172 生理学报 Acta Physiologica Sinica, Apirl 25, 2013, 65(2): 多囊卵巢综合征 (polycystic ovary syndrome, PCOS) 是育龄妇女中最常见的内分泌紊乱性疾病, 此病困 [1] 扰全球范围内 5%~10%

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寸伊
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1 生理学报 Acta Physiologica Sinica, April 25, 2013, 65(2): 研究论文类固醇激素合成酶在大鼠多囊卵巢综合征模型中的表达林伟 1, 宋张娟 1, 孙玮明 1, 董磊 2, 金可可 1, 王万铁 1, 汪洋 1,* 温州医学院 1 病理生理学教研室 ; 2 附属第一医院病理科, 温州摘要 : 本文旨在探讨类固醇激素合成酶在多囊卵巢综合征 (polycystic ovary syndrome, PCOS) 中的表达变化将 Sprague-Dawley (SD) 大鼠随机分为正常对照组 (NC 组 ) 和多囊卵巢综合征组 (PCOS 组 ),PCOS 组大鼠注射脱氢表雄酮 (dehydroepiandrosterone, DHEA) 以建立 PCOS 模型, 用放射免疫法测血清激素 ( 孕酮和雌二醇 ) 水平, 酶联免疫法检测血清睾酮水平取各组卵巢组织, 用免疫组化法对 3β- 羟基固醇脱氢酶 (3β-hydroxy steroid dehydrogenase, 3β-HSD) 17β- 羟基固醇脱氢酶 (17β-hydroxy steroid dehydrogenase, 17β-HSD) 和细胞色素 P450 芳香化酶 (cytochrome P450 aromatase, P450arom) 进行细胞定位分析,RT-PCR 和 Western blot 分别检测这三种酶的 mrna 和蛋白表达变化结果显示, 与 NC 组相比,PCOS 组血清雌二醇和睾酮水平显著升高, 孕酮无显著变化与 NC 组相比,PCOS 组 3β-HSD 和 17β-HSD mrna 和蛋白表达均显著升高,P450arom 的 mrna 和蛋白表达则明显降低以上结果提示,3β-HSD 和 17β-HSD 共同参与了 PCOS 大鼠模型卵巢的激素调节,P450arom 并未直接参与雌二醇的调节关键词 : 多囊卵巢综合征 ; 大鼠 ;3β- 羟基固醇脱氢酶 ;17β- 羟基固醇脱氢酶 ; 细胞色素 P450 芳香化酶中图分类号 :R Expression of steroidogenic enzymes in the rat model of polycystic ovary syndrome LIN Wei 1, SONG Zhang-Juan 1, SUN Wei-Ming 1, DONG Lei 2, JIN Ke-Ke 1, WANG Wan-Tie 1, WANG Yang 1,* 1 Department of Pathophysiology; 2 Department of Pathology of the First Affiliated Hospital, Wenzhou Medical College, Wenzhou , China Abstract: The aim of the present study was to investigate the expression changes of three steroidogenic enzymes in the polycystic ovary syndrome (PCOS). Thirty Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into normal control (NC) group and PCOS group. PCOS rat model was established by DHEA injection. The serum levels of progesterone, estrogen and testosterone were measured by immunoradioassay or enzyme immunoassay. The cellular distributions of 3β-hydroxy steroid dehydrogenase (3β-HSD), 17β-hydroxy steroid dehydrogenase (17β-HSD) and cytochrome P450 aromatase (P450arom) in ovaries were detected by immunohistochemistry. The expression levels of 3β-HSD, 17β-HSD and P450arom were detected by RT-PCR and Western blot. The results showed that the serum levels of estrogen and testosterone of PCOS group were significantly higher than those of the NC group. There was no significant difference of serum progesterone level between the PCOS and NC groups. Compared with the NC group, the PCOS group showed increased mrna and protein expressions of both 3β-HSD and 17β-HSD, as well as reduced P450arom mrna and protein expressions. These results suggest that 3β-HSD and 17β-HSD, but not P450arom, may participate in the ovarian hormonal regulation in the present rat model of PCOS. Key words: polycystic ovary syndrome; rat; 3β-hydroxy steroid dehydrogenase; 17β-hydroxy steroid dehydrogenase; cytochrome P450 aromatase Received Accepted This work was supported by the Scientific Research Fund of Department of Education, Zhejiang Province, China (No. Y ) and the Science and Technology Program of Wenzhou Municipality, Zhejiang Province, China (No. Y ). * Corresponding author. Tel/Fax: ; wangydh995@163.com

2 172 生理学报 Acta Physiologica Sinica, Apirl 25, 2013, 65(2): 多囊卵巢综合征 (polycystic ovary syndrome, PCOS) 是育龄妇女中最常见的内分泌紊乱性疾病, 此病困 [1] 扰全球范围内 5%~10% 育龄妇女, 以无排卵性不孕月经异常高雄激素血症和胰岛素抵抗为特征高雄激素血症是 PCOS 主要的临床特征之一, 但 PCOS 激素紊乱的病因及调控机制目前尚无定论体内激素的合成主要由类固醇激素合成酶完成, 包括细胞色素 P450 胆固醇侧链裂解酶 (cholesterol side chain cleavage enzyme, P450scc) 17, 20- 裂解酶 (17, 20-lyase, CYP17) 3β- 羟基固醇脱氢酶 (3β-hydroxy steroid dehydrogenase, 3β-HSD) 17β- 羟基固醇脱氢酶 (17β-hydroxy steroid dehydrogenase, [2, 3] 17β-HSD) 和雄激素转化酶 P450 (P450arom) 等在卵巢组织中, 雄激素的主要合成步骤为 3β-HSD 催化脱氢表雄酮 (dehydroepiandrosterone, DHEA) 转化为 Δ4- 雄烯二酮,17β-HSD 进而使 Δ4- 雄烯二酮转化为睾酮 ; 而睾酮则经颗粒细胞中的 P450arom [2, 4] 生成雌二醇 (E 2 ), 这是雌激素合成的限速阶段但是这三种类固醇激素合成酶在 PCOS 中的变化如何, 具体的调控机制如何, 目前尚未完全明了因此, 本研究通过注射 DHEA 建立 PCOS 的大鼠模型, 并用 Western blot 和逆转录 - 聚合酶链反应 (RT-PCR) 等方法探讨 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 在 PCOS 中的蛋白和 mrna 表达变化 1 材料和方法 1.1 实验动物选用 21 日龄未成年雌性 Sprague- Dawley (SD) 大鼠, 由温州医学院实验动物中心提供, 给予颗粒饲料喂养, 自由饮水 1.2 实验药品 DHEA 购自南京康满林生物化工有限公司, 孕酮及 E 2 放射免疫 (RIA) 试剂盒购自天津协和医药科技有限公司, 大鼠睾酮酶联免疫法 (ELISA) 试剂盒购自上海西塘生物科技有限公司, 兔抗鼠 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 多克隆抗体购自美国 Santa Cruz 公司, 二步法免疫组化检测试剂盒和通用型 IgG 抗体 (Fab 段 )-HRP 多聚体二抗 PV-6000 购自北京中杉金桥生物技术有限公司, Western blot 相关试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司,3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 引物购自上海生工生物工程有限公司, 总 RNA 提取试剂盒和逆转录试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司 1.3 主要仪器荧光显微镜 (OLYMPUS, 日本 ), 低温离心机 (Hettich 公司, 德国 ), 透射电镜 (H-7500, 日本 ), 切片机 (LEICA, 美国 ),Bio-Rad 微型凝胶电泳系统 ( 美国 ),PCR 仪 (ASTEC, 日本 ) 1.4 动物模型的建立本实验方案通过温州医学院实验动物伦理委员会审核并批准选用 21 日龄的 SD 大鼠 30 只, 随机分为实验组 (PCOS 组,n = 20) 和对照组 (NC 组,n = 10) PCOS 组 : 于 23 日龄开始, 每日 16:00 颈后背皮下注射 DHEA 6 mg/100 g 体重 ( 溶于 0.2 ml 注射用大豆油 ), 连续 20 天, 并同时进行阴道涂片, 以观察其动情周期的变化 ; NC 组 : 每日颈后背注射 0.2 ml 的大豆油, 其余同 PCOS 组 1.5 标本的获取及激素检测大鼠于 42 日龄 20:00 禁食禁饮, 次日晨称体重, 阴道涂片, 腹腔注射 10% 水合氯醛 (35 mg/kg) 麻醉,75% 酒精消毒后, 离断股动脉, 取股动脉血 3~4 ml 取双侧卵巢, 称取重量, 测量体积 ( 体积 = 长宽高 0.5), 卵巢体积和重量均是左右卵巢之和 ; 随机取实验组和对照组各一侧卵巢, 中性福尔马林固定, 常规包埋, 切片, 行 HE 染色和免疫组化, 光镜观察 ; 同时, 用 2.5% 戊二醛固定另一侧卵巢组织, 常规包埋, 超薄切片, 电子染色后, 进行透射电镜观察部分卵巢于 80 C 保存, 待用 Western blot 和 RT- PCR 检测蛋白及 mrna 的表达血清 E 2 和孕酮的检测均采用放射免疫法 (RIA), 按试剂盒说明书操作 ; 血清睾酮水平的检测采用 ELISA, 按照说明书操作 1.6 免疫组化检测卵巢类固醇激素合成酶的表达采用免疫组化两步法,DAB 显色检测方法严格按说明书操作, 光镜下观察, 阳性反应为细胞浆呈棕黄色染色, 不染色者为阴性并用 PBS 作空白对照 1.7 RT-PCR 检测类固醇激素合成酶的 mrna 表达 PCR 的引物详见表 1 采用 RT-PCR 方法检测卵巢 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 的 mrna 表达 Trizol 试剂盒一步法提取卵巢总 RNA, 测定 A 值, 计算纯度和含量,A 260 nm /A 280 nm 均在 1.8~2.0 之间按试剂盒要求进行逆转录扩增, 扩增条件 :94 C 预变性 3 min ;94 C 变性 30 s,60 C 退火 30 s,72 C 延伸 1 min, 共 30 循环 (P450arom mrna 40 循环 ); 最后 72 C 延伸 5 min 以 GAPDH 作为内参照扩增产物在 1.5% 的琼脂糖凝胶中电泳 20~30 min, 用 Bio-Rad 凝胶图像分析仪摄片, 并用 Quantity one 凝胶分析软件进行吸光度半定量分析

3 林伟等 : 类固醇激素合成酶在大鼠多囊卵巢综合症模型中的表达 173 表 1. PCR 引物序列 Table 1. Sequences of primers Gene Primer sequence Product (bp) 3β-HSD F: 5 -AGACCAGAAACCAAGGAGGAAT R: 5 -TGTATGGGTATGGATTTGACCA-3 17β-HSD F: 5 -AAGTTTGCGCTCGAAGGTCTGT R: 5 -TGCAGACCATCCCAATTCAGCT-3 P450arom F: 5 -GCACGAGAATGGCATCATATT R: 5 -ACGTCTCTCAGCGAAAATCAA-3 GAPDH F: 5 -CAGTGCCAGCCTCGTCTCAT R: 5 -AGGGGCCATCCACAGTCTTC 蛋白印迹 (Western blot) 检测蛋白表达量卵巢组织经处理后加 RIPA 裂解液, 吸取上清液, 用 BCA 法测定蛋白质浓度, 取蛋白 30 μg 上样于 12% 聚丙烯酰胺凝胶电泳并转印至 PVDF 膜上,5% 的脱脂奶粉封闭 1 h, 加入抗 3β-HSD 多克隆抗体 (1:6 000), 抗 17β-HSD 多克隆抗体 (1:2 500) 或抗 P450arom 多克隆抗体 (1:5 000),4 C 过夜, 一抗反应结束后, 加二抗即通用型 IgG 抗体 (Fab 段 )-HRP 多聚体稀释液 (1:500 或 1:250), 室温孵育 2 h,ecl 试剂显色, 暗室中曝光显影定影扫描, 并用 Quantity one 凝胶分析软件分析吸光度值, 以 GAPDH 作为内参照 1.9 统计方法采用 SPSS15.0 软件处理实验数据, 结果以 mean ± SD 表示统计方法用独立样本的 t 检验,P < 0.05 时差异有统计学意义 2 结果 2.1 大鼠一般情况及血清激素水平的评估两组大鼠发育良好, 毛色润泽, 行为反应无异常与 NC 组相比,PCOS 组的体重明显增加 (P < 0.05) 与 NC 组相比,PCOS 组大鼠血清睾酮 (P < 0.01) 和 E 2 (P < 0.05) 显著升高, 孕酮水平虽有所降低, 但无显著差异两组大鼠卵巢的重量和体积之间均未见显著差异 ( 表 2) 2.2 PCOS 组大鼠动情期和动情间期延长阴道涂片显示,NC 组动情周期稳定 ( 为 4~5 天, 含动情前期动情期动情间期和动情后期 ) ; 表 2. 两组血清激素水平及一般情况 Table 2. Serum hormones levels and general conditions of two groups Comparison project NC (n = 10) PCOS (n = 20) Testosterone (ng/ml) 4.06 ± ± 1.90 ** Progesterone (ng/ml) ± ± Estrogen (pg/ml) ± ± * Body weight (g) ± ± * Ovarian volume (cm 3 ) 0.13 ± ± 0.04 Ovarian weight (mg) ± ± Mean ± SD. * P < 0.05, ** P < 0.01 νs NC group. 图 1. 两组卵泡膜细胞的超微结构变化 Fig. 1.Ultrastructure changes of theca cells in the two groups indicated by electron microscopy. Compared to those in NC group (A), the theca cells in PCOS group (B) had richer lipid droplets, vacuoles in the mitochondria and dilated endoplasmic reticulum in the cytoplasm. Scale bar, 1 μm.

生理学报 Acta Physiologica Sinica, Apirl 25, 2013, 65(2): 171 177 174 PCOS 组 (100% 20/20) 大鼠失去了动情周期的规脂滴中量的内质网和线粒体 PCOS 组卵泡膜细律性变化主要表现为动情期 (60%, 12/20) 和动情间期 (90%, 18/20) 延长分别延长 3~7 天和 4~6 天

A: Ovarian follicles in NC group; B: Multiple cystic follicles in PCOS group. Scale bar, 100 μm 图 3.

4 生理学报 Acta Physiologica Sinica, Apirl 25, 2013, 65(2): PCOS 组 (100% 20/20) 大鼠失去了动情周期的规脂滴中量的内质网和线粒体 PCOS 组卵泡膜细律性变化主要表现为动情期 (60%, 12/20) 和动情间期 (90%, 18/20) 延长分别延长 3~7 天和 4~6 天胞内含有大量的脂滴细胞器丰富颗粒细胞核固缩内质网扩张线粒体内出现空泡 ( 图 1) NC 组 2.3 大鼠卵巢的形态学变化大鼠卵巢表面色泽红镜下可见不同时期的卵泡和黄体颗粒细胞形态完整排列整齐多为 8~9 层电镜结果显示 NC 组卵泡膜细胞含少量的的图 2. 两组卵巢的显微照片 Fig. 2. Micrographs of ovaries in the two groups showed by HE staining. A: Ovarian follicles in NC group; B: Multiple cystic follicles in PCOS group. Scale bar, 100 μm 图 3. 两组卵巢组织3β-HSD 17β-HSD和P450arom蛋白的表达 Fig. 3. The expressions of 3β-HSD, 17β-HSD and P450arom in ovaries of the two groups detected by immunohistochemistry. The 3β-HSD was mainly expressed in luteinized granulosa cells and theca cells; The 17β-HSD was mainly expressed in the granulosa cells and theca cells; P450arom was mainly expressed in luteinized granulosa cells. The arrows indicate granulosa cells, and the triangles indicate the theca cells.

林伟等 : 类固醇激素合成酶在大鼠多囊卵巢综合症模型中的表达 175 卵泡膜细胞间质细胞未见增生 PCOS 组 : 大鼠卵巢稍呈苍白色, 可见多个囊性卵泡, 双侧卵巢不对称性增大 HE 染色结果显示,PCOS 组多个卵泡囊性扩张, 扩张的卵泡中颗粒细胞层减少, 外包绕梭形的卵泡膜细胞 ; 另可见少量黄体形成 ( 图 2) 2.

;P450arom 表达于囊状卵泡的颗粒细胞层 ( 图 3) 2.5 PCOS 组卵巢组织 3β-HSD 和 17β-HSD 的表达升高,P450arom 表达下降与 NC 组相比,PCOS 组卵巢组织 3β-HSD mrna 水平上升了 41.51% (P < 0.05),17β-HSD mrna 水平明显升高了 62.65% (P < 0.

5 林伟等 : 类固醇激素合成酶在大鼠多囊卵巢综合症模型中的表达 175 卵泡膜细胞间质细胞未见增生 PCOS 组 : 大鼠卵巢稍呈苍白色, 可见多个囊性卵泡, 双侧卵巢不对称性增大 HE 染色结果显示,PCOS 组多个卵泡囊性扩张, 扩张的卵泡中颗粒细胞层减少, 外包绕梭形的卵泡膜细胞 ; 另可见少量黄体形成 ( 图 2) 2.4 PCOS 组大鼠 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 的表达定位 NC 组 :3β-HSD 和 17β-HSD 主要表达在颗粒细胞和外围少量的卵泡膜细胞层中,P450arom 在各时期的颗粒细胞层中均有表达 ;PCOS 组 :3β-HSD 特异性染色主要定位在增生的卵泡膜细胞及黄素化的颗粒细胞中 ;17β-HSD 主要集中在囊状卵泡的颗粒细胞层, 外围的卵泡膜细胞 ;P450arom 表达于囊状卵泡的颗粒细胞层 ( 图 3) 2.5 PCOS 组卵巢组织 3β-HSD 和 17β-HSD 的表达升高,P450arom 表达下降与 NC 组相比,PCOS 组卵巢组织 3β-HSD mrna 水平上升了 41.51% (P < 0.05),17β-HSD mrna 水平明显升高了 62.65% (P < 0.01) 与 NC 组比较, PCOS 组卵巢组织中 P450arom mrna 含量则降低了 58.83% (P < 0.01)( 图 4) 与 NC 组相比,PCOS 组卵巢组织 3β-HSD 蛋白表达上升了 46.93% (P < 0.05),17β-HSD 蛋白表达上升了 53.91% (P < 0.01) 而 PCOS 组卵巢组织 P450arom 蛋白表达明显低于 NC 组, 降低了 42.99% (P < 0.05) ( 图 5) 图 4. 两组卵巢组织中 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom mrna 表达情况 Fig. 4. The expressions of 3β-HSD, 17β-HSD and P450arom mrna in ovaries of the two groups detected by RT-PCR. Mean ± SD, n = 3. * P < 0.05, ** P < 0.01 vs NC group. 图 5. 两组卵巢组织中 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 蛋白表达情况 Fig. 5. The expressions of 3β-HSD, 17β-HSD and P450arom proteins in ovaries of the two groups detected by Western blot. Mean ± SD, n = 3. * P < 0.05, ** P < 0.01 vs NC group.

6 176 生理学报 Acta Physiologica Sinica, Apirl 25, 2013, 65(2): 讨论通过注射外源性雄激素可导致大鼠成年后排卵 [5 7] 障碍, 我们在给未成年大鼠注射 DHEA 后, 结果显示大鼠卵巢呈多囊性改变, 卵泡早熟, 动情期紊乱和不排卵, 卵巢形态结构和超微结构均发生显著变化, 血清激素改变, 均与人 PCOS 十分相似我们的实验结果显示, 类 PCOS 大鼠 E 2 水平升高 ; [16] 而 Wang 等的体外实验研究显示 PCOS 患者卵巢颗粒细胞分泌的 E 2 量增加, 且在基础状态下分泌 [17] 的 E 2 量也明显增加,Mason 等的结果等也证实了这一点人 PCOS 本身是一种病因和临床表现十分复杂的异质性疾病, 类 PCOS 大鼠的病理特点虽然与人 PCOS 不是完全相似, 但具有血清雄激素升高持续性排卵障碍和多囊卵巢等典型的特征, 因此可作为类 PCOS 大鼠模型, 用于探讨人类 PCOS 激素代谢异常发病机制近年研究表明,PCOS 是多种因素参与的内分泌紊乱性疾病, 既有糖代谢紊乱又有脂质代谢紊乱, [8] 而高雄激素血症是其突出特征 Marshall 等研究证明下丘脑促性腺激素释放激素脉冲频率增加, 导致 LH 分泌异常, 从而诱导卵泡膜细胞增生, 雄 [9] 激素合成增加 Crosignani 等认为过多的雄激素源于肾上腺, 而慢性感染遗传等与 PCOS 也有关 PCOS 患者体内雄激素水平升高受多种酶的调控, 尤其是类固醇激素合成酶, 其中包括 StAR 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 等, 而 3β-HSD 17β-HSD 和 P450arom 在性激素合成途径中扮演着重要的角色在本实验中,PCOS 组中 3β-HSD 和 17β-HSD 的表达显著升高, 而 P450arom 的表达则显著降低本研究结果显示的正常大鼠 3β-HSD 的免疫组化的定 [10] 位与 Juneau 等的描述一致, 主要集中在卵泡膜细胞和颗粒细胞中, 而在 PCOS 中更集中表现在增 [11] 生卵泡膜细胞中 Nelson 等在长期培养 PCOS 卵泡膜细胞中发现 3β-HSD 活性表达增强, 提示 [12] PCOS 卵泡膜细胞的稳定性增强 Matalliotakis 等在体外研究观察到雄激素的增加是 PCOS 一种稳定的生成类固醇的表型本研究结果显示,3β-HSD 和 17β-HSD 的 mrna 蛋白表达均显著增加, 这表明 PCOS 中的高雄激素是表达上调的 3β-HSD 和 17β-HSD 共同作用的结果卵巢颗粒细胞是构成卵泡的重要组成部分, 其分泌卵泡液及甾体激素 P450arom 由颗粒细胞表达, 是催化雄烯二酮和睾酮转化为雌酮和 E 2 的关键酶, 其数量和活性直接决定了正常和异常组织中雌激素的水平, 主要分布在内质网和线粒体内膜上本研究的电镜结果表明,PCOS 组卵巢颗粒细胞核 [13] 固缩 Zhang 等研究显示,PCOS 大鼠的颗粒细胞胞核, 细胞器及细胞结构均出现异常的变化, 与我们的结果一致在本实验中,PCOS 组大鼠卵巢组织 P450arom 蛋白和 mrna 的表达均降低, 与以往在 PCOS 小鼠患者和大鼠上所得的研究结果 [14,15] 一致综合上述结果, 我们推测 PCOS 组颗粒细胞结构及数量的变化可能抑制了卵泡的生长发育及成熟, 进而使卵巢中 P450arom 表达降低但是本研究结果也显示,PCOS 组中血清 E 2 水平显著升高对于 PCOS 患者 E 2 水平的升高和降低, 一直 [16, 17] 存在着许多争议 : 有研究显示 PCOS 组颗粒细胞不仅在 FSH 刺激下产生的 E 2 量增加, 而且在基础状态下产生的 E 2 量也明显增加相关的研究也显示, 在用 DHEA 或其衍生物造 PCOS 大鼠模型时, [13, 18, 19] 同样出现血清 E 2 水平显著升高本研究的阴道涂片结果证实,PCOS 大鼠模型组均处于动情期和动情前期, 这一时期的大鼠血清 E 2 正处于高峰期, 而 NC 组的大鼠正好处于动情后期和动情间期, 即血清 E 2 处于基线水平, 这可能使得 PCOS 组中血清 E 2 水平较 NC 组显著升高, 其具体机制有待进一步研究本实验通过提高外源性 DHEA 水平, 可以造成雄烯二酮水平增高, 进而睾酮及雌酮水平升高, 出现类似 PCOS 患者高雄激素血症的病理特征, 而升高的雌酮水平对 FSH 的负反馈使 FSH 相对不足, 使卵泡发育停滞, 导致排卵障碍及卵巢多囊化改变, 这也可能是使 PCOS 组大鼠血清 E 2 升高的原因之一综上所述, 我们的研究显示类固醇激素合成酶 (3β-HSD 和 17β-HSD) 在多囊卵巢中共同参与了 PCOS 激素的生物合成和转化, 且共同参与调控了 PCOS 中高雄激素血症这一典型特征但是, 是否还有其它途径参与 DHEA 诱导的 PCOS 大鼠模型 E 2 水平上升, 及是否还有其它转录因子或代谢途径参与 P450arom 的调控, 例如是否是由于 FSH 受体活性受限, 使 camp 活性降低, 从而导致芳香化酶基因转录水平降低 ; 或者是 PCOS 芳香化酶本身酶的转录或下游水平缺陷所致, 还有待进一步研究参考文献 1 Solomon CG. The epidemiology of polycystic ovary syndrome. Prevalence and associated disease risks. Endocrinol

7 林伟等 : 类固醇激素合成酶在大鼠多囊卵巢综合症模型中的表达 177 Metab Clin North Am 1999; 28(2): Labrie F. Adrenal androgens and intracrinology. Semin Reprod Med 2004; 22(4): Walter DH, Zeiher AM. Genetic risk factors for myocardial infarct. Herz 2000; 25(1): Labrie F, Luu-The V, Belanger A, Lin SX, Simard J, Pelletier G, Labrie C. Is dehydroepiandrosterone a hormone? J Endocrinol 2005; 187(2): Knudsen JF, Mahesh VB. Initiation of precocious sexual maturation in the immature rat treated with dehydroepiandrosterone. Endocrinology 1975; 97(2): Meenakumari KJ, Agarwal S, Krishna A, Pandey LK. Effects of metformin treatment on luteal phase progesterone concentration in polycystic ovary syndrome. Braz J Med Biol Res 2004; 37(11): Parker CR Jr, Mahesh VB. Interrelationship between excessive levels of circulating androgens in blood and ovulatory failure. J Reprod Med 1976; 17(2): Marshall JC, Eagleson CA, McCartney CR. Hypothalamic dysfunction. Mol Cell Endocrinol 2001; 183(1 2): Crosignani PG, Nicolosi AE. Polycystic ovarian disease: heritability and heterogeneity. Hum Reprod Update 2001; 7(1): Juneau C, Dupont E, Luu-The V, Labrie F, Pelletier G. Ontogenesis of 3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase delta 5-delta 4 isomerase in the rat ovary as studied by immunocytochemistry and in situ hybridization. Biol Reprod 1993; 48(2): Nelson VL, Legro RS, Strauss JF 3rd, McAllister JM. Augmented androgen production is a stable steroidogenic phenotype of propagated theca cells from polycystic ovaries. Mol Endocrinol 1999; 13(6): Matalliotakis I, Kourtis A, Koukoura O, Panidis D. Polycystic ovary syndrome: etiology and pathogenesis. Arch Gynecol Obstet 2006; 274(4): Zhang J ( 张娟 ), Zhu GJ, Wang XR, Xu B, Hu LL. The study of rat polycystic ovarian syndrome (PCOS) model induced by sodium prasterone sulfate. Chin J Birth Health Heredity ( 中国优生与遗传杂志 ) 2007; 15(2): (Chinese, English abstract). 14 Deshpande RR, Chang MY, Chapman JC, Michael SD. Alteration of cytokine production in follicular cystic ovaries induced in mice by neonatal estradiol injection. Am J Reprod Immunol 2000; 44(2): Jakimiuk AJ, Weitsman SR, Brzechffa PR, Magoffin DA. Aromatase mrna expression in individual follicles from polycystic ovaries. Mol Hum Reprod 1998; 4(1): Wang GM ( 王葛明 ), Lu CH, Qiao JL, Mei Z. The effects of FSH, LH and insulin on steroids production by granulosa cells from polycystic ovaries syndrome. Nat Med J Chin ( 中华医学杂志 ) 1998; 78(11): (Chinese, English abstract). 17 Mason HD, Willis DS, Beard RW, Winston RM, Margara R, Franks S. Estradiol production by granulosa cells of normal and polycystic ovaries: relationship to menstrual cycle history and concentrations of gonadotropins and sex steroids in follicular fluid. J Clin Endocrinol Metab 1994; 79(5): Anderson E, Lee GY, O Brien K. Polycystic ovarian condition in the dehydroepiandrosterone treated rat mode hyperandrogenism and the resumption of meiosis aremajor initial events associated with cystogenesis of antral follicles. Anat Rec 1997; 249: Zhu L ( 朱亮 ), Xing FQ, Quan S, Zhang WY, Du JX. Studies on LHR, INSR, AR genes methylation states in rat polycystic ovarian syndrome model induced by dehydroepiandrosterone. J Reprod Contraception ( 生殖与避孕 ) 2010; 30(1): 9 14 (Chinese, English abstract).

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环球中医药 2016 年 5 月第 9 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两种电针对脊髓损伤 14 天后大鼠运动功能神经元及 MEK2 p 鄄 ERK1 表达的影响论著宋良玉摇吕威摇景泉凯摇莫雨