42 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No. 1 symptoms, such as poor appetite, physica

Size: px

Start display at page:

Download "42 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No. 1 symptoms, such as poor appetite, physica"

芸黛别
5 years ago
Views:

1 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No 干细胞移植治疗肝硬化的临床研究论著观察外周血干细胞及脐带血干细胞移植治疗肝硬化的临床疗效选取 2009 年 8 月至 2010 年 6 月期间在成都军区总医院消化内科行干细胞治疗的失代偿期肝硬化患者 34 例, 对患者进行自身对照的临床研究, 外周血干细胞移植 14 例, 脐带血干细胞移植 20 例, 并比较两种干细胞治疗肝硬化的疗效将干细胞通过肝动脉途径植入患者肝脏内, 于移植后 2 周 4 周 8 周进行肝功能凝血指标检测, 并于 4 周及 8 周行腹部 B 超及胃镜检查, 观察患者移植后不同时间症状改善情况及术后不良反应的发生情况对移植术后生化指标的改变, 采用非参数 Firedman 检验及 t 检验进行统计学分析 34 例接受干细胞移植的肝硬化患者术中术后无明显不良反应发生移植后, 患者临床症状改善明显, 食欲不振乏力腹水等减轻甚至消失 ; 血清学检测 : 术后 8 周, 外周血干细胞治疗组白蛋白水平由术前 (30.35 ± 5.44)g/L 升至 (35.86 ± 4.75)g/L(P < 0.05); 凝血酶原时间由术前 (13.97 ± 1.50)s 降至 (12.61±1.20)s(P < 0.05); 总胆红素由术前 (52.18 ± 29.46)µmol/L 下降至 (37.96 ± 20.25)µmol/L(P < 0.05); 脐带血干细胞治疗组白蛋白水平由术前 (29.43 ± 5.35) g/l 升至 (34.92 ± 3.79)g/L (P < 0.05); 凝血酶原时间由术前 (14.89 ± 1.77)s 降至 (14.21 ± 2.00)s(P < 0.05); 总胆红素由术前 (52.72 ± 38.06) µmol/l 降至 (46.25 ± 32.21)µmol/L(P < 0.05) 外周血干细胞治疗组与脐带血干细胞治疗组相比, 差异无统计学意义干细胞移植治疗失代偿期肝硬化是一种安全有效的方法, 尤其是在提高白蛋白水平及改善凝血功能方面有很好的疗效, 可作为肝移植治疗的过渡或补充治疗外周血干细胞 ; 脐血干细胞 ; 肝硬化 Clinical study of patients with decompensated cirrhosis treated with stem cell transplantation He Li, Qiao Lijuan, Zeng Weizheng, Jiang Mingde. Department of Gastroenterology, General Hospital of Chengdu Military Command, Chinese People's Liberation Army, Chengdu , China Corresponding author:jiang Mingde, jiangmd88@aliyun.com Abstract Objective To investigate the clinical therapeutic effect of peripheral blood stem cells transplantation and umbilical blood stem cells transplantation on patients with liver cirrhosis. Methods A total of 34 patients with cirrhosis were enrolled. Peripheral blood stem cell transplantation was performed in 14 cases, and umbilical cord blood stem cell transplantation in 20 cases. The efficacy were compared between the 2 groups. Stem cells were transplanted into patient's liver through hepatic arteries. At 2, 4 and 8 weeks after transplantation, liver function and coagulation index tests were performed. Abdominal ultrasound and endoscope examination were performed at 4 and 8 weeksn. Changes and adverse reactions in the 34 patients were observed. The statistical analysis for biochemstry was non parameter Firedman test and T test. Results No remarkable side effect was observed in all 34 patients. Their clinical DOI: /cma.j.issn 作者单位 : 成都, 成都军区总医院消化内科通讯作者 : 蒋明德, jiangmd88@aliyun.com

2 42 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No. 1 symptoms, such as poor appetite, physical weakness, and peritoneal dropsy were either relieved or entirely disappeared. At 8 weeks after the peripheral blood stem cell transplantation, albumin levels increased from(30.35 ± 5.44)g/L to(35.86 ± 4.75)g/L(P < 0.05), prothrombin time decreased from(13.97 ±1.50)s to(12.61 ± 1.20)s(P < 0.05), and total bilirubin decreased from(52.18 ± 29.46)μmol/L to(37.96 ± 20.25)μmol/L(P < 0.05). At 8 weeks after umbilical cord blood stem cell transplantation, albumin levels increased from(29.43 ±5.35) g/l to(34.92 ± 3.79)g/L(P < 0.05), prothrombin time decreased from(14.89 ± 1.77) s to(14.21 ± 2.00)s(P < 0.05), and total bilirubin decreased from(52.72 ± 38.06)μmol/L to(46.25 ± 32.21)μmol/L(P < 0.05). There was not significant statistical difference between the peripheral blood stem cell group and the umbilical cord blood stem cell group. Conclusions Stem cells transplantation is a safe and effective therapy for hepatocirrhosis. Albumin levels and liver coagulation capacity are improved. Stem cells can serve as an alternative or a supplement to liver transplantation. Key words Peripheral blood stem cell; cord blood stem cell; transplantation; hepatocirrhosis 肝硬化是我国常见疾病和主要的死亡原因之一 1 各种原因导致的肝硬化可进一步发展至肝功能衰竭肝移植已被证实是各种原因造成的肝功能衰竭最有效的治疗方法, 但由于供肝源有限移植后的免疫排斥反应以及高额的治疗费用使得肝移植的广泛应用受到限制干细胞具有自我更新和分化能力, 在特定条件下, 它可分化为不同的功能细胞, 形成多种组织和器官目前用于临床的干细胞治疗包括外周血干细胞骨髓间充质干细胞脐带血干细胞本研究通过血细胞分离机或骨髓脐带血细胞处理试剂盒将分离纯化的外周血干细胞或脐带血干细胞悬液注入肝内, 取得了较好的临床效果一一般资料经医院伦理委员会审核批准, 选取成都军区总医院消化内科自 2009 年 8 月至 2010 年 6 月住院的 34 例行干细胞治疗失代偿期肝硬化患者, 其中男 26 例, 女 8 例, 年龄 35 ~ 73 岁,27 例为乙肝后肝硬化,2 例为酒精性肝硬化,3 例为原发性胆汁性肝硬化,1 例为丙肝后肝硬化,1 例为血吸虫性肝硬化 34 例患者中,14 例行外周血干细胞移植,Child-Pugh 分级 :A 级 10 例,B 级 4 例,20 例行脐带血干细胞移植,Child-Pugh 分级 :A 级 8 例,B 级 12 例所有病例临床诊断均符合失代偿期肝硬化的诊断标准, 术前术后均给予内科保守治疗所有治疗患者均在知情同意情况下签订外周血干细胞移植治疗同意书或脐血干细胞移植治疗同意书二方法 1. 外周血干细胞的动员采集分离计数 : 患者每日皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子 (G-CSF)200 μg, 连续 4 ~ 6 d, 进行外周血干细胞动员, 每日监测外周血白细胞数, 期间观察患者有无骨痛发热自发性脾破裂和感染等并发症当外周血白细胞数达到一定数量 ( /L) 以上, 可采集外周血干细胞术前或术中静滴葡萄糖及葡萄糖酸钙, 应用血细胞分离机 CS-3000Plus( 美国 Baxter 公司 ), 根据患者的一般状况决定采集循环血量, 常规为 4500 ~ 6000 ml, 约 2 ~ 3 h 分离出外周血干细胞约 100 ~ 150 ml 期间观察患者有无抽搐低钙性口周麻木等副反应采集后的干细胞应用流式细胞仪检测 CD34 + 细胞数并分类计数同时将干细胞送介入室行干细胞移植术 2. 脐血干细胞采集分离计数 : 选择本院健康足月产妇, 术前行输血前 9 项等的检测, 排除乙型肝炎丙型肝炎艾滋病梅毒及其他传染病胎儿娩出后, 在胎盘未娩出时, 立即用装有 ACD-B 保存液的一次性采血袋以封闭的方式采血, 每袋脐带血量约 70 ~ 100 ml 采好的脐带血迅速送入百级层流实验室, 采用宁夏中联达生物有限公司生产的骨髓脐带血细胞处理试剂盒 [ 宁 ( 银 ) 食药监械 ( 准 ) 字 2008 第号, 批

3 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No 号 :080611] 提取脐血干细胞, 分离过程严格无菌操作, 分离完成后, 将分离好的细胞用 10 ~ 15 ml 生理盐水稀释, 混合均匀, 取出 10 μl 用流式细胞仪进行 CD34 + 细胞计数其余细胞送入介入室行局部干细胞移植术 3. 外周血及脐血干细胞移植 : 经股动脉穿刺插管, 行肝固有动脉造影排除肝癌后, 将制备好的外周血或脐血干细胞悬液以均匀的速度缓慢注入肝左或肝右动脉, 术后常规穿刺点加压包扎, 患者穿刺肢制动 24 h 4. 疗效观察 : 术后给予心电监护止血抗感染等治疗, 同时常规静脉滴注促肝细胞生长素 1 周, 术后 2 周 4 周 8 周观察患者临床症状 ( 乏力纳差腹胀尿量双下肢水肿 ) 改变及有无不良反应 ( 发热疼痛过敏等 ) 发生, 同时进行肝功能凝血的检测, 并于 4 周 8 周行腹部 B 超及胃镜检查三统计学分析方法采用 SPSS 17.0 软件进行统计分析, 外周血干细胞及脐血干细胞移植后生化指标及两组治疗前后肝功能及凝血指标数据以 x ± s 表示, 采用单因素 F 检验及配对 t 检验, 以 P < 0.05 为差异有统计学意义 1. 体外分离外周血及脐血干细胞的数量 : 分离后的外周血干细胞制剂中 CD34 + 细胞数为 /ml ~ ml, 分离后的脐带血干细胞制剂中的 CD34 + 细胞数为 /ml ~ /ml 2. 外周血干细胞及脐血干细胞移植后患者一般情况 : 外周血干细胞移植后 2 周,13 例 (92.8 % ) 患者食欲明显改善,12 例 (85.7 % ) 患者体力好转,5 例 (35.7 % ) 患者尿量增多移植后 4 周,6 例 (42.8 % ) 患者腹胀明显减轻移植后 8 周,4 例 (28.6 % ) 患者双下肢水肿消失脐带血干细胞移植后 2 周,19 例 (95.0 % ) 患者食欲明显改善,16 例 (80.0 % ) 患者体力好转,13 例 (65.0 % ) 患者尿量增多移植后 4 周, 15 例 (75.0 % ) 患者腹胀明显减轻移植后 8 周, 10 例 (50.0 % ) 患者双下肢水肿消失 3. 外周血干细胞及脐血干细胞移植后生化指标的改变 : 外周血干细胞及脐血干细胞移植前后对比, 二者血清白蛋白于第 1 周即可见升高, 第 8 周明显升高 (P < 0.05); 干细胞移植后, 凝学酶原时间第 8 周下降最明显 (P < 0.05); 移植后 8 周, 总胆红素水平直接胆红素水平术后均有下降 (P < 0.05) 外周血干细胞移植后,ALT AST 术后有下降 (P > 0.05, 表 1) 脐带血干细胞移植术后 8 周,AST 下降,(P < 0.05, 表 2) 外周血干细胞移植组与脐带血干细胞移植组相比, 二者疗效相同, 差异无统计学意义 ( 表 3) 4. 外周血干细胞及脐血干细胞移植后 B 超检查腹水及胃镜检查食道静脉曲张情况 :14 例行外周血干细胞移植的患者, 其中 8 例并发腹水, 行腹部 B 超检查, 术后 8 周 4 例 (50.0 % ) 患者腹水明显减少,3 例 (37.5 % ) 腹水消失,1 例 (12.5 % ) 腹水无明显变化 14 例患者中有 6 例 (42.8 % ) 患者有食道静脉曲张, 行外周血干细胞移植治疗 8 周后复查胃镜, 发现食道静脉曲张没有明显变化 20 例行脐带血干细胞移植的患者, 其中 14 例并发腹水, 行腹部 B 超检查, 术后 8 周 10 例 14 例肝硬化患者外周血干细胞移植前后肝功及凝血指标的比较 (x ± s) 组别 PT(s) ALB(g/L) TBIL 移植前 ± ± 5.44 a ± ± ± ± ± 移植后 2 周 ± ± 3.95 a ± ± ± ± ± 移植后 4 周 ± ± ± ± ± ± ± 移植后 8 周 ± ± ± ± ± ± ± F 值 P 值注 : 与移植后 8 周比较, a P < 0.05

4 44 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No 例肝硬化患者脐带血干细胞移植前后肝功及凝血指标的比较 (x ± s) 组别 PT(s) ALB(g/L) TBIL 移植前 ± ± 5.35 a ± ± ± ± ± 移植后 2 周 ± ± 4.79 a ± ± ± ± ± 移植后 4 周 ± ± 3.84 a ± ± ± ± ± 移植后 8 周 ± ± ± ± ± ± ± F 值 P 值注 : 与移植后 8 周比较, a P < 0.05 两组治疗前后肝功能及凝血指标的比较 (x ± s) 组别例数 PT(s) ALB(g/L) TBIL 外周血干细胞移植治疗组移植前 ± ± ± ± ± ± ± 外周血干细胞移植治疗组移植后 ± ± ± ± ± ± ± 脐带血干细胞移植治疗组移植前 ± ± ± ± ± ± ± 脐带血干细胞移植治疗组移植后 ± ± ± ± ± ± ± 注 : 两组治疗前与治疗后肝功能及凝血指标相比, 均 P > 0.05 (71.4 % ) 患者腹水明显减少,4 例 (28.6 % ) 腹水消失 20 例患者中有 15 例 (75.0 % ) 患者有食道静脉曲张, 行脐血干细胞移植治疗 8 周后复查胃镜, 发现食道静脉曲张没有明显变化 5. 外周血干细胞及脐血干细胞移植术后不良反应的发生情况 :14 例外周血干细胞移植的患者中, 除 1 例患者出现低热及轻微骨痛以外, 余患者未发现其他明显不良反应及并发症 20 例脐带血干细胞移植的患者中, 有 1 例患者出现发热, 给予对症处理后体温下降至正常,1 例患者因过度紧张感穿刺处疼痛, 给予心理安慰后, 疼痛缓解, 余患者未发现白细胞下降感染过敏出血等不良反应和并发症干细胞是人体内最原始的细胞, 是一种具有多分化潜能和自我复制功能的未分化细胞, 大量研究证明干细胞不仅可分化为中胚层细胞, 还分 [2-3] 化为内胚层及外胚层细胞, 表明干细胞可以跨系跨胚层分化, 具有强大的可塑性同时, 干细胞具有化学趋向性根据干细胞的这些特性, 临床可用于治疗各种细胞或组织损伤性疾病, 如 [4-6] [7-8] 肝硬化糖尿病足溃疡性结肠炎等目前, 临床上用于治疗肝硬化的干细胞, 主要包括外周血干细胞自体骨髓干细胞和脐血干细胞外周血干细胞移植具有操作简单采集过程中不需要麻醉和多部位骨髓穿刺 ; 术后患者

5 中华细胞与干细胞杂志 ( 电子版 ) 2015 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin J Cell Stem Cell (Electronic Edition), Feb 2015,Vol. 5, No 免疫功能恢复快, 并发症少等优点自体骨髓干细胞治疗需要采集自体骨髓, 而患者需承受穿刺的痛苦及承担一定的风险, 同时采集得到的干细胞质量受年龄的限制脐血干细胞具有取材方便, 造血干细胞和间充质干细胞含量丰富, 不需要 HLA 严格配型, 移植后排异反应弱, 移植物抗宿主病 (GVHD) 出现少, 反应轻等特点 [9] 董毅等 [10] 利用外周血干细胞治疗 35 例肝硬化患者, 治疗 8 周, 与对照组相比, 肝功能明显好转, 他们认为外周血干细胞治疗肝硬化安全有效, 副作用小 Zhang 等 [11] 利用脐血干细胞治疗了 30 例肝硬化患者随访 1 年, 干细胞治疗组与注射生理盐水对照组相比, 患者的肝功能明显好转本研究通过 34 例干细胞移植治疗失代偿期肝硬化患者, 临床观察及实验室数据分析表明 : 患者在移植术后 2 周, 腹胀纳差乏力等症状明显改善 ; 移植前与移植术后 8 周相比, 肝功能及凝血 : 白蛋白水平明显升高, 胆红素水平均有一定程度的下降, 凝血酶原时间较术前明显缩短复查胃镜结果显示, 外周血干细胞与脐带血干细胞移植治疗对门静脉高压引起的食道静脉曲张无明显疗效, 二者相比, 统计学无明显差异 14 例外周血干细胞移植的患者中, 除 1 例患者出现低热及轻微骨痛以外, 余患者未发现其他明显不良反应及并发症 20 例脐带血干细胞移植的患者中, 有 1 例患者出现发热, 给予对症处理后体温下降至正常,1 例患者因过度紧张感穿刺处疼痛, 给予心理安慰后, 疼痛缓解, 余患者未发现白细胞下降感染过敏出血等不良反应和并发症因此, 干细胞移植治疗失代偿期肝硬化是一种安全有效的方法, 尤其是在提高白蛋白水平及改善凝血功能方面有很好的疗效, 但能否能够逆转肝纤维化, 还需要长期的随防与肝脏穿刺活检证实 Biol Ther, 2010, 10(1): Park HW, Lim MJ, Jung H, et al. Human mesenchymal stem cell derived Schwann cell-like cells exhibit neurotrophic effects, via distinct growth factor production, in a model of cord injury[j]. Glia, 2010, 58(9): 彭嘉睿, 柯亭羽, 车永哲, 等. 糖尿病足的干细胞治疗 [J]. 生物医学工程与临床, 2011, 15(4): 杨华强, 李东升, 杜玲, 等. 脐血间充质干细胞移植治疗糖尿病足二例并文献复习 [J]. 中国综合临床, 2010, 26(9): 闻进朝, 黄平平. 自体外周血单个核细胞移植治疗严重肢体缺血 30 例 :3 年安全性随访 [J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2010, 14(45): 顾嫣, 冉志华. 骨髓干细胞治疗炎症性肠病的研究进展 [J]. 胃肠病学和肝病学杂志, 2009, 18(10): 江学良. 非清髓脐带血干细胞治疗激素抵抗型溃疡性结肠炎临床研究 [J]. 中华消化内镜杂志, 2010, 27(8): Wagner JE, Gluckman E. Umbilical cord blood transplantation: the first 20 years[j]. Semin Hematol, 2010, 47(1): 董毅, 朱太岗, 张飞虎, 等. 自体外周血干细胞治疗肝硬化 35 例疗效分析 [J]. 中华全科医学, 2011, 1(9): Zhang Z, Lin H, Shi M, et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cells improve liver function and ascites in decompensated liver cirrhosis patients[j]. J Gastroenterol Hepatol, 2012, 27(2): ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 蔡晓珍 ) 参考文献 1 李行. 肝硬化疾病凝血四项与 D- 二聚体联检的应用 [J]. 中外健康文摘, 2013,15: Ball SG, Shuttleworth CA, Kielty CM. Platelet-derived growth factor receptors regulate mesenchymal stem cell fate: implications for neo-vascularization [J]. Expert Opin

instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative

instillation therapy combined with Western medicine can reduce the levels of ALT, TBA, ALP, TBIL, DBIL and GGT, and improve the anti-cmv-igm negative 在线投稿 : http://www.baishideng.com/wcjd/ch/index.aspx 帮助平台 : http://www.wjgnet.com/esps/helpdesk.aspx DOI: 10.11569/wcjd.v23.i28.4568 世界华人消化杂志 2015 年 10 月 8 日 ; 23(28): 4568-4573 ISSN 1009-3079