北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 9 c V^ V M V ^#1 F V V V D ^ M ^ > 3 #1 F V V^ D ^ [ R c [ V? M V ^ M ^ D V M D V> * * [ ^ D [ *:<g> D [ M D M^ V ^-I>9 D? M

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羊璃竺
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1 X#$8--6\G? * 崔生辉徐潇张凤兰>中国超级耐药细菌1 流行原因与控制 * >中华预防医学杂志< E $ > 措施探讨 Y * ]X ] 1XG + 6 o6$# - 8 > V 年第 * 卷第期 $?> * 16I# Y 1$ 1 \ Z$# c - >+ MV D E 8 1 -M M 6 D V 1D Y* > 3 V ^M 6 D R V MV * $* ** *?> R1D Y * >3 ^ M $ E<?> * 3 $c YI c 3 >$ ^ +D $ VM 6 Ep6E V D V V E V DM + Y * > D 3 ^ * $E E<?*> * o ^ F + 3 o6$# \ > D V M 1 V 6 Y* >$ V V I 3 ^ Ep6E?E$ < <<> * V D3# I 3 + D M - > +D VM 6 V V V M Ep6E DM Y * >Y M $ ^ > 1D D < *? $ < * * -I#1 3 V + 8 D Z > V E p6e [ [ D 6 M V Y* >I G M E < $ E E*> E * m V + +3 V D >3 M V ^ < * 6 G 8 ^ I Z Z >$ ^ M ^ V M D ^ 6 6 E V ^ [? V < D E Y * >Y M 1 3 ^ < # D V Y* > V D RMV E < $E???> 论著北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪张晓嫒陈倩陆峥王丽丽北京市疾病预防控制中心营养与食品卫生所食物中毒诊断溯源技术北京市重点实验室北京<# 摘要目的分析北京市食源性金黄色葡萄球菌对常用抗生素的耐药情况及其分子分型特征预防和控制由该菌引起的食源性疾病为临床合理用药提供依据方法收集 * 年北京地区食源性致病菌监测网分离到的金黄色葡萄球菌?E 株采用微量肉汤稀释法检测金黄色葡萄球菌对? 种常用抗生素的敏感性采用脉冲场凝胶电泳 -I 进行分子分型结果 * 株金黄色葡萄球菌表现出对抗生素耐药耐药率为 *:<g对抗生 :?*g#四环素 I <:g#氯素的耐药率为红霉素 I\:g#苯唑西林 ]$E:?g#克林霉素 18G *:g#甲氧苄啶 :??g 其中耐甲氧西林金黄色霉素 168:E*g#环丙沙星 1G 磺胺甲恶唑 3 葡萄球菌 3+$ 株#对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌 3++$ < 株分离到的 3+$中 < 株菌表现出多重耐药全部菌株共分为种 -I带型优势带型不明显结论食源性金黄色葡萄球菌的耐药和多重耐药普遍存在-I带型分布分散与耐药谱的关联性较差关键词金黄色葡萄球菌$ 耐药$ 微量肉汤稀释法$ 脉冲场凝胶电泳$ 食源性致病菌$ 分子分型?*$? E 中图分类号#<E?: 文献标志码$文章编号 # :< > D> :: H? * * * # # $ $ -I - Z$# o6$#] 16I# 8XoD Z$#8 $G M #M V - V 6 c 1 V 1 c F 1 8 ^ V ^ D - V c V 1 c < 1D D ^ V M D V^ #1 F 收稿日期 [ V S*> 作者简介王迪男主管技师研究方向为食源性致病菌相关研究I D j S*<> 通讯作者陈倩女主任技师研究方向为食源性致病菌相关研究I

2 北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 9 c V^ V M V ^#1 F V V V D ^ M ^ > 3 #1 F V V^ D ^ [ R c [ V? M V ^ M ^ D V M D V> * * [ ^ D [ *:<g> D [ M D M^ V ^-I>9 D? M V ^ [ D $ :g $ E:?g V $ :?*g $ <:g D D $ :E*g $ *:g D M [ 3 D #1 F $ 3+$ V < [ D D $:??g > #1 F $ 3++$ >< 3+$[ M V M > -I [ V V># V -I [ ^ M V V>- * -3M V M [ M D#1 F V V>-I D [ V V V D >D ^ M V 9 -I D [ V >? #1 F # ^ # ^ D V M # M V V D # V # M ^ D 金黄色葡萄球菌 $ #1 F 广泛分布于空气土壤水中人和动物的带菌率较高 * ::主要仪器与试剂 mg IF浊度仪 $ 法国 ^ 3 M 实验用去离金黄色葡萄球水浴摇床$ 德国 Y M ^ 子水系统$ 美国 3 菌及其毒素是引发细菌性食物中毒的主要病原之脉冲场凝胶电泳仪及配套设备和凝胶成像系统 $ 美一金葡菌污染食物所引发的食源性疾病为世界 V 国 c 因此食品受其污染的机会较多性食品安全问题该菌也是北京市细菌性食物中脑心浸液培养基细菌琼脂粉 $ 北京陆桥技术毒的主要病原菌之一年北京市共报有限责任公司革兰氏阳性菌冻干型细菌定量药告细菌性食物中毒 E 起其中金黄色葡萄球菌食 6肉汤细菌稀释液 $ 天津金章科技发敏测试盒3 物中毒占 g 多重耐药的金黄色葡萄球菌菌株 ^ c + 展有限公司琼脂糖 $ 美国 1 的出现已危及到对该菌引发食源性疾病的控制 R V 蛋白酶 F$ 德国 3 R限制性内切酶有研究表明 * 耐药菌可直接或通过食物链间接? 限制性内切酶 #: 均购自大连宝生物葡感染人并具有将相同的抗药特性通过食物链转 $ V D 萄球菌溶菌素$ 美国 + 移给人体病原菌的潜在危险目前脉冲场凝胶 :方法 V V D -I 被认为电泳 $ M ::测定方法是食源性病原菌分型的金标准 -I具有重复性好分辨率高的特点 <* 为了解北京市食源性金采用冻干型细菌定量药敏测试盒定量测定金 D ^ 黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度 $ 黄色葡萄球菌的耐药谱和 -I型别分布以及两 3G 1 将待测定的金黄色葡萄球菌和者之间的联系建立北京市食源性金黄色葡萄球质控菌株 $ $11 < 接种到脑心浸液肉汤菌耐药图谱库和分子溯源库提高北京市金葡菌 $ c6g 管中过夜培养从过夜培养的 c6g肉汤管食物中毒监测预警能力本研究通过采用美国临中挑取菌液划线接种脑心浸液琼脂 $ c6$ 平板过床实验标准委员会 $ #118+ 推荐的微量肉汤稀释夜培养从过夜培养的 c6$平板上挑取单个菌落法和 -I方法对年通过北京市食再次划线接种 c6$平板过夜培养从 D 培养源性致病菌监测网络分离到的?E 株金黄色葡萄的平板上挑取 < e 个纯新鲜菌落均匀悬浮于球菌进行药敏试验及 -I分型 : IF浊度计调细菌稀释管中将该菌液用 mg 整至 : 麦氏浊度用微量移液器吸取已比浊好浓材料与方法 6肉汤管中混匀度的菌液加入到 3 :材料缓慢倒入 m型无菌槽内使用微量移液器一次加入 ::菌株来源自动设置 $ e 到 * 孔药敏板中 $ 每孔本次试验菌株来自年通过北京市 6 不加任何抗生素的孔里个$ $ e 加菌食源性致病菌监测网络分离到的金黄色葡萄球菌作为生长对照# 个 $ I e6 不加菌作为空白共?E 株其中株来自餐饮食品EE 株来自未对照将接种好的 * 孔药敏板加盖置于培养箱中经过加工的食品原料质控菌株为金黄色葡萄球 $<* q f培养 D培养箱中放置水槽以保持湿菌$ $11< 度同时满足相同的操作测定标准质控菌株检

3 < X#$8--6\G 年第 * 卷第期测的抗生素种类红霉素 $ I\ 苯唑西林 $ ]$ :??gm$#: g 金黄色葡萄球菌对? 种抗四环素 $ I 氯霉素 $ 168 环克林霉素 $ 18G 生素耐药情况见表甲氧苄啶万丙沙星$ 1G 磺胺甲恶唑$ 3 表金黄色葡萄球菌对? 种抗生素的耐药率 1值判读古霉素$ m$# 根据药敏测试盒提供的 3G ^? R V ^ 1值: 8为敏标准进行判定其中 I\的 3G 8为中介 #? 8为耐药 ]$ 的感 e 抗生素耐药菌株数耐药率 g 中介菌株数中介率 g 敏感菌敏感率 g 株数 3G 1值 8为敏感 # 8为耐药 18G的 I\? : :*?< :< 3G 1值 : 8为敏感 e 8为中介 ]$ E:? : < E: 8为耐药I的 3G 1值 8为敏感 # 18G < :?* : EE: I * <: E: E E?:* 168 :E* : *?*: 1G *: :*E E : 3 :?? : E* : : :E??:<? 8为中介#* 8为耐药168的 3G 1值? 8为敏感* 8为中介#< 8为耐药 1G 的 3G 1值 8为敏感 8为中介 8为耐药3 的 3G 1值 <? 8 # E* 8为耐药m$#的 3G 1值 8 为敏感# 8为中介#* 8为耐药为敏感 e? ::结果判读当同时满足以下条件 # 生长对照孔中的细菌有明显生长空白对照孔无细菌生长 $ 每次实验均需用标准质控菌株$ $11< 同步操作进行质 1值在规定的范围内时目测量控制#质控菌株的 3G 结果可接受 ::<-I分型参照金黄色葡萄球菌 -I分型的标准操作方法进行主要实验参数如下细菌悬液浓度用 ^ 3r M麦氏比浊仪调至 *:#使用 #: 限制性内切酶$ X < f 酶切 < D# 电泳参数为 : e : + D#胶块电泳后使用 V 染色纯水脱色读取电泳图谱#沙门菌标准株$ 6? 作为分子量标准 m$# : 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌$3+$耐药情况?E 株金黄色葡萄球菌中共检出 3+$ 株占比为 E:?g 株 3+$共表现出 * 种耐药谱其中 < 株菌表现为多重耐药占 3+$ 菌株 *:<?g#? 株菌仅表现出对 ]$ 单一耐药占 3+$菌株 <:*g#双重耐药菌株共 E 株占 3+$ 菌株 <:*g#< 重耐药的菌株共 E 株占 3+$菌株 <:*g# 重耐药的菌株共 E 株占 3+$ 菌株 <:*g# 重耐药的菌株株占 3+$ 菌株 <:?g 3+$ 耐药谱见表株 3+$ 中有? 株菌表现出对 I\耐药耐药率 <:?g# 株表现出对 I耐药耐药率 <:?g# 株表现出对 18G耐药耐药率 <:?g# 株表现出对 168耐药耐药耐药率耐药率 :*g# 株表现出对 3 :*g# 株表现出对 1G 耐药耐药率 :g 表 3+$耐药谱 ::数据分析 -I图像录入 c M *: * 软件包进行处理识别图像条带经同一的分子质量标准进行校准 ^ $ ^ M 3+$ 耐药谱耐药菌数株 ]$? ]$I\ 中 9: R^ 的条带忽略不计 -I电泳图谱中 ]$I 每条泳道代表株菌在限制性内切酶的切割下不 ]$18G ]$I\18G 同的菌株会呈现不同的条带数和片段大小将条带 ]$I\168 数和位置相同的菌株归为同一 -I型别 ]$II\ 标定条带位置必要时进行手工校正在 -I图像结果 :?E 株金黄色葡萄球菌对? 种抗生素的耐药情况?E 株金黄色葡萄球菌共检出 * 株耐药菌耐 ]$3 ]$II\168 ]$II\18G ]$I\16818G ]$II\3 ]$I\18G3 ]$II\18G1G 株耐药率为 <: <g 对两种及以上抗生素耐药 ]$II\16818G 的菌株 $ 多重耐药共 E 株耐药率为 <?:g 耐 ]$II\18G3 药率为 *:<g 对一种抗生素表现为耐药的菌株共 g]$e:?g18g 药率由高到低依次为 I\: g168: E*g1G *: g3 :?*gi<: : <甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌$3++$耐药情况?E 株金黄色葡萄球菌中共检出 3++$< 株

4 北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 < 其中 E 株菌对所选抗生素敏感其余 * 株菌表现性病原菌耐药株的产生扩散且在食品中的药物残留出 E 种耐药谱对单一抗生素耐药菌株? 株占可能干扰人肠道内的正常菌丛和诱导临床耐药病原菌 3++$菌株 :Eg#多重耐药菌株 <* 株占 3++$ 株动物排泄物中的抗生素和耐药菌排入环境并长期菌株 *:*Eg 多重耐药菌中双重耐药菌 E 株占保持耐药性质 3++$菌株 :g#< 重耐药菌株占 3++$菌株 g 3+$ 中耐药率达到的耐药率最高达到 : <:Eg# 重耐药菌株占 3++$ 菌株?:g# <:?g3++$中耐药率达到 : gi\在 3+$ 重耐药 < 株占 3++$菌株 :g 耐药谱见表和 3++$中耐药率都位居第一位除 I\外3+$ < < 株 3++$ 中株菌对 I耐药耐药率和 3++$都表现出对 I 18G相对较高的耐药率 :<Eg#E 株菌对 I\ 耐药耐药率 :g# 168在 3+$和 3++$中的耐药率近似 3+$和 E 株菌对 168耐药耐药率 :g# E 株菌对 3++$对 m$#1g 3 相对敏感可作为优先选 18G耐药耐药率 :g# 株菌对 1G 耐药耐择的抗生素用于治疗金黄色葡萄球引起的食源性疾耐药耐药率药率?:g# * 株菌对 3 病长期以来万古霉素是治疗 3+$感染的基石和金 :g#全部 3++$均表现出对 m$#敏感标准 ^ <$ ^ M 3++$ 耐药菌数株本研究的监测结果可以看出I\ 耐万古霉素的 3+$被列为未来年的超级耐药细菌表 <3++$耐药谱耐药谱 * * ** 除株菌的 3G 1值表现为 8的中介值外菌株均表现为对 m$#敏感掌握食源性金黄色葡萄球菌耐药谱对于在治疗由该菌引起的食源性疾病 I I\ 168 临床研究显示年全国个城市 1G 所教学综合医院的 3+$的流行率为 :g E* 3 II\ 时的抗生素选择有一定的指导意义本研究结果显示的北京市食源性 3+$分离率达 I\168 < 到 E:?g低于临床的流行水平多重耐药菌更 I\18G 多的存在于 3+$中达到 *:<?g 高于 3++$中 II\18G II\1G I\16818G < 单一耐药与选取的抗生素种类相对较少有关与 II\18G1G 以往的研究比较发现不同地区不同食品来源 II\16818G I\18G3 < I\16818G1G * 金黄色葡萄球菌的耐药性分析中报道未检出 II\16818G1G 3+$?* 食品中金黄色葡萄球菌的污染状况及耐 II\18G3 :金黄色葡萄球菌的 -I分型?E 株金黄色葡萄球菌基因组 #$经 #:G 的 *:*Eg 表现出 * 种耐药谱仅对 ]$表现出 3+$的分离率可能不同如四川省动物性食品源药性分析中报道的北京市通州区污染食品的金黄 * 色葡萄球菌 g 为 3+$ 本研究中 3+$的样品来源分布广泛来源于类食品其中包括中酶切后将 -I图谱进行聚类分析见图其中式凉拌菜株生禽畜肉? 株熟肉制品? 株米面株菌未形成任何条带经复测仍无条带形成未纳制品? 株焙烤及油炸类食品株冰淇淋株豆入软件分析用于聚类分析的? 株菌中株菌制品株果蔬汁 < 株沙拉株烧烤食品株水发生降解经复测加入硫脲仍出现降解无法聚类产品株提示北京市餐饮业即食食品是 3+$污其余 *? 株菌共分为种带型其中? 株菌分离染的高风险食品自餐饮环节E 株菌分离自食品原料带型分布分散未体现出优势带型本研究结果显示北京市食源性金黄色葡萄球菌的 -I带型分散来自于不同区域不同样品的菌株从图中可以看到 -I图谱的聚集性并不明带型可以完全一致流行的优势菌株不明显耐药的显在 -I带型完全相同的菌株中样品种类及来金黄色葡萄球菌的 -I图谱与耐药谱之间关联性源呈多样性未表现出菌株间的相关性其中耐药较差同一耐药谱可呈现多种带型不同耐药谱可呈菌的 -I带型与耐药谱之间未体现出关联性现完全一致的带型来自相同区相同食品来源的菌株同源性较高来自崇文区的分离自米面制品的株 <讨论食源性金黄色葡萄球菌产生耐药的主要原因是由于动物在饲养过程中使用亚治疗量的抗生素导致食源菌表现出完全一致的带型来自通州区的分离自米面制品的 < 株菌表现出完全一致的带型本研究揭示了北京地区食源性金黄色葡萄球

5 < X#$8--6\G 图? 株金黄色葡萄球菌的 -I聚类图 - M -I? 年第 * 卷第期

北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 << 续图菌的耐药谱和 -I型别分布特征建立了包含耐药信息的食源性金黄色葡萄球菌分子分型数据库为今后处置由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件中的溯源诊断及抗生素治疗提供了技术支撑指导动物饲养阶段合理的选择抗生素从源头

6 北京市食源性金黄色葡萄球菌耐药及分子分型研究王迪等 << 续图菌的耐药谱和 -I型别分布特征建立了包含耐药信息的食源性金黄色葡萄球菌分子分型数据库为今后处置由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件中的溯源诊断及抗生素治疗提供了技术支撑指导动物饲养阶段合理的选择抗生素从源头上控制和减少多重耐药金黄色葡菌球菌的产生 D V ^ #1 F V V V VM Y*> G Y M - V 3 ^ E$< *> < * 3 D + 1 R 1 Z > 1 M D V m ^ D M Y * >Y1 3 ^ <E $? E< E?> * 徐勤巢国祥>生牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性 * >中国卫生检验杂志 $? E E<> 状研究 Y 参考文献 * 吕素玲诸葛石养韦程媛等>广西食品中金黄色葡萄球菌污染 *> > 状况及耐药情况分析Y 应用预防医学?$ * # + V 8 ^ $ > M * 崔巧珍张燕军郭慧芳>金黄色葡萄球菌的耐药变迁 Y * >中 <E*> 国药物与临床< < $ <E * * Y -F M 3 I + + > $ M ^ R M jm V V^ M V ^ D #1 F

7 X#$8--6\G < Y *> I G M?$??> E * 贺文强陈宏斌赵春江等> 年中国个主要城 * >中华微生物学和免市金黄色葡萄球分子流行病学研究 Y > 疫学杂志< << $ E 年第 * 卷第期? * 刘东香刘书亮张晓利等>四川省动物性食品源金黄色葡 * >中国兽医杂志 $ *?> 萄球菌的耐药性分析 Y * 张兰荣王连秀张文利>食品中金黄色葡萄球菌的污染状况 * > * $ < <E> 及耐药性分析 Y 论著上海市闵行区初级农产品中金黄色葡萄球菌污染状况及毒力基因分布特征研究骆玲飞王小光刘继倩宋驰萍乔坤欧阳霖陈秀华刘芸上海市闵行区疾病预防控制中心上海# 摘要目的了解上海市闵行区初级农产品中金黄色葡萄球菌的污染状况及毒力基因的携带情况方法按国标方法采用科玛嘉显色培养基对初级农产品中的金黄色葡萄球菌进行分离#生化鉴定收集的菌株采用实时耐热核酸酶基因 39 粘附素基因和肠毒素基因 6 #6? #6 #6 8#6 荧光 1方法检测血浆凝固酶基因 #39和基结果* 份食品中检出金黄色葡萄球菌 < 株检出率为 :?Eg$< 株金黄色葡萄球菌均含有基因全部缺失其余个毒力基因则表现为部分缺失结论本地区初级农产品中存在金黄色葡萄球菌因而 6 毒力的污染生肉禽类食品中金黄色葡萄球菌污染比较严重应加强监督管理$金黄色葡萄球菌菌株均包含有基因可以作为一项检测其致病力的指标关键词金黄色葡萄球菌$ 污染$ 毒力基因$ 食源性致病菌$ 初级农产品$ 农产品$ 食品安全?*$ < 中图分类号:#<E?:文献标志码$文章编号 # :< > D> ::* D # # $ $ * ? H X8 Z$#] M 8G XY j +#1D G $FM X\ 16I#] M DM 8G X\M $ 1 1 V 3 D +D D 1D D V D M #1 F D VM 3 D +D D > V M V $G#:9 [ M V V ^ D V #:9 V V V>m M ? V 6 [ V V ^ 1 D V > 9 * < [ V V * #> 9 V DV [ :?Eg>$ D V V D V 39 V M ^M 6 M [ MV V D M M [ > - * - D #:9 D VM V 3 D V +D D >+M V V D M V ^ D V [ V M M >$ #:9 M >G M V ^M V V M >? #1 F # # M # V^ D ^ # VM # VM # V 金黄色葡萄球菌在自然界中广泛存在可以引起各种化脓性炎症和食物中毒是食源性疾病的重要病原菌之一据报道 * 收稿日期基金项目上海市闵行区科委自然基金项目36o # 作者简介骆玲飞女主管技师研究方向为病原微生物 I ES > 通讯作者王小光男主任技师研究方向为病原微生物 I [ E<? S > * * 年在美国由于金黄色葡萄球菌引起的食物中毒有起在细菌性食物中毒中居第三位我国每年发生的此类食物中毒事件也非常多全国各地均有报道 i<* 金黄色葡萄球菌的致病原理与其很多毒力基因有关其中最重要的一种就是肠毒素 $ +I 基因常见的肠毒素分为种

人工抗原的鉴定

人工抗原的鉴定生物技术通报张海棠王自良刘耀东传统的理化分析方法在食品污染检测方面发挥了重要的作用但均存在一定的缺陷急需建立快速高效的检测方法食品污染免疫检测是一种新型的分析方法与理化分析方法相比具有省时省力费用低廉便