882 临床与病理杂志, 2017, 37(5) Keywords the left renal were used to evaluate pathology changes of rats kidney tissue with HE and M

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1 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2017, 37(5) doi: /j.issn View this article at: 川芎嗪对肾间质纤维化中 TGF-β1/miR-29 表达的影响 徐梅 1,2 1,2, 孙升云 (1. 暨南大学医学院中医学院, 广州 ;2. 暨南大学第一附属医院广州华侨医院中医科, 广州 ) [ 摘要 ] 目的 : 观察川芎嗪 (tetramethylpyrazine,tmp) 对单侧输尿管结扎 (unilateral ureteral obstruction, UUO) 大鼠模型肾间质纤维化 (renal interstitial fibrosis,rif) 间质损伤及 TGF-β1/miR-29 表达的影响 方法 :50 只雄性 Wistar 大鼠随机分为 5 组 : 正常对照组 (Ctrl 组 ) 假手术组(Sham 组 ) 模型组 (UUO 组 ) 缬沙坦组(VAN 组 ) 和 TMP 组各 10 只 经相应处理后, 通过 HE,Masson 染色观察肾组织的病理学表现 ; 同时采用 SP 免疫组织化学法检测各组病变组织中 TGF-β1 的表达情况 ; 最后采用 RT-PCR 技术比较各组 TGF-β1,miR-29 基因的表达 结果 :HE 染色结果显示 Ctrl 组 Sham 组 UUO 组 VAN 组及 TMP 组的肾间质损伤评分分别为 0.27±0.10,0.30±0.12,8.79±1.03,6.23±0.81 及 4.57±0.74 Masson 染色胶原半定量分析结果显示 Ctrl 组 Sham 组 UUO 组 VAN 组及 TMP 组的评分分别为 0.21±0.03,0.23±0.06,2.49±0.33,1.63±0.07 及 1.32±0.04 SP 免疫组织化学染色显示模型组 TGF-β1 的蛋白表达高于对照组 ; 而缬沙坦和 TMP 可部分逆转 TGF-β1 蛋白的表达, 且 TMP 的效果优于缬沙坦 RT-PCR 结果显示模型组的 TGF-β1 mrna 表达增高 mir-29 mrna 表达降低 TMP 组和缬沙坦组 TGF-β1 mrna 表达明显低于模型组, 而 mir-29 mrna 表达则明显高于模型组 ; 且 TMP 组 TGF-β1 mrna 表达高于缬沙坦组 结论 : 缬沙坦和 TMP 可明显减轻 UUO 致 RIF 中肾组织学损伤, 且 TMP 的疗效优于缬沙坦 此外 TMP 还可抑制 TGF-β1 而促进 mir-29 的表达 [ 关键词 ] 单侧输尿管结扎术 ; 肾间质纤维化 ; 川芎嗪 ;TGF-β1;miR-29 Effect of tetramethylpyrazine on TGF-β1/miR-29 expression in renal interstitial fibrosis XU Mei 1,2, SUN Shengyun 1,2 (1. School of Traditional Chinese Medicine, School of Medicine, Jinan University, Guangzhou ; 2. Department of Traditional Chinese Medicine, First Affiliated Hospital of Jinan University, Guangzhou Overseas Chinese Hospital, Guangzhou , China) Abstract Objective: To observe the effect of tetramethylpyrazine (TMP) on renal interstitial fibrosis, interstitial injury and TGF-β1/miR-29 expression in UUO model rats. Methods: Fifty male Wistar rats were randomly divided into five groups: normal control group (Ctrl), sham operation group (Sham), model group (UUO), valsartan group (VAN) and TMP group (TMP) with 10 in each group. After corresponding treatment, all rats were sacrificed and 收稿日期 (Date of reception): 通信作者 (Corresponding author): 孙升云, gzssy@163.com 基金项目 (Foundation item): 广东省中医药局科研项目 ( ); 广东省科技计划项目 (2014A ) This work was supported by Project of Administration of Traditional Chinese Medicine of Guangdong Province ( ) and Science and Technology Planning Project of Guangdong Province (2014A ), China.

2 882 临床与病理杂志, 2017, 37(5) Keywords the left renal were used to evaluate pathology changes of rats kidney tissue with HE and Masson staining; while using SP immunohistochemical method to detect the lesions in the expression of TGF-β1; and finally compare the gene expression of TGF-β1 and mir-29 in each group of by RT-PCR assay. Results: HE staining results showed that the interstitial injury scores of Ctrl, Sham, UUO, VAN and TMP group were 0.27±0.10, 0.30±0.12, 8.79±1.03, 6.23±0.81 and 4.57±0.74, respectively. The results of Masson staining showed that scores of Ctrl, Sham, UUO, VAN and TMP group were 0.21±0.03, 0.23±0.06, 2.49±0.33, 1.63±0.07 and 1.32±0.04, respectively. SP immunohistochemical staining showed that compared with the control group, model group has a higher expression of TGF-β1, while treatment with valsartan and TMP could reverse the up-regulation of TGF-β1 and TMP is more effective than valsartan. RT-PCR results showed that TGF-β1 mrna expression was increased, while mir-29 mrna expression decreased in model group. VAN group and TMP group have a significantly lower expression of TGF-β1 mrna level compared to the model group, while mir-29 mrna expression was significantly higher in both VAN group and TMP group; and TGF-β1 mrna expression in the TMP group was higher than that in VAN group. Conclusion: Valsartan and TMP could significantly reduce the renal histological damage in renal interstitial fibrosis and TMP is more effective than valsartan. Furthermore, TMP could inhibit TGF-β1 gene expression, while promoting the mir-29 expression. unilateral ureteral obstruction; renal interstitial fibrosis; tetramethylpyrazine; TGF-β1; mir-29 肾间质纤维化 (renal interstitial fibrosis,rif) 是继发于各种慢性肾病 (chronic kidney disease, CKD) 后损伤组织修复过程中的一种自身代偿机 制, 在肾功能减退的发生发展进程中发挥至关重 要的作用, 严重威胁人类的健康 [1-3] 因此, 探讨 RIF 的发病机制 寻找抗 RIF 的活性成分和作用靶 点对控制 CKD 的转归具有重要的临床意义 随着 传统中医药事业的进一步发展, 广大科研工作着 渐渐意识到其在防治复杂疾病上的巨大优势和广 阔前景 许多具有活血化瘀作用的中草药可抑制 纤维结缔组织增生及变质, 改善局部组织微循环 障碍, 因而对 RIF 具有潜在的治疗作用 [4] 川芎 嗪 (tetramethylpyrazine,tmp) 是中药川芎的主要 [5-6] 活性成分之一, 药效学研究显示其可改善微循 环 减少氧自由基 抗组织纤维化 目前,TMP 除广泛用于脑血栓 冠心病 脉管炎等传统的心 脑血管闭塞性疾病之外, 还可在肝 肺 腹膜的 纤维化治疗中可有效降低组织的胶原含量, 改善 纤维化的效应 关于 TMP 在防治 RIF 中的作用, 研 [7-9] 究显示其可改善肾损伤状态下成纤维细胞的转 化, 并影响 MMP-9 等分子的表达, 进而减缓肾纤 维化的病情进展 但是其抗纤维化的机理及在防 治 RIF 中的临床应用还有待进一步的研究 结合以上背景, 本实验选用单侧输尿管结扎 (unilateral ureteral obstruction,uuo) 致 RIF 模型, 检测 TMP 能否减少细胞外基质积聚, 从而延缓或 阻滞其纤维化, 为临床治疗和用药提供一定的实 验依据 ; 并初步探讨其抗 RIF 作用机制 1 材料与方法 1.1 材料 动物 6~8 周龄 清洁级 雄性 Wistar 大鼠 (180~220 g) 50 只购自南方医科大学实验动物中心, 实验动物许可证号 :SYXK( 粤 ) , 饲养于暨南大学医学院实验动物中心 饲养 手术 给药及取材等环节均严格遵守暨南大学动物管理委员会管理条例 试剂和仪器盐酸 TMP 注射液购自上海现代哈森药业有限公司 ( 规格 :40 mg:2ml); 缬沙坦胶囊 ( 代文 ) 购自北京诺华制药有限公司 (lot:x1436); 马松 (Masson) 三色法染色试剂盒购自上海博谷生物科技有限公司 (PT003); 即用型 SP(Streptavidin-Peroxidase) 免疫组织化学试剂盒购自北京绿源大德生物科技有限公司 ( 进口分装 ); 反转录试剂盒 荧光定量 PCR 试剂盒 (FP302) 均购自北京天根生物技术有限公司 ;mirna RT PCR 试剂盒购自日本 TAKARA 公司 (203301) 1.2 方法 模型的制备和分组随机将所有大鼠分为 5 组, 每组 10 只 : 正常对照组 (Ctrl 组 ) 假手术组(Sham 组 ) 模型组(UUO

3 川芎嗪对肾间质纤维化中 TGF-β1/miR-29 表达的影响徐梅, 等 883 组 ) 缬沙坦组 TMP 组 假手术组只行腹部切 开, 不进行输尿管结扎 ; 模型组 (UUO 组 ) 缬沙 坦组 TMP 组均行 UUO 术 各组于术前 3 d 开始给 药,TMP 组每天给予 TMP 30 mg/kg 灌胃 ; 缬沙坦 组每天给予缬沙坦 8 mg/kg 灌胃 ; 正常组及假手术 组予 2 ml 等量蒸馏水灌胃 UUO 模型的制备 : 术 前 12 h 禁食, 术前 4 h 禁水 麻醉后取右侧卧位将 大鼠固定后, 常规消毒 在其左肋下和脊柱旁约 一横指处取术口, 备皮后切开皮肤, 钝性分离相 关组织和肌群后暴露肾, 沿肾往下寻找并游离输 尿管 然后用 5-0 号手术结扎线先在输尿管部位进 行结扎, 再在肾下极紧靠肾盂处作两处结扎, 而 后离断 复位肾 逐次缝合并消毒包扎即可 假 手术组仅游离输尿管不结扎 术后管理 观察并记录大鼠的一般生存状态 ; 术后第 1 天 开始, 每 3 天测量并记录血压值和体重值 实验结 束时 ( 术后第 14 天 ) 取材并制作标本 : 麻醉后, 迅速 切开腹腔 ; 然后迅速游离双侧肾, 对半切开, 用生 理盐水冲洗后称量双侧肾湿重 取左侧肾一半组织 放入 10% 中性甲醛溶液中固定 6~24 h 后用于作病理 染色及免疫组织化学 ; 剩下一半组织则放入 80 冰箱中冷冻保存, 用于作 RT-PCR 等检测 HE 染色 取经 10% 中性甲醛溶液固定的肾组织, 梯度脱 水机透明化处理后浸入石蜡中包埋, 而后用切片 机制成约 5~7 mm 厚的石蜡切片 二甲苯常规脱蜡 后经各级乙醇至水化处理, 然后依次使用苏木精 伊红染液进行染色, 最后常规进行脱水 透明化 及封片处理 [10] HE 染色结果参考 Lee 等的肾间质损伤评分 方法 : 光学显微镜下, 每个标本上随机选取 10 个 皮质区视野 ( 不含肾小球 ), 然后依据肾间质损伤的 8 个参数指标判定肾小管间质的损伤指数 ( 肾小管 上皮细胞空泡变性及坏死 肾小管扩张或萎缩 蛋白管型 红细胞管型 间质炎性细胞浸润 间 质水肿 间质纤维化 ) 每个参数指标按正常 =0, 轻度受损 =1, 中度受损 =2, 重度受损 =3 分级进行 打分, 每个标本中肾小管间质损伤的总分为所观 察 10 个视野的均值 Masson 染色 石蜡切片经二甲苯常规脱蜡后和各级乙醇至 水化处理后, 依据上海博谷生物科技有限公司提 供的 Masson 三色法染色试剂盒说明书进行染色 处理 肾间质相对面积的评定方法釆用 Mizuguchi [11] 等描述的半定量分析方法, 光学显微镜下, 随 机在每个标本中选取 10 个不重复的肾小管间质视 野, 以蓝色胶原沉积为阳性信号, 依据视野中阳 性染色面积在整个视野面积中所占的比例评估胶 原的沉积情况 病变范围 <2%=0( 正常 ) 病变范围 2%~25%=1( 轻度损伤 ) 病变范围 26%~50%=2( 中度 损伤 ) 病变范围 >50%=3( 重度损伤 ) 免疫组织化学 SP 染色 依据北京绿源大德生物科技有限公司提供的 试剂盒说明书进行染色处理 染色结果采用专业图像分析软件 Image-Pro Plus 6.0 进行分析 每个样本随机选取 10 个不重复 的视野, 取其均值为最后结果进行统计学分析 分 析其阳性染色光密度及面积占视野总面积的百分 比 阳性染色结果的判定标准为组织被染成呈棕黄 色, 而阴性染色结果则以淡蓝色部分为代表 荧光定量 PCR 各实验动物组织中总 RNA 的抽提参照操作手 册采用 TRIzol 法进行,2% 的琼脂糖凝胶电泳检测 分析 RNA 的纯度和浓度后, 依据试剂盒说明书反 转录合成 cdna 而后采用 SYBR Green I Real-time PCR 的方法检测 mrna 的相对表达 引物设计 TGFβ1-F:5'-CTAATGGTGGACCGCAACAAC-3';TGF- β1-r:5'-cactgcttcccgaatgtctga-3';mir- 29-F:5'-CCGAGCGTTGAAATCAGTGTTAAA-3'; mir-29-r:5'-cggaattcaaaaagcctccga-3'; U6-F:5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3';U6-R: 5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3' PCR 反应条件为 95 预变性 5 min; 95 5 s, s, 共 40 个循环 记录 Ct 值并采用 2 Ct 法分析 mrna 的相对表达量 1.3 统计学处理 各实验数据数据均以均数 ± 标准差 ( x ± s ) 表 示, 结果采用 SPSS13.0 统计学分析软件进行统计 本实验数据为多组定量数据两两比较, 两两比较 选用采用 Benferroni 校正的 t 检验或单因素方差分析 进行统计分析 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 一般状态分析 实验过程中 Ctrl 组及 Sham 组大鼠的进食和大 小便均表现正常, 动物毛发整齐致密且光泽度 高, 尾部红润, 反应机敏 动作灵活 UUO 组 VAN 组和 TMP 组的大鼠随实验的进行进食均出现不

4 884 临床与病理杂志, 2017, 37(5) 同程度的减少, 但尿量逐渐增多, 大便干结量少, 至晚期动物开始出现不同程度的毛发脱落 毛发色泽明显暗淡, 尾部湿冷, 活动量减少, 精神萎靡不振, 其中模型组大鼠的上述表现最为明显 2.2 血压 体重及肾指数分析血压变化结果显示 ( 表 1): 实验过程中,Ctrl 组与 Sham 组大鼠血压基本维持不变 ;UUO 组 VAN 组和 TMP 组大鼠的血压则随实验的进行逐步升高 造模 14 d 后, 与假手术组比较,UUO 组 VAN 组和 TMP 组大鼠血压均明显升高, 差异有统计学意义 (P<0.05); 且缬沙坦组和 TMP 组大鼠血压明显低于模型组, 差异有统计学意义 (P<0.05); 但 TMP 组大鼠血压与缬沙坦组血压无明显差异, 差异无统计学意义 (P>0.05) 体重变化结果显示 ( 图 1): 实验过程中,Ctrl 组与 Sham 组大鼠体重逐渐增加 ;UUO 组 VAN 组和 TMP 组大鼠体重也会出现缓慢增加 造模 10 d 后, 与 Sham 组比较,UUO 组 VAN 组和 TMP 组大鼠体重均明显下降, 差异有统计学意义 (P<0.05); 且缬沙坦组和 TMP 组大鼠体重明显高于 UUO 组, 差异有统计学意义 ( P<0.05) 此外, 在造模 10 d 后,TMP 组大鼠体重明显高于后缬沙坦组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 实验结束时测定肾指数发现 ( 表 2): 与 Sham 组比较,UUO 组 缬沙坦组和 TMP 组大鼠肾指数均出现不同程度的升高, 差异有统计学意义 (P<0.05); 但缬沙坦组和 TMP 组大鼠肾指数明显低于模型组, 差异有统计学意义 (P<0.05);TMP 组与缬沙坦组则无明显差异 表 1 不同时间点各组大鼠血压的变化 Table 1 Blood pressure of rats at each time point. 分组 造模前 /mmhg 造模后 /mmhg 1 d 4 d 7 d 10 d 14 d Ctrl 组 113± ± ± ± ± ±4.61 Sham 组 112± ± ± ± ± ±5.42 UUO 组 110± ± ± ± ± ±4.24 # VAN 组 114± ± ± ± ± ±5.51 # * TMP 组 112± ± ± ± ± ±4.29 # * 1 mmhg=0.133 kpa 与 Sham 组比较, # P<0.05; 与 UUO 组比较,*P< mmhg=0.133 kpa. Compared with Sham group, # P<0.05; compared with UUO group, *P<0.05. 体重 /g Ctrl Sham UUO VAN TMP * * 造模前造模后 1 d 4 d 7 d 10 d 14 d # # 表 2 各组大鼠的肾指数 Table 2 Kidney index of rats in each group 分组造模后 14 d/% Ctrl 组 0.74±0.06 Sham 组 0.73±0.07 UUO 组 7.19±1.28 # VAN 组 4.73±1.12 # * TMP 组 5.09±1.09 # * 与 Sham 组比较, # P<0.05; 与 UUO 组比较,*P<0.05 Compared with Sham group, # P<0.05; compared with UUO group, *P<0.05. 图 1 各组大鼠的体重情况 Figure 1 Body weight of rats in each group 与 Sham 组比较, # P<0.05; 与 UUO 组比较, Δ P<0.05; 与 VAN 组比较,*P<0.05 Compared with Sham group, # P<0.05; compared with UUO group, Δ P<0.05; compared with VAN group, *P< 大鼠左侧肾组织学病理分析光镜下观察各组大鼠 HE 染色切片 ( 图 2), 可见 Ctrl 组与 Sham 组大鼠肾小管上皮细胞排列紧密整齐, 胞质丰富, 肾小管管腔窄, 间质面积较小且

5 川芎嗪对肾间质纤维化中 TGF-β1/miR-29 表达的影响徐梅, 等 885 无明显炎症细胞浸润 ;UUO 组可观察到肾盂的明显扩张以及肾小管的明显组织学改变, 部分可见肾间质水肿, 间质面积明显增宽, 成纤维细胞增多, 出现 RIF 与 UUO 组比较, 缬沙坦组和 TMP 组的肾组织学改变程度有所减轻 Ctrl 组 Sham 组 UUO 组 VAN 组及 TMP 组的肾间质损伤评分分别为 0.27±0.1,0.30±0.12,8.79±1.03,6.23±0.81 及 4.57±0.74; 缬沙坦组和 TMP 组的肾间质损伤指数评分显著低于模型组, 且 TMP 组的损伤评分明显低于缬沙坦组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 光镜下观察各组大鼠 Masson 染色切片 ( 图 3), 可见 Ctrl 组和 Sham 组大鼠肾组织中肾小管基底膜及周围脉管区有蓝染的胶原沉积区域 UUO 组可见间质明显变宽且其中可见大量的条索状蓝染的胶原沉积区域, 而肾小管上皮细胞的红染明显变淡, 提示肾小管上皮细胞受损, 出现间质纤维化 与模型组比较, 缬沙坦组和 TMP 组的肾脏组织学改变程度有所减轻, 染色面积显著降低, 且 TMP 组的染色面积明显低于缬沙坦组, 差异有统计学意义 (P<0.05) Masson 染色胶原半定量分析结果显示 :Ctrl 组 Sham 组 UUO 组 VAN 组及 TMP 组的评分分别为 0.21±0.03, 0.23±0.06, 2.49±0.33, 1.63±0.07 及 1.32±0.04; 缬沙坦组和 TMP 组的染色面积显著低于模型组, 且 TMP 组的染色面积明显低于缬沙坦组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 2.4 大鼠肾组织中 TGF-β1 的表达 SP 免疫组织化学检测各组大鼠肾组织中 TGF-β1 的表达情况, 结果显示 ( 图 4):Ctrl 组和 Sham 组大鼠肾组织中极少出现 TGF-β1 的阳性染色颗粒, 着色浅淡 UUO 组则在肾小管上皮细胞和肾间质明显可见条索状 TGF-β1 棕黄色染色颗粒, 着色较深 缬沙坦组和 TMP 组也可检测到不同程度的 TGF-β1 阳性染色颗粒, 但着色比模型组较浅, 且着色面积显著降低, 差异有统计学意义 (P<0.05), 其中缬沙坦组的 TGF-β1 阳性染色颗粒及着色面积明显低于 TMP 组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 2.5 大鼠肾组织中 TGF-β1 和 mir-29 的基因表达 RT-PCR 技术进一步检测了各组大鼠肾组织中 TGF-β1 和 mir-29 的基因表达情况, 结果显示 ( 图 5): Ctrl 组和 Sham 组中可检测到 TGF-β1 和 mir-29 mrna 的表达, 且两组差异无统计学意义 ( P>0.05); 与 Sham 组相比,UUO 组 TGF-β1 的 mrna 表达量明显增多, 而 mir-29 mrna 表达明显减少, 差异有统计学意义 (P<0.05); 缬沙坦组和 TMP 组的 TGF-β1 mrna 表达明显低于模型组, 而 mir-29 mrna 表达高于模型组, 差异有统计学意义 (P<0.05); 且 TMP 组的 TGF-β1 mrna 表达水平明显低于缬沙坦组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 说明缬沙坦和 TMP 均可促进 RIF 组织中 TGF-β1 mrna 的表达, 而抑制 mir-29 的表达 ; 且 TMP 这一作用更加显著 Ctrl 组 Sham 组 UUO 组 VAN 组 TMP 组 图 2 HE 染色检测各组大鼠肾组织病理变化 ( 200) Figure 2 Histological changes in renal tissue of rats in each group detected by HE staining ( 200)

6 临床与病理杂志, 2017, 37(5) Ctrl组 VAN组 Sham组 UUO组 TMP组 图3 Masson染色检测各组大鼠肾组织胶原沉积( 200) Figure 3 Collagen deposition in renal tissue of rats in each group detected by Masson staining ( 200) Ctrl组 VAN组 Sham组 UUO组 TMP组 图4 SP免疫组织化学检测各组大鼠肾组织中TGF-β1的表达( 200) Figure 4 Expression of TGF-β1 in renal tissue of rats in each group detected by SP immunohistochemical staining ( 200)

7 川芎嗪对肾间质纤维化中 TGF-β1/miR-29 表达的影响徐梅, 等 Expression of TGF-β1 mrna 10 5 # * Expression of mir-29 mrna # Ctrl Sham UUO VAN TMP Ctrl Sham UUO VAN TMP 图 5 RT-PCR 检测各组大鼠肾组织中 TGF-β1 和 mir-29 mrna 的表达 Figure 5 Expression of TGF-β1 and mir-29 mrna in renal tissue of rats in each group detected by RT-PCR 与 Sham 组比较, # P<0.05; 与 UUO 组比较, Δ P<0.05; 与 VAN 组比较,*P<0.05 Compared with Sham group, # P<0.05; compared with UUO group, Δ P<0.05; compared with VAN group, *P< 讨论 本实验选用传统中药的活性成分 TMP, 探 [9,12] 讨其在 RIF 中的药理活性 目前已有实验证实 TMP 对肾缺血再灌注损伤具有一定的保护作用 ; TMP 还可用于改善糖尿病患者的蛋白尿症状, 显 著提高肾小球的滤过率, 但关于 TMP 对急慢性肾 损伤的相关作用以及可能涉及的作用机制并没有 明确的研究 单侧输尿管梗阻模型 (UUO) 是目前 公认的研究非免疫性 RIF 的经典模型, 应用该模型 可以客观的评价目标药物对 RIF 的治疗效果 通过 对动物的一般生存状况分析及肾组织的病理学切 片染色可确定模型构建成功 本试验首先根据实 验中各组单侧输尿管梗阻模型中梗阻侧肾的 HE 染 色的结果对肾间质损伤的程度进行评分, 并以此 来评价 TMP 及其阳性对照药物缬沙坦在 RIF 过程 中的疗效 结果显示 :UUO 术可至患侧肾出现明 显 RIF, 缬沙坦和 TMP 可明显减轻肾组织学损伤, 且 TMP 的疗效优于缬沙坦 同时选用 Masson 三色 染色检测各组单侧输尿管梗阻模型中梗阻侧肾纤 维化的程度, 并以此来评价 TMP 及其阳性对照药 物缬沙坦在 RIF 过程中的疗效 结果表明 : 活性成 分 TMP 可明显改善肾损伤模型中肾小管的病理改 变, 减轻肾间质纤维组织的增生情况以及炎症细 胞的浸润 ; 且 TMP 的抗 RIF 效果优于缬沙坦 [13] 此前, 有研究发现 :TMP 可下调 TGF-β2 介导的成肌纤维细胞分化转移, 抑制细胞外基质 (extracellularmatrixc,ecm) 的聚集, 具有抗纤维 化的作用 ; 关于 TMP 抗间质纤维化的机制, 目前 并没有明确的实验研究 TGF-β1 是一种可参与调 控细胞生长以及细胞转分化的多肽, 属于 TGF-β 的 一种形式, 因其可促进肾间质成纤维细胞和肾小 管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化, 而一直被认 为是肾纤维化治疗的靶点 [14-15] 故而本实验进一 步采用 SP 免疫组织化学染色和 RT-PCR 的方法检测 了 TMP 对 RIF 过程中 TGF-β1 表达的影响, 结果显 示 UUO 术可至患侧肾出现明显 RIF 并导致 TGF-β1 的大量表达, 缬沙坦和 TMP 可明显减少 TGF-β1 的 表达, 具有抗 RIF 的作用, 且 TMP 的效果优于缬 沙坦 mirna 是调控基因表达的重要分子, 有研 [16-17] 究表明 :mir-29 家族是纤维化疾病的潜在诊 疗靶点, 其中 mir-29c 甚至可以作为肾纤维化的分 [18] 子标志物 另有研究表明 : 在子宫内膜基质细 胞中,miR-29b 可通过调控 TGF-β1/Smad 信号通路 抑制纤维化 本实验检测结果发现 :UUO 术可抑 制 mir-29 的表达, 而缬沙坦和 TMP 均可部分逆转 UUO 所致的 mir-29 表达降低, 同时 TMP 组的 mir- 29 mrna 表达水平明显高于缬沙坦组 提示 TMP 抗间质纤维化的作用可能与促进 mir-29 的表达相 关, 但两者具体的作用还需进一步深入的研究 综上所述, 缬沙坦和 TMP 可明显减轻 UUO 所致的肾组织学损伤, 改善肾小管的萎缩以及扩 张, 减轻肾间质纤维组织的增生以及炎症细胞的 浸润 ; 且 TMP 的抗 RIF 效果优于缬沙坦 此外, TMP 的抗 RIF 作用可能是通过抑制 TGF-β1 基因 促 进 mir-29 基因表达而实现的 参考文献 1. Li X, Zhuang S. Recent advances in renal interstitial fibrosis and tubular atrophy after kidney transplantation[ J]. Fibrogenesis Tissue Repair,

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