我国食品中大肠埃希菌 )E 耐药及,-I 分子分型特征分析!!! 白莉 " 等!%<!!M O! V :)E pdmov OV :)E p6e O>)-*)- /DO!^ O6/ )E V! V O 1DO[M> /DO!^M ^MO DMV ^ODOV" :)E $ OMVO+/I1:)E% DO

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1 !%! 16G#I+IYX"#$8--6\GI#I )% 年第 * 卷第 期 论著 我国食品中大肠埃希菌 )E 耐药及,-I 分子分型特征分析 白莉! 郭云昌! 董银苹! 王伟! 杜春明! 徐进! 李凤琴! 国家食品安全风险评估中心卫生部食品安全风险评估重点实验室 " 北京 ))# 摘 要! 目的 了解我国食品中分离的 )) 株大肠埃希菌 )E 的耐药及脉冲场凝胶电泳 %,-I 分子分型特征! 完善我国食品中大肠埃希菌 )E 菌株特征的基础信息! 为该菌的风险评估提供依据 " 方法 使用琼脂稀释法对确认的 )) 株大肠埃希菌 )E 进行药敏试验! 完成耐药特征的分析 " 参照美国疾病预防控制中心,M# 试验方法! 对 )) 株大肠埃希菌 )E! 运用?/ 酶进行酶切并完成,-I 分析! 利用 c#m! 软件对分离株的指纹图谱进行聚类分析 " 结果 #)) 株菌中!%< 株菌至少对一种抗生素有抗性 " 耐药率最多的前三种抗生素依次是四环素 磺胺甲恶唑 萘啶酸 $$ 一共有 % 个耐药谱! 耐两种以上抗生素的菌株有 <% 株! 耐 < 种以上抗生素的多重耐药菌株有 < 株 " 最常见的三种耐药谱依次是 +3]%*! $3,#$8+3]+]//I/%*!$3,168#$8+3]+]//I/% % $ 大肠埃希菌 )E 非 6E % )EpDMOV 对所测试的抗生素的耐药率明显高于大肠埃希菌 )Ep6E% " he:)!9: " 其中 <E 株携带了志贺毒素基因的大肠埃希菌 )Ep6E 仅对磺胺甲恶唑 # 萘碇酸 有耐药! 没有多重耐药菌株 $ 通过不同种类食品中大肠埃希菌 )E 菌株耐药率比较发现! 从生猪肉 # 生禽肉中分离的菌株耐药率相对高于其他食品种类 $),-I 分子分型研究显示菌株具有基因多态性! 且可以很好将大肠埃希菌 )E 非 6E 和大肠埃希菌 )Ep6E 菌株区分开 " 结论 我国食品中分离的大肠埃希菌 )E 耐药现象严重 " 我们应加强养殖环节和零售环节食源性致病菌! 特别是大肠埃希菌 )E% 包括产志贺毒素大肠埃希菌 )E 菌株药敏特征的监测! 探明食品与养殖环节菌株耐药的传播关系! 并为国家制定科学的养殖业抗生素用药提供依据 " 关键词! 大肠埃希菌 )E$ 药敏试验 $ 脉冲场凝胶电泳 $ 耐药 $ 分子分型中图分类号!"):#"<E?: = )#/+E:% 文献标志码!$ -8)6+*=6*?+-+*?+-/8)**+?=- 6? =*/1%*/* *)=3))%/$1-1 #""EFG )*+/%)8 %))/-3-+ c$g8" X\MODO" #\O O" Z$#Z" X1DMO!O" ]XYO" 8G-OjO $ F8^-V +"R $!O3O6D" 1DO#O1O -V +"R $!O" co))" 1DO% 6+ "6, /ODO!^M ^OV D MV D$,-I% O)) 6/ )E! V O 1DO" OV! DD6/ )E O V DR!O>@3)/$O!^M ^O!V 6/ )E [V!OV ^VMO!DV>#$ V!O[VV ^?/ GVODOVV,-I X+ 11>/D,-I O[OdV [D c#m![>9*md" %< O[OOO^> /D DO^[O$ <:g" % " M!Dd$:)g" " OVV >GO " % O!^O [VOV><% [O!DO [O^OV < O!DO DO^>/D V!OO!MVMO [+3] $*% " $3,#$8+3]+]//I/$*% " $3,168#$8+3]+]//I/ % % % >/DO^O:)E [OODDDO :)Ep6E $ " he:)!9:% ><E :)Ep6E D^ODO OO[O M!Dd$:Eg" " OVV $:Eg" [D O!MVMOO>1! V^VO V " O! [ R OV [ MDV DDODO D V>,-I 收稿日期!)%*< 作者简介! 白莉 女 副研究员 研究方向为食品微生物 I!^S>O>O 通讯作者! 徐进 男 研究员 研究方向为食品微生物 I!MOS>O>O

2 我国食品中大肠埃希菌 )E 耐药及,-I 分子分型特征分析!!! 白莉 " 等!%<!!M O! V :)E pdmov OV :)E p6e O>)-*)- /DO!^ O6/ )E V! V O 1DO[M> /DO!^M ^MO DMV ^ODOV" :)E $ OMVO+/I1:)E% DOD OV O!O O^OO^[O!OOV OV VO^ V O^!VO O!O>? )/ 6/ )E# O^O# MVV D# VMO#!M O 大肠埃希菌 $ 6/ ">% 通常存在 于人类和动物的肠道内 " 但是通过粪便或是动物屠宰过程的污染 " 也常常存在于水 土壤 食物中 ))* 产志贺毒素大肠埃希菌 $ D O VMO 6/ "+/I1% 是一类携带了前噬菌体编码 一种或两种志贺毒素基因 $ 61D% 的食源性致病菌 )* 自 )? 年以来 " 产志贺毒素大肠埃希菌 )Ep6E 相 继在美国 英国 加拿大 日本等国家引起暴发和流行 )* " 可导致患者出现腹泻 " 出血性结肠炎 " 其中有 g eeg 的病人会出现血栓性血小板减少性紫癜及 溶血性尿毒综合症 " 严重者死亡 " 产志贺毒素大肠 埃希菌引发的食源性疾病已成为严重的公共卫生 安全问题 )<* 对于大肠埃希菌 )E p6e 耐药特征 的研究文章显示 " 该菌株耐药率较低 " 对多种抗生 )% 素敏感 " 多重耐药菌株较为少见 i* 一直以来 " 对于 +/I1 菌株导致的感染 " 是否使用抗生素一直是有争议的 )** )E* 年 "ZO 等 发现婴幼儿在感染 +/I1)E p6e 后 " 某些情况下 " 抗生素的治疗不能改善其引起的感染状况 " 且还会 加重引发溶血性尿毒综合症 $ 6X+% 的风险 因为 抗生素裂解了细菌的细胞膜 " 加速毒素的释放 但 也有研究发现 " 某些抗生素 " 如果是在感染早期使用 " 可能会降低疾病发展成为 6X+ 的风险 )?* 对 )) 年德国产志贺毒素暴发事件溶血性尿毒综合 症病人分离的 )%p6% 菌株 " 添加某种抗生素进行 培养 " 就没有出现志贺毒素合成和释放的增加 )* 但近年来 " 大肠埃希菌 )E 的耐药性一直在增加 " 可能是由于某类抗生素在养殖业的预防性用药和 )"? 作为生长剂的使用 i))* 在养殖业 " 抗生素不仅作为预防性治疗也作为一种促生长剂 " 必然对经济动物 肠道内的菌株造成一定的耐药选择性压力 ))* " 经济 型动物在饲养 生产 加工过程中 " 动物的排泄物等物质势必携带耐药菌株 可移动的耐药基因 ))<* " 对外在的环境也造成耐药的选择性压力 ))%* )) 年德国暴 发的 +/I1)%p6% 疫情 " 该菌株联合携带了产志贺 毒素大肠埃希菌的基因 $ 61D-"/"@ * "@ ))< % 和聚 集性黏附大肠埃希菌的基因 $ /<<"/<<E"6=1,"" //%" 并表现出以上基因赋予的特性 " 同时该菌株具有产生! 内酰胺酶的基因 " 并表现出对多种青霉素类和头孢类药物耐药 ))* 经济型动物 " 特别是牛羊等 牲畜 " 是大肠埃希菌 )E$ 包括 +/I1)E% 的天然宿主 当动物生存的环境使用抗生素时 " 它必然也就成为了耐药细菌的耐药库 本研究首次对我国食品来源的的 )) 株大肠埃希菌 )E 的耐药性和分子分型进行研究 " 目的是更好的了解不同食品来源菌株的耐药性及分布特征 ) 材料和方法 ):) 材料 ):):) 菌株来源沙门菌试验用 )) 株大肠埃希菌 )E 来自! ) 年国家污染物监测网 " 本实验室使用生化反应 血清方法和,1" 方法完成 )) 株菌鉴定 " 明确毒力基因携带情况 ))** 根据不同的血清和毒力基因携带情况 " 在 )) 株大肠埃希菌 )E 中 "*E 株为大肠埃希菌 )Ep6E" 其中有 <E 株携带了 61D 基因 " %< 株为 )E 非 6E 的大肠埃希菌 菌株的分布情况见表 ) 大肠埃希菌 )Ep6E I8<<" 大肠埃希菌 $ 3)*% " 大肠埃希菌 $ $/11 % " 脉冲场凝胶电泳 $ MVV D",-I% 使用的相对分子量标准菌株为 #/:3=/ ^OVM 6?) 等质控菌株由本室保存 表 ) 各种不同类别的食品中 )Ep6E 和 )E 非 6E 数量 /^)OM>)Ep6E OV >)EpDMOV V! V 样品种类 菌株类型 生羊肉 生猪肉 生牛肉 生鸡肉! 其他 合计 )Ep6E? * )< % )* *E )E 非 6E )% )* * %< 注! 豆制品等 ):): 主要仪器与试剂恒温培养箱 $ 美国 <3% 涡旋振荡器 $ 德国 GF$% 微量紫外分光光度计 #O #) + D!$ 美国 /D!-D% 细菌多点接种仪 ^3rMmR 浊度计 $ 法国梅里埃 % 恒温振荡器 16I-! 型脉冲场凝胶电泳仪 I81 ]" 凝胶成像系统 $ 美国伯乐 % 纯水仪 电子天平 小型高速离心机 脑心浸液肉汤和脑心浸液琼脂均购于北京陆桥技术有限公司 "36! 肉汤 $ 美国 c% " 试验用抗生素氯霉素 头孢噻肟 头孢西丁 四环素 庆大霉

3 !%%! 16G#I+IYX"#$8--6\GI#I )% 年第 * 卷第 期 素 磺胺甲恶唑 复方新诺明 萘碇酸 环丙沙星 氨苄西林 头孢吡肟 头孢曲松 阿米卡星 卡那霉素均购自美国 +!" 3M6OO 琼脂 $ 英国 V% " 氯化钠 $ 北京化工厂 % "/^/61 均购自美国,!" 蛋白酶 F$ 德国 3R% " 限制性内切酶?/ $ 美国 #[IOOV c8^% " 月桂酰肌氨酸钠 十二烷基磺酸钠 乙二胺四乙酸二钠 比浊管 +F! V 琼脂糖均购自美国 c ): 方法 )::) 菌株活化将于 ie f 冰箱中冻存的 )) 株大肠埃希菌 )E 和质控菌株划线接种于脑心浸液琼脂 $ c6$% 上 "<E f 培养过夜 " 次日挑取单菌落再次接种于 c6$ 上 "<E f 培养过夜 ):: 药敏试验菌悬液的制备和试验分别取 e< 个第二次 c6$ 上传代的新鲜菌落 " 于 <! 无菌 :?g 生理盐水比浊管中 " 用微量紫外分光光度计调整菌悬液至 : 麦氏单位 " 取上述液体 ) %" 加入到 % 无菌 :?g 生理盐水中 " 充分混匀 用细菌多点接种仪分别对不同的抗生素进行接种 " 接种完毕后于 <E f" 培养 )* e D" 观察结果 )::< 抗生素最低抑菌浓度的测定抗生素最低抑菌浓度 $ 3G1% 参考美国临床实验室标准化委员会 $ 18+G% ) 版 ))E* " 使用琼脂稀释法测定肠杆菌科 )% 种抗生素 $ 氯霉素 头孢噻肟 头孢西丁 四环素 庆大霉素 磺胺甲恶唑 复方新诺明 萘碇酸 环丙沙星 氨苄西林 头孢吡肟 " 头孢曲松 阿米卡星 卡那霉素 % 的 3G1 值 " 并参照 18+G 判断 3G1 结果是否为耐药或敏感 )::% 脉冲场凝胶电泳分析参照美国 11,M# 的统一,-I 方法 ))?* " 脉冲场凝胶电泳分型所用标准菌株为 #>?/=38=9 血清型全球参考菌株 6?) 电泳图像分析和结果聚类分析 ",-I 图像应用 com!%: 数据库软件进行处理 " 识别图像条带 在图像识别过程中 " 在 3R 最小片段外的试验菌株条带因为不能为 3R 校准而被舍去 图像通过统一的 3R 进行校准 " 标定条带位置 " 必要时进行人工校正 聚类方法和参数选择 聚类图类型选择 X,3$$ MO[DV M!DV MOD!% 方法 " 条带位置差异容许度选择 ):g" 优化值为 :g"cov 方法计算相似性系数 在限制性内切酶的作用下 " 不同的菌株会呈现不同的条带数和片段大小 " 按照,M# 的命名原则 " 对每一种不同的带型进行命名 结果 :))) 株大肠埃希菌 )E 的药敏结果在受试的 )% 种抗生素中 " 对所有抗生素都敏感的菌株有 *E 株菌 其余的 %< 株菌至少对一种抗生素有抗性 耐药率最多的前四种抗生素依次是四环素 磺胺甲恶唑 萘啶酸 复方新诺明 ))%" 其次为氨苄西林 氯霉素 庆大霉素 环丙沙星 卡那霉素和头孢西丁 对阿米卡星 头孢吡肟 " 头孢曲松 头孢噻肟耐药株各 ) 株 " 药敏结果见表 抗生素种类 表 食品中分离的 )) 株大肠埃希菌 )E 的药敏结果 $ g% /^$O!^O DO )) >)E! V 生羊肉 $ 3 h%% 生猪肉 $ 3 h% 生牛肉 $ 3 h)?% 生禽肉 $ 3 h)% 其他 $ 3 h)?% 合计 $ 3 h))% 阿米卡星 氨苄西林 氯霉素 环丙沙星 头孢曲松 头孢噻肟 头孢吡肟 头孢西丁 庆大霉素 卡那霉素 萘啶酸 磺胺甲恶唑 复方新诺明 注 抗生素对应的耐药临界点 $ %@!% 阿米卡星 $*% % # 氨苄西林 $< % # 氯霉素 $< % # 环丙沙星 $ % % # 头孢曲松 $ < % # 头孢噻肟 $ % % # 头孢吡肟 $<% # 头孢西丁 $%% # 庆大霉素 $)*% # 卡那霉素 $*%% # 萘啶酸 $<% # 磺胺甲恶唑 $)% # 复方新诺明 # 四环素 $)*%

4 我国食品中大肠埃希菌 )E 耐药及,-I分子分型特征分析!!!白莉"等!%! :大肠埃 希 菌 )E p6e 和 大 肠 埃 希 菌 )E 非 6E 药敏结果的比较及耐药谱 *E 株大肠埃希菌 )E p6e 和 %< 株大肠埃希菌 )E 非 6E 分 别 有 株 菌 和 <? 株 菌 对 所 测 试 的 )% 种抗生素有不同程度的耐药 株耐药的大肠 埃 *E % "磺 胺 甲 恶 希菌 )Ep6E仅对萘啶 酸 *E% "对 其 余 抗 生 素 均 敏 感 但 大 肠埃希菌 )E 非 6E 对 这 几 种 抗 生 素 的 耐 药 率 明 显高于大肠 埃希菌 )E p6e 菌 株"对 上述 种 抗 生 素的 耐 药 率 均 有 统 计 学 差 异 $ 萘 啶 酸 " h%:*)"!9:#磺胺 甲 恶 唑 " h%%:%)*"!9: % " 药 敏 结果比较见图 ) 图 产志贺毒素大肠埃希菌 )Ep6E的耐药情况 - M, VM D O > )Ep6E O :%,-I分析结果,-I分析结 果 见 图 <")) 株 菌 经? /内切 OM! 软 件 酶消化后制胶 进行,-I分型"经 c 聚类 分 析 发 现" 每 株 菌 的 条 带 数 在 )* e< 之 间" )) 菌株共分为 )) 种带型"带 型间 差别 很 大"说 明 食品来源的菌株在基因水平上具有多态性 有 个 O O! 带型 有 相 同 的 条 带" 分 别 是 O * O + O,"相 同带 型 的 菌 株 都 具有相同的耐药 谱,-I将 菌 株 分 为 两 个 主 要 的 图 )大肠埃希菌 )Ep6E和大肠埃希菌 )E 非 6E 对 )% 种抗生素耐药的比较 - M )1! O O )% O ^ )Ep6E V! V ^ [ O > 在 %< 株耐药 菌 株 中" 一 共 有 % 个 耐 药 谱 其 M " M G $ 相 似 度 *):<g% 和 M G G $相似 M G全 是 )E p6e 菌 株# M G G 度?:<g% 全 是 )E 非 6E 菌 株" 耐 药 菌 株 大 多 集 中 在 M G G <讨论 中大肠 埃 希 菌 )E 非 6E 有 < 种 耐 药 谱"大 肠 埃 人类经济型动 物 及 食 品 之 间 存 在 一 个 相 互 紧 希菌 )Ep6E有 种耐药谱 其中耐 < 种不同类别 密联系的微 生 态 环 境" 养 殖 业 大 量 使 用 抗 生 素" 会 抗生素及其以上的多重耐药的共 < 株"且都为大 肠 使动物体内的微生 物 长 期 存 在 耐 药 筛 选 压 力"必 然 埃希菌 )E 非 6E 菌株"大肠埃希菌 )Ep6E没有 会产生耐 药 菌 株 这 些 菌 株 又 可 以 通 过 食 物 链 定 多重耐药菌株"前者的多重耐药率明显高于后者 值于人体的 肠 道" 对 社 区 人 群 的 健 康 产 生 威 胁 ) ) * 在 %< 株耐药 菌 株 中" 一 共 有 % 个 耐 药 谱 耐 研究 食 品 来 源 大 肠 埃 希 菌 )E 菌 株 的 耐 药 情 况" 两种以上抗生素的菌株有 <% 株"耐 < 种以上抗生素 可以为 我 们 探 索 人 员 社 区 感 染 提 供 一 定 的 线 索 的多重耐药菌株 有 < 株 最 常 见 的 五 种 耐 药 谱 依 本研究中 <:)g 菌 株 对 至 少 一 种 测 试 的 抗 生 素 耐 #$8 +3] +]/ /I/$ * % " $3, 次是 +3]$ * % " $3, D V 等 ) * * 对 <*) 株 $ ) 株 产 志 药 这与先前 #$8 +3] +]/ /I/$ % % " $3, +3] +]/ /I/ 贺毒素大肠埃希菌 )Ep6E和 )) 株不产志贺毒素 $%% "/I/$%% 多重耐药菌株最多可同时对 ) 种抗 的 大 肠 埃 希 菌 )E % 进 行 药 敏 检 测 并 发 现 约 有 168 1G, 1" 1/] 生 素 耐 药" 其 耐 药 谱 为 $3, %g的菌株对至少一种测试的抗生素耐药的结果相 -I, I# +3] F$# #$8 +]/ /I/ 近 本研究 中 大 肠 埃 希 菌 )E 菌 株 对 四 环 素" 复 :<产志贺毒素大肠埃希菌 )Ep6E的耐药情况 方新诺明"萘啶酸"氨 苄 西 林 耐 药 率 较 高"这 与 先 前 <E 株携带了志贺毒素基因的大肠埃希菌 )Ep 6E 报道的结果大 体 一 致 )? " * "但 是 萘 啶 酸 的 耐 药 率 本 研究高于文献 报 道 )?") * )@ <E%有耐药 对 种抗生素的耐药率明显低于其他 酮类药物使 用 有 关 ) ) * 不携带志贺毒素的大肠埃希菌 )E"两种抗生素均有 食源性致病菌株对 喹 诺 酮 类 耐 药"其 耐 药 率 远 高 于 <E%萘 碇 酸 $: Eg" 菌株仅 对 磺 胺 甲 恶 唑 $:?E"!9: #萘啶酸 统计学差异$磺胺甲恶唑 " h): %<)"!9: % <E 株携带志贺毒素的大肠埃希 " h)*: 6E没有多重耐药菌株"结果见图 菌 )Ep "这 可 能 与 我 国 养 殖 业 喹 诺 在我国食品中分离的其他 欧美发达国家的报道屡见不鲜 ) ) * 从耐药谱看"%< 株菌共 有 % 个 耐 药 谱"这 与 本 ^ 等 ) * 的 研 次研究菌 株 来 源 的 多 样 性 有 关 o

5 !%*! 16G #I+IY X"#$8--6\G I#I 图 <)) 株大肠埃希菌 )E 食品分离株带型聚类图 - M <,-I O )) O > )E V! V> )% 年第 * 卷第 期

6 我国食品中大肠埃希菌 )E 耐药及,-I 分子分型特征分析!!! 白莉 " 等!%E! 究显示大肠埃希菌 )E 耐药谱的多样性与菌株噬 菌体型有关 细菌在某种生存环境压力下 " 带有耐 药机制的遗传物质 $ 质粒 噬菌体 插入序列 整合 子等 % 通过水平传播方式 " 逐渐向细菌传递和积累 的结果 ))* 超广谱! 内酰胺酶 $ I+c8% 大肠埃希 菌在世界范围内已有大量报道 ))* " 且国内外已有 I+c8+/I1 菌株的报道 )< i%* 特别是 )) 年德 国暴发的 +/I1)% p6%" 具有产生! 内酰胺酶的基因 " 并表现为对多种青霉素类和头孢类药物耐 药 " 警示人类关注这类新型超级耐药的高致病性菌 株的存在 ))* )< 年 " 丹麦首次报道了从人类分 离到 I+c8+/I1)E p6e )* 但是本次研究中 " 我们没有进行 I+c8 表型和基因型的研究 " 这也是 未来的研究中需要完善的地方,-I 分子分型显示食品来源的菌株在基因水平上具有多态性 " 且可以将 )E p6e 菌株和 )E 非 6E 菌株很好的分为两个群 " 可见两簇在进化的 过程中来源于不同的克隆群 " 这与先前研究已经证实 )Ep6E 是从 p6e 进化而来的结果是一致 的 )** 通过本研究,-I 的方法也可以为分离菌 株的预警提供有效的分子分型比对 本研究对我国食品分离的 )E 菌株进行药敏 检测 " 发现抗生素的使用 " 包括四环素类 磺胺类 喹诺酮类及青霉素类 " 对大肠埃希菌 )E 菌株产 生了选择性压力 美国相关研究显示生猪肉分离 的大肠埃希菌 )E 菌株的高耐药率与生猪可批准 使用的兽药有一定的相关性 " 养殖过程兽药的使用 可能会促进大肠埃希菌 )E 菌株新的耐药性出 现 )?* )E* mv 等报道动物来源的 )E 菌株与人来源的菌株在统计学上有显著差异 " 造成差异的 原因也是因为养殖过程中抗生素的使用 新出现 且广泛分布的耐药菌株必将对未来可能出现的 +/I1)E 疫情产生更加复杂的影响 我们应加强养殖环节和零售环节食源性致病菌 " 特别是大肠埃 希菌 )E$ 包括 +/I1)E% 菌株药敏特征的监测 " 探明食品与养殖环节菌株耐药的传播关系 " 并为国 家制定科学的抗生素用药提供依据 $ 志谢 感谢参与全国食源性疾病监测的同志 % 参考文献 ) ) * +DM!O + /"-V!OO 61"OV +!"6>/DVIDD D VOMV DO ) Y* >1O GOM"E"%$?% ))> ) * #Y,"F Yc>DO6/ ) Y* >1O 3^"[")?"))$)% )%)> ) < * O,3"/M"m>/D V!OOMV ^ 6/ )E p6e" DOD!D>OV DV D!M!OV!) Y* >I V!"" ))")<*?> ) % * 3I#Y" o6$ +" 3," >$O^"O 6/ )Ep6E OV )E p#3 V! O!" V OV DM!O) Y* >YMO-V,O")?"*) $)) % )))))%> ) * OV Y1"6""1M + +">,O"O^ M ^OV V6/ )E p6e! OMVOMV^V) Y* >$ V OV IOO!O3^")"*E$%% )*))*E> ) * * +DV1 3" o6$ 1" ^" 1" >$O!^ O6/ )E V! DM!O"" [O"OV V ) Y* >$ V OV IOO!O3^" "*?$% E*?)> ) E * ZO1+"Y+"6^^ "8">/DR DD! M!OV! O^!O6/ )Ep6E OO) Y* >#[ IOOV YMO3VO" "<%$*% )<)<*> )? * o6$ + 6" ZD " I c 8" >GVOO OV DdO OO!VV O^O!O +DO VMO6/ ) Y* >$ V OV IOO!O3^")"*E$%% )?)*%> ) * 1OM " Z! "" ZR 3" > /D M OOOO^ OD^+D O! OD!D:)% p6%! D ))!O M^R) Y* >c313^")")$)% )*> ))* $ 1" 3O I" $OVM $" >,DM " MOV!OOOV O!^OO 61D- O O6/ V! jmoo!o) Y* > "D O 3^"")*$?%?)> )))* 3s O/" +!3" #[R c" >,!OMV O " OOV O!^O O6/ $ m/i1% V O coov!o! OV D VM) Y* >GOOO YMO-V 3^"E"))E$% )?))> ))* Z$# \" 16I# " 1XG +" > IOM!O OV DdO #/:3=/! DRO O co" 1DO) Y* >-V^O,DO OV ")%"))$% )*)<> ))<* 3OdY8>IOO!O MO ^ O^OV ^ O^OV!OO) Y* >IOO!O,MO" ")E$))%?<> ))%* /#"moyz"cr$mo 1>$jM!!OOO"!OOV!^OO!^O) Y*> /OVO IHIMO"))"*$*%E??%> ))* cd[r3"3oc"$ov3">1do D6/ O V [D O M^R D! M!OV!O!O"))!^MV)Y*>/D 8OGOM"))"))$%*E)*E*> ))** 白莉 " 刘秀梅 " 付萍 " 等 >!E 年中国食品中疑似 )E 大肠埃希菌的鉴定及毒素基因的检测 ) Y* > 卫生研究 ")" <$<% <<<<?> ))E* 18+G>3)+<,!OOVVO!^M ^ O#/[O/DV GO!O+M!O)+*>)<> ))?* "^I3" -3" M! "" >+OVVdO MV V D DM^ O6/ )E p6e" #/:3=/ OV #<=/,M#) Y* > -V^MO,DOH "*"<$)% *E>

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