( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示某国家 地区或养殖场发生的口蹄疫疫情图片或视频, 教师充当畜牧场工 教师归纳总结后作人员介绍疫情发生情况, 学生于教材上标记, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片,

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1 动物检疫技术 课程单元设计方案 单元名称共患疫病的检疫教学地点多媒体教室和养殖场学时 4 教学目标技能目标 :1. 会进行口蹄疫 狂犬病 布鲁氏菌病 结核病 炭疽的临诊检疫 ; 2. 会进行口蹄疫 狂犬病 布鲁氏菌病 结核病 炭疽检疫后的处理 ; 3. 会应 RT-PCR 法和 ELISA 法进行口蹄疫检疫 ; 4. 会应用变态反应试验进行牛结核病检疫 ; 5. 会按照国标进行羊布鲁氏菌病检疫 知识目标 :1. 掌握口蹄疫 狂犬病 布鲁菌病 炭疽检疫要点和检疫后的处理方法 ; 2. 掌握旋毛虫病 囊尾蚴病 棘球蚴病的实验室检疫方法及检疫后处理 ; 3. 了解伪狂犬病 弓形虫病 沙门氏菌病 钩端螺旋体病 巴氏杆菌病 大肠杆菌病 螨病的检疫要点和检疫后的处理方法 能力目标 :1. 具有爱岗敬业 踏实肯干 不怕脏 不怕累 认真负责的工作态度 ; 2. 具有生物安全和防护人兽共患病的意识, 防止外来病原体带入养殖场 ; 3. 具备良好的沟通能力和团队协作精神, 听从组长和指导教师的指挥 ; 4. 具有善于分析 总结问题和解决问题的能力 教学过程 提问与知识回顾 : 常见的共患病有哪些? 以上疫病分别属于农业部颁布的 一 二 三类动物疫病 病种名录 中的哪一类疫病 ( 项目四知识回顾 )? 发生一类 二类 三类动物疫病时, 如何处理? 主要的共患疫病包括 : 多媒体展示, 大体了解 口蹄疫 结核病 布鲁氏菌病 炭疽 狂犬病 旋毛虫病 囊尾蚴病 棘球蚴病 弓形虫病 伪狂犬病 沙门氏菌病 钩端螺旋体病 巴氏杆菌病 大肠杆菌病 螨病 以上共患疫病在农业部颁布的 一 二 三类动物疫病病种名录 中的分类 : 同学们分 类, 然后记在笔记本上 一类疫病 : 口蹄疫二类疫病 : 结核病 ( 牛 ) 布鲁氏菌病 炭疽 狂犬病 旋毛虫病( 猪 ) 囊尾蚴病( 猪 ) 棘球蚴病 弓形虫病 伪狂犬病 沙门氏菌病 ( 鸡白痢 禽伤寒 ) 钩端螺旋体病 巴氏杆菌病 ( 猪肺疫 禽霍乱 ) 三类疫病 : 大肠杆菌病 沙门氏菌病 ( 猪副伤寒 ) 螨病 一 口蹄疫的检疫

2 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示某国家 地区或养殖场发生的口蹄疫疫情图片或视频, 教师充当畜牧场工 教师归纳总结后作人员介绍疫情发生情况, 学生于教材上标记, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片, 教师进行归, 详细讲解该病临诊检疫方法纳总结 学生在, 学生对应笔记模拟实境 中,, 观看图片完成工作岗位体验和掌握口蹄疫临诊检疫的方法, 加深记忆 1. 流行特点传染性强, 传播迅速, 易造成大流行 一年四季均可发生, 以冬 春多发 自然条件下可感染多种动物, 以偶蹄兽最易感染 家畜中以牛最易感, 其次是猪, 再次是绵羊 山羊和骆驼 成年动物多呈良性经过, 幼畜死亡率高 2. 临床症状不同动物发病后症状基本相似, 体温升高至 40~41, 食欲不振或不食, 精神沉郁 病畜唇部 舌面 齿龈 鼻镜 蹄踵 蹄叉 乳房等部位出现水疱, 水疱破溃后往往形成浅表性的红色溃疡 病畜常表现运步困难 跛行, 严重的蹄部溃烂 蹄壳脱落 仔猪 犊牛 羔羊常因急性胃肠炎和心肌炎而突然死亡, 病死率可达 60%~80% 3. 病理变化咽喉 气管 支气管和胃黏膜可见圆形烂斑和溃疡, 胃和大小肠黏膜可见出血性炎症 典型病变可见心肌松软似煮肉状, 心包膜有弥漫性及点状出血, 心肌切面有灰白色或淡黄色的斑点或条纹, 似老虎身上的斑纹, 俗称 虎斑心 ( 二 ) 实验室检疫提问与知识回顾 : 哪些组织中口蹄疫病毒含量最高? 如何采集? 病原学检测的方法有哪些? 血清学检测的方法有哪些? 教师将检疫方法以多媒体形式呈现结果或学生查看教材 123 页, 学生以 RT-PCR 和 ELISA 法口述口蹄疫病毒的实验室 检疫过程 (RT-PCR 和 ELISA 操作方法已在项目二学习 ) 1. 病原学检测采集的新鲜水疱皮 水疱液或其它组织样品, 经双抗体夹心酶联免疫吸附试验 反向间接血凝试验 反转录 - 聚合酶链式反应 (RT-PCR) 乳鼠中和试验或微量补体结合试验进行病原检测 检测结果为阴性时, 需将样品接种 3~5 日龄乳鼠或细胞盲传 2 代进行病毒增殖, 用乳鼠组织或细胞培养物再进行上述检测 O-P 液可直接用反转录 - 聚合酶链式反应 (RT-PCR) 方法进行检测, 或经乳鼠或敏感细胞增殖后用上述方法进行病原检测 2. 血清学检测将采集的血清样品, 用非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验检测野毒感染抗体, 或用液相阻断 - 酶联免疫吸附试验 病毒感染相关 (VIA) 抗原琼脂凝胶免疫扩散试验 (VIA-AGID) 检测试验进行抗体检测 要求学生于课余时间到疫病检测中心观摩或动手操作 RT-PCR 法鉴定病原和 ELISA 法检测血清中的抗体水平, 做到熟 练掌握两种方法的应用和操作 ( 三 ) 检疫后处理情景设计 : 通过多媒体展示某国家 地区或养殖场发生的口蹄疫疫情图片或视频, 学生充当畜牧场工 作人员 官方兽医, 结合项目四中学习的一类疫病检疫后处理口述口蹄疫检疫后的处理, 教师根据口蹄疫特征归纳总结其检疫后处理的方法

3 1. 宰前检疫发现口蹄疫病畜时, 立即上报疫情, 病畜和同群畜用不放血方法全部扑杀销毁 场地严格消毒, 采取防疫措施 宰后检疫发现口蹄疫病畜时, 立即停止生产, 彻底清洗 严格消毒生产场地, 其胴体 内脏及其副产品以及同批产品及其副产品销毁处理 2. 建立疫情报告制度和报告网络, 一旦发生疫情, 应立即上报动物卫生监督机构, 尽快确检, 严格封锁疫点 疫区, 消灭疫源, 杜绝散播 及时扑杀疫点内病畜和同群畜, 在兽医人员的严格监督下, 对病畜扑杀和进行尸体无害化处理, 对污染的场所 器具用 2% 氢氧化钠溶液消毒 对疫区和受威胁区内易感畜进行紧急免疫接种, 禁止活畜进出 最后一头病畜死亡或扑杀后 14 d 内不出现新的病例, 经终末消毒 动物防疫监督机构按规定审验合格后, 由当地畜牧兽医行政管理部门向发布封锁令的人民政府申请解除封锁 二 狂犬病的检疫 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示狂犬病疫情图片或视频, 教师充当畜主介绍疫情发生情况, 学生分组讨论 后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟实境 中, 完成工 作岗位体验和掌握狂犬病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生于教材上标记, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片, 详细讲 解该病临诊检疫方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 流行特点散发性, 各种畜禽和人对本病都有易感性, 尤以犬科和猫科动物敏感 主要经过咬伤传播, 病死率高达 100% 2. 临床症状各种动物的临诊表现相似, 先出现沉郁 意识混乱 异食, 后高度兴奋 狂暴, 有攻击性行为 最后呈现局部或全身麻痹, 吞咽困难, 下颌下垂, 流涎, 尾下垂 3. 病理变化尸体消瘦, 常有咬伤或裂伤, 胃内空虚有异物 ( 二 ) 实验室检疫 通过多媒体展示包涵体和荧光抗体试验的操作过程及结果, 学生对应教材了解狂犬病实验室检疫的方法 1. 包涵体检查取新鲜脑组织制成压印片, 塞勒氏染色镜检, 如在神经细胞浆内见有圆形或椭圆形桃红色小颗粒, 即内基氏小体 ( 包涵体 ), 就可以确诊 2. 荧光抗体试验我国将该试验作为检查狂犬病的首选方法 取可疑脑组织或唾液腺制成触片, 荧光抗体染色, 荧光显微镜下观察, 胞浆内出现黄绿色荧光为阳性 本法快速 特异性强, 检出率高 3. 动物接种试验以小鼠最为敏感, 并可提高阳性检出率 ( 三 ) 检疫后处理情景设计 : 通过多媒体展示现实生活中人们处理狂犬病病死动物的图片和我国狂犬病流行现状, 学生分组讨论此种处理方法的危害和我国狂犬病发病率高的原因, 结合二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师根据狂犬病特征归纳总结其检疫后处理的方法

4 扑杀患病动物和被患病动物咬伤的其他动物, 并对扑杀和发病死亡的动物进行无害化处理 ; 对疫点内所有犬 猫进行一次狂犬病紧急强化免疫, 并限制其流动 ; 对污染的用具 笼具 场所等全面消毒 三 结核病的检疫 ( 一 ) 临诊检疫情景设计 : 通过展示多媒体结核病疫情图片或视频, 教师充当畜牧场工作人员介绍疫情发生情况, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟实境 中, 完成工作岗位体验和掌握结核病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生将相关知识记在笔记本上 再次播放典型结核病症状和病变的图片, 详细讲解结核病临诊检疫 方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 流行特点本病可侵害人和多种动物 家畜中牛最易感, 特别是奶牛, 其次为黄牛 牦牛 水牛, 猪和家禽易感性也较强, 羊极少患病 2. 临床症状以肺结核 乳房结核 淋巴结核和肠结核最为常见 肺结核以长期顽固性干咳为特征, 且以清晨最为明显 患畜容易疲劳, 逐渐消瘦, 有的牛体表淋巴结形成无热无痛性肿块, 病情严重者可见呼吸困难 乳房结核时, 一般先是乳房淋巴结肿大, 继而后方乳腺区发生局限性或弥漫性硬结, 硬结无热无痛, 表面凹凸不平 ; 泌乳量下降, 乳汁变稀, 严重时泌乳停止 肠结核表现消瘦, 持续下痢与便秘交替出现, 粪便常带血或脓汁 3. 病理变化在肺 乳房和肠黏膜等处形成特异性白色或黄白色结节 结节大小不一, 切面干酪样坏死或钙化, 有时坏死组织溶解和软化, 排出后形成空洞 胸膜和肺膜可发生密集的结核结节, 形如珍珠状 ( 二 ) 实验室检疫 组织学生在学院实训奶牛场按照国标要求进行奶牛结核病的普查, 本次课通过多媒体展示检测步骤和检测结果使学生大体了解这部分内容 1. 病原学检查取痰液或结核病灶 乳及其他分泌物直接涂片, 抗酸染色后镜检, 结核杆菌呈红色, 其他菌及背景为蓝色 2. 变态反应法检查用提纯结核菌素 (PPD) 按操作要求和程序进行确检 应用变态反应法可检出牛群中 95%~98% 的结核病牛 ( 三 ) 检疫后处理 情景设计 : 通过多媒体展示某些养殖场违规处理结核病阳性牛的案例和我国结核病流行现状, 学生分组讨论此种处理方法的危害和我国结核病发病率高的原因, 结合二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师根据结核病特征归纳总结其检疫后处理的方法 1. 发现全身性结核病病牛应立即采取不放血方式扑杀, 尸体销毁 ; 淘汰阳性牛及宰后检疫发现全身性结核或局部结核的, 其胴体及内脏一律销毁处理 2. 引进动物应隔离检疫, 阴性者方可入群 奶牛场用结核菌素作变态反应检测, 每年对

5 牛群检疫两次, 检出的阳性牛无害化处理 可疑牛在隔离的基础上经两次以上检疫仍为可疑者按阳性牛处理, 保留健康牛, 加强检疫和饲养管理 为了防止人畜互相传染, 工作人员应注意防护, 并定期体检 四 布鲁氏菌病的检疫 ( 一 ) 临诊检疫情景设计 : 通过多媒体展示鲁氏菌病疫情图片或视频, 教师充当畜牧场工作人员介绍疫情发生情况, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟实境 中, 完成工作岗位体验和掌握布鲁氏菌病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生将相关知识记在笔记本上 再次播放布鲁氏菌病症状和病变的图片, 详细讲解布鲁氏菌病临诊 检疫方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 流行特点多种动物和人对布鲁氏菌易感 羊 牛 猪的易感性最强 母畜比公畜, 成年畜比幼年畜发病多 在母畜中, 第一次妊娠母畜发病较多 人主要通过皮肤 黏膜 消化道和呼吸道感染, 尤其以感染羊种布鲁氏菌 牛种布鲁氏菌最为严重 带菌动物, 尤其是病畜的流产胎儿 胎衣是主要传染源 2. 临床症状最显著症状是怀孕母畜发生流产, 流产后可能发生胎衣滞留和子宫内膜炎, 从阴道流出污秽不洁 恶臭的分泌物 新发病的畜群流产较多, 老疫区畜群发生流产的较少, 但发生子宫内膜炎 乳房炎 关节炎 胎衣滞留 久配不孕的较多 公畜往往发生睾丸炎 附睾炎或关节炎 3. 病理变化胎衣呈黄色胶冻样浸润, 生殖器官 脾 淋巴结 肝 肾炎性坏死, 有的可见关节炎 ( 二 ) 实验室检疫 组织学生在校外实训基地按照国标要求进行羊布鲁菌病的普查, 本次课通过多媒体展示检测步骤和检测结果使学生大体了解这部分内容 1. 病原学检查采集流产胎衣 绒毛膜水肿液 肝 脾 淋巴结 胎儿胃内容物等组织, 制成抹片, 用柯兹罗夫斯基染色法染色镜检, 布鲁氏菌为红色球杆状菌, 而其它菌为蓝色 有条件时, 可做细菌分离培养和生化鉴定 2. 免疫学检查牛主要用平板凝集试验和试管凝集试验, 对无病乳牛群可用全乳环状沉淀试验进行布病监测 山羊 绵羊群检疫用变态反应方法比较合适 猪布鲁氏菌病常用血清凝集试验, 也有的用补体结合试验和变态反应 此外, 可用间接血凝试验 抗球蛋白试验 酶联免疫吸附试验 PCR 和基因探针试验等方法进行检疫 ( 三 ) 检疫后处理 情景设计 : 通过多媒体展示某些养殖场违规处理布鲁氏菌病阳性动物的案例和我国布鲁氏菌病流行现 状, 学生分组讨论此种处理方法的危害和我国布鲁氏菌病发病率高的原因, 结合二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师根据布鲁氏菌病特征归纳总结其检疫后处理的方法

6 1. 病畜和阳性畜全部扑杀 对病畜和阳性畜污染的场所 用具 物品严格进行消毒 宰后检出的布病病畜胴体 内脏和副产品, 一律销毁处理 2. 从非疫区引种, 引进的动物应隔离检疫 30d 以上, 经二次血清学检查为阴性者方可混群 奶牛场每年进行两次定期检疫, 发现可疑者,1 个月内应重复检查, 检出阳性牛扑杀 做好流产胎儿 污染物 粪便及环境的消毒工作 五 炭疽的检疫 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示炭疽疫情图片或视频, 教师充当畜牧场工作人员介绍疫情发生情况, 学生 分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟实境 中, 完成工作岗位体验和掌握该病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生于教材上标记, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片, 详细讲 解该病临诊检疫方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 流行特点各种家畜均可感染 草食动物中以牛 羊 马最易感, 人也易感, 猪抵抗力较强, 多为慢性经过 该病多为散发, 有时呈地方流行性, 多发生于夏季 炭疽芽胞对环境具有很强的抵抗力, 患病动物和因炭疽而死亡的动物尸体污染的土壤 水源及场地可形成持久的疫源地 本病主要经消化道 呼吸道和皮肤感染 2. 临床症状 (1) 牛体温升高常达 41 以上, 可视黏膜呈暗紫色, 心动过速 呼吸困难 呈慢性经过的病牛, 在颈 胸前 肩胛 腹下或外阴部常见水肿 ; 皮肤病灶温度增高, 坚硬, 有压痛, 也可发生坏死, 有时形成溃疡 ; 颈部水肿常与咽炎和喉头水肿相伴发生, 致使呼吸困难加重 急性病例一般经 24~36d 后死亡, 亚急性病例一般经 2~5d 后死亡 (2) 羊多表现为最急性 ( 猝死 ) 病症, 摇摆 磨牙 抽搐, 挣扎 突然倒毙, 有的可见从天然孔流出带气泡的黑红色血液 病程稍长者也只持续数小时后死亡 (3) 猪多为局限性变化, 呈慢性经过, 临床症状不明显, 常在宰后见病变 3. 病理变化死亡患病动物可视黏膜发绀 出血 血液呈暗紫红色, 凝固不良, 粘稠似煤焦油状 皮下 肌间 咽喉等部位有浆液性渗出及出血 淋巴结肿大 充血, 切面潮红 脾高度肿胀, 达正常数倍, 脾髓呈黑紫色 在宰后检疫中, 可见慢性局限性炭疽 猪以咽喉型炭疽最多见, 颌下淋巴结肿大 出血, 刀切时感到硬而脆, 切面呈砖红色, 有时可见大小不等的灰白 灰黄色或污黑色坏死灶 ; 淋巴结周围组织呈不同程度出血性胶样浸润 ; 扁桃体充血 出血 水肿或坏死 其次是肠型炭疽, 多发生于小肠, 以肿大 出血和坏死的淋巴小结为中心, 形成局灶性 出血性 坏死性病变, 于肠壁上出现坏死溃疡 ; 肠系膜淋巴结肿大呈出血性胶样浸润 ( 二 ) 实验室检疫 着重强调疑似炭疽病例条件不允许的情况下严禁解剖 图片或视频的形式展示检疫程序和结果

7 1. 病原学检查在防止病原扩散的条件下采取病料 生前可采耳静脉血 水肿液或血便, 死后可立即采取耳尖血和四肢末端血涂片 宰后检疫时, 取淋巴结涂片 用瑞氏染色法或荚膜染色法染色, 显微镜检查可发现单个或 1~4 个短链排列的竹节状的带有荚膜的粗大杆菌 2. 血清学检查常用环状沉淀试验, 将病料浸出液与炭疽沉淀素血清做环状沉淀试验, 接触面出现清晰的白色沉淀环者为阳性 此外, 还可用琼脂扩散试验 荧光抗体染色试验 ( 三 ) 检疫后处理情景设计 : 通过多媒体展示某些养殖场违规处理炭疽病死牛的案例及造成的严重后果, 学生反思 讨论, 结合二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师根据该病特征归纳总结其检疫后处理的方法 1. 发现炭疽时, 疑似炭疽尸体严禁剖检, 迅速上报疫情, 立即隔离封锁 呈零星散发时, 患病动物作无血扑杀处理, 对同群动物立即进行强制免疫接种, 并隔离观察 20d; 呈暴发流行时, 患病动物和同群动物全部进行无血扑杀处理 对病死动物及排泄物 可能被污染饲料 污水等进行无害化处理 ; 对可能被污染的物品 交通工具 用具 动物舍进行严格彻底消毒 疫区 受威胁区所有易感动物进行紧急免疫接种 2. 最后 1 头患病动物死亡或患病动物和同群动物扑杀处理后 20d 内不再出现新的病例, 进行终末消毒后, 经动物防疫监督机构审验合格后, 方能解除封锁 3. 宰后检疫发现炭疽病畜, 立即停止生产, 被污染的场地 用具用 10% 氢氧化钠溶液或 20% 漂白粉溶液消毒 患畜的胴体 内脏 皮毛及血液 ( 包括被污染的血 ), 分别装入不漏水的容器, 加盖后于当天运至指定地点销毁 凡被污染或疑为污染的肉尸 内脏等, 在 6h 内高温处理后方可利用, 否则销毁 血 骨和毛等只要有污染的可能, 均作工业用或销毁 对确未被污染的同批产品及其副产品可按正常产品出厂 六 旋毛虫病的检疫 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示旋毛虫病图片或视频, 教师充当屠宰场 畜牧场工作人员介绍疫情发生情 况, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟 实境 中, 完成工作岗位体验和掌握该病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生于教材上标记, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片, 详细讲 解该病临诊检疫方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 流行特点几乎所有哺乳动物甚至某些昆虫都能感染, 鼠类感染率最高, 存在着广大自然疫源 在家畜中, 猪患病率最高, 人多因食用未煮熟的含旋毛虫包囊的动物肉及肉制品而感染, 呈地方流行性 2. 临床症状动物感染后均有一定耐受性, 往往无明显症状 感染严重者, 表现肌肉痉挛, 麻痹, 运动障碍, 咀嚼吞咽困难等症状 ; 有的呈急性卡他性肠炎 3. 病理变化肠黏膜增厚水肿, 有黏液性炎症和出血斑 肌肉间结缔组织增生, 肌纤维

8 萎缩 横纹消失 ( 二 ) 实验室检疫 在实训室用肌肉压片法进行旋毛虫病检疫, 图片形式展示检疫方法和结果 目前所用的方法有显微镜检查法 集样消化法 血清学方法 变态反应 旋毛虫荧光染色 激光扫描压缩标本等 但在宰后检查中, 仍多利用眼观结合显微镜检查法, 大批量的检疫还可以用集样消化法进行 ( 三 ) 检疫后处理情景设计 : 以多媒体形式展示 2009 年云南云南兰坪群体发生旋毛虫病, 学生讨论, 教师根据该病特征归纳总结其检疫后处理的方法 学生反思 讨论, 结合该病的发病特点和二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师归纳总结 1. 发现有旋毛虫包囊和钙化虫体者, 全尸作工业用 干性化制或销毁 2. 犬 猫及其他肉食动物, 喂生肉时必须先作旋毛虫检查 ; 养猪实行圈养饲喂 ; 肉类加工厂废弃物或厨房泔水, 必须做无害化处理 ; 加强饲养场的灭鼠工作, 改善环境卫生 七 囊尾蚴病的检疫 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示囊尾蚴病图片或视频, 教师充当屠宰场 畜牧场工作人员介绍疫情发生情 况, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟 实境 中, 完成工作岗位体验和掌握该病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生于教材上标记, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片, 详细讲 解该病临诊检疫方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 猪囊尾蚴病是由寄生于人体小肠内的有钩绦虫的幼虫在猪体内寄生所引起的疾病 猪囊尾蚴主要寄生于猪的肌肉组织, 尤其活动性较强的咬肌 心肌 舌肌 腰肌 膈肌等处 严重感染者还可寄生于肝 肺 肾 眼球和脑等器官 (1) 流行特点常发生于存在有绦虫病人的地区, 卫生条件差和猪散养的地区常呈地方流行, 猪带绦虫寄生于人的小肠中, 孕卵节片不断脱落, 卵随粪排出, 猪吃感染性虫卵发生感染 (2) 临床症状猪感染少量的猪囊尾蚴时, 无明显的症状 其致病作用很大程度上取决于寄生部位 寄生在脑时, 可能引起失明等神经机能障碍 ; 肌肉中寄生数量较多时, 常引起寄生部位的肌肉发生短时间的疼痛, 表现跛行和食欲不振等 寄生于眼结膜下组织或舌部表层时, 可见寄生处呈现豆状肿胀 (3) 病理变化宰后检疫时见肩胛肌 咬肌 颈部肌肉 舌肌等部位肌肉部有米粒大至黄豆大灰白色半透明包囊, 内含囊液, 囊壁内侧面有一个乳白色的结节, 为内翻的头节 严重感染时, 全身肌肉 内脏 脑和脂肪内均能发现 2. 牛囊尾蚴病牛囊尾蚴病是由寄生于人体小肠内的无钩绦虫的幼虫在牛体内寄生所

9 引起的疾病 牛囊尾蚴主要寄生在牛的咬肌 舌肌 颈部肌肉 肋间肌 心肌和膈肌等部位 ( 二 ) 实验室检疫 图片形式展示检疫方法和结果 1. 病原学检查生前检查眼睑和舌部, 触摸到舌部有稍硬的豆状结节时, 可作为生前诊断的依据 宰后检验咬肌 腰肌 舌肌 膈肌 心肌等, 看是否有乳白色椭圆形或圆形猪囊虫 镜检时可见猪囊虫头节上有 4 个吸盘, 头节顶部有两排小钩 钙化后的囊虫, 包囊中呈现大小不同的黄白色颗粒 我国规定牛囊尾蚴主要检验部位为咬肌 舌肌 深腰肌和膈肌 与猪囊尾蚴的外形相似, 囊泡为白色的椭圆形, 囊内充满液体, 囊壁上也附着有乳白色的头节, 头节上有 4 个吸盘, 但无顶突和小钩, 这是与猪囊尾蚴的区别 2. 免疫学检查方法有变态反应 环状沉淀试验 补体结合反应试验 间接血凝试验 免疫酶联吸附试验等 ( 三 ) 检疫后处理情景设计 : 以多媒体形式展示建国初和目前发生人感染囊尾蚴的病例数, 学生根据统计的数据分析讨论, 结合该病的发病特点和二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师归纳总结 1. 整个胴体化制处理 2. 加强公共卫生, 做好粪便的处理工作, 做到人有厕所 猪有圈 八 棘球蚴病的检疫 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体展示棘球蚴病图片或视频, 教师充当屠宰场 畜牧场工作人员介绍疫情发生情 况, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟 实境 中, 完成工作岗位体验和掌握该病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生于教材上标记, 并于课后将相关知识记在笔记本上 再次播放该病症状和病变的图片, 详细讲 解该病临诊检疫方法, 学生对应笔记, 观看图片, 加深记忆 1. 流行特点家畜中受害较重的是牛 羊 猪, 特别是绵羊, 每年早春时节发病较多, 牧区发生较多 2. 临床症状绵羊发病死亡率较高, 表现为消瘦 被毛逆立 脱毛 咳嗽 倒地不起 牛常见消瘦 衰弱 呼吸困难或轻度咳嗽, 产奶量下降 猪感染棘球蚴后, 症状一般不明显, 一般在屠宰后发现 各种动物都可因囊泡破裂而产生严重的过敏反应, 突然死亡 3. 病理变化剖检可见肝 肺及其他脏器有棘球蚴包囊, 常为球形, 大小不等 囊壁厚, 囊内充满液体, 棘球蚴游离在囊液中, 或单个存在或成堆 ( 簇 ) 寄生 ( 二 ) 实验室检疫 图片形式展示检疫方法和结果

10 1. 变态反应检查取新鲜棘球蚴囊液, 无菌过滤, 在动物颈部皮内注射 0.1~0.2mL, 注射后 5~10min 内观察, 皮肤出现红肿, 直径 ~2cm,15~20min 后成暗红色者, 为阳性 ; 迟缓型在 24h 时内出现反应 ;24~28h 不出现反应者为阴性 2. 血清学检查间接血凝试验 (IHA) 和酶联免疫吸附试验 (ELISA) 具有较高的敏感性和特异性, 对动物和人的棘球蚴检出率较高 3. 超声波检查对人和动物也可用 X 线透视和超声波检查进行诊断 ( 三 ) 检疫后处理情景设计 : 以多媒体形式展示建国初和目前发生人感染棘球蚴病的病例数, 学生根据统计的数据分析讨论, 结合该病的发病特点和二类疫病的处理方法, 提出该病检疫后的处理, 教师归纳总结 1. 严重感染者, 整个胴体和内脏作工业用或销毁 病变轻微者, 剔除病变部分销毁, 其余部分高温处理后出场 2. 严格屠宰场地管理, 做好饲料 饮水及圈舍的清洁卫生工作, 防止被犬粪污染 九 弓形虫病 伪狂犬病 沙门氏菌病 钩端螺旋体病 巴氏杆菌病 大肠杆菌病 螨病的 检疫 了解这些病的检疫和处理方法 ( 一 ) 临诊检疫 情景设计 : 通过多媒体分别展示弓形虫病 伪狂犬病 沙门氏菌病 钩端螺旋体病 巴氏杆菌病 大肠杆菌病 螨病疫情图片或视频, 教师充当畜牧场 屠宰场工作人员介绍病情, 学生分组讨论后充当检疫员说出临诊检疫结果并列出检疫依据, 教师进行归纳总结 学生在 模拟实境 中, 完成工作岗位体验和了解这些病临诊检疫的方法 教师归纳总结后, 学生于教材上标记 再次再次播放该病症状和病变的图片, 讲解该病临诊检疫方法, 学生对应教材, 观看图片, 了解这些病的临诊检疫方法 ( 二 ) 实验室检疫 提问大肠杆菌 沙门氏菌病 巴氏杆菌病的细菌学检查的方法, 多媒体展示检测步骤和检测结果使学生大体了解, 其 他病用多媒体形式简单介绍试验方法和结果 ( 三 ) 检疫后处理 要求学生分组查找这些疫病检出后的处理方法, 并分组进行汇报 实训一牛结核病检疫 教学情境 : 为学院实训奶牛场进行奶牛结核病检疫 实训前播放结核病检疫过程的视频, 学生记录检疫的大体流程 教学目标 1. 学会变态反应法检疫牛结核病的操作要领

11 2. 会正确判定变态反应试验结果 实训材料及场地 每班划分 6 个小组, 每个小组成员参考教材或视频准备各小组的实训材料, 准备完毕后教师检查 实训场地 : 学院实训奶牛场 防疫与检疫实训室实训材料 : 每小组鼻钳 1 个 毛剪 1 把 镊子 1 个 游标卡尺 1 把 皮内注射器和针头 1 套 75% 酒精棉 1 瓶 纱布 1 小卷 牛型提纯结核菌素 1 支 记录表 1 张 来苏儿 1 瓶, 每人线手套 1 副 工作服 1 件 口罩 1 个 胶靴 1 双等 实训过程 本次实训可分 3 次完成, 第 1 次进行临诊检疫 样品采集和结核菌素的注射, 第 2 次于 72 后进行结果判定, 第 3 次 于实训进行样品的触片镜检 细菌分离鉴定 实训前教师再次讲解牛的保定方法, 着重强调人身安全知识和生物安全知识 1. 临诊检疫 先进行大群检查, 然后每人固定一头牛并做好标记, 小组成员协同保定, 再进行个体检查, 将结果填写在临诊检疫表上 (1) 流行病学调查询问牛的引进及饲养管理情况, 发病数量及病程长短等 (2) 临诊症状参照牛结核病的临床诊断要点仔细观察, 有无逐渐消瘦 咳嗽 呼吸困难 鼻腔分泌物增多 体表淋巴结的肿大, 检查乳房是否对称, 乳房淋巴结是否肿大, 特别要注意营养状况 呼吸道及消化道症状 (3) 病理变化对疑为结核病牛尸体解剖时, 观察特征性的病理变化, 注意观察肺部 胸腹膜上有无结核结节 2. 变态反应检疫用牛型提纯结核菌素 (PPD) 进行变态反应试验, 出生后 20d 的牛即可用本试验进行检疫 教师先进行示教, 然后分组操作 (1) 注射部位将牛编号后在颈侧中部上 1/3 处 (3 个月以内的犊牛, 也可在肩胛部 ), 局部剪毛 ( 或提前一天剃毛 ), 直径约 10cm, 用卡尺测量术部中央皮皱厚度, 作好记录 如术部有变化时, 应另选部位或在对侧进行 (2) 注射方法以 75% 酒精棉球消毒术部, 不论大小牛, 一律皮内注射 IU, 即将牛型提纯结核菌素 (PPD) 稀释成每毫升 IU 后, 皮内注射 0.1 ml, 注射后局部应出现小丘 结核菌素稀释后应当天用完 如注射有疑问时, 应另选 15cm 以外的部位或对侧重做 (3) 观察反应皮内注射后经 72h 判定, 仔细观察局部有无热痛 肿胀等炎性反应, 并以卡尺测量皮皱厚度, 作好详细记录 ( 表 5-1) 对疑似反应牛应在另一侧以同一批菌素同一剂量进行第二回皮内注射, 再经 72h 观察反应 如有可能, 对阴性和疑似反应牛, 于注射后 96h 和 120h 再分别观察一次, 以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应

12 各组操作完毕后, 教师进行考核 表 5-1 牛结核病检疫记录表 单位 : 年月日检疫员 : 受检头数阳性头数疑似头数阴性头数 编号 牛 号 年 龄 次数 提纯结核菌素皮内注射反应注射原皮厚部位时间 (mm) 注射后皮厚 (mm) 72h 96h 120h 判定 第次第次第次第次第次 一回二回一回二回一回二回一回二回一回二回 (4) 结果判定阳性反应 : 局部疼痛 发热 水肿等, 炎性反应明显, 皮厚差等于或大于 4mm( 对进口牛的检疫, 皮厚差大于 2mm) 者, 判为阳性, 记为 (+) 疑似反应 : 局部炎性反应不明显, 皮厚差在 2.1~3.9mm 间, 其记录符号为 (±) 阴性反应 : 无炎性反应, 皮厚差在 2mm 以下, 其记录符号为 (-) 凡判定为疑似反应的牛只, 于第一次检疫 30d 后进行复检, 其结果仍为可疑反应时, 经 30~45d 后再复检, 如仍为疑似反应, 应判为阳性 3. 病原学检疫 (1) 病料处理根据感染部位的不同采用不同的标本, 如痰 尿 脑脊液及腹水 乳及其他分泌物等 为了排除分支杆菌以外的微生物, 组织样品制成匀浆后, 取 1 份匀浆加 2 份草酸或 5%NaOH 溶液混合, 室温放置 5~10min, 上清液小心倒入装有小玻璃珠带螺帽的小瓶或小管内,37 放置 15min,3000~4000r/min 离心 10min, 弃去上清液, 用无菌生理盐水洗涤沉淀, 并再离心 沉淀物用于镜检或分离培养 (2) 分离培养将沉淀物接种于潘氏斜面琼脂和甘油肉汤, 培养管加橡皮塞, 置 37 下培养 2~4 周, 每周检查细菌生长情况, 并在无菌环境中换气 2~3min 牛结核分支杆菌呈淡黄微白色 湿润 粘稠 微粗糙菌落 取典型菌落涂片 染色 镜检可确诊 结核杆菌革兰氏染色阳性 ( 菌体呈蓝紫色 ), 抗酸染色菌体呈红色 分离培养在防疫与检疫实训室完成, 主要 是利用课余时间反复练习抗酸染色和分离培养的操作 注意事项

13 1. 利用变态反应检疫牛结核病时, 注射方法必须正确, 剂量准确 2. 游标卡尺测量皮肤厚度时, 松紧度应适宜 结果观察时, 不要更换检疫人员, 减少人为误差 考核 考核项目考核内容考核标准参考分数 实训态度服从安排, 积极主动, 认真负责 10 协作意识具备团队协作精神, 积极与小组成员配合, 共同完成任务 10 过程考核 安全意识注重生物安全, 防止疫情扩散, 做好个人防护 10 注射部位选择部位选择正确 10 游标卡尺使用会用卡尺测皮皱厚度, 并正确读数 10 注射方法注射方法正确, 剂量准确 10 临诊检疫正确说出牛结核病的临床表现及剖检病变特点 10 结果考核 变态反应结果判定能正确计算皮厚差并判定结果 20 实训报告目标明确 内容与过程全面 结果判定正确 10 合计 100 实训二猪旋毛虫病检疫 教学情境 : 联系市场上待屠宰的猪, 进行猪旋毛虫检疫 教学目标 1. 学会肌肉压片镜检法的操作要领 2. 会在显微镜下识别旋毛虫 实训材料 弓形剪刀 镊子 旋毛虫压片器或载玻片 显微镜 1% 稀盐酸 10% 稀盐酸 50% 甘油溶液 研磨器 消化液 ( 胃蛋白酶 ) 天平 贝尔曼氏幼虫分离装置 污物桶等 方法步骤 1. 临诊检疫 先查找资料, 检查待屠宰猪有无猪旋毛虫的临床表现 感染旋毛虫病的猪一般有一定的耐受性, 虫体对猪的影响较小, 主要病变在肌肉 感染严重的猪出现营养不良 肌肉痉挛 运动障碍 发热 吞咽 咀嚼困难及发痒 2. 肌肉压片检查法 教师示教, 学生分组操作 (1) 采样从胴体左右膈肌脚各采取肌肉一块, 每块约重 15~30g, 编上与胴体相同的号码 (2) 目检先将检样的肌膜撕去, 纵向拉平检样, 在充足的自然光下, 不断晃动, 观

14 察肉表面有无针尖大半透明稍隆起的乳白色或灰白色的小点, 然后再撕开或剪开检样深部进行观察 发现可疑便剪下 制成压片镜检 (3) 制片取肉样, 用剪刀顺着肌纤维的方向, 分别在肉样两面的不同部位剪取 12 个麦粒大小的肉粒 ( 其中目检发现的小白点, 必须剪下 ), 两块肉样共剪取 24 粒, 依次将肉粒贴附于夹压玻片上, 排列成两排, 每排放置 12 粒 如果用载玻片, 则每排放置 6 粒, 共用两张玻片 然后取另一玻片覆盖于肉粒上, 旋动夹压片的螺丝或用力压迫载玻片, 将肉粒压成厚度均匀又很薄的薄片, 并使其固定后镜检 (4) 镜检将制好的压片置于 50~70 倍的低倍显微镜或投影仪下, 进行仔细观察 从压片一端的第一个肉片外缘开始, 顺着肌纤维检查, 直到压片另一端的最后一个肉片的外缘为止, 逐个检查每一个视野, 不得漏检 视野中的肌纤维呈淡黄蔷薇色 (5) 判定 多媒体展示旋毛虫图片或观察阳性标本片 1 未形成包囊的旋毛虫幼虫 在肌纤维之间, 虫体呈直杆状或微蜷曲状, 但有时因压片时压力过大或压得太紧, 使虫体被挤出在肌浆中 2 形成包囊后的旋毛虫幼虫 在淡黄蔷薇色的背景上, 可看到发亮透明的圆形或椭圆形的包囊, 囊中央是蜷曲的旋毛虫幼虫, 通常为一条, 重度感染时, 可见到双虫体包囊和多虫体包囊 猪旋毛虫的包囊呈椭圆形, 而狗旋毛虫的包囊常呈圆形 有时因压片时使包囊破裂, 幼虫游离于包囊外周 3 钙化的旋毛虫幼虫 在包囊内可见数量不等 颜色浓淡不均的黑色钙化物 通常虫体的钙化先始于局部, 逐渐波及全虫, 最后四周包囊开始钙化 钙化后的包囊仅见虫体轮廓和包囊, 连同包囊钙化了的虫体在镜下为一黑色团块 为了便于鉴别, 此时可在压片上滴加 10% 的盐酸溶液数滴, 静置 15~30min, 待钙盐溶解后, 便可见到完整的幼虫虫体, 此系包囊钙化 ; 或可见到断裂成段 模糊不清的虫体, 此系幼虫本身钙化 前者钙化是从包囊腔两端开始, 逐渐向中间扩展 ; 后者钙化是从虫体本身开始, 逐渐向包囊边缘扩展 4 机化的包囊幼虫 因虫体周围的结缔组织增生, 使包囊明显增厚, 压片镜检时呈较大的白点或云雾状, 此时在肉样中滴加适量 50% 甘油溶液, 数分钟后待检样透明清晰, 镜检可见虫体或崩解后虫体的片段 考核 考核项目考核内容考核标准参考分数实训态度服从安排, 积极主动, 认真负责 10 协作意识具备团队协作精神, 积极与小组成员配合, 共同完成任务 10 安全意识注重生物安全, 防止疫情扩散, 做好个人防护 10 过程考核 思考能力善于总结和分析制片过程中的问题并提出解决方法 10 采样采样部位准确, 样品大小恰当 10 目检操作方法正确 10 制片操作规范, 压片效果好 10

15 镜检正确按顺序用低倍镜镜检 10 结果考核 判定能正确识别旋毛虫 10 实训报告目标明确 内容与过程全面 有判定结果 10 合计 100 实训三布鲁菌病检疫 教学情境 : 为学院实训羊场进行布鲁菌病检疫 教学目标 1. 学会试管与平板凝集反应 全乳环状凝集试验的操作方法及判定标准 2. 会正确判定平板凝集反应 全乳环状凝集试验结果 3. 学会布鲁菌病病原学检查的程序和方法 实训材料 每班划分 6 个小组, 每个小组成员参考教材或视频准备各小组的实训材料, 准备完毕后教师检查 实训场地 : 学院实训羊场 防疫与检疫实训室实训材料 : 去羊场准备的实训材料 : 每小组无菌采血试管 4 支 采血针头及注射器 4 套 皮内注射器和注射针头 4 套, 布鲁菌水解素 1 支 5% 碘酊棉球 1 瓶 75% 酒精棉球 1 瓶 来苏儿 1 瓶 毛巾 4 条 脸盆 4 个 灭菌小试管及试管架 1 套 清洁灭菌吸管 (0.2mL 1mL 5mL 10mL) 各 4 支 玻璃笔 1 支, 工作服 手套 口罩没人 1 套 防疫与检疫实训室 : 每班布鲁菌虎红平板凝集抗原 1 瓶 布鲁菌标准阳性血清 1 瓶 布鲁菌标准阴性血清 1 瓶 布鲁菌试管凝集抗原 1 瓶 全乳环状试验抗原 1 瓶, 每组牙签 1 包 清洁玻璃板 (20cm 25cm)1 块 酒精灯 1 个 5%~10% 的浓盐水 1 瓶 玻璃笔 1 支 接种环 4 支 肝汤琼脂培养基 4 个 显微镜 1 台 常用染色液 1 组等 实训过程 本次实训可分 2 次完成, 第 1 次去实训羊场进行临诊检疫和采集集样品 ( 血清 乳汁 流产胎儿胎衣 绒毛膜水肿液 肝 脾 淋巴结或其胃内容物 羊水 胎盘的病变部位 ) 采集, 第 2 次于防疫与检疫实训室进行平板凝集 试管凝集和 分离培养 1. 临诊检疫 (1) 流行病学调查了解畜群的免疫接种 疫病的流行及饲养管理情况等 (2) 临诊症状根据布鲁菌病的症状进行仔细观察, 特别注意家畜生殖系统变化 最显著症状是怀孕母畜发生流产, 流产后可能发生胎衣滞留和子宫内膜炎, 从阴道流出污秽不洁 恶臭的分泌物 公畜往往发生睾丸炎 附睾炎或关节炎 (3) 病理变化对流产胎儿及胎衣仔细观察, 观察其特征性的病理变化, 胎儿皮下及肌肉间结缔组织出血性胶样浸润, 黏膜 浆膜有出血斑点, 胸腔 腹腔有微红色液体, 肝

16 脾 淋巴结不同程度的肿大等 2. 实验室检疫 播放试管凝集和平板凝集反应视频( 实验操作方法已在微生物课程学习 ), 学生分组操作, 着重强调阴阳性对照及意义 (1) 血清学试验无菌采血 7~10mL 于灭菌试管内, 摆成斜面让血液自然凝固, 经 10~12h, 待血清析出后, 分离血清装入灭菌小瓶内 有时血清析出量少, 或血清蓄积于血凝块之下, 可用灭菌细铁丝或接种环沿着试管壁穿刺, 使血凝块脱落管壁, 然后放于冷暗处, 使血清充分析出 注意 : 采集的血液贴上标签, 室温静置待凝固后送实验室, 运送 分离血清过程中避免剧烈晃动以避免溶血而影响检验结果 1 试管凝集试验 a. 操作方法 取康氏试管 8 支, 立于试管架上, 用玻璃笔在每支试管上编号, 按表 5-2 加样, 置 37 4~10h, 再置室温 18~24h, 观察记录结果 与此同时, 每次凝集试验应有阳性血清 ( ) 阴性血清(1.. 25) 对照和抗原对照, 标准阳性 阴性血清经 稀释后分别取 ml 与等量抗原混合, 抗原对照是抗原 ml 加盐水 ml 混合 表 5-2 布鲁菌试管凝集试验加样表单位 :ml 试管号 稀释倍数 1:12.5 1:25 1:50 1:100 1:200 阳性血 清对照 阴性血 清对照 抗原对 照 生理盐水 2.3 被检血清 0.2 弃 抗原 b. 记录反应结果 试管底部有明显伞状凝集物, 液体完全透明, 抗原全部凝集, 以 ++++ 表示 试管底部有明显伞状凝集物,75% 抗原被凝集, 以 +++ 表示 试管底部有倒伞状凝集物, 液体中度混浊,50% 抗原被凝集, 以 ++ 表示 25% 菌体凝集, 则试管底部有少量伞状沉淀, 液体透明不明显, 混浊, 以 + 表示 若抗原完全不凝集, 试管底部无伞状凝集物, 只有圆点状的沉淀物, 液体完全混浊, 以 - 表示 c. 判定标准 发生 ++ 凝集的最高血清稀释倍数为该血清的凝集价 羊 猪和犬血清凝集价 以上为阳性, 为可疑 ; 大家畜和人 l 以上为阳性, 为可疑 可疑反应者经 3~4 周重检, 牛 羊重检时仍为可疑, 判为阳性 猪 马重检时仍为可疑, 但该场中未出现阳性反应及无临诊症状的家畜, 判为阴性 2 虎红平板凝集试验 这种试验是快速玻片凝集反应 抗原是由布鲁菌加虎红制成 它可与试管凝集及补体结合反应效果相比, 且在犊牛菌苗接种后不久, 以此抗原做试验就呈现阴性反应, 对区别菌苗接种与动物感染有帮助

17 a. 材料准备 布鲁菌虎红平板试验抗原 b. 操作步骤 被检血清和布鲁菌虎红平板凝集抗原各 0.03mL 滴于玻璃板的方格内, 每份血清各用一支牙签混合均匀 在室温 (20 ) 下 4~10min 内记录反应结果 同时以阳 阴性血清作对照 c. 结果判定 在阳性血清及阴性血清试验结果正确的对照下, 被检血清出现任何程度的凝集现象均判为阳性, 完全不凝集的判为阴性, 无可疑反应 3 全乳环状试验 本法是用于检查无布鲁菌病奶牛群有无布鲁菌感染的适宜方法 全乳环状试验抗原用苏木紫染成蓝色, 或用四氮唑染成红色 a. 操作方法 取新鲜全脂乳 1mL 于小试管内, 加入抗原 1 滴约 0.05mL, 旋转试管数次, 混合均匀, 放于 37 温箱中 1h, 取出判定结果 b. 判定标准 阳性反应 (+): 上层乳脂环着色明显 ( 蓝或红 ), 乳脂层下的乳柱为白色或着色轻微 阴性反应 (-): 乳脂层白色或轻微着色, 乳柱显著着色 可疑反应 (±): 乳脂环与乳柱的颜色相似 分别对比 3 种检测方法的结果, 分析各种方法的优缺点 (2) 病原检查 强调生物安全知识; 本次试验采集的样品来自健康羊群, 以假设样品中含有布鲁氏菌来学习布鲁氏菌的分离培养和镜检, 操作过程穿防护服 带手套 口罩等 1 细菌培养 取流产胎儿胎衣 绒毛膜水肿液 肝 脾 淋巴结或其胃内容物 羊水 胎盘的病变部位, 无菌操作, 用接种棒蘸取病料, 在血清肝汤琼脂培养基上划线,37 温箱内培养 2~3d, 取出观察结果, 如平板上有湿润 闪光 无色 圆形 隆起 边缘整齐的小菌落, 则为布鲁菌的可疑菌落 2 镜检 取培养基的典型菌落涂片, 用革兰氏法染色后镜检 : 布鲁菌呈单个散在, 少数呈短链, 无芽孢 无荚膜的短小杆菌, 革兰氏阴性 ; 用柯兹罗夫斯基染色法染色后镜检, 布鲁菌为红色球杆状小杆菌, 而其他菌为蓝色 注意事项 1. 采血针头 试管使用前必须经过灭菌 ; 每头被检家畜用一个针头, 采血后置于消毒液中 2. 采血时务必使血液沿管壁流入, 不要出现气泡 3. 采得的血清, 必须新鲜, 无溶血和腐败, 若不能尽早检验, 应在血清中加入防腐剂 4. 每份被检血清必须注明编号 5. 检查羊血清时, 用含有 % 石炭酸的 10% 盐水代替生理盐水稀释抗原和血清 6. 为了结果的准确判定, 每次检疫必须作对照实验 7. 大群检疫时, 为节约时间, 大家畜作 和 , 小家畜作 和 两个稀释倍数 考核

18 考核项目考核内容考核标准参考分数 实训态度服从安排, 积极主动, 认真负责 10 协作意识具备团队协作精神, 积极与小组成员配合, 共同完成任务 10 过程考核 安全意识注重生物安全, 防止疫情扩散, 做好个人防护 10 思考能力善于总结和分析操作过程中的问题并提出解决方法 10 虎红平板凝 集试验 操作方法正确 20 临诊检疫能根据流行病学特点 症状和病变诊断布鲁菌病 10 结果考核 虎红凝集试 验结果 会正确判定阳性结果 20 实训报告目标明确 内容全面 结果判定正确 10 合计 100 作业布置 1. 检疫出口蹄疫时须采取哪些防疫措施? 2. 检疫出炭疽病时应如何处理? 参考资料 1. 刘秀梵 兽医流行病学 [M]. 第三版. 北京 : 中国农业出版社. 2. 陈溥言 家畜传染病学 [M]. 第五版. 北京 : 中国农业出版社. 3. 费恩阁, 李德昌, 丁壮 动物疫病学 [M]. 北京 : 中国农业出版社. 4. 童光志 动物传染病学 [M]. 北京 : 中国农业出版社. 5. 宁宜宝 兽用疫苗学 [M]. 北京 : 中国农业出版社. 6. 汪明 兽医寄生虫学 [M]. 第三版. 北京 : 中国农业出版社. 7. 傅先强, 刘占民, 等 养禽场禽病检测手册 [M]. 北京 : 中国农业大学出版社. 8. 王天有, 等 猪传染病现代诊断与防治技术 [M]. 北京 : 中国农业科学技术出版社. 9. 胡新岗, 桂文龙 动物防疫技术 [M]. 北京 : 中国农业出版社. 10. 陈继明 重大动物疫病监测指南 [M]. 北京 : 中国农业科学技术出版社

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