葛花亚慢性毒性研究陈冠敏等毒副作用为更好地开发利用葛花提供科学依据( ( 天时采尾血测血常规白细胞分类血小板积压及生化 (材料与方法指标谷丙转氨酶谷草转氨酶尿素肌酐总胆固 0(材料醇甘油三酯血糖总蛋白白蛋白喂养第天 00(实验动物及饲养禁食过

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阴戌柏
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1 中国食品卫生杂志 IDI ( 年第卷第期研究报告葛花亚慢性毒性研究陈冠敏黄宗锈林健黄佳宁关则婷郑丽红卢叶枫福建省疾病预防控制中心福建省人兽共患病重点实验室福建福州( 广东健生堂保健品有限公司广东广州( 福建中医药大学药学院福建福州( 摘(要目的(了解葛花亚慢性毒性为更好地开发利用葛花提供科学依据方法 ( 依据 + 食品安全性毒理学评价程序和方法. 进行试验选取只清结级.R大鼠按体质量分成组给予剂量分别为 0 ^ j 以葛花计每组只雌雄各半受试组以葛花水及其醇提取物作为受试物每天按 0 ^ j 进行灌胃连续 W 第天采尾血进行血常规及生化指标检测第天采血测定血常规及生化指标取肝肾脾睾丸称重并对肝肾脾胃肠睾丸卵巢作病理学检查结果(各受试组大鼠体质量进食量食物利用率脏体比各项指标与对应指标比较差异无统计学意义 Jq0 试验中期及结束时个别受试组大鼠血常规血生化指标与对应指标比较差异有统计学意义 Jp0 但均在本实验室正常值范围内没有生物学意义 ^ j 范围内对清洁级组织病理学观察显示个别动物出现轻度的病理改变结论 ( 葛花剂量在 0 b.r大鼠生长发育未见不良影响及毒副作用关键词葛花血常规血生化脏体比毒性保健食品凉茶原料毒理学试验 8 8 中图分类号++((文献标志码7((文章编号 = 00 ) ( +) 9 >. +* +/* * ( +88 (+9*,, / *@ID>P B8 B 8 P -c DJ 8 B B >L7DH 8 B H@ID>- 8 = B -LO8 B _P9 B * B _ R * B BW ) B B _P9 B _P = P *= B 9). 9, *,( /= = PW[ B PQ = B K J =, >+)( 7 W B \ WP BW = W B W W B =.R [ BW BW B = P\ 0 ^ j K J W W B P P\ [ B Q W \?B = = W \ Q W [ W \ \ Q W PB BW Q = 7 W \ Q W [ W BW [ P W Q W PB BW Q = ^ WB \ B BW [ [ = W \ = B B ^ WB \ B = B B BW [ BWP W?, ) )( /= P = [ W = BW B PW B[ = W B ^ W P B BW B8 Q W B B P\ B B BW B = B = B P\ Jq0 B = B BW = BW \ B =Q W PB BW Q = B B P\= W B Jp0 = [ =W B B B B BW = BQ B B B \ = = B = Q B W W B [ B P\ = P = = = \ = B B@+ ) * +(K J = B W B = [ = \ B PBW =W \P [ B B 08 ^ j, K J = Br P W Q P BW W B \ B B, ( B+. ) K J \ Q W PB Q W Q = B8 Q W = = W [ \ B ((葛花又称葛条花为豆科植物野葛或甘葛藤的干燥花具有解酒醒脾保肝护肝降低血糖和血脂等保健功能 )8 * 越来越受消费者的青睐( 葛花作为广东地区常用的护肝凉茶饮料原料但是其安全 8 收稿日期 8 基金项目国家科技部计划重点项目77 作者简介陈冠敏(女(主任技师 ( 研究方向为卫生毒理学及保健 ( = B a B 食品功能学(I8 问题鲜见文献报道( 本文旨在以规范的毒理学方法为试验手段对葛花进行亚慢性毒性研究从而了解葛花作为保健食品原料是否安全或是否存在

2 葛花亚慢性毒性研究陈冠敏等毒副作用为更好地开发利用葛花提供科学依据( ( 天时采尾血测血常规白细胞分类血小板积压及生化 (材料与方法指标谷丙转氨酶谷草转氨酶尿素肌酐总胆固 0(材料醇甘油三酯血糖总蛋白白蛋白喂养第天 00(实验动物及饲养禁食过夜动物称重采血作血常规及生化指标测定选用清洁级.R离乳雌雄大鼠各只购自上取出肝肾脾睾丸称重并对肝肾脾胃肠睾丸海斯莱克实验动物有限责任公司 ) 许可证号.*Ke 卵巢作病理学检查沪8 * 体质量 b 周龄饲养于 0(指标测定 )* ( 福建省疾病预防控制中心.)_级动物实验室 ) 许可血常规红细胞计数白细胞计数血红蛋白 * 温度 b g湿度证号.OKe 闽 8 白细胞分类血小板红细胞积压和生化指标谷 b( 饲料购自上海斯莱克实验动物有限责丙转氨酶谷草转氨酶尿素肌酐总胆固醇甘油任公司) 许可证号沪饲审* ( 三酯总蛋白白蛋白按 + 全国临床检验操作 00(主要仪器及试剂规程第版, *全自动生化分析仪日 = ) * 检测( 0(统计学分析 *I--8 RLD 血球分析仪美国雅培制药有限公试验数据以.).. 0 软件进行单因素方差分 *7./ 全自动染色机德国 - 全司 -Ic 析( 经方差齐性检验方差齐的试验数据采用最小自动密封脱水机石腊切片机显微镜( 显著差异法进行统计分析方差不齐的实验数据采谷丙转氨酶试剂盒 -?/ 7 IK) Q B法进行统计分析( 用 / 生化检测均在年月日之前完 IK) 成谷草转氨酶试剂盒 -?/ J (结果肌酐试剂盒 -?/ e IK) (对大鼠生长状态的影响总胆固醇试剂盒 -?/I IK) 试验期间受试组大鼠毛质白有光泽外观形甘油三酯试剂盒 -?/_ IK) 态与比较无明显差异无异常也无死亡( 血糖试剂盒 -?/ R IK) (对大鼠体质量的影响总蛋白试剂盒 -?/ _ IK) 试验结束时体质量及增重总进食量食物利白蛋白试剂盒 -?/ I IK) 用率与对照组相应项目差异无统计学意义 Jq 均购于北京利德曼生化试剂公司尿素 0 结果见表 ( 试剂盒 -?/IK) 购于浙江新昌康 (对大鼠血常规指标的影响 RLD 特生化试剂公司血常规采用雅培 *I--8 ^ j 剂量灌胃第天雄性 0 血球分析仪专用试剂盒溶血素 -?/IK) 组的红细胞计数白细胞计数指标下降 8 8 清洗液 -?/ IK)8 8 ^ j 剂量组嗜碱性粒细胞指标升高雌稀释液 -?/IK)8 8 鞘液 ^ j 剂量组血红蛋白升高 0 性 -?/IK)8 8 ( ^ j 剂量组的白细胞计数指标升高与 0(方法指标比较差异有统计学意义 Jp0 灌 0(试验 ^ j 剂量组血红蛋白胃第天雄性试验动物按体质量分成组每组只雌雄各淋巴细胞指标下降中性粒细胞升高相当于 0 半( 葛花每天最高用量为 0 雌性各剂量组嗜碱粒细胞指标下降与对照组比较 ^ j 以葛花计成人体质量以 ^计试验按差异有统计学意义 Jp0 ( 结果见表 ( 成人每日最高用量的倍设个剂量组 (对大鼠血生化指标的影响 ^ j 以葛花计分别为低即 0 ^ j 剂量组谷灌胃第天雄性 0 00 ^ 中高剂量组相当于浸膏粉 0 草转氨酶甘油三酯下降尿素白蛋白总胆固醇升 j 及溶剂蒸馏水 ( 试验时每日用蒸馏水 ^ j 剂量组谷草转氨酶和血糖高雌性 0 按个试验剂量配制个浓度以经口灌胃方式给 ^ j 剂量组升高白蛋白 ^ j( 试验期间动物单笼喂予灌胃量为 0 指标下降与比较差异有统计学意义养自由进食饮水每天观察活动状态记录饲料洒漏 Jp0 ( 灌胃第天雄性 ^ j 剂量组量每周称重记录进食量计算食物利用率( 试验第和 ^ j 剂量组指标升

OKe 闽 8 白细胞分类血小板红细胞积压和生化指标谷 b( 饲料购自上海斯莱克实验动物有限责丙转氨酶谷草转氨酶尿素肌酐总胆固醇甘油任公司) 许可证号沪饲审* ( 三酯总蛋白白蛋白按 + 全国临床检验操作 00(主要仪器及试剂规程第版, *全自动生化分析仪日本 @ = ) * 检测( 0(统计学分析

3 中国食品卫生杂志 IDI ( 年第卷第期 i 表 s (( / Q (+\ =[ = W B ^ BW W P B K J B 初始体质量禁食前体质量体质量增重总进食量总食物利用率 0 s 0 s 0 s 0 s0 0 s0 0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 ^ j 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 ^ j 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 初始体质量禁食前体质量体质量增重总进食量总食物利用率 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 ^ j 0 s0 s0 s s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 s0 s0 s0 0 s0 i 表 (第 s / Q (c \ B == BW BW K J B W o o s 0 s0 0 s0 s 0 s0 ^ j s 0 s0 ^ j s 0 s0 0 ^ j o 压积细胞细胞 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s s0 0 s s0 0 s0 s0 0 s0 0 s 0 s 0 s s0 s0 0 s0 0 s0 0 0 s 0 s0 0 s 0 s0 s0 0 s0 0 s0 o o o 压积细胞细胞 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 细胞淋巴细胞单核细胞 s0 0 s0 细胞淋巴细胞单核细胞 s 0 s0 0 ^ j s 0 s0 0 s ^ j s 0 s0 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s s0 0 s 0 s0 ^ j s 0 s0 s0 0 s0 0 s s0 0 s 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 注为与比较 Jp0 i 表 (第 s / Q (c \ B == BW BW _ )P B W o o o 压积细胞细胞细胞淋巴细胞单核细胞 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 ^ j s 0 s0 0 s 0 s s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s ^ j s 0 s0 0 s0 0 s0 ^ j s 0 s0 0 s 0 s0 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s s0 0 s0 s s0 0 s0 0 o o o 压积细胞细胞细胞淋巴细胞单核细胞 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 s0 s0 0 s 0 ^ j s 0 s0 0 s 0 s s0 0 s0 s0 s0 s0 0 s0 ^ j s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 s0 s0 0 s 0 s0 ^ j s 0 s0 0 s0 0 s 0 s s0 s0 s0 0 s0 0 s 注为与比较 Jp0 ^ j 剂量组的下降与高雌性 0 病理检查发现个别动物肝脏肾脏出现轻度病变( 结果见表 ( 比较差异有统计学意义Jp0 正常肝小叶结构明显肝细胞无坏死病变少数肝 (对大鼠脏体比的影响汇管区见淋巴细胞等炎细胞浸润无纤维组织增灌胃第天各剂量组大鼠肝体比肾体比睾生胆管未见异常部分雄性大鼠肝细胞出现肿胀体比脾体比与对照组比较差异均无统计学意义颗粒变性及肝细胞胞浆内出现脂肪空泡呈脂肪 Jq0 结果见表 ( 变其中只高剂量组只出现脂肪空泡 (对组织学病理检查结果的影响见图 b( 胃和十二指肠粘膜完整无明显出血灌胃第天各剂量组动物大体检查未见病变坏死糜烂溃疡及炎细胞浸润个别大鼠肠粘膜轻

$s0 ^ j 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 初始体质量禁食前体质量体质量增重总进食量总食物利用率 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 ^ j 0 s0 s0 s s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 s0 s0 s0 0 s0 i 表 (第天葛花对雄血液学指标的影响 @ s / Q (c \ B ==$

4 葛花亚慢性毒性研究陈冠敏等 ( i 表 (第 s ((( / Q (c \ B =Q W Q = BW BW K J B W 0 ^ j 谷丙转氨酶谷草转氨酶 L L 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s s0 0 s0 0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 白蛋白 0 s0 总蛋白 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s 0 s0 s0 0 s0 0 s0 s0 s0 0 白蛋白总蛋白 0 s0 0 s0 谷丙转氨酶谷草转氨酶 L L 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s 0 s0 s0 0 s0 0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 s0 0 0 s0 注为与比较 Jp0 i 表 (第 s / Q (c \ B =Q W Q = BW BW K J B W 0 ^ j 谷丙转氨酶谷草转氨酶 L L 白蛋白总蛋白 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s 0 s 0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 ^ j s0 0 s 0 s0 0 s 0 s0 s 0 s0 0 s0 0 s0 白蛋白总蛋白 0 s0 谷丙转氨酶谷草转氨酶 L L 0 s0 0 s 0 s0 s0 0 s0 0 s0 s0 s0 0 s 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 ^ j 0 s 0 s0 0 s0 0 s 0 s0 0 s 0 s0 0 s0 0 s0 0 ^ j 注为与比较 Jp0 i 表 s / Q (7Q P BW B [ = BW \P\ 肝体比脾体比 0 s0 0 s0 0 s0 0 s s 0 s0 0 s0 0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 ^ j 0 s 0 s0 0 s0 0 s s0 0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 肾体比肝脾肾宰杀体重肾体比肝体比脾体比 0 s0 0 s0 0 s0 0 s s0 s0 0 s0 0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s 0 s0 0 s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 肝脾肾宰杀体重度水肿无明显腺体增生萎缩改变( 肾皮髓质结构生精上皮细胞减少少数大鼠睾丸间质水肿( 卵巢清楚个别大鼠肾小管内可见管型及肾间质内可见发育正常可见各级卵泡和成熟黄体( 以上病理变少量炎细胞浸润少数大鼠肾小管上皮空泡变性及化均轻微并见于各组组间病理变化无明显差异( 肿胀其中雄性大鼠高剂量组只只出现肿胀见图 b( 脾白髓红髓结构清楚白髓红 (讨论髓无明显扩张或萎缩现象大多数大鼠脾脏内见色葛花主要分布于广东广西四川云南等地素沉着呈退行性改变见图 ( 睾丸中曲细精民间将它作为传统凉茶原料其主要化学成分有异管正常可见各级生精细胞及成熟精子个别睾丸黄酮类皂苷类化合物挥发油类甾醇类生物碱和

$^ j 0 s0 0 s0 0 s0 s0 0 s0 0 s0 0 s s0 ^ j 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 0 s0 s0 s0 0 0 s0 注为与比较 Jp0 i 表 (第天葛花对雄血生化指标的影响 @ s / Q (c \ B =Q W Q = BW BW K J B W 0 ^ j 谷丙转氨酶谷草转氨酶 L L 白蛋白总蛋白 0 s0 0 s0$

5 中国食品卫生杂志 IDI ( 图 _ P (- P B B = B 图 _ P (- P B B == = W 图 _ P () Q B = B 图 _ P () Q B == = W )* 年第卷第期图 _ P (+ B PQP P B B = B 图 _ P (+ B PQP P B B == = W 图 _ P (.[ B B PQP B = B 图 _ P (.[ B B PQP B == = ( 资料显示葛花其水提取物通过激活起的肝细胞损害有保护作用葛花的异黄酮及三萜乙醇脱氢酶活性有效降低血中乙醇浓度对酒精引皂苷能降低血中乙醇乙醛浓度降低谷草转氨酶氨基酸等

(高剂量组肝细胞颗粒变 @Io _ P () Q B == = W )* 年第卷第期图 (肾小管空泡变 @Io _ P (+ B PQP P B B = B 图 (高剂量组肾小管空泡变 @Io _ P (+ B PQP P B

6 葛花亚慢性毒性研究陈冠敏等 ( ^ j 剂量组雄雌内( 灌胃第天 0 大鼠出现异常但灌胃第天后其白细胞计数恢复正常白细胞计数的差异可能与试验中期眼球采血导致异常有关( 血生化检测结果显示灌胃第天 0 ^ j剂量组雄性大鼠尿素白蛋白总胆固醇及雄性大鼠的均高于灌胃第天 0 ^ j 剂量组雄性大鼠高于对照组但均在本实验室正常值范围内其余各剂量组大鼠的图血清谷丙转氨酶谷草转氨酶尿素肌酐总胆固 _ P (.\ B \ B B B = B 醇总蛋白白蛋白均与对照组无明显差 ^ j 异提示葛花在试验剂量为 0 b 范围内对动物生化指标未见不良影响( ^ j 剂组织病理学检查结果显示量组肝细胞出现肿胀颗粒变及肝细胞胞浆内出现呈脂肪变的脂肪空泡的雄性动物数多于对照组 ^ j剂量组肾脏出现肾小管上皮肿胀的雄性动物数略多于对照组这些脏器出现的病理改变均轻微并见于各组动物( ^ j 综上所述试验剂量在 0 b 图范围内葛花对清结级.R大鼠生长发育未见不良影 _ P (.\ B \ B B B == = W 响增加试验剂量是否对大鼠产生不良反应还有待谷丙转氨酶活性有效保护由 ** 所致小鼠肝损伤 ) 8 * 进一步研究( ( 目前作为解酒护肝保健食品的原料曾有不良反应报道 )8 * 服用葛花后会引起恶心呕吐心悸并伴有短暂的晕厥和抽搐口服葛花泡水会出现剧烈呕吐口唇麻木心悸全身出汗面色苍白等葛花中毒症状( 关则婷等 ) * 首次对葛花进行了急性毒性和遗传毒性的研究未发现急性及遗传毒性葛花的安全性得到政府及相关企业的重视( 参考文献 ) * (江苏新医学院中药大辞典下册 ),* 上海上海科技出版社 ) * (e *.= B.@@. PW PQ B = B B [ /, 7 B =WP B ) J* 7 = )= J + 8 ) * (苗彦妮钟赣生葛花对大鼠酒精性肝损伤的预防作用研究 )J * 科技导报 8 为了解长期服用葛花是否对机体产生潜在的毒 ) * (中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会> 副作用其实验剂量的设定非常重要关系到试验结 08 食品安全性毒理学评价程序和方法 ).* 果能否正确评价受试物是否存在毒性作用以及将动北京中国标准出版社 ) * (中华人民共和国卫生部医政司全国临床检验操作规程物毒性试验结果外推到人时能否确保对人群的安全 ),* 第版南京东南大学出版社 8 性鉴于动物人的种属以及个体之间的生物学差异 ) * (王胜鹏陈美婉王一涛葛花化学成分和药理活性研究进展通常以安全系数来界定要, + 全国中草药汇编, )* ) * ( 本试验依据+ 医林篡的记载葛花每天最高用按其摄入量倍设为最高试验剂量( 量定为 0 ^ j即试验结果显示试验剂量在 0 b )J * 中药药理与临床 8 ) * (芦洁李文哲倪亚明中药水提取物对乙醇脱氢酶活性影响 * 同济大学学报医学版的初步研究) J ) * (王东坡谭学林葛花解酲汤对酒精性肝病防治作用研究 )J * 贵阳中医学院学报在每日最高食用量的 b 倍范围内葛花对大鼠 ) * (石开玖葛花致晕厥例) J * 四川中医封三体质量及体质量增重进食量食物利用率及脏器系 ) * (范瑞琴冯艳赵昌林葛花中毒例报告 ) J * 湖北中医杂数等动物生长指标无明显影响( 本试验血常规检测结果显示个别剂量的血红蛋白白细胞计数中性粒细胞等指标与对照组比较有差异但在本实验室正常值范围 (((( 志 ) * (关则婷叶小忠梁群欢等葛花急性毒性及遗传毒性试验 * 中国医药导报 8 研究) J ) * (全国中草药汇编编写组全国中草药汇编 ),* 北京人民卫生出版社

$\ B \ B B B = B 醇总蛋白白蛋白均与对照组无明显差 ^ j 异提示葛花在试验剂量为 0 b 范围内对动物生化指标未见不良影响( ^ j 剂组织病理学检查结果显示量组肝细胞出现肿胀颗粒变及肝细胞胞浆内出现呈脂肪变的脂肪空泡的雄性动物数多于对照组 ^ j剂量组肾脏出$

生產準備您接近生產之注意事項 : 備妥住院用物, 勿遠行 ( 生產用物包 ) 最好有人在家陪伴, 或和陪產者保持連繫, 有任何狀況可立即趕到可做家事散步蹲下等運動, 以不太勞

生產準備您接近生產之注意事項 : 備妥住院用物, 勿遠行 ( 生產用物包 ) 最好有人在家陪伴, 或和陪產者保持連繫, 有任何狀況可立即趕到可做家事散步蹲下等運動, 以不太勞主題 : 安心準備生產用物及產後護理調養生產準備您接近生產之注意事項 : 備妥住院用物, 勿遠行 ( 生產用物包 ) 最好有人在家陪伴, 或和陪產者保持連繫, 有任何狀況可立即趕到可做家事散步蹲下等運動, 以不太勞累為原則需有充份