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4 研究论文 世界临床药物 WORLD CLINICAL DRUGS Vol.37 NO.7 妊娠糖尿病与 CDKN2A/2B 基因多态性的相关性及危险因素研究 胡娟, 叶枫 * ( 江汉大学附属医院, 武汉市第六医院妇产科, 武汉 ) 摘要 : 目的探讨妊娠糖尿病 (GDM) 与 CDKN2A/2B 基因多态性的相关性及其危险因素 方法以 2015 年 1 月 ~ 2015 年 12 月就诊于我院妇产科的孕妇为研究对象, 纳入 GDM 孕妇 (GDM 组 )65 例, 同期糖耐量正常孕妇 (NGT 组 )65 例 检测两组孕妇 CDKN2A/2B 基因 rs 位点多态性, 并对可能影响 GDM 的因素进行分析 结果 CDKN2A/2B 基因 rs 位点表现为 CC/TC/TT 三种基因型,CC TC 和 TT 基因型所占比例,NGT 组分别为 26.15% 43.08% 和 30.77%,GDM 组 494 分别为 6.15% 49.23% 和 44.62%, 两组基因型分布差异具有统计学意义 (P=0.007) NGT 组和 GDM 组 C 和 T 等位基因分布频率分别为 47.69% 52.31% 和 30.77% 和 69.23%, 两组差异具有统计学意义 (P=0.005) 携带 T 等位基因 (TC+TT) 的 GDM 发病率更高 (P=0.002) 此外, 携带 T 等位基因 (TC+TT) 年龄 体质量指数 (BMI) C 反应蛋白 胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR) 胰岛 β 细胞功能指数 (HOMA-β),GDM 组和 NGT 组比较差异具有统计学意义 (P < 0.05) 结论 GDM 发病风险与 CDKN2A/2B 基因 rs 位点多态性相关, 而携带 T 等位基因 年龄 BMI C 反应蛋白 HOMA-IR 和 HOMA-β 可能是 GDM 发病的独立危险因素 关键词 : 妊娠糖尿病 ;CDKN2A/2B; 基因多态性 ; 危险因素 中图分类号 :R587.1;R 文献标志码 :A 文章编号 : (2016) DOI: /j.wph Correlation on gestational diabetes mellitus with the polymorphism of CDKN2A/2B gene and its risk factors HU Juan, YE Feng* (Department of Obstetrics and Gynecology, Affiliated Hospital of Jianghan University, Wuhan The Sixth Hospital, Wuhan , China) Abstract: Objective To investigate the correlation on gestational diabetes mellitus (GDM) with CDKN2A/2B gene polymorphism and its risk factors. Methods A total of 130 cases of pregnant women in our hospital from January 2015 to December 2015 were selected as research objects. Among them 65 cases of GDM (GDM group) and 65 cases of normal pregnant women (NGT group) were recruited. The CDKN2A/2B rs gene polymorphism were detected by PCR- RFLP, and the factors related to GDM were analyzed. Results The genetype CC, TC and TT in GDM group and NGT group were 6.15%, 49.23%, 44.62%, and 26.15%, 43.08% and 30.77% respectively, which were statistically different between two groups (P=0.007). The frequency of C and T allele in the GDM group and NGT group were 30.77%, 69.23% and 47.69%, 52.31%, respectively. There was statistically significant difference between two groups (P=0.005).In addition, carrying the T allele(tc+tt)might increase the GDM risk(p=0.002). Multivariate analysis showed that carry the T allele (TC + TT), age, BMI, C reactive protein, HOMA-IR and HOMA-β might be independent GDM risk factors(p< 0.05). Conclusion GDM may be associated with the polymorphism of CDKN2A/2B rs gene. The T allele, age, BMI, C reactive protein, HOMA-IR and HOMA-β may be the independent risk factors of GDM. Key words: gestational diabetes mellitus; CDKN2A/2B; gene polymorphism; risk factor 收稿日期 : ; 修回日期 : 作者简介 : 胡娟, 主治医师, 专业特长 : 擅长妇产科传统手术 微创 ( 宫腔镜和腹腔镜 ) 手术 高危妊娠的诊疗 通信简介 : 叶枫, 主管护师, 专业特长 : 妇产科常见疾病和高危妊娠的护理

5 胡娟, 等. 妊娠糖尿病与 CDKN2A/2B 基因多态性的相关性及危险因素研究 年第 37 卷第 7 期 研究论文 妊娠糖尿病 (GDM) 是一种较为常见的围产期并发症, 易引起胎儿发育异常 自然流产和新生儿畸形等不良妊娠结局 [1-2], 且对孕妇本身的远期影响严重 : 再次妊娠时 GDM 发生率高达 50% 以上, 产后 2 型糖尿病 (T2DM) 发生率高达 25% ~ 70% [3-4] 遗传及流行病学调研显示,GDM 是具有多种危险因素的多基因遗传病, 其病理生理方面与 T2DM 较为相似 [5] 研究显示,CDKN2A/2B 基因多态性与 T2DM 的发病关系密切 [6] 但 CDKN2A/2B 基因多态性与 GDM 发病的研究报道较少, 其是否与 GDM 的发病相关尚待进一步研究证实 本研究通过对 GDM 孕妇 CDKN2A/2B 基因多态性检测, 分析其基因分布特点, 并对可能影响 GDM 的危险因素进行分析, 现将结果报道如下 1 资料与方法 1.1 病例选择选取 2015 年 1 月 ~ 2015 年 12 月就诊于我院妇产科的孕妇为研究对象 GDM 的诊断标准 : 采用美国糖尿病学会 (ADA) 制定的糖尿病医学诊疗标准 (2010 年版 ) [7] 妊娠第 24 ~ 28 周行 75 g 口服葡萄糖耐量试验 (OGTT), 判断界点 : 空腹血糖 (FPG): 5.3 mmol/l,ogtt 1 h 血糖 (PPG):10 mmo/l,ogtt 2 h PPG:8.6 mmol/l, 如有 2 个或 2 个以上时点值 判断界点者即确诊为 GDM; 各时点值均小于判断界点者诊断为糖耐量正常 (NGT) 按照上述诊断标准, 本研究 GDM 组共纳入患者 65 例, 同期 OGTT 检查结果正常的孕妇 65 例为 NGT 组 排除标准 :1 孕前糖尿病病史 ;2 其他内分泌疾病 ;3 近期使用影响糖代谢药物者 ;4 近期使用激素类药物者 ;5 伴严重心血管及肝肾功能不全者 本研究通过我院伦理委员会批准, 所有参与本研究者均签署书面知情同意书 1.2 监测指标于妊娠第 24 ~ 28 周收集受试者的年龄 孕次 体质量指数 (BMI) 血压 ( 收缩压和舒张压 ) 血脂 血糖 [ 空腹血糖 (FPG) 和餐后 2 h 血糖 ] 胰岛素抵抗指数 (HOMA-IR) 胰岛 β 细胞功能指数 (HOMA-b) 和 C 反应蛋白等相关指标 BMI= 体重 (kg)/ 身高的平方 (m 2 );HOMA-IR= FINS FPG/22.5;HOMA-b=20 FINS/(FPG-3.5) 其中 FINS 为空腹血浆胰岛素浓度 1.3 方法 DNA 提取接受测试者空腹 10 h 以上, 使用内置有枸橼酸钠的真空采血管采集早晨 7:30 至 9:00 肘静脉血 2 ml, 采用 QIAampDNA 提取试剂盒 ( 德国 Qiagen 公司 ) 提取 DNA,-20 保存备用 引物合成和基因扩增引物序列由上海生物工程技术有限公司设计合成, 正向引物序列 :5'-GGAGCCATTCTATCGTGAA CA-3'; 反向引物序列 :5'-CACCCGACTGGAAAACC TTAT-3',PCR 产物长度为 475 bp PCR 扩增采用 5331 型 Eppendorf 基因扩增仪 ( 德国 Eppendorf 公司 ) PCR 反应程序 :94 预变性 4 min,94 变性 30 s,59 退火 30 s,72 延伸 30 s, 循环 35 次 ; 最后 72 延伸 7 min 基因检测扩增产物经 Hsp Ⅰ 限制性内切酶 ( 日本 Takara 公司 ) 酶切, 酶切产物经 2.0% 的琼脂糖凝胶电泳鉴定 [GelDoc 2000 凝胶成像仪 ( 美国 Bio-Rad)] 1.4 统计学分析采用 SPSS 17.0 统计学软件进行统计分析 符合正态分布的计量资料以均数 ± 标准差 (x ±s) 描述, 组间比较采用 t 检验, 非正态分布的以中位数描述, 组间比较采用非参数 Mann-Whitney 检验, 计数资料以百分比描述, 组间比较采用 χ 2 检验, 以 P < 0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 监测指标入选孕妇年龄为 22 ~ 37 岁, 孕周 23 ~ 30 周, 两组孕妇在年龄 孕次 体重和 BMI 等一般资料差异无统计学意义 (P > 0.05), 具有可比性 与 NGT 组相比,GDM 组餐后 2 h 血糖 HOMA-IR 水平升高, HOMA-β C 反应蛋白水平降低, 且差异均具有统计学意义 (P < 0.05), 见表 基因型及等位基因分布频率 495

6 研究论文 世界临床药物 WORLD CLINICAL DRUGS Vol.37 NO 表 1 入组 130 例孕妇临床资料比较 Table 1 Clinical indexes between two groups NGT 组 (n=65) CDKN2A/2B 基因 rs 位点表现为三种基 因型 :CC(475 bp) TC(343 bp) 和 TT(132 bp) 其 中,NGT 组 CC 型 17 例 (26.15%),TC 型 28 例 (43.08%),TT 型 20 例 (30.77%);GDM 组 CC 型 4 例 (6.15%),TC 型 32 例 (49.23%),TT 型 29 例 (44.62%), 组间比较差异均具有统计学意义 (P=0.007) NGT 组和 GDM 组 C 和 T 等位基因频率分 别为 47.69% 52.31% 和 30.77% 和 69.23%,GDM 组 等位基因 T 的分布频率显著高于 NGT 组, 两组差异具 有统计学意义 (P=0.005), 见表 2 表 2 两组孕妇基因型及等位基因分布频率比较 Table 2 Genotypes and alleles on rs between two groups NGT 组 (n=65) GDM 组 (n=65) χ 2 值 P 值 基因型分布频率 CC 26.15%(17/65) 6.15%(4/65) TC 43.08%(28/65) 49.23%(32/65) TT 30.77%(20/65) 44.62%(29/65) 等位基因分布频率 C 47.69%(62/130) 30.77(40/130) T 52.31%(68/130) 69.23(90/130) GDM 组 (n=65) 年龄 / 岁 32(25~37) 30(22~36) 孕次 / 次 2(1~4) 2(1~3) 体重 /kg 59.3(36.4~91.2) 57.5(42.3~93.1) BMI/kg m (15.63~36.44) 22.07(15.33~31.61) 收缩压 /mmhg 113(85~170) 111(80~165) 舒张压 /mmhg 69(41~101) 68(41~100) 甘油三酯 /mmol L (0.71~6.53) 2.23(0.73~5.68) 总胆固醇 /mmol L ± ±1.04 高密度脂蛋白 /mmol L ± ±0.43 低密度脂蛋白 /mmol L ± ±0.23 空腹血糖 /mmol L (3.0~6.4) 4.7(2.6~10.5) 餐后 2 h 血糖 /mmol L (4.3~10.3) 9.1(4.2~16.3)* HOMA-IR 1.29(0.17~9.83) 1.61(0.23~14.33)* HOMA-β 139.5(40.5~501.3) 122.6(7.8~356.1)* C 反应蛋白 /mg L (0.3~10.0) 2.15(0.2~11.1)* 与 NGT 组相比,* P < 0.05 vs group NGT, * P< 基因型与 GDM 发病的相关性分析 表 3 显示, 与 CC 基因型相比, 携带 T 等位基因 (TC+TT) 者 GDM 发病率更高 (P=0.002) 表 3 基因型与妊娠糖尿病相关性分析 Table 3 Correlation analysis between genotypes and GDM for objects NGT 组 (n=65) GDM 组 (n=65) χ 2 值 P 值 OR(95%CI) CC 26.15(17/65) 6.15(4/65) TC+TT 73.85(48/65) 93.85(61/65) 2.4 GDM 患者的危险因素分析 ( 参考 ) ( ) 表 4 显示, 携带 T 等位基因 (TC+TT), 年龄, BMI, 以及 C 反应蛋白 HOMA-IR 和 HOMA-β 水平, GDM 和 NGT 组间差异具有统计学意义 (P < 0.05) 表 4 妊娠糖尿病患者的危险因素分析 Table 4 Risk factors of patients with GDM 影响因素 β P 值 OR 值 95%CI 基因型 (TC+TT) 年龄 BMI C 反应蛋白 HOMA-IR HOMA-β 讨论 CDKN2A/2B 基因位于染色体 9p 的位置上, 是 胰岛 β 细胞复制调节剂 CDK4 的抑制基因, 可抑制 CDK4 活性, 导致胰岛发育不全, 造成胰岛素分泌 功能受损, 而胰岛素分泌功能受损是引起 T2DM 发 病的关键因素 [8-9] 国内外有关 T2DM 发病的易感基 因已有较多的研究 [10], 如 CDKN2A/2B CDKAL1 FTO TCF7L2 和 SLC30A8 等基因的多态性与 T2DM 发病密切相关 Cheung 等 [11] 通过对近十年有关 GDM 发病机制的文献进行 Meta 分析, 结果显示, GDM 与 T2DM 的发病存在共同的遗传基础 既然 两者具有共同的遗传基础, 故推测 T2DM 的发病易 感基因可能也是 GDM 的发病易感基因 Cho 等 [12] 通过对 869 例 GDM 患者的研究发现,CDKN2A/2B

7 胡娟, 等. 妊娠糖尿病与 CDKN2A/2B 基因多态性的相关性及危险因素研究 年第 37 卷第 7 期 研究论文 基因 rs 位点多态性与 GDM 的发病具有强相关性 本研究结果显示,GDM 和 NGT 孕妇 CC/ TC/TT 三种基因型分布存在统计学意义的显著差异 (P=0.007),C T 等位基因分布频率存在统计学意义的显著差异 (P=0.005), 结合文献调研结果, 推测 CDKN2A/2B 基因 rs 位点多态性可能与 GDM 易感性相关, 且携带 T 等位基因可能增加了 GDM 的发病风险 此外, 本研究对 GDM 发生发展的可能的影响因素进行了分析, 结果显示,GDM 和 NGT 组孕妇存在年龄 孕前 BMI, 以及 C 反应蛋白 HOMA-IR 和 HOMA-β 水平等多项因素的显著差异 (P < 0.05), 上述因素可能是 GDM 发病的独立危险因素 可能原因有 :1 年龄 :GDM 的发病率会随着孕妇年龄的增长而逐渐增加,40 岁以上孕妇的发病风险是 20 ~ 30 岁孕妇的 8.2 倍, 可见高龄是 GDM 发病的重要危险因素 [13] 2 BMI: 肥胖人群易出现葡萄糖耐受不良, 可能是由于肥胖者脂肪细胞肥大, 持续过度刺激胰岛 β 细胞, 胰岛素分泌过多, 引起胰岛素降调节, 导致胰岛素抵抗 所以, 控制孕前肥胖 维持正常的 BMI 是预防 GDM 发病的重要手段 ; 对于已经存在孕前肥胖的围产期妇女更应该加强监护 3 C 反应蛋白 : 有研究显示,GDM 患者血清 C 反应蛋白显著升高, 提示 C 反应蛋白水平与 GDM 的发病密切相关 C 反应蛋白是机体炎症反应的指标, 某些促炎细胞因子会引起孕妇葡萄糖耐受下降, 最终导致 GDM 的发病 [14] 4 HOMA-IR HOMA-β 水平 : 胰岛功能受损和胰岛素抵抗是引起 T2DM 的关键因素 [15-16] 本研究结果显示,GDM 孕妇 HOMA-β 水平低于 NGT 孕妇, 提示 GDM 孕妇 β 细胞功能可能受损 ;GDM 孕妇 HOMA-IR 水平高于 NGT 孕妇, 提示 GDM 孕妇可能存在胰岛素抵抗 4 结论综上所述,CDKN2A/2B 基因 rs 位点多态性可能与 GDM 发病相关, 而 T 等位基因 年龄 BMI C 反应蛋白 HOMA-IR HOMA-β 可能是 GDM 发病的独立危险因素 参考文献 : [1] 徐蓉, 陶静, 胡鹏. 妊娠糖尿病发病现状及危险因素分析 [J]. 护理研究, 2016, 30(1): [2] Archambault C, Arel R, Filion KB. Gestational diabetes and risk of cardiovascular disease: a scoping review [J]. Open Med, 2014, 8(1): e1-e9. [3] 韩树恒. 妊娠期糖尿病患者血糖对妊娠结局的影响 [J]. 中国妇幼保健, 2016, 31(1): [4] Poomalar GK. Changing trends in management of gestational diabetes mellitus [J]. World J Diabetes, 2015, 6(2): [5] Noctor E, Dunne FP. Type 2 diabetes after gestational diabetes: The influence of changing diagnostic criteria [J]. World J Diabetes, 2015, 6(2): [6] Amira T, Al-Zaben GS, Moncef K. Gender-dependent associations of CDKN2A/2B, KCNJ11, POLI, SLC30A8, and TCF7L2 variants with type 2 diabetes in (North African) Tunisian Arabs [J]. Diabetes Res Clin Prac, 2014, 103(3): e40-e43. [7] 毛瑞雪, 戴智勇, 李勇. 妊娠期糖尿病的发病机制及诊疗进展 [J]. 中国生育健康杂志, 2015, 26(5): [8] Huang S,Ye H, Guo W. CDK4/6 inhibitor suppresses gastric cancer with CDKN2A mutation [J]. Int J Clin Exp Med, 2015, 8(7): [9] 梅劼, 王海莲, 刘运强. CDKN2A/2B 的单核苷酸多态性与妊娠妇女糖耐量异常的相关性分析 [J]. 中华内分泌外科杂志, 2014, 8(3): [10] 朱垚吉, 王文绢, 李庆生. 2 型糖尿病遗传倾向及其关联基因研究进展 [J]. 中国慢性病预防与控制, 2015, 23(3): [11] Cheung NW, Byth K. Population health significance of gestational diabetes [J]. Diabetes Care, 2003, 26(4): [12] Cho YM, Kim TH, Lim S, et al. Type 2 diabetes-associated genetic variants discovered in the recent genome-wide association studies are related to gestational diabetes mellitus in the Korean population [J]. Diabetologia, 2009, 52(2): [13] Buchanan TA, Xiang AH. Gestational diabetes mellitus: risks and management during and after pregnancy [J]. Nat Rev Endocrinol, 2012, 8(11): [14] 胡玲, 王程琳, 郑文霞. 妊娠糖尿病患者脂肪因子炎症因子与胰岛素抵抗的关系 [J]. 中国药物与临床, 2015, 3(6): [15] 陆蓓亦, 朱自强, 虞斌. 妊娠期糖尿病妊娠中晚期胰岛素抵抗及胰岛 B 细胞功能的研究 [J]. 中国妇幼保健, 2015, 30(36): [16] 黄立嵩, 王立秋, 林朱森. 胰高血糖素样肽 -1 对胰岛素抵抗肌细胞脂代谢相关基因表达的干预作用 [J]. 中国新药杂志, 2010, 3(6): ( 责任编辑 : 赵绪韬 ) 497

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