1144 中南大学学报 ( 医学版 ), 2017, 42(10) molecular basis for the abnormal sapra syndrome. KEY WORDS abnormal sapra syndrome; metabonomi

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中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2017, 42(10) http://www.csumed.org 1143 DOI:10.11817/j.issn.1672-7347.2017.10.003 www.csumed.org/xbwk/fileup/pdf/2017101143.

1 中南大学学报 ( 医学版 ) J Cent South Univ (Med Sci) 2017, 42(10) DOI: /j.issn 异常胆液质证大鼠尿液代谢组分的变化及其意义哈力旦阿布都, 卡思木江阿西木江, 阿不来提阿合买提, 吴桂霞, 张静萍, 库热西玉努斯 ( 新疆医科大学基础医学院, 乌鲁木齐 ) [ 摘要 ] 目的 : 基于代谢组学方法研究异常胆液质证大鼠尿液中的差异性代谢组分, 并通过差异性代谢组分结果探讨异常胆液质证的分子基础方法 : 选用 Wistar 大鼠, 通过干热环境干热性饲料慢性电刺激等多复合因素建立维吾尔医学异常胆液质载体动物模型, 通过代谢组学方法检测尿液中的差异性代谢物结果 : 异常胆液质证大鼠尿液具有显著性高峰度代谢物为异亮氨酸亮氨酸糖蛋白, 具有显著性低峰度代谢物为谷氨酰胺肌酸柠檬酸苯丙氨酸结论 : 多因素复合刺激可促进异常胆液质的产生, 异常胆液质证大鼠存在三大营养物质及能量代谢障碍, 可能是异常胆液质证的分子基础 [ 关键词 ] 异常胆液质 ; 代谢组学 ; 维吾尔医学 Metabonomic analysis of the urine from rat model with abnormal sapra syndrome Halidan.ABUDU, Kasimujiang.AXIMUJIANG, Abulaiti.AHEMAITI, WU Guixia, ZHANG Jingping, Kurexi.YUNUSI ( Basic Medical School, Xinjiang Medical University, Urumqi , China ) ABSTRACT Objective: To investigate the correlation between the change in metabolic components of urine and the abnormal sapra syndrome by using a rat model of abnormal sapra syndrome. Methods: Multiple factors, such as dry environment, dry feed, and chronic electrical stimulation, were used to establish the abnormal sapra syndrome in Wistar rats by Uyghur medicine. The differences in metabolites were detected through the metabonomics method. Results: The urine of rats in abnormal sapra syndrome group showed significant high abundance metabolites as follows: Leucine, isoleucine, and glycoprotein. And that significant low abundance metabolites as follows: Glutamine, creatine, citric acid, and phenylalanine. Conclusion: The urine of rats with the abnormal sapra syndrome displays abnormal energy metabolism. It is likely that the dysfunctional metabolisms of three major nutrients might be the 收稿日期 (Date of reception): 第一作者 (First author): 哈力旦阿布都, halida_abudou@126.com 通信作者 (Corresponding author): 库热西玉努斯, kurax8824@sina.com 基金项目 (Foundation item): 国家自然科学基金 ( ) This work was supported by the National Natural Science Foundation of China ( ).

2 1144 中南大学学报 ( 医学版 ), 2017, 42(10) molecular basis for the abnormal sapra syndrome. KEY WORDS abnormal sapra syndrome; metabonomics; Uyghur medicine 维吾尔医学 ( 简称维医 ) 体液学说的核心内容是说明人体体液的来源种类及其应用体液学说认为人体由黑胆质 (savda) 血液质(kan) 黏液质 (belhem) 和胆液质 (sapra)4 种不同的体液质构成, 这 4 种体液在体内的动态平衡为人体生命活动的正常进行提供稳定的内环境若 4 种体液质发生质变或量变, 将形成异常黑胆质 (abnormal savda) 异常血液质 (abnormal kan) 异常黏液质(abnormal belhem) 和异常胆液质 (abnormal sapra), 使机体处于亚健康状态, 这种亚健康状态长期存在或进一步发展可导致疾病的发生胆液质体液作用是促进脂类物质的分解, 刺激肠道蠕动, 加速消化产生的废物排出体外, 并对一部分有毒物质起到防毒解毒的作用 [1-2] 维医对疾病进行预防诊断和治疗的关键是对异常体液质的分型, 所以, 异常体液质的正确分型是维医对疾病进行整体化治疗的关键 [3] 维医体液学说认为机体内的异常胆液质一方面为消化系统疾病的发生发展提供了土壤, 另一方面又是内外环境遗传饮食等多方面因素变化而引起的细胞脏器和系统正常生理功能失调的结果 [4] 本研究应用代谢组学方法通过核磁共振 (NMR) 波谱技术测定异常胆液质证大鼠尿液代谢物成分及其相对含量, 鉴别异常胆液质证代谢产物差异, 探讨异常胆液质证的产生及其致病的物质基础 1 材料与方法 1.1 材料动物雄性 SPF 级 Wistar 大鼠 16 只, 体重 (180±30) g, 鼠龄 6~8 周, 购自新疆医科大学实验动物中心适应性喂养 7 d 后, 随机分为正常组和异常胆液质证组, 每组 8 只试药与仪器大鼠饲料购自新疆医科大学实验动物中心, 动物灌胃饲料购自新疆维吾尔自治区维吾尔医院, 各药材特点 [3-4] : 黑胡椒属四级干热性药材 ; 干姜属三级热性二级干性药材 ; 西红花属三级干性二级热性药材 ( 长期联合使用以上药材体内易生成异常胆液质体液 ) VARIAN 600 MHz NMR 波谱仪 80 超低温冰箱购自美国 THERMO 公司 ; 超速低温离心机购自德国 Eppendorf 公司 ;FLI-2999HT 型人工气候箱购自日本 EYE-LA 公司 ; 代谢笼购自安徽淮北正华生物有限公司 ; 电击笼购自乌鲁木齐启翔生物有限公司 ; 重水 (deuterium oxide,d 2 O) 购自美国 Cambridge Isotop Laboratories,TSP 购自美国 Sigma 公司 ;K 2 HPO 4.3H 2 O 和 NAH 2 PO 4.2H 2 O 购自天津市光复精细化工研究所 ;5 mm 核磁管蒸馏水 Topspin 2.0 软件购自德国 Bruker 公司 1.2 异常胆液质证大鼠模型的构建按照维吾尔医学理论和文献 [5-6] 记载, 本课题组在以往的的研究方法上进行了适当的调整采用干热属性饮食及饮用西红花水干热环境和慢性刺激, 持续进行 10 d 建立异常胆液质证大鼠模型参考 [7-8] 维吾尔医学经典书籍记载,30 g 黑胡椒 30 g 干姜打成粉末和 0.3 g 西红花溶于 400 ml 双蒸水中制干热属性灌胃饲料, 每天每只大鼠按 2 ml/100 g 剂量灌胃 ; 将 1 g 西红花溶于 400 ml 双蒸水中, 浸泡约 6 h 制备饮用西红花水干热饲养环境按文献 [9-11] 记载, 以环境温度为 (26±2), 相对湿度为 38%~40%, 每天使用 10 h 人工气候箱模拟实现慢性电刺激按照文献 [12-13] 所述, 采用间断足底电击, 输出电压 20~40 V, 不定时改变电压, 间隔 0.2~0.5 s, 每天 1 次,30 min/ 次夹尾噪音等根据文献 [14] 操作夹尾, 用小型书夹夹住老鼠的尾巴, 让其相互撕咬打斗, 每日处理 1 次, 每次 5 min; 噪音, 每天用 100 db 以上的快节奏音乐持续刺激 2 h 正常组大鼠于室温 (24±2), 相对湿度 60%~80% 下饲养, 每天每笼给予普通饲料 300 g, 蒸馏水 200 ml, 不给予任何刺激干预后, 与正常组比较, 异常胆液质证大鼠会出现舌及舌苔变黄变厚, 皮肤粗糙无光泽, 对周围环境的刺激非常敏感, 尿量减少呈黄色或橙色, 大便成形呈硬颗粒状 ; 提示异常胆液质证大鼠模型建构成功

3 异常胆液质证大鼠尿液代谢组分的变化及其意义哈力旦阿布都, 等收集及处理尿液样品收集尿液异常胆液质证大鼠模型建立成功后, 每只老鼠单独放入代谢笼 24 h, 禁食, 正常饮水, 收集尿液样品并记录尿量, 将收集的尿液样品 r/min 离心 15 min, 取上清, 加入叠氮钠, 放入 80 冰箱待测样品的配置及核磁共振氢谱 ( 1 H-NMR) 的记录尿液样本在室温中解冻, 将 400 μl 尿液样本和 200 μl 已配置好的缓冲液加入离心管, 充分震荡混均后,4, r/min 离心 10 min, 取上清液 550 μl 放入 5 mm 核磁样品管中待测已配好的样品保存于 4 冰箱内, 测试前 15 min 取出置于常温下, 上样前用纸巾擦干核磁管外壁对尿液样品进行 1 H-NMR 实验所有 1 H-NMR 的测试均在 25 条件下用 VARIAN 600 MHz NMR 波谱仪进行, 调用标准 noesy 脉冲序列并用预饱和方法压制水峰每个样品谱宽为 10 khz, 采样点位 32K, 饱和时间为 2 s 将一维谱中质量较高的样品筛选出来进行二维谱测定, 方便后续的解谱工作 H-NMR 图谱处理及数据分析完成所有样品的检测后, 将数据导入 Topspin 2.0 软件对尿液 1 H-NMR 图谱手动进行相位和基线校正所有 1 H-NMR 图谱以内标 3- 三甲基甲硅烷基 -2, 2, 3, 3- 四氘代丙酸钠 (TSP,δ=0.00) 为化学位移参考峰的位置为标准进行定标, 对每一个 1 H-NMR 图谱的 10~0.5 ppm 范围内以每段为 δ=0.003 进行分段积分并进行归一化处理 ( 每段积分面积除以所有积分面积之和 ) 数据用 SIMCA-P+11 软件采用 UV(unit variance) 标准化方式进行处理后, 进行正交偏最小二乘判别分析 (orthogonal partial least-squares discriminant analysis, OPLS-DA) OPLS-DA 是一种基于偏最小二乘法的线性回归统计分析方法, 分析结果有较高的可信度 OPLS-DA 分析方法以优化程度 (R 2 X) 反应变量 Y 的变异百分比 (R 2 Y) 和预计结果的真实性 (Q 2 ) 作为所建立模型大鼠的评价指标寻找尿液中差异性代谢物 [15-17], 并得到各组尿液的 OPLS-DA 散点分布图散点分布图可给出各组尿液样品在空间上的位置, 每一个点代表了一个样品 Q 2 >0.5 表示样本的预测结果为良,Q 2 >0.9 表示样本的预测结果为优通过 Pearson 相关系数统计学差异检测 (Pearson s product moment correlation coefficient) 确定 0.602( 最少样本数为 6 时 ) 作为代谢产物变化是否具有统计学差异的界值 (P=0.05) 使用 SIMCA-P+11 软件进行 OPLS-DA 统计分析, 以 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果正常组异常胆液质证组大鼠的尿液 1 H-NMR 图谱如图 1 所示对 1 H-NMR 图谱进行分段积分后的积分值进行 OPLS-DA 分析, 得到 2D 平面分布图与 3D 空间分布图 ( 图 2) 该分析中 R 2 X=0.359,R 2 Y=0.911, Q 2 =0.519, 从图 2 中可以看到, 两组的分布区域完全分开, 说明两组代谢成分上有明显的差异从相关系数中得到两组差异性代谢组分的化学位移并与相关系数相结合确定差异程度根据以上信息及 1 H-NMR 图谱和 2D 平面分布图 3D 空间分布图确定各组大鼠尿液中的差异性代谢成分 ( 表 1) 两组尿液代谢组分有明显的差异, 差异性代谢组分中相关系数为正值的代谢物是在异常胆液质证组中升高的代谢物, 相关系数为负值的代谢物是在异常胆液质证组中下降的代谢物与正常组相比, 异常胆液质证组尿液中异亮氨酸亮氨酸糖蛋白等代谢组分含量降低, 而谷氨酰胺肌酸柠檬酸苯丙氨酸等代谢组分含量升高, 差异有统计学意义 (P<0.05, 表 1) 化学位移 /ppm A 化学位移 /ppm B 图 1 2 组大鼠尿液 1 H-NMR 图谱 Figure 1 1 H-NMR spectra of urine samples A: Abnormal sapra syndrome group; B: Normal group. 1: Isoleucine; 2: Leucine; 3: Glycoprotein; 4: Glutamine; 5: Creatine; 6: Citric acid; 7: Phenylalanine

4 1146 中南大学学报 ( 医学版 ), 2017, 42(10) 主成分正常组异常胆液质证组正常组异常胆液质证组主成分主成分 1 A 主成分 3 主成分 1 B 图 2 正常组与异常胆液质证组大鼠尿液 1 H-NMR 的 OPLS-DA 平面分布 (A) 与空间分布图 (B) Figure 2 OPLS-DA score plots (A) and dimensional score plots (B) from 1 H-NMR spectra of urine of normal group and abnormal sapra syndrome group 表 1 各组大鼠尿液 1 H-NMR 图谱经过 OPLS-DA 分析获得的主要差异性代谢物及其相关系数 Table 1 Urine metabolities primarily responsible for separation between groups through the OPLS-DA model and correlation coffecient 序号代谢物归属化学移位相关系数 * 趋势 1 异亮氨酸 δ-ch 3,β-CH (t),1.00(d) 0.76 下降 2 亮氨酸 δ-ch (d) 0.67 下降 3 糖蛋白 NHCO-CH 2.03(s) 0.80 下降 4 谷氨酰胺 half γ-ch (m),2.42(m) 0.71 上升 5 肌酸 CH 3,CH (s),3.93(s) 0.68 上升 6 柠檬酸 half-ch 2,half-CH (d),2.67(d) 0.67 上升 7 苯丙氨酸 H 2 /H 6,H 3 /H (m),7.42(m) 0.82 上升 s: 单峰 ;d: 双重峰 ;t: 三重峰 ;q: 四重峰 ;m: 多重峰 ;dd: 双重双重峰 ;ddd: 双重双重双峰 * 相关系数为负数是指该代谢物在正常组中是降低的 ; 相关系数为正值是指该代谢物在正常组是上升的 3 讨论 Nicholson 研究小组于 1999 年提出了代谢组学的概念 [18], 并在疾病诊断药物筛选等方面做了大量的工作 [19-20] 基于 NMR 的代谢组学主要是利用 NMR 测定生物体液或组织提取液中的内源性代谢产物, 通过模式识别分析确定机体在病理生理状态下的代谢表型, 以代谢表型与数据库比较分析确定化学物质作用靶器官机体发病机制及生物标志物 NMR 图谱中包含与特定靶器官相关代谢物信号相对应的特定区域每种体液都具有特异性的 NMR 指纹谱, 其中可溶性物质的浓度和分子间的相互作用决定了峰谱的密度和分布 [21-22] 本研究通过 NMR 检测技术分析异常胆液质证组与正常组尿液的代谢差异物, 发现异常胆液质证组尿液具有显著性高峰度代谢物为异亮氨酸亮氨酸糖蛋白, 具有显著性低峰度代谢物为谷氨酰胺肌酸柠檬酸苯丙氨酸异亮氨酸和亮氨酸是不能在机体内自身合成, 需要外界补给的必需氨基酸, 属于支链氨基酸支链氨基酸既有合成作用又有抗分解作用 [23] 它们对其他氨基酸的合成起辅助作用, 促进相关激素的释放和防止蛋白质的分解和肌肉丢失支链氨基酸是唯一的不在肝内, 而是在骨骼肌中进行代谢的氨基酸支链氨基酸的代谢产物进入三羧酸循环可以进行氧化供能, 所产生的三磷酸腺苷 (ATP) 的量远远高于其他氨基酸, 约占氨基酸供能总量的 60%, 即使机体处于休息状态, 骨骼肌中的支链氨基酸氧化所供应的能量也可以占到约 14%, 是一类重要的供能氨基酸异亮氨酸和亮氨酸在异常胆液质证组大鼠尿液中升高, 说明由于机体内三羧酸循环出现异常, 导致肌肉组织当中的蛋白质分解速度加快, 因此生成大量的异亮氨酸和亮氨酸去给机体进行供能这与异常胆液质证组大鼠的体重减轻相吻合从以上分析中, 可以得出机体处

5 异常胆液质证大鼠尿液代谢组分的变化及其意义哈力旦阿布都, 等 1147 于蛋白质分解代谢加速的内环境当中人体内的蛋白质 1/3 为糖蛋白糖蛋白是一类含糖的蛋白质, 由糖苷键以共价形式连接肽链中的某些氨基酸残基与寡糖链而形成糖蛋白在生物体内分布广, 种类繁多, 并且具有多种生物学效应 [24] 研究表明 : 糖蛋白中的寡糖链参与机体的凝血过程, 细胞识别和信号转导, 调节机体代谢等诸多功能大多数黏附分子为糖蛋白, 分布于细胞外基质和细胞膜的表面血小板表面的黏附分子为凝血过程中的血小板聚集的分子基础动脉中白色血栓主要由血小板构成白色血栓的形成引起血液的高凝状态, 高凝状态导致肠道黏膜的血液循环障碍, 加重肠道黏膜的缺血缺氧, 从而破坏肠道黏膜原有的保护屏障, 加剧肠道黏膜的损伤与此同时, 聚集的血小板还可以释放多种促炎因子, 加剧肠道黏膜 [25] 的炎症反应, 造成肠道黏膜的进一步损伤研究表明 : 溃疡性结肠炎患者的肠道黏膜上存在着异常上皮细胞, 它们可以通过分泌黏液糖蛋白, 破坏肠道黏膜组织的结构完整性, 使得某些抗原 ( 菌群食物等 ) 通过肠道黏膜的机械屏障进入黏膜细胞, 激发免疫炎症反应, 导致病情加重本实验异常胆液质载体证组大鼠模型尿液中糖蛋白升高, 与维医体液论中异常胆液质证体质者更易患消化道疾病的理论一致在生物体内, 谷氨酰胺是肠道黏膜和免疫细胞的主要能量来源, 正常生理情况下, 谷氨酰胺可以提供肠道约 70% 以上的能量肠道黏膜是谷氨酰胺主要的消耗场所因此, 生物体内保证足够的谷氨酰胺的含量, 对提高肠道黏膜上皮细胞对生长因子的反应性, 促进肠道黏膜的上皮细胞的增殖生长及分化, 维持肠道黏膜的组织和功能完整性及增强肠道免疫功能起重要作用 [26-28] 当机体处于病理状态时, 机体通过加快蛋白质的代谢来促进谷氨酰胺的生成, 但是由于肠道黏膜细胞大量地消耗谷氨酰胺, 导致机体所能生成的谷氨酰胺不能满足自身需要, 出现谷氨酰胺的相对不足, 体内谷氨酰胺的水平出现下降因此, 机体需通过加快蛋白质的分解代谢来弥补体内谷氨酰胺的不足异常胆液质证大鼠尿液中出现了谷氨酰胺含量的降低, 提示异常胆液质证大鼠体内谷氨酰胺含量的降低与肠道黏膜上皮细胞能量供应障碍, 肠道黏膜机械屏障受到破坏, 肠道免疫功能的下降等关系密切, 这与维医体液论中, 异常胆液质证体质者更易患消化道疾病的理论一致柠檬酸在三羧酸循环中是在 α- 酮戊二酸生成之前产生的中间产物, 而 α- 酮戊二酸可以通过转氨基作用生成谷氨酸, 谷氨酸又可以在谷氨酰胺合酶的催化下生成谷氨酰胺柠檬酸谷氨酰胺在异常胆液质证大鼠尿液中的含量均下降, 说明异常胆液质证大鼠的糖代谢途径出现异常, 反应速度出现变化导致中间产物的含量下降, 机体不能依靠糖的有氧氧化供应所需的能量, 因此机体必须通过加快脂肪动员和蛋白质的分解代谢途径进行能量供给, 这与异常胆液质证大鼠体重下降, 体形消瘦, 并且与尿液中的异亮氨酸和亮氨酸含量明显升高的代谢组学结果相一致苯丙氨酸在苯丙氨酸羟化酶作用下可转变为酪氨酸, 后者经不同代谢途径可合成儿茶酚胺类神经递质 (catecholamines,cas) 甲状腺素等肾上腺素 (epinephrine,e) 去甲肾上腺素(norepinephrine,NE) 和多巴胺 (dopamine,da) 为儿茶酚胺类物质, 作为神经递质和激素与人们的健康及疾病的发生有密切关系异常胆液质证组大鼠对刺激反应强烈, 出现易怒易惊慌及打斗的现象可能是机体通过消耗苯丙氨酸产生了大量的兴奋性神经递质所致肌酸是一类存在于生物体内的含氮氨基酸, 主要生理作用是为肌肉组织和神经细胞快速供应能量在线粒体中磷酸激酶可以催化肌酸发生磷酸化反应生成磷酸肌酸, 磷酸肌酸是一种高能磷酸化合物, 当机体需要其供能的时候, 磷酸肌酸被运输到肌肉组织和神经细胞, 将自身携带的磷酸基传递给二磷酸腺苷 (ADP) 用于合成 ATP 进行供能, 而自身失去磷酸基形成肌酸 [29-30] 当机体处于 ATP 丰富的运动缓解期时, 肌酸又可以被 ATP 磷酸化, 生成磷酸肌酸, 将高能磷酸基储存起来用于后面的生命活动机体的各项生命活动虽然是靠 ATP 来供应能量, 但是 ATP 在机体内储存的量非常少, 需要不断地进行合成在运动时,ATP 被很快消耗, 肌酸此时就可以快速地再合成 ATP 来供应能量异常胆液质证大鼠尿液中的肌酸含量显著降低, 说明异常胆液质证大鼠处于高产能高耗能状态, 并且耗能高于产能, 肌酸的大量消耗导致机体内肌酸水平下降总之, 维医体液论认为正常的体液和气质给机体的正常生理活动提供稳定的内环境从西医角度来说, 稳定的内环境是维持机体细胞组织各个脏器和体内多个复杂系统的正常运转的重要前提而异常胆液质的产生破坏了细胞外液也就是细胞在机体内所处环境的稳态, 并通过一系列复杂的生物化学反应, 影响了机体正常的代谢活动, 具体表现在代谢产物含量的变化通过经典的维医体液论, 笔者认为异常胆液质引起内环境的紊乱是异常体液质在机体整体水平上的表现, 而通过代谢组学分析所得到的代谢产物变化则是异常胆液质导致的机体处于亚健康状态的具体表现维医认为具有异常胆液

6 1148 中南大学学报 ( 医学版 ), 2017, 42(10) 质体质的个体易患消化系统疾病, 本研究证实了这一结果因此, 可推断异常胆液质证的形成为疾病的产生提供了土壤, 防治异常胆液质证的产生有望预防各种炎症性疾病的发生发展参考文献 [1] 哈木拉提吾甫尔. 维吾尔医气质体液论及其现代研究 [M]. 乌鲁木齐 : 新疆科学技术出版社, 2003: Halmurat.UPUR. Humor and temperament theory of traditional uyghur medicine and its modern research[m]. Urumqi: Xinjiang Science and Technology Press, 2003: [2] 买买提明沙比尔. 维吾尔医学诊断学 [M]. 乌鲁木齐 : 新疆科技卫生出版社, 1993, Maimaitiming.SHABIER. Diagnostics of traditional uyghur medicine[m]. Urumqi: Xinjiang Science and Technology Press, 1993: [3] 吐尔洪吾买尔, 阿尔甫买买提尼亚孜, 艾力肉孜. 维吾尔医生药学 ( 上册 )[M]. 乌鲁木齐 : 新疆人民卫生出版社, 2006: Tuerhong.WUMAIER, Aerfu.MAIMAITINIYAZI, Aili.ROUZI. Pharmacognostics of traditional uyghur medicine (volume one)[m]. Urumqi: Xinjiang Peoples Hygiene Press, 2006: [4] 吐尔洪吾买尔, 阿尔甫买买提尼亚孜, 艾力肉孜. 维吾尔医生药学 ( 中册 )[M]. 乌鲁木齐 : 新疆人民卫生出版社, 2006: Tuerhong.WUMAIER, Aerfu.MAIMAITINIYAZI, Aili.ROUZI. Pharmacognostics of traditional uyghur medicine (volume two)[m]. Urumqi: Xinjiang Peoples Hygiene Press, 2006: [5] 阿地力江伊明, 潘建春, 哈木拉提吾甫尔, 等. 几种不同方法建立维医异常黏液质阳痿病证模型的研究 [ J]. 新疆医科大学学报, 2010, 33(11): Adilijinag.YIMING, FAN Jianchun, Halmurat.UPUR, et al. Research on establishment of abnormal balgam (phlegmatic temperament) impotence syndrome model in traditional uyghur medicine using several different method[ J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2013, 33(11): [6] 哈木拉提吾甫尔, 阿依努尔买提斯迪克, 努尔买买提艾买提, 等. 异常黑胆质证载体动物模型的建立及其自然恢复反证 [ J]. 新疆医科大学学报, 2006, 29(10): Halmurat.UPUR, Ayinuer.MAITISIDIKE, Nuermaimaiti.AIMAITI, et al. The establishment of the animal model of abnormal Savda and its natural recovery[ J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2006, 29(10): [7] 再努勒艾塔尔. 拜地依药书 ( 维吾尔文 )[M]. 乌鲁木齐 : 新疆人民出版社, 2010: 39. Zainule.AITAER. The pharmacy book of Baidiyi (uyghur)[m]. Urumqi: Xinjiang People's Press, 2010: 39. [8] 国家中医药管理局, 中华草本编委会. 中华草本 : 维吾尔药卷 [M]. 上海 : 科学技术出版社, 2005: 25. The state administration of traditional Chinese medicine, the Chinese herb Editorial board. Chinese herbs: Uyghur medicine volume [M]. Shanghai: Science and Technology Press, 2005: 25. [9] 桑传兰, 王潇, 董浩然, 等. 光照和噪声对实验小鼠血液指标及肝肾功能的影响 [ J]. 动物医学进展, 2012, 33(5): SANG Chuanlan, WANG Xiao, DONG Haoran, et al. Effects of light and noise on blood index and liver, kidney function in experimental mice [ J]. Animal Medicine Progress, 2014, 33(5): [10] 董浩然, 王潇, 桑传兰, 等. 温度湿度对实验动物福利的影响 [ J]. 广州中医药大学学报, 2012, 29(1): DONG Haoran, WANG Xiao, SANG Chuanlan, et al. Effects of temperature and humidity on experimental animal welfare [ J]. Journal of Guangzhou University of Chinese Medicine, 2012, 29 (1): [11] Geir A, May-Bente B, Morten HV, et al. Can temperature explain the latitudinal gradient of ulcerative colitis Cohort of Norway Aamodt [ J]. BMC Public Health, 2013, 13(530): 2-8. [12] Shi Y, Li S, Wu HG, et al. Interventional effect of electro acupuncture combined with medicine on monoamine neurotransmitters in hypothalamus of rats with ulcerative colities[ J]. Neural Regen Res, 2007, 2(9): [13] Kellett J. Extinction deficit and fear reinstatement after electrical stimulation of the amygdale; implications for kindling associated fear and anxiety[ J]. Neuroscience, 2004, 127(2): [14] 唐红梅, 廖小红, 房财富, 等. 肝郁脾虚型大鼠肠易激综合征模型的建立及评价 [ J]. 现代消化及介入诊疗, 2012, 11(6): TANG Hongmei, LIAO Xiaohong, FANG Caifu, et al. Establishment and evaluation of rat irritable bowel syndrome model of liver and spleen depression [ J]. Modern Digestion and Interventional Therapy, 2011, 11(6): [15] Zhang Y, Lin L, Xu Y, et al. 1 H-NMR based spectroscopy detects metabolic alterations in serum of patients with early-stage ulcerative colitis[ J]. Biochem Biophys Res Commun, 2013, 433(4): [16] Qi SW, Tu ZG, Peng WJ, et al. 1 H-NMR based serum metabolic profiling in compensated and decompensated cirrhosis[ J]. World J Gastroenterol, 2012, 18(3): [17] Dowlatabadi R, Weljie AM, Thorpe TA, et al. Metabolic footprinting study of white spruce somatic embryogenesis using NMR spectroscopy[ J]. Plant Physiol Biochem, 2009, 47(1): [18] Nicholson JK, LinDon JC, Holmes E. "Metabonomics": understanding the metabolic responses of living systems to pathophysiological stimuli via m ultivariate statistical analysis of

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戊酸雌二醇片联合宫颈注射利多卡因用于绝经后妇女取环的临床效果评价陆琴芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s

戊酸雌二醇片联合宫颈注射利多卡因用于绝经后妇女取环的临床效果评价陆琴芬, 等 371 Keywords groups, no removal difficulties and failure, was statistically s 370 临床与病理杂志 J Clin Pathol Res 2015, 35(3) http://www.lcbl.net doi: 10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 View this article at: http://dx.doi.org/10.3978/j.issn.2095-6959.2015.03.009 戊酸雌二醇片联