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1 748 中国人兽共患病学报 ChineseJournalofZoonoses 2018,34 (8) DOI: /j.issn 调查防治 年河南省沙门菌污染分布状况及其耐药研究 穆玉姣, 张白帆, 李 懿, 赵嘉咏, 尤爱国, 夏胜利, 黄学勇, 许汴利 摘要 : 目的了解河南省环境中沙门菌的分布情况, 探讨环境中沙门菌的不同型别分布和药物敏感情况. 方法采集动物粪便 肉制品和厨具等各类标本 4488 份, 进行沙门菌分离培养 化鉴定 血清学分型, 采用 CLSI 推荐的 KGB 法对分离株进行 13 种抗素敏感试验. 结果从 18 种标本中共分离出 332 株沙门菌, 分离率为 7.40%; 分离株分属于 39 种血清型, 优势血清型是肠炎沙门菌 (23.79%) 和德尔卑沙门菌 (20.18%). 环境中沙门菌对各类抗素均有不同程度的耐药, 其中对氨苄西林 四环素和萘啶酸的耐药率较严重, 对三代头孢类抗素和喹诺酮类抗素敏感. 结论河南省环境中沙门菌血清型分布呈多样性, 不同来源的沙门菌的血清型有一定的差异 ; 对目前常用的抗菌药物均有耐药菌株出现, 提示在防控食源性疾病中应关注环境细菌的危害. 关键词 : 沙门菌 ; 血清型 ; 药物敏感性 ; 耐药中图分类号 :R378.2 文献标识码 :A 文章编号 : (2018) DistributionandantimicrobialresistanceofSalmonela inhenanprovince,china, MU YuGjiao,ZHANGBaiGfan,LIYi,ZHAOJiaGyong,YOU AiGguo, XIAShengGli,HUANG XueGyong,XU BianGli (InstituteforCommunicableDiseaseControlandPrevention,HenanProvincialCenter fordiseasecontrolandprevention,zhengzhou450016,china) Abstract:ToinvestigatethedistributionofSalmonelaintheenvironmentofHenanprovinceandexplorethediferentseG rotypesanddrugsensitivitywecolected4,488specimensfromvarioussourcesincludinganimalfeces,rawandcooked meat products,andkitchenwareetc.salmonelaisolationandcultivation,biochemicalidentification,andserologicaltyping were performedonthesamples.weusedthekgbmethodrecommendedbyclsitoperform13antibioticsusceptibilitytestsonthe isolatedserotypes.atotalof332salmonelastrainsweredetectedfromthesesamples,withadetectionrateof7.40%;these 332Salmonelaisolatesbelongedto39serotypes,includingthedominantserotypesS.Enteritidis(23.79%)andS.Derby (20 18%).Salmonelaintheenvironmenthasvariousdegreesofresistancetomultipleclassesofantibiotics,amongwhichthe resistanceratetoampicilin,tetracycline,andnalidixicacidisthemostserious.however,itissensitivetothirdgeneration cephalosporinsandquinolones.thedistributionofsalmonelaserotypesintheenvironmentofhenanprovincewasdiverse, andtheserotypesdiferedbaseduponthesource.theemergenceofstrainsresistanttocommonlyusedantibacterialdrugssugg geststhatatentionshouldbepaidtothehazardsofenvironmentalbacteriaintermsofpreventingandcontrolingfoodbornedisg eases. Keywords:Salmonela;serotype;microbialsensitivitytest;antimicrobialresistance Correspondingauthor:XuBianGli, xubl@hncdc.com.cn 沙门菌是引起食源性疾病的重要病原菌, 全球 通讯作者 : 许汴利, xubl@hncdc.com.cn 作者单位 : 河南省疾病预防控制中心传染病预防控制所, 郑州 每年发食源性疾病病例高达数亿人. 沙门菌在自然界广泛存在, 主要是受感染的动物, 包括哺乳动物 ( 猪 牛 羊 马 狗等 ) 家禽 ( 猪 鸡 鸭 鹅 ) 爬行类 ( 龟 蛇 ) 等. 各种肉类及肉制品 禽类及禽蛋制品都

2 8 期穆玉姣等 : 年河南省沙门菌污染分布状况及其耐药研究 749 可以在制作 储存 运输 销售过程中被污染而引发食源性病例. 我国每年约 3 亿人因沙门菌感染人而患病, 占病原菌食源性疾病总数的 70% ~80% [1]. 此外, 由于抗菌药物在临床中的广泛使用和畜牧业中作为促长剂的大量使用, 沙门菌分离株的耐药性在全球范围内逐渐上升. 因此, 很有必要对河南省沙门菌污染分布状况进行调查分析, 对 年从食品 厨具和动物粪便等 4488 份标本中分离的 332 株沙门菌进行了血清学和抗素耐药性研究, 分析河南省沙门菌的流行状况 菌型分布 危险因素与耐药等流行特征, 为制定食源性疾病的防治对策和措施提供科学依据. 1 材料与方法 1.1 菌株来源 年按照项目要求, 在河南省周口市 济源市 商丘市区 商丘睢县 郑州登封和郑州中牟县的菜市场 饭馆 动物养殖场采集食品 厨具和动物粪便等各类标本共 4488 份 : 其中鸡粪 512 份 猪粪 480 份 鸡肉 473 份 猪肉 461 份 猪肉 441 份 鸡肉 318 份 鸭肉 267 份 牛肉 207 份 牛肉 197 份 苍蝇 189 份 菜菜板 176 份 豆腐 146 份 鸭粪 129 份 水产品 ( 包括淡水螺 虾 鲈鱼肠 鲈鱼内脏 鲈鱼体表 螺狮内脏 甲鱼体表 中华鲟体表 牛蛙体表 三枪鱼体表 圣子体表 青虾体表等 )113 份 羊肉 104 份 羊粪 101 份 凉菜 ( 包括凉拌腐竹 水煮花 螺丝 凉拌黄瓜等 )93 份 羊肉 81 份. 动物粪便及标本表面涂抹物使用 CarryGBlair 运送培养基采集保存, 经过亚硒酸煌绿增菌液 (SBG)(36±1) 增菌 16h 沙门菌显色分离培养 系统化鉴定 ; 食品类样本采样要求及分离培养按照食品安全国家标准 GB G2011 进行 ; 共分离出 332 株沙门菌. 1.2 试剂与仪器 CarryGBlair 运送培养 缓冲蛋白胨水 (BPW) 亚硒酸盐胱氨酸 (SC) 增菌液购自北京陆桥,SBG 购自美国 BD 公司, 沙门菌科玛嘉鉴定培养基为法国 CHROMAgar, 肠杆菌科细菌鉴定板条 API20E 购自法国梅里埃公司, 沙门菌诊断血清购自丹麦 SSI 公司, 脑心浸液 /MGH 琼脂及药敏纸片为英国 OXOID 药敏纸片分配器购自英国 OXOID 公司. 1.3 菌株的化鉴定与血清分型样品在 SBG 中增菌培养, 第 2d 转沙门菌显色培养基科玛嘉培养基上, 挑取紫色 淡紫色菌落转种脑心浸液平板上 37 过夜培养 ; 使用 API20E 进行系统化鉴定. 参照考夫曼 G 怀特沙门菌属抗原表诊断沙门菌血清 型, 先做 O 相血清凝集分型, 后用软琼脂 ( 参见 WHO 沙门菌鉴定手册 ) 进行相位诱导, 再进行 H 相 (1/2 相 ) 血清凝集, 使用理盐水做阴性对照. 1.4 药敏试验按美国临床和实验室标准化协会 (CLSI) 推荐的 KirbyGBauer 琼脂法进行 [2], 选用大 肠杆菌 ATCC25922 作为质控菌株. 1.5 统计学分析采用 SPSS17.0 统计软件分析数 据, 通过 χ 2 检验分析药物敏感性, 以 P<0.05 为差 异有统计学意义. 2 结果 2.1 沙门菌检出情况 4488 份标本共分离出 332 株沙门菌, 分离率为 7.40%(332/4488) 出自 18 种食 品及动物粪便. 其中从鸡肉中检出的沙门菌最多 79 株, 检出率为 16.70%(79/473); 其次猪肉检出 65 株, 检出率为 14.09%(65/461); 鸡粪检出 57 株, 检出率为 11.13%(57/512), 猪粪检出 47 株沙门菌, 检出率为 9.79%(47/480). 表 1 外环境中的沙门菌检出情况 Tab.1 DetectionofSalmonelaintheexternalenvironment 来源采集样本数检出菌株数检出率 (%) 鸡肉 猪肉 鸡粪 猪粪 水产品 猪肉 凉菜 牛肉 羊肉 羊肉 鸡肉 鸭粪 牛肉 苍蝇 羊粪 豆腐 菜菜板 鸭肉 合计 血清分型共分离到 332 株沙门菌, 可分为 39 种血清型, 每年血清型的分布及种类也不相同 ( 图

3 750 中国人兽共患病学报 2018,34(8) 1). 菌株均为常见的 A~F 群, 分别为 O 4(B) 群 166 株,O 7/8(C) 群 39 株,O 9(D) 群 87 株,O 3,10/1,3,19(E) 群 34 株,O 11(F) 群 4 株,O 13 (G) 群 1 株,O 28(M) 群 1 株.39 种血清型中最常见的血清型是肠炎沙门菌 23.79%(79/332), 德尔卑 20.18%(67/332) 鼠伤寒 10.84%(36/332) 印第 对头孢噻肟 庆大霉素 头孢吡肟 甲氧胺嘧啶 环丙沙星 链霉素 萘啶酸 诺氟沙星 复方新诺明的耐药率有统计学意义, 说明不同年份的耐药率有统计学差异 ( 表 3).332 株沙门菌中有 174 株 (52 41%) 为多重耐药菌 ( 表 4). 安纳 7.22%(24/332) 4,5,12:i:G 和阿贡纳 4 81% (16/332), 这些血清型占沙门菌分离株的 71 69% (238/332), 见表 耐药特征对分离出的 332 株沙门菌进行 13 种抗素药物敏感性试验, 发现沙门菌对三代头孢类和喹诺酮类抗素较敏感, 对头孢噻肟 头孢吡肟 头孢他啶的耐药率为 7.53% 1.51% 1 81%; 对环丙沙星和诺氟沙星的耐药率为 8.73% 8.43%; 对氨苄西林 四环素和萘啶酸的耐药率较严重, 耐药率分别为 42.47% 57.53% 55.42%. 但通过对 年沙门菌耐药率统计分析发现, 沙门菌 图 年环境中沙门菌血清分型 Fig.1 TheserotypingofSalmonelafromenvironmentIn 表 2 环境中沙门菌菌株宿主 - 血清分布情况 Tab.2 HostandSerotypingofSalmonelaisolatefromenvironment 血清型 菌株宿主 鸡肉 猪肉 鸡粪 猪粪 猪肉 水 产品 牛肉 鸡肉 凉菜 羊肉 牛肉 羊肉 鸭粪 苍蝇 菜 菜板 鸭肉 羊粪 豆腐合计 肠炎沙门菌 德尔卑沙门菌 鼠伤寒沙门菌 印第安纳沙门菌 ,5,12:i: 阿贡纳沙门菌 山夫登堡沙门菌 哈达尔沙门菌 火鸡沙门菌 伦敦沙门菌 丘古沙门菌 科瓦利斯沙门菌 阿伯丁沙门菌 桑给巴尔沙门菌 汤卜逊沙门菌 伊斯托里亚沙门菌 贝塔沙门菌 舒卜拉沙门菌 埃斯卡纳巴沙门菌 婴儿沙门菌 斯坦利沙门菌 埃森沙门菌 其它 合计 注 : 0 表示该类样本中未分离出此血清型的沙门菌, 如猪粪中未分离出肠炎沙门菌. 其它 代表血清型有鸭 巴布亚 渥兴顿 温斯顿 波 摩那 胥代成格隆 恩昌加 勃兰登堡 吉韦 波蒂尔斯 维尔肖 病牛 哈托 波茨坦 圣保罗 田纳西 肯塔基沙门菌.

4 8 期穆玉姣等 : 年河南省沙门菌污染分布状况及其耐药研究 751 表 3 药物敏感性结果 Tab.3 Resultsofmcrobialsensitivitytest 抗素 2011 耐药率 (%) (n=108) 2012 耐药率 (%) (n=103) 2013 耐药率 (%) (n=121) χ 2 P 氨苄西林 AMP 56(51.9) 31(30.1) 54(44.6) 头孢噻肟 CTX 17(15.7) 3(2.9) 5(4.2) 庆大霉素 GEN 33(30.6) 14(13.6) 11(9.0) <0.000 头孢吡肟 FEP 3(2.8) 0(0) 2(1.7) 甲氧胺嘧啶 TMP 43(39.8) 17(16.5) 28(23.5) 头孢他啶 CAZ 1(0.9) 1(1.0) 41(3.2) 环丙沙星 CIP 20(18.5) 6(5.8) 3(2.5) <0.000 四环素 TET 69(64.5) 46(44.7) 76(62.3) 链霉素 STR 49(45.4) 29(28.2) 38(31.3) 萘啶酸 NAL 74(68.5) 55(53.4) 55(45.1) 氯霉素 CHL 40(37.0) 25(24.3) 51(41.8) 诺氟沙星 NOR 19(17.6) 5(4.9) 4(3.3) <0.000 复方新诺明 SXT 46(42.6) 18(17.5) 27(22.1) 表 4 沙门菌多重耐药结果 Tab.4 Multipledrugresistanceresults 多重耐药 2011(n=108) 2012(n=103) 2013(n=121) 耐药 ( 株 ) 耐药比 (%) 耐药 ( 株 ) 耐药比 (%) 耐药 ( 株 ) 耐药比 (%) R R R R R R R R R R 合计 讨论本次研究显示肉制品 动物粪便 水产品及厨房用具中均有沙门菌的存在, 从鸡肉和猪肉中菌株的检出率较高, 其次是鸡粪和猪粪. 分离菌株的血清型分布非常广泛, 而且不同的宿主血清型的分布特征也有很大的差异. 此次研究环境中所分离出的 332 株沙门菌可分为 39 种血清型, 表明河南省环境中沙门菌血清型分布具有多样性. 位于第 1 位的血清型是肠炎沙门菌, 其次是德尔卑沙门菌和 鼠伤寒沙门菌, 这与临床流行病学调查基本相符 [3], 但与河南省腹泻病人及肉食品中分离的前 5 位沙 门菌血清型略有不符 [4G5]. 德尔卑沙门菌 鼠伤寒沙 门菌和阿贡纳沙门菌是从猪肉来源分离出来的沙门 菌最常见血清型 ; 而肠炎沙门菌 印第安纳沙门菌和 德尔卑沙门菌是鸡肉中分离出沙门菌的主要血清 [6] [7] 型. 这和孙吉昌 王勤等的研究有一定的区别, 这说明即使食品种类相同, 但畜禽的长环境和地 域不同, 其携带或污染的沙门菌血清型之间也存在

5 752 中国人兽共患病学报 2018,34(8) 差异, 也说明沙门菌的血清型分布有一定的地域特 点. 通过对宿主分析发现, 肠炎沙门菌绝大多数来 自于鸡宿主源 ( 鸡酮体 鸡内脏 鸡粪等 ), 而德尔卑 沙门菌大多数来自于猪宿主源 ( 猪肉和猪粪 ), 结合 国内其它研究数据 [8G10], 可以看出肠炎沙门菌是污 染家禽产品的优势血清型, 而德尔卑沙门菌是猪 养殖及屠宰环节中的优势血清型, 说明了广泛流行 于畜禽中沙门菌的血清型种类具有一定程度的一致 性, 也表明肉类食品沙门菌的污染与养殖场的卫 状况有很大的关联. 由于抗素在临床和畜牧业中的广泛使用, 细 菌耐药是近年来医疗卫机构面临的重大问题. 对 环境中沙门菌耐药性的研究发现其对临床治疗沙门 菌感染的传统药物氯霉素 广谱青霉素 磺胺类和四 环素类抗素均产了一定的耐药性, 对第三代头 孢类和三代喹诺酮类抗素敏感性较强 ; 这可能与 畜牧业中抗素的不规范使用有关, 如将抗素作 为饲料添加剂以预防动物疾病和促进长而长期使 用, 使得抗素以原形或代谢物形式由畜禽的粪尿 排入环境, 从而导致沙门菌对氯霉素 广谱青霉素 磺胺类和四环素类抗素的较高耐受. 在临床上三 代头孢类药物主要用于儿童沙门菌感染患者, 而氟 喹诺酮类药物是用于治疗成人沙门菌感染 [11]. 本 次结果显示, 外环境中沙门菌对头孢吡肟和头孢他 啶十分敏感, 但对环丙沙星和诺氟沙星出现耐药现 [12] 象, 这与陈盛杰等的研究结果一致, 表明随其在 临床及畜牧业的广泛持续使用, 也产一定的耐药 性, 甚至多重耐药. 对此应继续增强对沙门菌污染 的主动监测力度, 加强对环境中沙门菌的分布研究, 从而减少食物受沙门菌污染而引起的感染性疾病, 并为畜牧养殖业抗素的合理使用提供数据指导. 参考文献 : [1] 毛雪丹, 胡俊峰, 刘秀梅 年中国 1060 起细菌性食源性疾病流行病学特征分析 [J]. 中国食品卫杂志,2010,22(3): 224G228.DOI: /j.cjfh [2]CLSI.CLSIDocumentM020A11PerformancestandardsforantiG microbialdisksusceptibilitytests[s].approvedstandardelevg enthedition.wayne,pa:clinicalandlaboratorystandardsing stitute,2012. [3] 刘力彰, 卢珊, 赵素莲, 等. 中国非伤寒沙门菌主要血清型临床分离株耐药特征分析 [J]. 疾病监测,2013,28(6):459G463.DOI: /j.issn [4] 穆玉姣, 张白帆, 赵嘉咏, 等. 河南省腹泻病人沙门菌血清型及其耐药性变迁研究 [J]. 中国卫检验杂志,2016,26(97):1335G [5] 张秀丽, 廖兴广, 郝宗宇, 等 年河南省肉食品中沙门菌的主动监测及其 DNA 指纹图谱库的建立 [J]. 中国卫检验杂志,2009,19(7):1545G1548. [6] 孙吉昌, 游兴勇, 曾艳兵, 等. 江西省零售禽畜肉中分离的 136 株沙门菌血清学鉴定与分析 [J]. 实验与检验医学,2012,30(1):10G 12.DOI: /j.issn [7] 王勤, 刘军, 张杰, 等. 淄博市鸡肉产业链中沙门菌污染状况及其血清型与分子分型分析 [J]. 现代预防医学,2015,42(16):2924G [8] 赵建梅, 王娟, 王君玮, 等. 山东地区猪和家禽屠宰环节沙门菌血清型分布 [J]. 中国食品卫杂志,2015,27(5):503G508.DOI: /j.cjfh [9] 韩新锋, 刘书亮, 侯小刚, 等. 四川部分地区 年猪肉产链中沙门菌耐药特征及分子分型研究 [J]. 中华流行病学杂志,2014,35(5):519G523.DOI: /cma.js.issn [10] 赵薇, 刘桂华, 遇晓杰.2013 年吉林省食源性沙门菌脉冲场凝胶电泳分型研究 [J]. 中国卫检验杂志,2015,25(13):2171G [11] 梁达炜, 卢解红, 江凌晓, 等. 广州市 136 株沙门菌耐药表型与分子分型研究 [J]. 现代预防医学,2016,43(4):696G699. [12] 陈盛杰, 曾莹春, 霍细香, 等. 湖北省不同来源沙门菌耐药性及耐药谱研究 [J]. 现代预防医学,2017,44(6):1011G1014. 收稿日期 :2017G06G30 编辑 : 张智芳

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