘要 ] 目的 : 观察 microrna-2(mir-2) 在缺血再灌注损伤 (I/R) 早期大鼠心肌的表达及对细胞凋亡的影响 方法 :SD 大鼠随机分为对照组 ( 冠状动脉注射转染空白对照病毒 raav9-zsgreen),mir-2 组 ( 冠状动脉注射转染 raav9-zsgreen-pre-mir-2),sham 组 ( 仅开胸挂线 ),I/R 组 ( 进行 I/R 处理 ),I/R+miR-2( 转染 raav9-zsgreen-premir-2 后再进行 I/R 处理 ) 用 Realtime-PCR 检测大鼠 mir-2 水平, 免疫组织化学及 Western 印迹方法检测 Bcl-2, Bax,caspase-3 水平并计算 Bcl-2/Bax 比值 结果 : 冠状动脉注射 raav9-zsgreen-pre-mir-2 可使 mir-2 表达增加 4.43 倍 (P<.); 与 Sham 组比较,I/R 组大鼠缺血区 mir-2 水平下调 (P<.5), 而非缺血区 mir-2 升高 (P<.5); 与 Sham 组比较,I/R 组再灌注,2,6 h mir-2 水平进行性下降 (P<.5), 在同一时间点 I/R+miR-2 组较 I/R 组 mir-2 表达升高 (P<.5); 与 Sham 组比较, 再灌注 6 h 时 I/R 及 I/R+miR-2 组 Bcl-2 增高 caspase-3 增高 Bcl-2/Bax 降低 (P<.5), 与 I/R 组比较,I/R+miR-2 组 Bcl-2 下调 caspase-3 下调 Bcl-2/Bax 增高 (P<.5) 结论:I/R 早期大鼠心肌缺血区 mir-2 表达下降, 细胞凋亡增加, 过表达 mir-2 可改善细胞凋亡 [ 关键词 ] microrna;microrna-2; 缺血再灌注损伤 ; 细胞凋亡 Anti-apoptosis and expression of microrna-2 in rat myocardium during early ischemia-reperfusion injury YANG Qiong, YANG Kan, LI Anying, TAN Wenpeng 2 (. Department of Cardiology, Third Xiangya Hospital, Central South University, Changsha 43; 2. Department of Cardiology, Third Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangzhou 55, China) ABSTRACT Objective: To observe the expression and anti-apoptosis of microrna-2(mir-2) in rat myocardium during early ischemia-reperfusion injury (I/R). Methods: Sprague-Dawley rats were randomly divided into 5 groups: a control group (transfected with raav9-zsgreen by coronary injection), a mir-2group (transfected raav9-zsgreen-premir-2 by coronary injection), a sham group (open-chest only), an I/R group (I/R), and an I/ R+miR-2 (I/R after transfected raav9-zsgreen-pre-mir-2 by coronary injection). Realtime PCR was used to assess the expression level of mir-2. Immunohistochemistry and Western blot 收稿日期 (Date of reception): 作者简介 (Biography): 杨琼, 博士研究生, 主治医师, 主要从事冠心病的临床与基础研究 通信作者 (Corresponding author): 杨侃, yangkan@medmail.com.cn

2 484 中南大学学报 ( 医学版 ), 23, 38(5) were used to determine the expression of Bcl-2, Bax, caspase-3 and Bcl-2/Bax. Results: MiR-2 was increased by 4.43 times in the mir-2 group (P<.). MiR-2 was downregulated in the ischemia zone after I/R compared with the sham group (P<.5), but that in the non-ischemia zone was significantly increased compared with the sham group (P<.). MiR- 2 expression was decreased in the I/R group compared with that in the sham group at h, 2 h and 6 h after I/R (P<.5), and it was up-regulated in the I/R+miR-2 group at the same time point compared with the I/R group (P<.). The expression of Bcl-2, Bax, and caspase-3 was upregulated and Bcl-2/Bax was decreased in the ischemia zone in the I/R group and I/R+miR-2 group than the sham group(p<.5). Compared with the I/R group, the expression of Bcl-2 and caspase-3 was down-regulated and Bcl-2/Bax was increased in the ischemia zone in the I/ R+miR-2 group (P<.5). Conclusion: MiR-2 expression is down-regulated and cell apoptosis is increased in rat myocardium during early ischemia-reperfusion injury. Myocardial cell apoptosis may be alleviated by mir-2 over-expression. KEY WORDS microrna; microrna-2; ischemia-reperfusion injury; apoptosis 急性心肌梗死病死率极高, 最有效的治疗方法是尽早再灌注治疗, 但再灌注损伤是无法避免的问题 细胞凋亡是缺血再灌注损伤 (ischemiareperfusion injury,i/r) 的重要环节 [], 多发生在 I/ R 损伤早期 MicroRNA 是一类内源性 非编码 单链 RNA, 参与心血管系统的生理及多种病理过程 MicroRNA-2(miR-2) 在心脏表达丰富, 在肿瘤领域的研究中发现 mir-2 有抗细胞凋亡作用 [2-4] 重组 9 型腺相关病毒 (raav9) 具有嗜心肌性 [5-6], 本研究以 raav9 为载体,ZsGreen 为荧光标记,pre-miR-2 为目的基因建立过表达 mir-2 大鼠, 拟观察 mir- 2 在缺血再灌注损伤早期心肌的表达及其对心肌细胞凋亡的影响 本研究小组前期已报道尾静脉注射 心肌注射和冠状动脉注射三种不同方法转染 raav9-zsgreen 后在大鼠心脏转染效率的比较, 发现使用冠状动脉注射方法转染效率高, 安全性好, 心肌均匀表达 [7] 因此本研究选择冠状动脉注射方法作为转染途径 材料与方法. 材料.. 动物和分组清洁级雄性 SD 大鼠 66 只, 体质量 25~ 3(265±.39) g, 所有动物均由中南大学湘雅三医院动物实验中心提供 [ 实验动物合格证号 SCXK( 湘 )29-4] 随机分为 5 组 :) 对照组 ( n=6): 大鼠通过冠状动脉注射方法转染空白对照病毒 raav9-zsgreen;2) mir-2 组 (n=6): 大鼠通过冠状动脉注射方法转染 raav9-zsgreen-premir-2; 3) sham 组 ( n=8): 大鼠仅开胸挂线 ; 4) I/R 组 ( n=8): 大鼠进行缺血再灌注处理 ;5) I/R+miR-2 组 (n=8): 大鼠冠状动脉转染 raav9- ZsGreen-pre-miR-2 后再进行缺血再灌注处理..2 主要试剂 TRIzol 试剂为美国 Invitrogen 公司生产 ;SYBR Green qrcr Mix 由日本 Toyobo 公司生产 ;mir 反转录试剂盒购自广州复能公司, 由美国 Fermentans 公司生产 ;caspase-3 抗体 ( 货号 ab3235) 由英国 abcam 公司生产 ;Bcl-2 抗体 ( 货号 ab7973) 和 Bax 抗体 ( 货号 ab7977) 由英国 abcam 公司生产 ; 辣根过氧化物酶标记羊抗兔二抗由美国 Vector 公司生产 ;raav9- ZsGreen-pre-miR-2 由深圳百恩维生物公司构建, 制备方法是构建 paav-zsgreen -rno-pre-mir-2 转染 293AAV 细胞, 产生高滴度含目的基因 pre-mir- 2AAV, 滴度为 5. 2 vg/ml 空白对照病毒 raav9-zsgreen 由深圳百恩维生物公司提供, 病毒滴度为 5. 2 vg/ml.2 方法.2. 冠状动脉注射方法转染 raav9-zsgreen-premir-2 或 raav9-zsgreen 对照组 mir-2 组和 I/R+miR-2 组大鼠腹腔注射 % 水合氯醛 (35 mg/kg) 麻醉, 气管插管,

3 MicroRNA-2 在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用杨琼, 等 485 呼吸机支持, 胸骨左缘第 4 肋间开胸, 自制无损伤 血管钳夹闭主动脉 s, 同时左心室腔内注射 2 µl raav9-zsgreen 或 raav9-zsgreen-pre-mir-2, 关胸饲养, 术后连续 3 d 每天每只大鼠注射 万单位青霉素预防感染 4 d 后对照组及 mir-2 组大鼠处死,I/R+miR-2 组大鼠进行缺血再灌注处理 Sham 组和 I/R 组未进行冠状动脉转染.2.2 缺血再灌注大鼠模型的构建 Sham 组 I/R 组和 I/R+miR-2 组大鼠腹腔注射 % 水合氯醛 (35 mg/kg) 麻醉成功后, 仰卧位固定, 无菌条件下开胸, 撕开心包, 暴露心脏, 在肺动脉圆锥及主动脉交界处以下 ~2 mm, 用 5- 带缝合针滑线在左冠状动脉前降支打一活结, 冠状动脉前降支完全阻断成功标志为结扎部位以下心肌颜色变苍白 搏动减弱, 心电图 ST 段明显抬高 缺血 45 min 后解开活结, 恢复前降支血流, 观察 3 min 后关胸 Sham 组仅在左冠状动脉挂线而不结扎.2.3 动物处死 I/R 组和 I/R+miR-2 组大鼠分别于再灌注,2,6 h 处死,sham 组大鼠亦分别在相应时间点处死, 每次 6 只 大鼠拟处死前腹腔注射 % 水合氯醛 (35 mg/kg) 麻醉, 将冠状动脉挂线再次结扎, 经心尖向左室腔注入 4 ml % Evans 蓝, 缺血区呈白色, 非缺血区染成蓝色 迅速剪下心脏, 冰生理盐水冲洗干净, 垂直心脏左室长轴方向在中点将心脏横切为两半 心尖部分 4% 多聚甲醛固定 8 h 后用叠氮化钠保存, 留做形态学检测 心底部分缺血区 非缺血区组织分别放入不同冻存管, 液氮速冻后转入 -8 超低温冰箱保存, 留做分子生物学检测.2.4 各组大鼠心肌 mir-2 的表达将每 mg 组织样本加入 ml TRIzol 试剂, 置于冰上充分匀浆, 经异丙醇沉淀, 得到总 RNA 按反转录试剂盒说明书方法反转录合成第 条 cdna, 再以此 cdna 为模板按 PCR 试剂盒进行 PCR 反应 引物和探针由广州复能基因科技有限公司设计和合成,U6 为内参 预变性 95,3 min, 之后变性 95, s, mir2 U6 引物 58 退火一 Ct 延伸 3 s, 共进行 35 个循环 根据公式 2 计算 mir-2 的相对表达量.2.5 免疫组织化学测大鼠心肌 Bcl-2,Bax 和 caspase-3 的表达组织用石蜡包埋, 切片脱蜡, 水化, 微波抗原修复, 阻断内源性过氧化物酶 min; 非特异性血清封闭 min; 一抗 Bcl-2 滴度为 :2,Bax 滴度为 :2,caspase-3 滴度为 :;4 孵育过 夜 ; 二抗孵育 min, 上述各步骤后均以 PBS 冲洗 min, 重复冲洗 2 次 DAB 显色, 苏木精复染细胞核, 脱水, 透明, 封片, 光学显微镜下观察, 拍照 采用 Image proplus 6. 程序软件进行图像分析, 阳性特异染色面积占组织切片总面积的比例为标志物阳性数值.2.6 Western 印迹检测大鼠心肌 Bcl-2, Bax 和 caspase-3 的表达取待测组织于 EP 管中, 加入蛋白裂解液, 离心沉淀提取全蛋白,Brad-ford 法测定蛋白浓度, 5 min 煮沸 上样量 5 μg/ 泳道,8~2 V 行 SDS-PAGE 凝胶电泳样品, 半干法转移凝胶至 PVDF 膜,5% BSA 慢摇 4 h 封闭 PVDF 膜,TTBS 洗膜后分别加入兔 Bcl-2 多克隆抗体 兔 Bax 多克隆抗体 兔 caspase-3 单克隆抗体,4 过夜, 加入羊抗兔二抗, 慢摇 2 h 后进行 ECL 显色,X 线胶片显影定影, 将胶片进行扫描, 用图像分析软件 Image proplus 6. 对图像进行灰度分析.3 统计学处理应用 SPSS3. 软件包进行统计分析 计量资料以均数 ± 标准差 (x±s) 表示, 对计量资料进行正态性检验, 两组间比较采用 t 检验, 多组间比较采用 One-Way ANOVA 分析法 ( 分析前先进行方差齐性检测 ), 多组间均数的两两比较采用 LSD-t 检验 以 P<.5 为差异有统计学意义 2 结果 2. 各组大鼠心肌 mir-2 的表达 mir-2 组大鼠经冠状动脉注射 raav9-zsgreenpre-mir-2 后心脏 mir-2 表达量较对照组增加 4 倍以上 与 sham 组比较,I/R 组大鼠缺血区 mir-2 表达下调,I/R+miR-2 组在 6 h mir-2 表达下调 ; 但 I/R+miR-2 组在,2,6 h mir-2 表达均高于 I/R 组 ( 表 ) 2.2 各组大鼠心肌缺血区 Bcl-2, Bax, caspase-3 水平与 sham 组比较, 缺血再灌注 6 h I/R 组大鼠心肌组织结构紊乱, 细胞核不规则, 可见炎性细胞浸润,Bcl-2 表达增高,I/R+miR-2 组心肌组织结构稍紊乱, 炎性细胞浸润减少,Bcl-2 表达明显增强 ( 图 ); I/R 组 Bax 水平明显上调,Bcl-2/Bax 下降 ;I/R+miR-2 组 Bax 表达升高,Bcl-2/Bax 上调 ( 图 2);I/R 组 caspase-3 水平上调 ;I/R+miR-2 组 caspase-3 轻度升高 ( 图 3)

4 486 中南大学学报 ( 医学版 ), 23, 38(5) 表 各组大鼠心肌 mir-2 相对水平 (mir-2/β-actin) Table Relative expression of mir-2 in rat's myocardium 组别 I/R 前 I/R h 2 h 6 h 对照组.2±.7 mir ±.5 Sham.5±.39.±.4.99±.2 I/R.82±.2 #.6±.5 #.52±.2 # I/R+miR ±.32 ##a.2±.28 a.8±.9 #a 与对照组比较, P<.5; 与 sham 组比较, # P<.5, ## P<.; 与 I/R 组同一时间点比较, a P<.5 与 sham 组比较, 非缺血区 mir-2 水平在再灌注 2,6 h 逐渐升高 ( 分别为.42±.9,.82±.3,P<.) A 2.5 # Bcl-2 β-actin Relative Bcl-2 expression (Bcl-2/β-actin) Sham I/R I/R+miR-2 B 图 缺血再灌注 6 h 各组大鼠 Bcl-2 的表达 A: 免疫组织化学方法检测各组大鼠心肌缺血区 Bcl-2 表达 ( 4), 与 sham 组比较,I/R 组增高,I/R+miR-2 组表达更高 (P<.5);B:Western 印迹方法检测各组大鼠心肌缺血区 Bcl-2 蛋白水平, 与 sham 组比较, P<.5; 与 I/R 组比较, # P<.5 Figure Bcl-2 expression in rat myocardium at 6 h after I/R. A: Bcl-2 expression was detected by immunohistochemistry( 4). Bcl- 2 expression was up-regulated in ischemia zone in the I/R group and I/R+miR-2 group (P<.5 vs the sham group), and that was higher in the I/R+miR-2 group than the I/R group; B: Bcl-2 expression was determined by Western blot. P<.5 vs the sham group; # P<.5 vs the I/R group.

5 MicroRNA-2 在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用杨琼, 等 487 A Sham 组 I/R 组 I/R+miR-2 组 Bax β-actin Relative Bax expression (Bax/β-actin) Sham I/R I/R+miR-2 Sham I/R I/R+miR-2 B Bcl-2/Bax # C 图 2 缺血再灌注 6 h 各组大鼠 Bax 的表达 A: 免疫组织化学方法检测各组大鼠心肌缺血区 Bax 表达 ( 4), 与 sham 组比较,I/R 和 I/R+miR-2 组表达升高 (P<.5);B:Western 印迹方法检测各组大鼠心肌缺血区 Bax 蛋白水平, 与 sham 组比较, P<.5;C: 各组 Bcl-2/Bax 值比较, 与 sham 组 Bcl-2/Bax 值比较, P<.5; 与 I/R 组比较, # P<.5 Figure 2 Bax expression in rat myocardium at 6 h after I/R. A: Bax expression was detected by immunohistochemistry ( 4). Bax expression was up-regulated in ischemia zone in the I/R group and I/R+miR-2 group (P<.5 vs the sham group); B: Bax expression was determined by Western blot, P<.5 vs the sham group; C: Comparison of Bcl-2/Bax, P<.5 vs the sham group, # P<.5 vs the I/R group. 图 3 caspase-3 β-actin Relative caspase-3 expression (caspase-3/β-actin) Sham I/R I/R+miR-2 缺血再灌注 6 h 各组大鼠 caspase-3 的表达 A: 免疫组织化学方法检测各组大鼠心肌缺血区 caspase-3 表达 ( 4), 与 sham 组比较,I/R 和 I/R+miR-2 组表达升高 (P<.5); 与 I/R 组比较,I/R+miR-2 组水平降低 (P<.5);B:Western 印迹方法 检测各组大鼠心肌缺血区 caspase-3 蛋白水平, 与 sham 组比较, P<.; 与 I/R 组比较, # P<.5 Figure 3 Caspase-3 expression in rat myocardium at 6 h after I/R. A: Caspase-3 expression was detected by immunohistochemistry ( 4). Caspase-3 expression was up-regulated in ischemia zone in the I/R group and I/R+miR-2 group (P<.5 vs the sham group), and that was down-regulated in the I/R+miR-2 group (P<.5 vs the I/R group); B: Caspase-3 expression was determined by Western blot, P<. vs the sham group; # P<.5 vs the I/R group # A B

6 488 中南大学学报 ( 医学版 ), 23, 38(5) 讨论 本研究采用冠状动脉注射. 2 vg/ 只病毒 量的方法在体内转染 raav9- ZsGreen-pre-miR-2 至大鼠心肌, 观察到转染后心肌 mir-2 的表达量可以提高 4.43 倍 提示对大鼠心肌组织进行基因转染时,AAV9 是较为理想的病毒载体 [8] mir-2 在大鼠 I/R 心脏表达异常 Tang 等发现在小鼠缺血 3 min 再灌注 24 h 心肌组织 mir-2 [9] 表达下降 ;Dong 等观察到大鼠持续缺血 6,24 h 的心肌梗死区 mir-2 表达下降 本研究发现大鼠缺血 45 min 再灌注心肌缺血区 mir-2 表达降低, 且在,2,6 h 呈进行性下降, 与文献报道相似, [] 但在非缺血区 mir-2 表达升高 Roy 等报道小鼠缺血 3 min, 再灌注 2,7 d 心肌梗死区 mir-2 表达升高, 且主要在成纤维细胞中高表达, 认为可能由于 I/R 晚期心肌细胞部分已坏死, 梗死区以修复为主,miR-2 抑制心脏成纤维细胞凋亡, 从而促进修复 因此, 本研究认为 I/R 早期, 缺血区 mir- 2 表达下调可能与缺血区心肌细胞凋亡相关, 与 [-3] 文献报道一致 ; 而非缺血区 mir-2 的升高可能与机体代偿修复反应有关, 具体机制不明, 但 I/R 中 晚期 mir-2 的表达本研究未做观察 缺血再灌注可诱发心肌细胞凋亡, 细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤机制中的重要环节 [] 细胞凋亡的多少决定缺血再灌注损伤的严重程度, 因此, 有效抑制细胞凋亡的发生 发展, 是减轻心肌缺血再灌注损伤的重要途径 Bcl-2 是被确认有抑制凋亡作用的基因 [4], Bcl-2/Bax 决定细胞是否进入凋亡途径, 当其比值下降时细胞发生凋亡, 而 caspase-3 被认为是细胞凋亡过程的主要执行者 [5], 因此,Bcl-2, Bcl-2/Bax, caspase-3 是反映凋亡的经典的指标 本研究发现 I/R 处理后大鼠心肌缺血区组织结构紊乱, 细胞核不规则,Bcl- 2/Bax 降低,caspase-3 上调, 提示细胞凋亡明显, 过表达 mir-2 后, 大鼠心肌缺血区组织结构稍紊乱, 炎性细胞浸润减少,Bcl-2/Bax 表达上调, [9] caspase-3 表达下降, 提示细胞凋亡改善 Dong 等报道缺血预处理后结扎大鼠冠状动脉 6 h, 心肌梗死区 mir-2 降低的趋势得到改善, 凋亡细胞减少, [6] 梗死面积减少 ;Cheng 等报道大鼠心肌缺血预适应处理后, 心肌组织 mir-2 的表达增加, 抑制 mir- 2 后, 缺血预适应的心肌保护作用减弱, 与本研究结论一致 通过本研究发现 I/R 早期大鼠心肌缺血区 mir- 2 表达下调,Bcl-2/Bax 下降,caspase-3 升高, 心肌细胞凋亡, 且随再灌注时间延长凋亡进展 ; 过表 达 mir-2 后减少细胞凋亡, 提示 mir-2 可抑制细胞凋亡 但 mir-2 通过何种机制在 I/R 中抗细胞凋亡尚不清楚, 有待于今后进一步研究 参考文献. Scarabelli TM, Knight R, Stephanou A, et al. Clinical implication of apoptosis in ischemic myocardium[ J]. Curr Probl Cardiol, 26, 3(3): Jalava SE, Urbanucci A, Latonen L, et al. Androgen-regulated mir- 32 targets BTG2 and is overexpressed in castration-resistant prostate cancer[ J]. Oncogene, 22, 3(4): Li LQ, Li XL, Wang L, et al. Matrine inhibits breast cancer growth via mir-2/pten/akt pathway in MCF-7 cells[ J]. Cell Physiol Biochem, 22, 3(3): Uboldi S, Calura E, Beltrame L, et al. A systems biology approach to characterize the regulatory networks leading to trabectedin resistance in an in vitro model of myxoid liposarcoma[ J]. PLoS One, 22, 7(4): e Inagaki K, Fuess S, Storm TA, et al. Robust systemic transduction with AAV9 vectors in mice: efficient global cardiac gene transfer superior to that of AAV8[ J]. Molec Ther, 26, 4(): Zincarelli C, Soltys S, Rengo G, et al. Analysis of AAV serotypes -9 mediated gene expression and tropism in mice after systemic injection[ J]. Mol Ther, 28, 6(6): 谭文鹏, 杨侃, 李安莹, 等. 腺相关病毒载体介导 ZsGreen 基因通过 3 种转染途径在心肌组织转染效果的比较 [ J]. 重庆医科大学学报, 22, 37(6): TAN Wenpeng, YANG Kan, LI Anying, et al. Comparison on three transfection methods for ZsGreen gene expression mediated by adenoassociated virus in the myocardium of rats[ J]. Journal of Chongqing Medical University, 22, 37(6): Tang Y, Zheng J, Sun Y, et al. Microrna- regulates cardiomyocyte apoptosis by targeting Bcl-2[ J]. Int Heart J, 29, 5(3): Dong S, Cheng Y, Yang J, et al. Microrna expression signature and the role of microrna-2 in the early phase of acute myocardial infarction[ J]. J Biol Chem, 29, 284(43): Roy S, Khana S, Hussain SR, et al. MicroRNA expression in response to murine myocardial infarction: mir-2 regulates fibroblast metalloprotease-2 via phosphatase and tensin homologue[ J]. Cardiovasc Res, 29, 82(): Qin Y, Yu Y, Dong H, et al. MicroRNA 2 inhibits left ventricular remodeling in the early phase of rat model with ischemia-reperfusion injury by suppressing cell apoptosis[ J]. Int J Med Sci, 22, 9(6): Liu F, Yin L, Zhang L, et al. Trimetazidine improves right ventricular

7 MicroRNA-2 在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用杨琼, 等 489 function by increasing mir-2 expression[ J]. Int J Mol Med, 22, 3(4): Xu X, Kriegel AJ, Liu Y, et al. Delayed ischemic preconditioning contributes to renal protection by upregulation of mir-2[ J]. Kidney Int, 22, 82(): Kilbride SM, Prehn JH. Central roles of apoptotic proteins in mitochondrial function[ J]. Oncogene, 22, 348(): Sykes MC, Mowbray AL, Jo H. Reversible glutathiolation of caspase-3 by glutaredoxin as a novel redox signaling mechanism in tumor necrosis factor-alpha-induced cell death[ J]. Circ Res, 27, (2): Cheng Y, Zhu P, Yang J, et al. Ischemic preconditioning-regulated mir- 2 protects heart against ischemia/reperfusion injury via anti-apoptosis through its target PDCD4[ J]. Cardiovasc Res, 2, 87(3): ( 本文编辑彭敏宁 ) 本文引用 : 杨琼, 杨侃, 李安莹, 谭文鹏. MicroRNA-2 在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用 [ J]. 中南大学学报 : 医学版, 23, 38(5): DOI:.3969/ j.issn Cite this article as: YANG Qiong, YANG Kan, LI Anying, TAN Wenpeng. Anti-apoptosis and expression of microrna-2 in rat myocardium during early ischemia-reperfusion injury[ J]. Journal of Central South University. Medical Science, 23, 38(5): DOI:.3969/j.issn 国际病理科学与临床杂志 23 年征订启事 国际病理科学与临床杂志 ( 原名 国外医学 生理 病理科学与临床分册 ) 创刊于 98 年, 为教育部主管 中南大学主办的国家级医学学术期刊, 为 中国科技核心期刊 ( 中国科技论文统计源期刊 ), 并被美国 化学文摘 (CA) 等国内外多家重要数据库和检索系统收录, 被评为 第 2 届中国高校特色科技期刊, 第 3 届中国高校优秀科技期刊, 第 4 届中国高校优秀科技期刊, 已成为病理科学与临床医学领域中颇具影响力的期刊 本刊为双月刊, 逢双月末出版,6 开, 国内外公开发行 定价 5 元 / 期, 全年定价 9 元, 国内统一刊号 : CN /R, 国际标准刊号 :ISSN ; 国内邮发代号 :42-35, 国外邮发代号 :BM6564; 各地邮局 ( 所 ) 均可订阅, 漏订者也可直接汇款至湖南省长沙市湘雅路 号湘雅医学院 5 号信箱 国际病理科学与临床杂志 编辑部, 邮政编码 :478, 订阅者请在汇款单附言注明所订刊物的年度 期号和册数 编辑部电话 : , ; 传真 : gwyxxy@26.com; gwyxxy@vip.63.com 国际病理科学与临床杂志 编辑部

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