Microsoft Word _editing.doc

Size: px

Start display at page:

Download "Microsoft Word _editing.doc"

词富
5 years ago
Views:

1 离子液体分散液 - 液微萃取 / 高效液相色谱法测定牛奶中己烯雌酚摘 1, 戚琦, 黄闵 2 1, 谢海华 (1 赣南师范学院化学化工学院, 江西赣州,341;2 赣南医学院第一附属医院, 江西赣州,341) 要 : 建立了离子液体分散液 - 液微萃取与高效液相 - 紫外检测器相结合测定牛奶中己烯雌酚含量的方法考察了萃取溶剂抗粘剂 ph 值离子强度及温度对萃取效率的影响结果表明该法对样品中己烯雌酚的萃取灵敏度高, 检出限为.5μg/L, 相对标准偏差落在 2.8~4.43%, 平均回收率为 % 该技术可以满足牛奶中己烯雌酚的测定关键词 : 分散液 - 液微萃取 ; 牛奶 ; 己烯雌酚 ; 高效液相色谱 Determination of diethylstilbestrol in milk using dispersive liquid-liquid microextraction followed by HPLC QI Qi 1, *, HUANG Min 2, XIE Haihua 1 (1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Gannan Normal University, Ganzhou 341 China;2. The First Affiliated Hospital of Gannan Medical University, Ganzhou 341 China) Abstract:A novel method for the determination of diethylstilbestrol in milk using dispersive liquid-liquid microextraction coupled to HPLC was developed. By single factor test, different parameters affecting the extraction efficiency: extraction solvent type and its volume, anti-sticking agent type and its volume, ph, salt concentration, temperature were discussed. Under the optimal conditions, the method had high sensitivity, low detection limit and high stability for the extraction of diethylstilbestrol. Ultrasound-assisted ionic liquid cold-induced aggregation microextraction could be successfully used for determination of diethylstilbestrol in milk. Key words:dispersive liquid-liquid microextraction; milk; diethylstilbestrol;hplc 中图分类号 :TS27.3 文献标志码 :A 文章编号 : 己烯雌酚是一种人工合成的雌激素, 可用于提高动物的生长速度, 其一直作为促进剂用在牛羊等畜禽饲料中 [1] 现已证实它可在动物的肝脏肌肉脂肪等处残留, 是一种致癌物质, 可诱发白血病子宫癌等疾病 [2-4] 由于己烯雌酚的滥用, 动物性食品中己烯雌酚的残留检测引起了国内外的高度重视 [5-7] 目前国内外报道用于己烯雌酚残留检测的方法很多主要有气相色谱法 [8] [9, 气相色谱- 质谱联用法 1] [11, 高效液相色谱法 12] [13, 液相色谱- 质谱联用法 14] [15, 电化学法 16] [17, 免疫法 18] [19] 蛋白质微阵列法和 [2, 21] 分子印迹传感器等传统的样品前处理技术, 存在操作繁琐耗时, 需要使用大量对人体和环境有毒有害的有机溶剂等缺点因此, 发展省时高效, 有机溶剂用量少的样品前处理新技术, 已成为分析化学 [11, 研究的热点之一近年来, 已发展了多种微萃取技术, 例如 : 固相微萃取 22] 液相微萃取 [23] 分散液 [24, 25] 相微萃取等本实验利用绿色溶剂离子液体 [Omim][PF 6 ] 作萃取溶剂, 在超声辅助的作用下, 用曲拉通 114 为抗粘剂, 建立了一种新型超声辅助的离子液体冷诱导微萃取的样品前处理技术, 并成功应用于牛奶中己烯雌酚的分析检测该方法集采样萃取和浓缩于一体, 操作简单快速成本低对环境友好且富集效率高 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 [Bmim][PF 6 ] ( 纯度 99%),[Hmim][PF 6 ] ( 纯度 99%),[Omim][PF 6 ] ( 纯度 99%) 购自上海成捷化学有限公司 ( 中国, 上海 ); 己烯雌酚 ( 纯度 99%) ( 德国,Dr. Ehrenstorfer 公司 ); 曲拉通 1 曲拉通 114 ( 试剂级, 上海美季生物技术有限公司 ); 其他试剂均为分析纯试剂 ; 所用水为超纯水 * 通信作者 : 戚琦 (1971-), 女, 副教授, 硕士, 研究方向 : 光谱学色谱学分析 qiqichem@163.com 1

2 1.2 仪器与设备 Agilent 12 系列高效液相色谱仪 (Santa Clara, CA, USA), 包括 :G1322A 脱气机,G1311A 四元泵,HT-22A 柱保温箱,G1314B 紫外检测器,G1328B 手动进样器 ; 高速离心机 ( 巩义予华仪器厂 ); 超纯水器 ( 韩国,Human Corporation 公司 );Delta 32 ph (Mettler-Toledo 仪器有限公司 ); 超声清洗器 ( 昆山超声仪器有限公司 ) 1.3 方法色谱条件色谱柱 : 反相 Extend-C18 柱 (25 mm 4.6 mm, 5 μm); 柱温 :35 ; 进样量 :1 μl; 流动相 : 甲醇 / 水 (.43 mol/l 磷酸盐缓冲溶液 ) (65/35, v/v); 流速 :1 ml/min 样品处理取 2.5 g 牛奶于 25 ml 刻度离心管中, 加 5 ml1mol/l 磷酸盐溶液 (ph=5), 混匀后离心 (4 r/min, 1 min) 上层清液转入 25 ml 离心管, 下层加 5 ml 1mol/L 磷酸盐溶液 (ph=5) 重复以上操作, 合并上清液离子液体液 - 液分散微萃取将 35 μl[omim][pf 6 ] ( 萃取剂 ) 和 1 μl 曲拉通 114 ( 抗粘剂 ) 加入至中合并的上清液中, 经振荡后超声 1min(55, 频率 4 khz, 功率 1 W) 乳化后的[Omim][PF 6 ] 溶液先于冰水浴中冷却 5 min, 后离心 5 min(5 r/min) 移除上层溶液, 用 1 μl 的甲醇溶解沉积在离心管底部的 [Omim][PF 6 ], 用.45 μm 微孔滤膜过滤, 用微量进样器吸取 1 μl 进样测定 2 结果与分析 2.1 萃取溶剂的影响由于 [Bmim][PF 6 ] 在水中的溶解度比较大, 不易形成乳化的两相系统, 本文考察了 [Hmim][PF 6 ] 和 [Omim][PF 6 ] 的萃取能力, 由图 1 和图 2 可知使用 [Omim][PF 6 ] 且用量为 35μL 时萃取效率高 [Hmim][PF 6 ] [Omim][PF 6 ] 离子液体的种类图 1 离子液体的种类对萃取效率的影响 (t=55, ω NaCl =) Fig.1 Effects of the types of ionic liquids on extraction efficiency(t=55, ω NaCl =) [Omim][PF 6 ] 的体积 : ml 图 2 [Omim][PF 6 ] 的用量对萃取效率的影响 (t=55, ω NaCl =) Fig.2 Effects of the volume of [Omim][PF 6 ] on extraction efficiency(t=55, ω NaCl =) 2.2 抗粘剂的影响 2

3 本文考察了两种非离子型表面活性剂 - 曲拉通 1 曲拉通 114 及其用量对萃取的影响, 由图 3 和图 4 可知曲拉通 114 作为抗粘剂效果较好, 且用量为 1μL 时萃取效率高曲拉通 1 抗粘剂的种类曲拉通 114 图 3 抗粘剂的种类对萃取效率的影响 (t=55, ωnacl=) Fig.3 Effects of the types of TritonX on extraction efficiency(t=55, ωnacl=) 曲拉通 114 的用量 : L 图 4 曲拉通 114 的用量对萃取效率的影响 (t=55, ωnacl=) Fig.4 Effects of the volume of Triton X-114 on extraction efficiency(t=55, ωnacl=) 2.3 ph 离子强度及温度的影响通过考察不同 ph( 图 5) NaCl 浓度 ( 图 6) 及温度 ( 图 7) 对萃取效率的影响结果表明, 当 ph 从 3. 增大到 8. 时, 只有在 ph 值为 5. 时, 萃取效率最高 ; 当 NaCl 浓度从增加到 1%, 当 NaCl 为 6.% 时萃取效率较高 ; 考察温度从 4 增加到 65, 由图可知 55 时萃取效果最好 ph 图 5 ph 对萃取效率的影响 (t=55, ωnacl=) Fig.5 Effects of ph on extraction efficiency(t=55, ωnacl=) 3

4 NaCl(w/v,%) 图 6 NaCl 的用量对萃取效率的影响 (t=55, ph=5) Fig.6 Effects of ionic strength on extraction efficiency(t=55, ph=5) 温度 ( o C) 图 7 温度对萃取效率的影响 (ph=5,ωnacl=6%) Fig.7 Effects of temperature on extraction efficiency(ph=5,ωnacl=6%) 2.4 方法的线性范围检出限精密度和加标回收率在优化的萃取条件下考察了超声辅助的离子液体冷诱导微萃取技术对己烯雌酚萃取的线性范围检出限 (S/N=3) 和精密度 (n=1), 实验结果见图 8, 其线性范围为 5-3 μg/l, 检出限 (S/N=3) 为.5μg/L 25 2 Y = C R = 浓度 C (μg/l)) 图 8 萃取方法的标准工作曲线 Fig.8 The standard working curve of the extraction method 在阴性牛奶样品中分别添加.2 μg/g.4 μg/g.8 μg/g 3 个浓度水平的己烯雌酚溶液, 重复 5 次, 计算平均回收率和相对标准偏差, 结果表明本方法的精密度和重现性令人满意 ( 见表 1) 表 1 回收率及精密度实验结果 (n=5) Table 1 Results of recovery rate and precision (n=5) 样品 Sample 牛奶 Milk 加标量 (μg/g) 测定值 (n=5) (μg/g) 平均回收率 Average recovery 相对标准偏差 RSD (%)

5 3 结论本实验建立了离子液体分散液 - 液微萃取的样品前处理技术, 采用高效液相 - 紫外检测法测定牛奶中己烯雌酚含量的方法在萃取溶剂抗粘剂 ph 值离子强度及温度等条件对萃取效率的影响进行了实验结果表明使用 35μL [Omim][PF 6 ], 1μL 曲拉通 114 抗粘剂,pH 5., NaCl 为 6.%, 温度为 55 时萃取效率较高对该法进行精密度实验, 其平均回收率为 %, 相对标准偏差 2.8~4.43% 说明该技术可以满足牛奶中己烯雌酚的测定 [Omim][PF 6 ] 作为萃取溶剂, 使该法具有操作简单环保萃取效率高和灵敏度高等特点, 有很好的应用前景参考文献 : [1] PFAFFI M W, RECK B, DREHER R, et al. Production of clenbuterol,diethylstilbestrol and trenbolone mass standards in lyophilized bovine urine[j]. Analytical Chimica Acta, 23, 483: [2] JAROSŁAW K, WOJCIECH P, TOMASZ B, et al. Effect of diethylstilbestrol (DES) and 17 β-estradiol (E2) on growth, survival and histological structure of the internal organs in juvenile European catfish Silurus glanis (L.)[J]. Aquaculture International, 214, 22: doi:1.17/s [3] HANS-OLOV A, PAGONA L, DIMITRIOS T. Breast cancer following diethylstilbestrol exposure in utero:insights from a tragedy[j]. European journal of epidemiology, 212, 27:1-3. doi:1.17/s [4] HIDENOBU M, MUNEKAZU N, SHUICHI H, et al. Neonatal exposure to diethylstilbestrol causes granulomatous orchitis via epididymal inflammation[j]. Anatomical science international, 214, 89: doi:1.17/s [5] HYOGO H, ETSUKO O, TAKAKO S, et al. Suppression of erythropoietin induction by diethylstilbestrol in rats[j]. Archives of Toxicology, 214, 88: doi:1.17/s [6] YU R A, JEONG H, SEUNG J K, et al. The study of diethylstilbestrol toxic effect in the mouse sertoli cell line by comparison of mirna and mrna expression[j]. Toxicology and Environmental Health Sciences, 21, 2(4): [7] 陈眷华, 王文博, 徐在品, 等. 己烯雌酚残留的三种检测方法比较研究 [J]. 食品科学, 26, 27(9): [8] 韩见龙, 于村, 葛乐瑶, 等. 毛细管气相色谱法测定肉类食品中游离己烯雌酚的残留量 [J]. 中国卫生检验杂志, 24, 14 (6): [9] 宫向红, 徐英江, 张秀珍, 等. 气相色谱 - 质谱法测定水产品中的己烯雌酚 [J]. 食品科学, 29, 3(2): [1] 廖涛, 吴晓翠, 王少华, 等. 固相萃取 - 气相色谱 / 质谱联用法同时检测水体中 9 种环境雌激素 [J]. 分析化学, 213, 41(3): [11] 邓爱妮, 陶艳玲, 张昱, 等. 固相微萃取高效液相色谱法测定食品中己烯雌酚 [J]. 化学研究与应用, 211, 23(5): [12] 刘宏程, 邹艳红, 黎其万, 等. 高效液相色谱分离牛奶中己烯雌酚己烷雌酚和双烯雌酚 [J]. 分析化学, 28, 36(2): [13] 许泓, 吴延晖, 何佳, 等. GB/T , 牛奶和奶粉中玉米赤霉醇玉米赤霉酮己烯雌酚双烯雌酚残留量的测定液相色谱 - 串联质谱法 [S]. 国家标准出版社, 28. [14] 田秀慧, 薛敬林, 孙岩, 等. 己烯雌酚及其代谢物在泥鳅体内的组织分布及药物代谢动力学研究 [J]. 食品科学, 214, 35(21): [15] FEI Junjie, WEN Xiaoqin, YI Lanhua, et al. Electrochemical determination diethylstilbestrol by a single-walled carbon nanotube/platinum nanoparticle composite film electrode[j]. Journal of applied electrochemistry, 28, 38: doi:1.17/s [16] 郭城, 高桂园, 丁小洁, 等. ZnSe 量子点增敏鲁米诺 - 铁氰化钾化学发光测定牛奶中的己烯雌酚 [J]. 发光学报, 212, 33(7): [17] 王蓓, 胥传来, 彭池方. 间接酶联免疫吸附检测己烯雌酚条件优化 [J]. 食品科学, 28, 29(5): [18] XIONG Ping, GAN Ning, CUI Hua, et al. Incubation-free electrochemical immunoassay for diethylstilbestrol in milk using gold nanoparticle-antibody conjugates for signal amplification[j]. Microchimica Acta, 28, 38: doi:1.17/s [19] LIU Yingchun, WANG Quan, JIANG Wei, et al. Simultaneous determination of malachite green, diethylstilbestrol, medroxyprogesterone, and 3-amino-2-oxazolidone in synbranchoid Eels by a Protein Microarray Method[J]. Food ayalytical methods, 215, 8: dio:1.17/s [2] 刘瑛, 管良慧, 黄新, 等. 己烯雌酚分子印迹传感器的制备及其性能研究 [J]. 分析化学, 21, 38(4): [21] 朱将伟, 柴春彦, 刘国艳, 等. 己烯雌酚的过氧化氢酶标记及己烯雌酚免疫传感器 [J]. 食品科学, 26, 27(5):57-6. [22] 刘斐, 段凤魁, 李海蓉, 等. 固相微萃取 - 气相色谱串联质谱法检测北京大气细颗粒物中的多环芳烃 [J]. 分析化学, 215, 43(4):

6 [23] 赵汝松, 徐晓白, 刘秀芬. 液相微萃取技术的研究进展 [J]. 分析化学, 24, 32(9): [24] CHEN Kuanyu, YANG T C, CHANG S Y. Determination of macrolide antibiotics using dispersive liquid-liquid microextraction followed by surface-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry[j]. American society for mass spectrometry, 212, 23: dio: 1.17/s [25] 臧晓欢, 张贵江, 王春, 等. 分散液相微萃取技术研究的最新进展 [J]. 色谱, 215, 33(2):

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.