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- 錞植 袁
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1 Guihaia Feb. 2016ꎬ 36(2): http: / / journal.gxzw.gxib.cn http: / / DOI: / guihaia.gxzw 齐 小 琼 ꎬ 葛 亚 飞 ꎬ 李 大 卫. 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 分 子 克 隆 和 序 列 分 析 [J]. 广 西 植 物 ꎬ 2016ꎬ 36(2): QI XQꎬGE YFꎬLi DW. Molecular clone and sequence analysis of hemoglobin gene in Ceratopteris thalictroides[j]. Guihaiaꎬ 2016ꎬ 36(2): 摘 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 分 子 克 隆 和 序 列 分 析 齐 小 琼 1 ꎬ 葛 亚 飞 1 2 ꎬ 李 大 卫 ( 1. 湖 北 第 二 师 范 学 院 化 学 与 生 命 科 学 学 院 / 植 物 抗 癌 活 性 物 质 提 纯 与 应 用 湖 北 省 重 点 实 验 室 ꎬ 武 汉 ꎻ 2. 中 国 科 学 院 武 汉 植 物 园 植 物 种 质 创 新 与 特 色 农 业 重 点 实 验 室 ꎬ 武 汉 ) 要 : 植 物 血 红 蛋 白 (Hemoglobin) 是 一 类 由 珠 蛋 白 (Globin) 和 血 红 素 (Ferroheme) 组 成 的 结 合 蛋 白 ꎬ 在 植 物 中 广 泛 分 布 ꎬ 迄 今 已 在 苔 藓 植 物 裸 子 植 物 和 被 子 植 物 中 克 隆 到 血 红 蛋 白 基 因 序 列 ꎬ 但 在 蕨 类 植 物 中 相 关 研 究 还 未 见 报 道 ꎮ 该 研 究 采 用 热 不 对 称 交 错 PCR(TAIL PCR) 方 法 克 隆 了 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 全 长 序 列 ꎮ 该 基 因 的 序 列 总 长 为 949 bpꎬ 包 含 4 个 外 显 子 和 3 个 内 含 子 ꎬ 编 码 189 个 氨 基 酸 ꎮ 预 测 的 蛋 白 质 ( 命 名 为 CtHb) 的 分 子 量 为 kdaꎬ 等 电 点 (pi) 为 7.81ꎮ 三 维 结 构 模 拟 表 明 CtHb 具 有 植 物 血 红 蛋 白 典 型 的 三 级 结 构 : 即 含 有 A B C E F G 和 H 螺 旋 ꎬ 形 成 了 3 on 3 的 三 明 治 结 构 ꎮ 和 水 稻 血 红 蛋 白 的 三 级 结 构 相 比 ꎬCtHb 的 大 部 分 结 构 ( 包 括 具 有 远 端 和 近 端 组 氨 酸 定 位 的 E 螺 旋 和 F 螺 旋 的 位 置 等 ) 同 水 稻 的 结 构 极 为 相 似 ꎮ 两 者 的 不 同 之 处 主 要 表 现 在 :(1) CtHb 含 有 较 长 的 N 端 区 域 ꎻ(2) 两 者 CD loop 的 折 叠 方 式 不 同 ꎻ(3) 两 者 螺 旋 B 和 螺 旋 C 的 连 接 方 式 不 同 ꎬCtHb 是 通 过 卷 曲 连 接 的 ꎬ 而 水 稻 中 借 助 的 是 螺 旋 ꎮ 结 构 进 化 分 析 揭 示 了 植 物 血 红 蛋 白 从 非 共 生 到 共 生 进 化 过 程 中 的 一 些 关 键 改 变 ꎬ 这 些 改 变 可 能 有 助 于 非 共 生 血 红 蛋 白 向 共 生 血 红 蛋 白 结 构 的 转 变 ꎬ 特 别 是 有 助 于 豆 血 红 蛋 白 共 生 功 能 的 实 现 ꎮ 关 键 词 : 植 物 血 红 蛋 白 ꎬ 序 列 分 析 ꎬ 三 级 结 构 模 拟 ꎬ 结 构 进 化 ꎬ 水 蕨 中 图 分 类 号 : Q943.2ꎬ Q75 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : (2016) Molecular clone and sequence analysis of hemoglobin gene in Ceratopteris thalictroides QI Xiao Qiong 1 ꎬ GE Ya Fei 1 ꎬ LI Da Wei 2 ( 1. School of Chemistry and Life Sciencesꎬ Hubei University of Education/ Hubei Key Laboratory of Purification and Application of Plant Anticancer Active Ingredientsꎬ Wuhan ꎬ Chinaꎻ 2. Key Laboratory of Plant Germplasm Enhancement and Specialty Agricultureꎬ Wuhan Botanical Gardenꎬ Chinese Academy of Sciencesꎬ Wuhan ꎬ China ) Abstract: Plantsꎬ like humansꎬ contain hemoglobins ( Hbs)ꎬ which consist mostly of protein subunits ( the globin molecules) and heme groups. Phylogenomic analysis shows that Hbs are widely distributed in higher plantsꎬ and by com paring sequencesꎬ expression patternsꎬ and ligand binding propertiesꎬ it is evident that three distinct types of Hb exist in plants: symbioticꎬ non symbioticꎬ and truncated Hbs. In the recent yearsꎬ the genes of Hb have been cloned and identi fied in various species of bryophytesꎬ gymnosperms and angiospermsꎬ but no study has been reported in the ferns until 收 稿 日 期 : 修 回 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 ( ꎬC130405)ꎻ 湖 北 省 科 学 研 究 计 划 项 目 ( Q )ꎻ 湖 北 省 自 然 科 学 基 金 (2015CFB508)ꎻ 植 物 抗 癌 活 性 物 质 提 纯 与 应 用 湖 北 省 重 点 实 验 室 开 放 课 题 ( HLPAI ) [ Supported by the National Natural Science Foundation of China ( ꎬ C130405)ꎻ Scientific Research Project of Educational Commission of Hubei Province ( Q )ꎻ Natural Science Foundation of Hubei Province (2015CFB508)ꎻ Open Research Fund of Hubei Key Laboratory of Purification and Application of Plant Anticancer Active Ingredients(HLPAI )]ꎮ 作 者 简 介 : 齐 小 琼 (1981 )ꎬ 女 ꎬ 山 东 昌 邑 人 ꎬ 博 士 ꎬ 讲 师 ꎬ 主 要 从 事 进 化 遗 传 学 研 究 ꎬ(E mail) @ qq.comꎮ 通 讯 作 者 : 李 大 卫 ꎬ 博 士 ꎬ 副 研 究 员 ꎬ 主 要 从 事 果 树 遗 传 育 种 方 向 ꎬ( )david.lee1983@ 163.comꎮ
2 2 期 齐 小 琼 等 : 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 分 子 克 隆 和 序 列 分 析 217 now. In the present studyꎬ a full length Hb gene from Ceratopteris thalictroides was cloned by Thermal Asymmetric Inter laced (TAIL) PCRꎬ and sequence analysis was conducted by bioinformatics. The results revealed that the gene was 949 bp longꎬ containing 4 exons interrupted by 3 introns. The deduced protein (named CtHb) with 189 amino acid residues had a predicted isoelectric point (PI) of 7.81 and a calculated molecular mass kda. Modeling of the tertiary struc ture indicated that CtHb possesses the typical tertiary structure as plant Hbs (including helices Aꎬ Bꎬ Cꎬ Eꎬ Fꎬ G and Hꎬ these together forms a sandwich structure of 3 on 3). Comparative structure analysis of CtHb with rice native NsHb1 revealed that most of the CtHb structure was quite similar to that of rice NsHb1ꎬ including the positions of helices E and Fꎬ where distal and proximal His were locatedꎬ respectively. Howeverꎬ the structure differences were as follows: (1)The N terminus region was longer in CtHb than in rice NsHb1ꎻ (2)The CD loop folded differentlyꎻ (3) Helices to coils transition at the connect regions of helices B and C were different. Structural comparison revealed major evolutionary changes during plant Hbs evolution. Some of these structural changes would be helpful for the transition from nonsymbiot ic Hb to symbiotic Hb and for the specialization of a symbiotic function for symbiotic Hb. Key words: plant hemoglobinꎬ sequence analysisꎬ tertiary structure modelingꎬ structural evolutionꎬ Ceratopteris thalic troides 植 物 血 红 蛋 白 ( Hemoglobin) 是 一 类 由 珠 蛋 白 (Globin) 和 血 红 素 (Ferroheme) 组 成 的 结 合 蛋 白 ꎬ 广 泛 存 在 于 植 物 界 ꎬ 在 植 物 固 氮 及 抵 御 胁 迫 中 具 有 重 要 作 用 ꎮ 随 着 研 究 的 不 断 深 入 ꎬ 根 据 血 红 蛋 白 的 序 列 表 达 方 式 以 及 配 体 结 合 性 质 把 植 物 中 的 血 红 蛋 白 分 为 三 类 : 共 生 的 血 红 蛋 白 ( Symbiotic hemoglobinꎬshb) 非 共 生 的 血 红 蛋 白 ( Nonsymbiotic hemoglobinꎬnshb) 和 截 短 的 血 红 蛋 白 (Truncated he moglobinꎬthb)ꎮ 共 生 的 血 红 蛋 白 主 要 存 在 于 豆 类 和 一 些 非 豆 类 植 物 ( 主 要 是 放 线 菌 结 瘤 植 物 和 榆 科 植 物 某 些 属 ) 固 氮 根 瘤 菌 侵 染 的 根 瘤 细 胞 中 ꎮ 非 共 生 的 血 红 蛋 白 比 共 生 的 血 红 蛋 白 分 布 更 广 泛 ꎬ 不 仅 存 在 于 含 有 共 生 血 红 蛋 白 的 植 物 中 ꎬ 而 且 也 存 在 于 其 他 植 物 中 ꎻ 并 可 在 多 种 器 官 中 表 达 ꎬ 如 正 常 生 长 条 件 和 胁 迫 条 件 下 植 物 的 根 茎 叶 花 和 种 子 中 ( An derson et alꎬ1996ꎻ Lira Ruan et alꎬ2001ꎻ Ross et alꎬ 2004ꎻ Taylor et alꎬ1994ꎻ Trevaskis et alꎬ1997)ꎮ 截 短 的 血 红 蛋 白 首 先 在 原 核 生 物 原 生 动 物 和 真 核 藻 类 中 发 现 ꎬ 后 来 在 一 些 植 物 中 也 发 现 了 该 蛋 白 (Watts et alꎬ 2001)ꎮ 其 序 列 比 其 他 血 红 蛋 白 短 (Pesce et alꎬ2000)ꎬ 三 维 结 构 是 由 α 螺 旋 通 过 2 on 2 的 方 式 排 列 而 成 ꎬ 不 同 于 3 on 3 标 准 的 血 红 蛋 白 折 叠 ꎮ 通 过 系 统 发 育 分 析 表 明 ꎬ 植 物 中 的 thb 与 shb NsHb 形 成 了 不 同 的 谱 系 ( Lineages)ꎬtHb 是 通 过 基 因 水 平 转 移 从 细 菌 中 获 得 ( Vinogradov et alꎬ 2006)ꎬ 具 体 的 功 能 还 不 是 很 清 楚 ꎮ 血 红 蛋 白 基 因 在 植 物 中 普 遍 存 在 ꎬ 就 目 前 积 累 的 数 据 来 看 ꎬ 大 部 分 序 列 来 自 于 被 子 植 物 ꎬ 在 裸 子 植 物 和 苔 藓 植 物 中 有 几 条 代 表 序 列 ꎬ 但 蕨 类 和 石 松 类 植 物 中 尚 未 见 有 相 关 报 道 ꎬ 不 完 全 的 序 列 数 据 影 响 了 该 基 因 家 族 的 分 子 进 化 研 究 ꎮ 本 研 究 通 过 分 子 克 隆 手 段 获 得 蕨 类 植 物 水 蕨 的 血 红 蛋 白 基 因 的 完 整 编 码 区 序 列 ꎬ 并 进 行 生 物 信 息 学 分 析 三 级 结 构 模 拟 及 进 化 分 析 ꎬ 试 图 阐 明 该 基 因 在 序 列 组 成 基 因 结 构 三 级 结 构 等 方 面 的 特 征 ꎬ 并 推 断 其 可 能 的 功 能 ꎻ 通 过 与 其 他 分 类 群 中 的 血 红 蛋 白 基 因 进 行 比 较 分 析 ꎬ 探 讨 其 在 不 同 分 类 群 中 较 独 特 的 进 化 样 式 ꎮ 1 材 料 与 方 法 1.1 植 物 材 料 蕨 类 植 物 水 蕨 的 健 康 幼 嫩 叶 片 采 自 中 国 科 学 院 武 汉 植 物 园 ꎮ 1.2 主 要 分 子 生 物 学 试 剂 普 通 Taq DNA 聚 合 酶 高 保 真 LA Taq 酶 dntp 等 试 剂 购 自 TaKaRaꎻDNA 凝 胶 纯 化 回 收 试 剂 盒 购 于 Axygen 生 物 技 术 有 限 公 司 ꎮ 1.3 试 验 方 法 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 部 分 片 段 的 扩 增 分 别 用 拟 南 芥 ( Arabidopsis thaliana) AHB1 和 AHB2 基 因 ( 登 录 号 :AAD26949ꎬAAB82770) 的 蛋 白 序 列 作 为 查 询 序 列 ꎬ 通 过 对 数 据 库 中 已 报 道 的 蕨 类 序 列 进 行 相 似 性 搜 索 ꎬ 在 Ceratopteris richardii 中 得 到 一 条 同 目 标 序 列 相 似 性 较 高 的 EST 序 列 ( 登 录 号 : BQ087262)ꎮ 根 据 这 条 序 列 设 计 一 对 特 异 引 物 ꎬ 进 行 PCR 扩 增 ꎮ 引 物 序 列 为 F cera:5 TCACCGAGC ATCTGCGTCAAT 3 ꎻ R cera: 5 TCAATAGGCAGTA CCTGACGA 3 ꎮ
3 218 广 西 植 物 36 卷 PCR 反 应 体 系 为 20 μlꎬ 引 物 各 40 pmolꎬdntp 各 1 pmolꎬ10 PCR 反 应 缓 冲 液 2.0 μlꎬtaq 酶 0.2 μl(5 U / μl)ꎮ 反 应 条 件 为 95 预 变 性 5 minꎻ 接 着 94 变 性 50 sꎬ53 退 火 50 sꎬ72 延 伸 60 sꎬ 共 36 个 循 环 ꎻ 最 后 72 延 伸 8 minꎮ 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 3 侧 翼 序 列 的 扩 增 以 提 取 的 总 DNA 为 模 板 ꎬ 用 3 个 巢 式 单 引 物 进 行 3 轮 TAIL PCR 扩 增 ꎬ 引 物 序 列 为 3 TAIL 1:5 TCTTAAT GTGAGTTCGCCTCTGTGA 3 ꎻ 3 TAIL 2: 5 CTTTGAG CAGCACAGGAATGGTCTC 3 ꎻ 3 TAIL 3: 5 CGGTG TAGTGGATGAGCATTATGAG 3 ꎮ TAIL PCR 的 反 应 体 系 为 50 μlꎬ 简 并 引 物 AD (5 TC( G / C) TICGNACIT ( A / T) GGA 3 ) ( Liu and Whittierꎬ 1995 )ꎮ 各 成 分 及 用 量 如 下 : LA buffer (Mg 2+ plus)5.0 μlꎻdntp Mix(2.5 mmol / L)8.0 μlꎻ AD 引 物 (20 μmol / L) 5. 0 μlꎻ 基 因 特 异 性 引 物 ( 5 μmol / L)2.0 μlꎻla Taq 酶 (5 U / μl) 0.5 μlꎻdna (50 ng / μl)5.0 μlꎻh 2 O 24.5 μlꎮ 第 一 轮 反 应 引 物 采 用 3 TAIL 1 和 ADꎬ 条 件 为 94 预 变 性 1 minꎬ98 预 变 性 1 minꎻ 接 着 94 变 性 30 sꎬ65 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ 共 5 个 循 环 ꎻ 紧 接 着 94 变 性 30 sꎬ25 退 火 3 minꎬ 在 3 min 内 攀 升 到 72 ꎬ72 延 伸 2 minꎬ 进 行 一 个 循 环 ꎻ 接 着 94 变 性 30 sꎬ65 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ94 变 性 30 sꎬ65 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ94 变 性 30 sꎬ44 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ 共 15 个 循 环 ꎻ 最 后 72 延 伸 10 minꎮ TAIL PCR 第 二 轮 反 应 引 物 采 用 3 TAIL 2 和 ADꎬ 将 第 一 轮 反 应 产 物 稀 释 50 倍 ꎬ 取 1 μl 作 为 第 二 轮 反 应 的 模 板 ꎬ 其 它 成 分 与 第 一 轮 反 应 相 同 ꎮ 反 应 条 件 为 94 预 变 性 1 minꎻ 接 着 94 变 性 30 sꎬ65 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ94 变 性 30 sꎬ65 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ94 变 性 30 sꎬ44 退 火 1 minꎬ72 延 伸 2 minꎬ 共 15 个 循 环 ꎻ 最 后 72 延 伸 10 minꎮ 第 三 轮 反 应 引 物 采 用 3 TAIL 3 和 ADꎬ 将 第 二 轮 反 应 产 物 稀 释 50 倍 ꎬ 取 1 μl 作 为 第 三 轮 反 应 的 模 板 ꎬ 其 它 成 分 与 第 二 轮 反 应 相 同 ꎮ 反 应 条 件 也 同 第 二 轮 相 同 ꎮ 产 物 回 收 连 接 转 化 克 隆 测 序 扩 增 片 段 凝 胶 回 收 采 用 凝 胶 回 收 试 剂 盒 ꎬ 参 照 说 明 书 进 行 ꎻ 产 物 连 接 采 用 TaKaRa 公 司 pmd19 T simple Vectorꎬ 参 考 说 明 书 ꎬ 反 应 体 系 稍 作 优 化 ꎮ 大 肠 杆 菌 感 受 态 细 胞 制 备 采 用 CaCl 2 法 ꎬ 将 目 的 基 因 通 过 热 激 法 转 化 到 大 肠 杆 菌 感 受 态 细 胞 中 ꎬ 阳 性 克 隆 采 用 蓝 白 斑 筛 选 方 法 并 进 一 步 采 用 PCR 方 法 ꎬ 扩 增 产 物 长 度 与 目 的 片 段 相 当 者 为 阳 性 克 隆 ꎮ 每 个 目 的 片 段 ꎬ 随 机 选 取 至 少 3 个 阳 性 克 隆 ꎬ 送 华 大 基 因 测 序 ꎮ 序 列 测 定 采 用 ABI PRISM 3730 DNA 测 序 仪 用 BigDye Termi nator Kit(Applied Biosystems) 进 行 双 向 克 隆 测 序 ꎮ 1.4 数 据 分 析 采 用 BioEdit 软 件 ( http: / / www. mbio. ncsu. edu / BioEdit / bioedit. html ) ( North Carolina State University) 对 克 隆 测 序 得 到 的 片 段 进 行 拼 接 ꎮ 采 用 FGENESH 和 NCBI ( http: / / linux1. softberry. com / berry.phtml) 的 ORF finder 进 行 开 放 阅 读 框 确 定 ꎮ 运 用 DNAstar 软 件 推 测 氨 基 酸 序 列 ꎬ 分 析 蛋 白 质 的 分 子 量 等 电 点 和 氨 基 酸 组 成 ꎮ 使 用 SignalP 3. 0 Server( http: / / www. cbs. dtu. dk / services / SignalP / ) 分 析 蛋 白 N 端 氨 基 酸 序 列 ꎬ 根 据 SignalP 分 析 得 到 的 Cmax 值 ( the cleavage site score) Smean ( the signal peptide score) 和 HMM 值 (Hidden Markov Model) 判 别 信 号 肽 序 列 ꎬ 确 定 是 否 存 在 信 号 肽 ꎮ 使 用 TargetP Server v1. 01 ( http: / / www. cbs. dtu. dk / services / Tar getp / ) 确 定 分 泌 蛋 白 的 分 泌 途 径 和 亚 细 胞 定 位 ꎮ 蛋 白 质 保 守 结 构 功 能 域 用 PROSITE SMART 软 件 和 PFAM 数 据 库 ( http: / / pfam. wustl. edu / ) 进 行 预 测 ꎮ 多 条 序 列 的 一 致 性 分 析 用 Bioedit 软 件 sequence i dentity matrix 进 行 ꎮ 使 用 在 线 软 件 SOPMA 预 测 蛋 白 二 级 结 构 并 计 算 各 种 二 级 结 构 所 占 的 百 分 比 ꎮ 将 推 导 的 氨 基 酸 序 列 提 交 瑞 士 生 物 信 息 研 究 所 的 Swiss model( http: / / www. isb sib. ch / ) ( Arnold et alꎬ 2006ꎻ Schwede et alꎬ2003)ꎬ 基 于 同 源 建 模 的 原 理 ꎬ 用 水 稻 的 NsHb1 作 为 模 板 ( PDB code: 1D8UA) 进 行 水 蕨 血 红 蛋 白 三 级 结 构 的 预 测 ꎮ 预 测 结 果 用 Py MOL 软 件 展 示 和 编 辑 ꎮ 运 用 Blast 工 具 ( http / / blast. ncbi. nlm. nih. gov / Blast.cgi)ꎬ 以 水 蕨 血 红 蛋 白 作 为 查 询 序 列 ꎬ 进 行 序 列 相 似 性 搜 索 ꎬ 并 选 取 相 似 性 较 高 的 序 列 用 MEGA6 软 件 (Tamura et alꎬ2013) 中 的 邻 接 算 法 进 行 进 化 树 的 构 建 ꎬ 其 中 多 重 序 列 比 对 采 取 Clustalx 软 件 进 行 ꎮ 2 结 果 与 分 析 2.1 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 克 隆 以 水 蕨 的 总 DNA 为 模 板 ꎬ 用 一 对 特 异 引 物 ( F cera 和 R cera) 扩 增 得 到 一 段 约 820 bp 的 片 段 ( 图
4 2 期 齐 小 琼 等 : 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 分 子 克 隆 和 序 列 分 析 219 1:a)ꎮ 经 过 分 析 ꎬ 该 序 列 的 5 端 是 完 整 的 ꎬ 因 此 只 需 通 过 染 色 体 步 移 技 术 获 得 3 侧 翼 序 列 ꎮ 基 于 获 得 的 序 列 片 段 ꎬ 进 一 步 设 计 了 一 组 巢 式 引 物 通 过 TAIL PCR 来 获 得 3 侧 翼 序 列 ꎮ 在 TAIL PCR 的 第 二 轮 和 第 三 轮 分 别 获 得 了 几 条 清 晰 的 条 带 ꎬ 根 据 巢 式 引 物 设 计 的 相 对 位 置 ꎬ 选 取 这 两 轮 反 应 的 产 物 大 小 相 差 大 约 100 bp 的 条 带 ( 图 1:b) 作 为 目 的 条 带 ꎮ 将 第 三 轮 的 目 的 条 带 回 收 克 隆 测 序 ꎬ 经 分 析 ꎬ 得 到 的 序 列 含 有 同 已 知 序 列 完 全 一 致 的 重 叠 区 ꎮ 将 上 述 实 验 获 得 的 序 列 拼 接 最 终 得 到 水 蕨 血 红 蛋 白 基 因 的 完 整 编 码 区 序 列 ꎮ 将 得 到 的 序 列 同 C. richardii 的 EST( 登 录 号 : BQ087262) 序 列 进 行 比 对 ꎬ 发 现 本 研 究 获 得 的 序 列 比 数 据 库 中 的 序 列 多 了 三 段 区 域 ꎬ 其 它 部 分 都 完 全 匹 配 ꎬ 推 测 这 三 部 分 是 基 因 的 内 含 子 区 域 ꎮ 由 此 获 知 该 基 因 含 有 4 个 外 显 子 ꎬ3 个 内 含 子 ꎬ 这 与 其 他 植 物 血 红 蛋 白 的 基 因 结 构 相 同 ꎮ 说 明 血 红 蛋 白 基 因 的 外 显 子 内 含 子 结 构 在 植 物 进 化 中 是 保 守 的 ꎮ 2.2 全 长 基 因 序 列 及 编 码 蛋 白 的 基 本 性 质 分 析 对 已 获 得 的 克 隆 基 因 进 行 分 析 研 究 后 ꎬ 得 到 水 图 1 特 异 PCR(a) TAIL PCR(b) 琼 脂 糖 电 泳 检 测 M.2000 bp 分 子 量 标 记 ꎻ a 1. 特 异 引 物 F cera 和 R cera 扩 增 得 到 的 大 约 820 bp 的 产 物 ꎻ b II. 引 物 3 TAIL 2 通 过 TAIL PCR 第 二 轮 反 应 得 到 的 条 带 ꎻ b III. 引 物 3 TAIL 3 通 过 TAIL PCR 第 三 轮 反 应 得 到 的 条 带 ꎮ Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of the specific PCR(a)ꎬ TAIL PCR(b)products M. Molecular weight marker (DL2000)ꎻ a 1. About 820 bp fragment generated by specific PCR with primer F cera and R ceraꎻ b II. Several bands produced by the secondary reaction of TAIL PCR with primer 3 TAIL 2ꎻ b III. Two clear bands produced by the tertiary reaction of TAIL PCR with primer 3 TAIL 3. Table 1 表 1 序 列 一 致 性 分 析 Analysis of percent sequence identify 序 列 名 称 Sequence name 棉 花 Cotton 拟 南 芥 AHB 拟 南 芥 AHB1 大 麦 Barley 大 麦 Barley 玉 米 Maize 玉 米 Maize 水 稻 Rice 水 稻 Rice 苜 蓿 Alfalfa 苜 蓿 Alfalfa 百 脉 根 Lotus 百 脉 根 Lotus 大 豆 Soybean 大 豆 Soybean 羽 扇 豆 1 Lupinus 羽 扇 豆 1 Lupinus 1 拟 南 芥 Ns2 AHB 拟 南 芥 Ns2 AHB2 棉 花 Ns2 Cotton Ns 棉 花 Ns2 Cotton Ns2 小 立 碗 藓 Physcomitrella 小 立 碗 藓 Phys comi trella 角 齿 藓 Ceratodon 石 松 Selaginellae 水 蕨 Ceratopteris 注 : AHB1 和 AHB2 分 别 代 表 拟 南 芥 非 共 生 血 红 蛋 白 1 和 2ꎻ 代 表 非 共 生 血 红 蛋 白 1ꎻ 代 表 豆 血 红 蛋 白 ( 共 生 血 红 蛋 白 )ꎮ Note: AHB1 and AHB2 represent nonsymbiotic hemoglobin 1 and 2 from Arabidopsis thalianaꎬrespectivelyꎻ indicates nonsymbiotic hemoglobin 1(NsHb 1)ꎻ while indicates leghemoglobin(symbiotic hemoglobin). 角 齿 藓 Cera todon 石 松 Selag inellae 蕨 血 红 蛋 白 ( 命 名 为 CtHb) 基 因 序 列 全 长 ( 图 2) 为 949 bpꎬ 该 基 因 包 括 4 个 外 显 子 和 3 个 内 含 子 ꎬ 编 码 189 个 氨 基 酸 ꎮ 氨 基 酸 组 成 中 含 量 最 高 的 为 丙 氨 酸 ( Alaꎬ )ꎬ 其 次 缬 氨 酸 ( Valꎬ 9. 0 ) 丝 氨 酸 (Serꎬ8.5 ) 亮 氨 酸 ( Leuꎬ7. 9 ) 和 赖 氨 酸 ( Lysꎬ 7.9 )ꎮ 碱 性 氨 基 酸 ( ArgꎬLys) 24 个 ꎬ 强 酸 性 氨 基 酸 (AspꎬGlu)23 个 ꎬ 疏 水 氨 基 酸 ( AlaꎬIleꎬLeuꎬPheꎬ TrpꎬVal)71 个 ꎬ 不 带 电 荷 的 极 性 氨 基 酸 (Asnꎬ Cysꎬ
5 ２２０ 广 西 植 物 ３６ 卷 图 ２ 水蕨血红蛋白基因的核酸序列和推导的氨基酸序列 推导的氨基酸序列标注在开放阅读框下面ꎬ小写字母示内含子部分ꎮ Ｆｉｇ. ２ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ Ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｉｓ ｓｈｏｗｎ ｂｅｌｏｗ ｉｔｓ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｒｏｎｓ ａｒｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｉｎ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ. ＧｌｎꎬＳｅｒꎬＴｈｒꎬ Ｔｙｒ) ４１ 个ꎮ 预 测 的 蛋 白 质 分 子 量 为 ２１.１４ ｋｄａꎬ理论等电点( ｐｉ) 为 ７.８１ꎮ ２.３ 蛋白质的信号肽预测及亚细胞定位分析 采用 ＳｉｇｎａｌＰ 对该蛋白序列及其他分类群的代 表序列( 包括苔藓植物 ２ 条( Ｐｈｙｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ ｐａｔｅｎｓ 和 Ｃｅｒａｔｏｄｏｎ ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ) 石松类 １ 条( Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａｅ ｍｏｅｌ ｌｅｎｄｏｒｆｉｉ) 和被子植物 １１ 条( 具体的物种和序列名称 见表 １) 进行在线搜索ꎬ发现这些蛋白存在信号肽的 概率都极低ꎬ不存在信号肽酶切位点ꎬ说明这些血红 蛋白很可能为非分泌蛋白ꎮ 进一步分析这些蛋白的 亚细胞定位ꎬ发现大部分蛋白是细胞质蛋白ꎬ只有小 立碗藓和江南卷柏的血红蛋白具有较高分值的叶绿 体定位信号ꎬ可能会定位于叶绿体中ꎮ ２.４ 序列一致性分析 表 １ 给出的是 １５ 条植物血红蛋白序列两两之 间的一致性指数ꎬ其中包括 ２ 条苔藓植物序列( Ｐｈｙ ｓｃｏｍｉｔｒｅｌｌａ ｐａｔｅｎｓ 和 Ｃｅｒａｔｏｒｄｏｎ ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ) ꎬ１ 条石松 类植物序列( Ｓｅｌａｇｉｎｅｌｌａｅ ｍｏｅｌｌｅｎｄｏｒｆｉｉ) ꎬ１ 条蕨类植 物序列( Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ) 及 １１ 条被子植物 序列ꎮ 本研究发现 ＣｔＨｂ 与被子植物 ＮｓＨｂ１ 的序列 一致性偏高ꎬ与豆科植物 ｓｈｂ 的序列一致性偏低ꎬ 说明 ＣｔＨｂ 属于 ＮｓＨｂ１ꎻ同时比较 ＣｔＨｂ 和其他分类 群 ＮｓＨｂ 的一致性发现ꎬ与古老的苔藓 石松类植物 的 ＮｓＨｂ 序列相比ꎬＣｔＨｂ 在进化上更类似于被子植 物 ＮｓＨｂꎮ ２.５ 水蕨血红蛋白高级结构预测 在二级结构预测中ꎬＣｔＨｂ 主要由 ６１.３８ 的 α 螺旋ꎬ ６. ３５ 的 延 伸 片 层ꎬ ５. ８２ 的 β 转 角 和 ２６ ４６ 无规卷曲组成ꎮ 其中 α 螺旋和卷曲是 ＣｔＨｂ 二级结构的主要构成成分ꎮ 了解水蕨血红蛋白的结构性质对于阐明植物血 红蛋白的进化多样性及其在植物中发挥的作用都有
6 ２ 期 齐小琼等: 水蕨血红蛋白基因的分子克隆和序列分析 ２２１ 图 ３ ａ. 预测的 ＣｔＨｂ 三级结构ꎻ ｂ. 选取的 ＣｔＨｂ 血红素口袋中的氨基酸三级结构 每个螺旋分别用字母 ＡꎬＢꎬＣꎬＥꎬＦ 和 Ｈ 表示ꎮ Ｆｉｇ. ３ ａ. Ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＣｔＨｂꎻ ｂ. Ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｈｅｍｅ ｐｏｃｋｅｔ ｏｆ ＣｔＨｂ Ｈｅｌｉｃｅｓ (ｉｎ ｃｌｕｄｉｎｇ ｔｏ ｐｒｅｈｅｌｉｘ Ａ) ａｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅｔｔｅｒｓ ＡꎬＢꎬＣꎬＥꎬＦ ａｎｄ Ｈ. 图 ４ Ａ. ＣｔＨｂ( 灰色表示) 和水稻 ＮｓＨｂ１( 黑色表示) 三级结构比对图ꎻ Ｂ. 选取在 ＣｔＨｂ( 灰色表示) 和水稻 ＮｓＨｂ１( 黑 色表示) 血红素口袋中的氨基酸位点的三级结构比对图 每个螺旋分别用 ＡꎬＢꎬＣꎬＥꎬＦ 和 Ｈ 表示ꎬ其中( ａ) 为正面ꎬ( ｂ) 为背面ꎮ Ｆｉｇ. ４ Ａ. Ｏｖｅｒｌａｙ ｏｆ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＣｔＨｂ(ｇｒａｙ) ａｎｄ ｎａｔｉｖｅ ｒｉｃｅ ＮｓＨｂ１(ｂｌａｃｋ) ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓꎻ Ｂ. Ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃ ｔｕｒｅ ｏｖｅｒｌａｙ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｈｅｍｅ ｐｏｃｋｅｔ ｏｆ ＣｔＨｂ(ｇｒａｙ) ａｎｄ ｎａｔｉｖｅ ｒｉｃｅ ＮｓＨｂ１(ｂｌａｃｋ) Ｈｅｌｉｃｅｓ(ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｏ ｐｒｅｈｅｌｉｘ Ａ) ａｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅｔｔｅｒｓ ＡꎬＢꎬＣꎬＥꎬＦ ａｎｄ Ｈ. (ａ) ｉｓ ａ ｆｒｏｎｔ ｖｉｅｗꎬｗｈｉｌｅ (ｂ) ｉｓ ａ ｂａｃｋ ｖｉｅｗ. 着重要的意义ꎮ 通过计算机模拟可以从模板预测出 高质量的蛋白质三级结构ꎬ通过预测出的结构可以 考察血红蛋白的进化模式ꎬ在结构和功能方面理解 进化问题ꎮ 由于 ＣｔＨｂ 和水稻 ＮｓＨｂ１ 具有接近 ５０ 的相似性ꎬ所以可以用水稻 ＮｓＨｂ１(１Ｄ８ＵＡ) 作为预 测 ＣｔＨｂ 三级结构的模板ꎮ 图 ３ 给出了 ＣｔＨｂ 三维结构模拟结果ꎮ 图中显 示ꎬＣｔＨｂ 具有植物血红蛋白典型的三级结构模式ꎬ ＣｔＨｂ 三级结构具有典型球蛋白的折叠方式ꎬ它的大 部分结构( 包括具有远端和近端组氨酸定位的 Ｅ 和 Ｆ 螺旋的位置等) 同水稻的结构非常相似ꎻ不同之处 主要表现在:(１) ＣｔＨｂ 含有较长的 Ｎ 端区域ꎻ(２) 两 者 ＣＤ ｌｏｏｐ 的折叠方式不同ꎻ(３) 两者螺旋 Ｂ 和螺旋 Ｃ 的连接方式不同ꎬＣｔＨｂ 是通过卷曲连接的ꎬ而水 稻 ＮｓＨｂ１ 借助的是螺旋ꎮ 在比对图 ５ 中ꎬ发现苔藓植物 石松类和蕨类植 即含有 Ａ Ｂ Ｃ Ｅ Ｆ Ｇ 和 Ｈ 螺旋ꎬ形成了 ３ ｏｎ ３ 的 物 ＮｓＨｂ 中都含有一段延长的 Ｎ 端序列ꎬＲｏｓｓ ｅｔ ａｌ 进行 ｏｖｅｒｌａｙ 比较ꎬ结果如图 ４:Ａ 所示:预测得到的 的蛋白位点ꎬ推测植物 ＮｓＨｂ 的祖先可能是定位于 三明治 结构ꎮ 将 ＣｔＨｂ 和水稻 ＮｓＨｂ１ 的三级结构 (２００２) 在苔藓植物 ＮｓＨｂ 中检测到了类似于前导肽
7 ２２２ 广 西 植 物 ３６ 卷 图 ５ 植物血红蛋白的多序列比对 序列的保守性通过 ＥＳＰｒｉｐｔ 化学等价策略进行可视化ꎬ设置相似性阈值来强调严格保守的位置ꎻ 不变残基添加黑色背景ꎬ理化性质相同的残基用灰色矩形框标注ꎻ 预测的 ＣｔＨｂ 二级结构元件标注在序列比对的最上面ꎮ Ｆｉｇ. ５ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｓ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｉｓ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ＥＳＰｒｉｐｔ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｍｅａｓｕｒｅꎬ ｗｉｔｈ ａ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｓｅｔ ｔｏ ｅｍｐｈａｓｉｚｅ ｓｔｒｉｃｔｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓꎻ Ｉｎｖａｒｉａｎｔ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｒｅ ｂｏｘｅｄ ｉｎ ｂｌａｃｋꎬ ｐｈｙｓｉｃｏ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ａｒｅ ｂｏｘｅｄ ｉｎ ｇｒａｙꎻ Ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＣｔＨｂ ｉｓ ｓｈｏｗｎ ａｂｏｖｅ ｔｈｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ. 细胞器中的ꎬ这同软件预测的小立碗藓 ＮｓＨｂ 的亚 细胞定位结果一致ꎮ 推测这段延长的 Ｎ 端氨基酸 可能有 助 于 蛋 白 的 转 运 ( Ｇａｒｒｏｃｈｏ ｖｉｌｌｅｇａｓ Ａｒｒｅ ｄｏｎｄｏ ｐｅｔｅｒꎬ２００８) ꎮ 在 ＣｔＨｂ 中ꎬＡ 螺旋之前存在较 长的一段序列ꎬ可能与苔藓植物延长的 Ｎ 端氨基酸 有着相似的作用ꎬ即与蛋白的转运有关ꎬ但信号肽和 亚细胞定位预测都没有支持这一推断ꎮ 这可能与采 用的生物信息学的预测方法有关ꎬ需要进一步的实 验证据来证明ꎮ 如果这些都被验证是正确的ꎬ那么 从进化的角度讲ꎬＮｓＨｂ 可能从细胞器的蛋白进化成 了细胞质的蛋白( Ｒｏｓｓ ｅｔ ａｌꎬ２００２) ꎮ 本研究也检测了参与配基结合的一些重要位点 的氨基酸组成和相对位置( 图 ４:Ｂ) ꎬ结果表明近端 组氨酸( Ｈｉｓ) ꎬ 远端组氨酸ꎬ 螺旋 Ｂ 第 １０ 位的苯丙 氨酸 ( Ｐｈｅ ) ꎬ ＣＤ ｌｏｏｐ 第 １ 位 的 苯 丙 氨 酸 及 １７２ / １５０ 的酪氨酸( Ｔｙｒ) 在水蕨和水稻ＮｓＨｂ１中都非常一
8 ２ 期 齐小琼等: 水蕨血红蛋白基因的分子克隆和序列分析 致ꎬ位置完全吻合ꎮ 这表明 ＣｔＨｂ 具有水稻 ＮｓＨｂ１ ２２３ 类似的配基结合动力学性质ꎬ即具有很低的 Ｏ ２ 解离 常数ꎬ很高的 Ｏ ２ 亲和力ꎮ ４.６ 血红蛋白的序列和结构进化 通过将 ＣｔＨｂ 与其他分类群的代表序列比较发 现( 图 ５ ) : ＣｔＨｂ 包 含 非 常 保 守 的 近 端 组 氨 酸 ( Ｈ９５) ꎬ远端组氨酸( Ｈ１３０) 和位于 Ｂ 螺旋第 １０ 位 的苯丙氨酸( Ｆ６２) ꎻ同时也发现ꎬ在 ＣＤ ｌｏｏｐ 的第 １ 位上只有苔藓植物是酪氨酸( Ｔｙｒ) 而其他物种都是 苯丙氨酸( Ｐｈｅ) ꎮ 这说明 ＣＤ１ 在非共生血红蛋白的 祖先序列中是被酪氨酸占据的ꎬ而在进化过程中被 苯丙氨酸所取代ꎮ 图 ６ 不 同 物 种 ＧＧＰＰＳ 蛋 白 序 列 的 同 源 比 较 采用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｊｏｉｎｉｎｇ算法ꎬ在ｍｅｇａ６软件平台上构 图 ６ 不同物种的系统进化树 Ｆｉｇ. ６ Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓ 图 ７ 角齿藓 水蕨 水稻非共生血红蛋白和大豆豆血红蛋白三级结构和表面电荷分布比较 带有正电荷和负电荷的氨基酸 分别用蓝色和红色表示ꎻ 小立碗藓的三级结构坐标数据( ＩＤ ｎｕｍｂｅｒ:ｐｍ００７５０１３) 从蛋白质模型数据库( Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｅｌ Ｄａｔａｂａｓｅ) ( ｈｔｔｐ: / / ｍｉ. ｃａｓｐｕｒ.ｉｔ / ＰＭＤＢ / )下载ꎬ水稻和大豆的三级结构坐标数据(ＩＤ ｎｕｍｂｅｒｓ:１ｄ８ｕ 和 １ＢＩＮ)从 ＲＣＳＢ 蛋白质数据库(ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ)下载ꎮ Ｆｉｇ. ７ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｎｏｎｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｆｒｏｍ Ｃｅｒａｔｏｄｏｎ ｐｕｒｐｕｒｅｕｓꎬｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓꎬｎａｔｉｖｅ ｒｉｃｅ ＮｓＨｂ１ ａｎｄ ｓｏｙｂｅａｎ Ｌｂａ ｔｅｒｔｉａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｈａｒｇｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｂｌｕｅ ａｎｄ ｒｅｄ ｃｏｌｏｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｃｈａｒｇｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙꎻ Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ ｆｏｒ ｎｏｎｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ ｆｒｏｍ Ｃｅｒａｔｏｄｏｎ ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｅｌ Ｄａｔａｂａｓｅ (ｈｔｔｐ: / / ｍｉ.ｃａｓｐｕｒ.ｉｔ / ＰＭＤＢ / )ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ＩＤ ｎｕｍｂｅｒ ＰＭ００７５０１３. Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ＮｓＨｂ１ ａｎｄ ｓｏｙｂｅａｎ Ｌｂａ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＩＤ ｎｕｍｂｅｒｓ １Ｄ８Ｕ ａｎｄ １ＢＩＮꎬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. 建了植物血红蛋白的分子系统进化树( 图 ６) ꎮ 根据 植物血红蛋白从非共生到共生进化过程中的一些关 (Ｎｓ１) 古老的血红蛋白( Ｎｓ) 组成的分支和非共生 六配位体( Ｈｅｘａｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ) 到五配位体( Ｐｅｎｔａｃｏｏｒｄｉ 序列 的 差 异 分 为 两 大 分 支 非 共 生 血 红 蛋 白 １ 血红蛋白 ２ ( Ｎｓ２) 共生血红蛋白 ( ｓｈｂ) 组成的分 支ꎻＣｔＨｂ 位于非共生血红蛋白 １ 的基部ꎬ说明其可 能是非共生血红蛋白 １ 的共同祖先ꎬ并且其进化地 位比古老的苔藓植物血红蛋白稍微高等一点ꎬ这跟 物种的进化关系是吻合的ꎮ 本研究也比较了角齿藓 水蕨 水稻非共生血红 蛋白及大豆的豆血红蛋白三维结构的差异ꎬ揭示了 键改变( 图 ７) ꎮ 这些改变包括:( １) 血红素辅基从 ｎａｔｅ) 的转变 ( Ｇｏｐａｌａｓｕｂｒａｍａｎｉａｍ ｅｔ ａｌꎬ２００８) ꎻ ( ２) ＣＤ ｌｏｏｐꎬｎ 端和 Ｃ 端区域长度的缩短ꎻ( ３) 蛋白结 构更加紧凑ꎬ形成球状结构ꎮ 这些改变可能有助于 非共生血红蛋白向共生血红蛋白结构的转变ꎬ 特别 是有助于豆血红蛋白共生功能的实现( Ｇｏｐａｌａｓｕｂｒａ ｍａｎｉａｍ ｅｔ ａｌꎬ２００８) ꎮ ( 下转第 １６１ 页 Ｃｏｎｔｉｎｕｅ ｏｎ ｐａｇｅ １６１ )
Syngene GBOXHR Retsch MM400 KQ DE Eppendorf Table 1 The sources of Astragali Radix and Hedysarum Radix No. 1 AMM2011_NMGTY Astr
PCR 龙平, 崔占虎, 李虔全, 徐建平, 张春红, 周立社 * *, 李旻辉 ( 包头医学院, 内蒙古包头 014060) DNA 30 28 DNA trnl-trnf PCR PCR 136 bp 323 bp 10% PCR PCR Astragalus membranaceus Fisch. Bge. var. mongho- licus Bge. Hsiao A. membranaceus
i
i i ii 1 2 3 4 % N) 5 50.0 AMINO ACID #64 [modified by Administrator] IntAmp_1 nc 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0-10.0 1 - ala - 10.483 2 - thr - 11.107 3 - gly - 11.872 4 - val - 13.458 5 - ser - 14.903 6 - pro
AFLP % 1. 1 DNA 5 RAPD DNA 0. 1g % ~ ph 6 10 DNA 9 40μl TE SSR STS 20ng /L
2012 13 2 201-206 Journal of Plant Genetic Resources / 071001 41 SSR 21 SSR 41 52 2 ~ 4 2. 5 Shannon 0. 21 ~ 1. 40 0. 73 5. 54 3 7 9 13. 16% ~ 186. 49% 5. 48 6 11 SSR Genetic Diversity of Peanut Arachis
TGF-β AngⅡ B SD ~ 220g SPF. SCXK No SYXK ~ 25 40% ~ 70% OR37G-C
2017 7 43 4 Journal of Southwest Minzu University Natural Science Edition Jul. 2017 Vol. 43 No. 4 doi10. 11920 /xnmdzk. 2017. 04. 008 1 1 1 2 1 1 3 1. 610212 2. 6100413. 610031 AngⅡ TGF-β. SD 60 180 ~
tbjx0121ZW.PDF
1 a a b a (9+2 b - ) a c - 9 2 ( ( ) a 90 ) ( ( ) b - ) 10 (9+2 ) a b - ( ) a c - 2 ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) () ( ) ( ) ( ) ( 1 2 ) ( ) ( 3 () 0.3mm 2 ( ) 2 10 ( ) ( ) ( ) 2 10 ( )
28 2015 3 1 2 2011-2012 38 985 31 EXCEL 2005-2010 985 3 985 2011 2012 EXCEL 38 985 31 985 2011-2012 38 985 1. 38 985 90 20 70 1 2005-2010 2011-2012 13
36 3 Vol. 36 No.3 2 0 1 5 5 May 2 0 1 5 985 2011-2012 361005 2011-2012 985 985 985 2005-2012 985 985 G645 A 1001-4519 2015 03-0027 - 12 DOI 10. 14138 /j. 1001-4519. 2015. 03. 002712 2005-2010 985 2012
(1) 脂 肪 族 氨 基 酸 (2) 芳 香 族 氨 基 酸 : 苯 丙 氨 酸 色 氨 酸 酪 氨 酸 (3) 杂 环 氨 基 酸 : 脯 氨 酸 组 氨 酸 3 按 侧 基 R 基 与 水 的 关 系 分 : (1) 非 极 性 氨 基 酸 : 有 甘 氨 酸 丙 氨 酸 缬 氨 酸 亮 氨
第 四 章 氨 基 酸 与 蛋 白 质 1 掌 握 蛋 白 质 的 基 本 构 成 单 体 : 氨 基 酸 的 结 构 特 点, 从 各 氨 基 酸 的 结 构 特 点 上 理 解 氨 基 酸 的 分 类 2 掌 握 氨 基 酸 的 理 化 性 质, 重 点 掌 握 两 性 电 离 与 等 电 点 含 义 茚 三 酮 反 应 及 其 应 用 3 掌 握 氨 基 酸 纸 层 析 的 原 理 第 一 节
1556 地 理 科 学 进 展 30 卷 他 关 于 农 村 住 房 结 构 与 抗 震 性 能 的 研 究, 则 多 是 从 工 程 抗 灾 的 角 度, 研 究 某 种 构 造 类 型 的 房 屋, 力 图 找 到 传 统 房 屋 的 结 构 失 误 和 新 建 房 屋 中 存 在 的 问 [
第 30 卷 第 12 期 2011 年 12 月 地 理 科 学 进 展 PROGRESS IN GEOGRAPHY Vol.30, No.12 Dec., 2012 中 国 农 村 地 区 住 房 结 构 的 区 域 差 异 及 其 影 响 因 素 1, 2, 李 方 一 3 1,, 高 晓 路 2 2, 王 英 杰 (1. 中 国 科 学 院 区 域 可 持 续 发 展 分 析 与 模 拟 重
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多 肽 基 础 知 识 问 答 目 录 1. 什 么 是 多 肽? 2. 多 肽 的 来 源 有 哪 些? 3. 多 肽 的 保 存 应 该 注 意 的 因 素? 4. 多 肽 怎 样 溶 解? 5. 多 肽 的 纯 度 测 定 6. 多 肽 的 纯 度 和 多 肽 的 净 含 量 的 区 别? 7. 冻 干 粉 状 多 肽 除 了 净 含 量 外, 还 包 含 哪 些 物 质? 8. 多 肽 的
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39 1 2015 1 Vol. 39 No. 1 January 2015 74 Population Research 80 + /60 + 90 + 90 + 0 80 100028 Measuring and Comparing Population Longevity Level across the Regions of the World Lin Bao Abstract Appropriate
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2010-08,31(4) 中 国 烟 草 科 学 Chinese Tobacco Science 59 几 种 烤 烟 专 业 化 烘 烤 模 式 分 析 与 探 讨 宋 朝 鹏 1, 冀 新 威 1, 孙 建 锋 2, 徐 秀 红 3, 孙 福 山 3, 宫 长 荣 (1. 河 南 农 业 大 学 农 学 院, 郑 州 450002;2. 云 南 省 烟 草 曲 靖 市 公 司, 云 南 曲 靖
1 VLBI VLBI 2 32 MHz 2 Gbps X J VLBI [3] CDAS IVS [4,5] CDAS MHz, 16 MHz, 8 MHz, 4 MHz, 2 MHz [6] CDAS VLBI CDAS 2 CDAS CDAS 5 2
![1 VLBI VLBI 2 32 MHz 2 Gbps X J VLBI [3] CDAS IVS [4,5] CDAS MHz, 16 MHz, 8 MHz, 4 MHz, 2 MHz [6] CDAS VLBI CDAS 2 CDAS CDAS 5 2](/thumbs/93/111695992.jpg "1 VLBI VLBI 2 32 MHz 2 Gbps X J VLBI [3] CDAS IVS [4,5] CDAS MHz, 16 MHz, 8 MHz, 4 MHz, 2 MHz [6] CDAS VLBI CDAS 2 CDAS CDAS 5 2")
32 1 Vol. 32, No. 1 2014 2 PROGRESS IN ASTRONOMY Feb., 2014 doi: 10.3969/j.issn.1000-8349.2014.01.07 VLBI 1,2 1,2 (1. 200030 2. 200030) VLBI (Digital Baseband Convertor DBBC) CDAS (Chinese VLBI Data Acquisition
中 文 摘 要 一 个 蛋 白 质 去 折 叠 可 视 化 系 统 的 设 计 与 实 现 中 文 摘 要 蛋 白 质 的 生 物 功 能 由 其 三 维 结 构 所 决 定, 而 蛋 白 质 通 过 特 定 的 折 叠 机 制 行 成 稳 定 的 空 间 结 构 当 前 生 物 科 学 领 域 一
硕 士 专 业 学 位 论 文 (2009 届 ) 一 个 蛋 白 质 去 折 叠 可 视 化 系 统 的 设 计 与 实 现 The Design and Implementation of A Protein Unfolding Visualization System 研 究 生 姓 名 陈 宇 指 导 教 师 姓 名 吕 强 ( 教 授 ) 专 业 学 位 名 称 研 究 方 向 论 文 提
1 GIS 95 Y = F y + (1 F) (1) 0 0 Y0 kg/hm 2 /day F y 0 y c kg/hm 2 /day [12] y m 20 kg/hm 2 /hour Y = cl cn ch G [ F( y ) T m yo + (2) (1 F)(
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24 1 Vol.24 No.1 94 2008 1 Transactions of the CSAE Jan. 2008 2008 1 100094 2 100035 3 100081 4 100081 5 100101 GIS ( ) 65.12 16.82 13.74 15.27 11.07 t/(hm 2 a) 10.93% 41.43% 46.93% 65.4%. Bi Jiye, Zhu
240 生 异 性 相 吸 的 异 性 效 应 [6] 虽 然, 心 理 学 基 础 研 [7-8] 究 已 经 证 实 存 在 异 性 相 吸 异 性 相 吸 是 否 存 在 于 名 字 认 知 识 别 尚 无 报 道 本 实 验 选 取 不 同 性 别 的 名 字 作 为 刺 激 材 料, 通
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2011 年 Journal of Capital Medical University 4月 第2 期 Apr 2011 Vol 32 No 2 基础研究 doi: 10 3969 / j issn 1006-7795 2011 02 015 人脑识别不同性别名字反应时的差异研究 高迎霄 陈昭燃 * 张明霞 ( 首都医科大学神经生物系高级脑功能中心) 摘要 目的 探讨男女对不同性别名字认知加工速度是否存在差异
%
38 1 2014 1 Vol. 38No. 1 January 2014 51 Population Research 2010 2010 2010 65 100028 Changing Lineal Families with Three Generations An Analysis of the 2010 Census Data Wang Yuesheng Abstract In contemporary
畜牧 动物医学 蚕 蜂
中国农学通报 2015,31(20):181-185 Chinese Agricultural Science Bulletin 老河口市砂梨花期的物候特点分析 邓 环 1 马德栗 1 徐洪海 2 洪国平 1 2 武汉区域气候中心 武汉 430074 老河口气象局 湖北老河口 441800 1 摘 要 为掌握湖北省老河口市砂梨花期的物候规律 利用老河口市 20 年的砂梨裂蕾期 初花期 和盛花期 4
DNA 2 RAPD 3-5 AFLP 6 GISH RAPD 7 RAPD SCAR 32 8 RAPD SSR DNA CTAB 引物合成 8 RAPD 8 6 SC
2013 35 2 307-312 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com SSR SCAR 310024 RAPD EST - SSR SCAR 26 24 22 18 81. 8% 7 23 S668. 4 Q943. 2 A 1000-2286
硕 士 学 位 论 文 论 文 题 目 : 北 岛 诗 歌 创 作 的 双 重 困 境 专 业 名 称 : 中 国 现 当 代 文 学 研 究 方 向 : 中 国 新 诗 研 究 论 文 作 者 : 奚 荣 荣 指 导 老 师 : 姜 玉 琴 2014 年 12 月
硕 士 学 位 论 文 论 文 题 目 : 北 岛 诗 歌 创 作 的 双 重 困 境 专 业 名 称 : 中 国 现 当 代 文 学 研 究 方 向 : 中 国 新 诗 研 究 论 文 作 者 : 奚 荣 荣 指 导 老 师 : 姜 玉 琴 2014 年 12 月 致 谢 文 学 是 我 们 人 类 宝 贵 的 精 神 财 富 两 年 半 的 硕 士 学 习 让 我 进 一 步 接 近 文 学,
第四章 蛋白质的营养
第 四 章 蛋 白 质 的 营 养 蛋 白 质 一 词, 源 于 希 腊 字 Proteios, 其 意 是 最 初 的 第 一 重 要 的 ; 蛋 白 质 是 细 胞 的 重 要 组 成 成 份, 在 生 命 过 程 中 起 着 重 要 的 作 用, 涉 及 动 物 代 谢 的 大 部 分 与 生 命 攸 关 的 化 学 反 应 不 同 种 类 动 物 都 有 自 己 特 定 的 多 种 不 同
标题
吉林农业大学学报 ２０１６ ３８ １ ８７ ９１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｈｔｔｐ ｘｕｅｂａｏ ｊｌａｕ ｅｄｕ ｃｎ Ｅ ｍａｉｌ ｊｌｎｄｘｂ ｖｉｐ ｓｉｎａ ｃｏｍ 神 经 生 长 因 子 ｍｒｎａ 在 鹅 等 级 前 卵 泡 中 的 表达 刘璐璐 隋玉健 朱海洋 武惠岩 杨 辉 孙永峰 吉林农业大学动物科学技术学院 长春 １３０１１８
IPCC CO (IPCC2006) 1 : = ( 1) 1 (kj/kg) (kgc/gj) (tc/t)
2011 5 5 (278 ) China Industrial Economics May 2011 No.5 1 12 (1. 100005; 2. 066004) [ ] : ; ; : ; ; [ ] ; ; ; [ ]F290 [ ]A [ ]1006-480X(2011)05-0047-11 2008 CO 2 ( ) (2009) (GDP) (Binhocker et al. 2008)
8 戲劇學刊 The Interrelation between Peking opera and Modern Drama in Shanghai during the Isolated Island Period: Two Different Kinds of MingmoYihen and t
田村容子 孤島 時期上海跨劇種的互動關係 兩種 明末遺恨 及 改良 之口號 孤島 時期上海跨劇種的互動關係 兩種 明末遺恨 及 改良 之口號* 田村容子** 中文摘要 近年 以抗戰時期的上海話劇為研究對象的學術專著在中國相繼出版問世 但是另一方面 不僅僅局限於話劇 而對同時期的其它諸如京劇 平劇 文明 戲以及申曲 越劇之類的演劇形態也加以關注 並從這些劇種都在 抗戰時期的 上海 這一特殊歷史時空中並存共生這一視角出發所做的研究卻不多
2008 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE : g/ d a : b : a/ b Ag As Au Cd Ce 1817
2008 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 15 2 : 1006 2 446X (2008) 02 2 00152 17. (, 201800) :,, ;, : ; ; ; ; : R 15313 : A, () () ( ) () () () [ 1 ],, 1,, ( ) 1996 1997, 4 ( ), 12 42 [ 2 ], (1) 1, 36, 17
22 Animal Husbandry & Veterinary Medicine 2011 Vol. 43 No % 3% 3% /% % 6. 67% 1. 71% 1. 11% 0. 14% 0.
2011 43 5 21 3 1 1* 1 2 3 1 1. 2. 3. 78. 68±2. 95 g 28 300 3 5 3% 3 1 ALT TP ALB AST 0. 05 P>0. 05 ALT TP ALB P>0. 05 AST 0. 05 GLOB P>0. 05 2 INS 0. 05 TSH T 3 0. 05 P>0. 05 GLU GH T4 IGF-I P>0. 05 S816.
SVM OA 1 SVM MLP Tab 1 1 Drug feature data quantization table
38 2 2010 4 Journal of Fuzhou University Natural Science Vol 38 No 2 Apr 2010 1000-2243 2010 02-0213 - 06 MLP SVM 1 1 2 1 350108 2 350108 MIP SVM OA MLP - SVM TP391 72 A Research of dialectical classification
% 8. 48% 3 80 Alcalase Novozymes Alcalase 2. 4 L Bacillus licheniformis 2. 4 AU /g 1. 2 Hitachi S-4700 JEOL JEM-1200EX Olympus Bu
2011 33 6 1117-1121 http / /xuebao. jxau. edu. cn Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis E - mail ndxb7775@ sina. com * 311400 Alcalase 2. 4 L TS225. 1 + 6 A 1000-2286 2011 06-1117 - 05 A Study on
Microsoft Word - 793-797 tb20150504赵宏宇s-高校教改纵横.doc
微 生 物 学 通 报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn Apr. 20, 2016, 43(4): 793 797 http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150504 高 校 教 改 纵 横 生 物 工 程 专 业 发 酵 课 程 群 建 设 探 索 * 赵 宏 宇
2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 18 12 1. 1. 2 500 730 2 5 1 1 1. 1. 3 739 127 116 712 265 3 143 50 2 2 1 13 2 14 3 15 4 16 5 17 6 18 7 19 8 20 9
2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 18 12 1006-446X 2011 12-0001-28 1 2 2 1. 201800 2. 510070 R 244. 9 A 1 1. 1 3 2000 1. 1. 1 1973 3 52 299 31 136 100 32 1 13 2011-10 -20 1 2011 GUANGDONG WEILIANG YUANSU
1 引言
P P 第 40 卷 Vol.40 第 7 期 No.7 计 算 机 工 程 Computer Engineering 014 年 7 月 July 014 开 发 研 究 与 工 程 应 用 文 章 编 号 :1000-348(014)07-081-05 文 献 标 识 码 :A 中 图 分 类 号 :TP391.41 摘 基 于 图 像 识 别 的 震 象 云 地 震 预 测 方 法 谢 庭,
208 中 南 大 学 学 报 ( 社 会 科 学 版 ) 2013 年 第 19 卷 第 6 期 节 目 录 上 卷 一 所 载 篇 名, 乃 总 目 录 中 篇 名 之 误, 正 文 卷 一 收 录 篇 名 为 月 支 使 者 玄 觉 杜 凝 妻 灌 国 婴 女 独 狐 及 吕 卿 均 五 篇
第 19 卷 第 6 期 中 南 大 学 学 报 ( 社 会 科 学 版 ) Vol.19 No.6 2013 年 12 月 J. CENT. SOUTH UNIV. (SOCIAL SCIENCE) Dec. 2013 篇 目 考 辨 三 则 以 韩 藏 详 节 为 校 勘 依 据 盛 莉 ( 江 汉 大 学 人 文 学 院, 湖 北 武 汉,430056) 摘 要 : 详 节 为 朝 鲜 时 期
mm 400 mm 15 mm EOF mm/10a Fig. 1 Distributions
7 2 2011 3 ADVANCES IN CLIMATE CHANGE RESEARCH Vol. 7 No. 2 March 2011 1673-1719 (2011) 02-0097-07 1961 2007 77 5 5 6 2 3 8 11 1980 1980 1990 2015 8 11 P426.6 A 7.86% 4 50 0.35 5 6 19 7 8 9 1 1906 2005
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRRT2 gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin Chen
Supplemental information Exome sequencing identifies truncating mutations in the PRR gene that cause paroxysmal kinesigenic dyskinesia Wan-Jin hen,, Yu Lin, Zhi-Qi Xiong 3, Wei Wei, Wang Ni,, uo-he an
untitled
20 1 2010 10 Vol.20 Special 1 The Chinese Journal of Nonferrous Metals Oct. 2010 1004-0609(2010)S1-s0127-05 Ti-6Al-4V 1 2 2 (1. 710016 2., 710049) 500~1 000 20 Ti-6Al-4V(TC4) TC4 800 TC4 800 TC4 TC4 800
the southern city was higher than that in the northern city. In rural areas the proportion of the nuclear family in the northern region was higher tha
2015 1 208 POPULATION & ECONOMICS No. 1 2015 Tot. No. 208 2010 100028 2010 2000 2010 2000 2010 C92-05 DOI 10. 3969 /j. issn. 1000-4149. 2015. 01. 004 A 1000-4149 2015 01-0034 - 15 A Comparative Analysis
标题
648 江 苏 农 业 学 报 (Jiangsu J. of Agr. Sci. ),2013,29(3):648 ~ 653 h ttp: / / w w w. jsn y x b.c o m 王 摇 丹, 孙 摇 蕾, 孙 家 正, 等. 桑 葚 冻 结 过 程 中 的 温 度 变 化 特 性 [J]. 江 苏 农 业 学 报,2013,29(3):648 鄄 653. doi:10. 3969
01-0982.doc
第 32 卷 第 7 期 岩 土 工 程 学 报 Vol.32 No.7 2010 年 7 月 Chinese Journal of Geotechnical Engineering July 2010 沿 海 碎 石 回 填 地 基 上 高 能 级 强 夯 系 列 试 验 对 比 研 究 年 廷 凯 1,2, 水 伟 厚 3, 李 鸿 江 4, 杨 庆 1,2, 王 玉 立 (1. 大 连 理 工
2 : 111 ( Pinctada maxima), 13, 11,,,,,, 15, 25 cm, cm, 4 5 kg 1-2],,, 3-7] 24] 25-26],,, ] min, 1, 5 m 4 m, 20 m , 9-22],,, (
![2 : 111 ( Pinctada maxima), 13, 11,,,,,, 15, 25 cm, cm, 4 5 kg 1-2],,, 3-7] 24] 25-26],,, ] min, 1, 5 m 4 m, 20 m , 9-22],,, (](/thumbs/86/94695178.jpg "2 : 111 ( Pinctada maxima), 13, 11,,,,,, 15, 25 cm, cm, 4 5 kg 1-2],,, 3-7] 24] 25-26],,, ] min, 1, 5 m 4 m, 20 m , 9-22],,, (")
12 2 2 0 1 6 4 South China Fisheries Science Vol. 12, No. 2 Apr., 2016 doi: 10. 3969/ j. issn. 2095-0780. 2016. 02. 016,,,, (,,, 510300) : ( Pinctada maxima),,,, 54. 55%, 0 0. 25 m - 2, 0 70. 31 gm - 2,
在 培 养 职 前 卓 越 化 学 教 师 的 院 校, 会 编 一 本 过 去 称 作 化 学 教 学 论 实 验, 现 在 拟 为 卓 越 化 学 教 师 教 育 实 验 教 学 研 究 的 教 材 各 院 校 对 这 门 课 程 所 给 的 学 时 不 太 一 样, 但 都 是 围 绕 实 验
doi: 10.3866/pku.DXHX201607011 卓 越 化 学 教 师 教 育 实 验 教 学 研 究 课 程 探 微 * 杨 承 印 汪 蒙 蒙 赵 洋 ( 陕 西 师 范 大 学 化 学 化 工 学 院, 西 安 710119) 摘 要 : 在 对 实 验 操 作 进 行 编 码 的 基 础 上 对 高 中 化 学 课 程 标 准 中 有 关 实 验 进 行 统 计 分 析, 以
环境指标
1 重 庆 城 市 化 发 展 区 域 差 异 及 模 式 探 讨 李 孝 坤 重 庆 师 范 大 学 地 理 科 学 学 院 (400047) e-mail: cslixk@cqnu.edu.cn 摘 要 : 受 区 域 发 展 不 平 衡 规 律 的 影 响, 重 庆 直 辖 市 城 市 化 发 展 区 域 差 异 十 分 明 显 主 要 表 现 在 城 市 化 率 城 镇 密 度 城 镇 规
JOURNAL OF EARTHQUAKE ENGINEERING AND ENGINEERING VIBRATION Vol. 31 No. 5 Oct /35 TU3521 P315.
31 5 2011 10 JOURNAL OF EARTHQUAKE ENGINEERING AND ENGINEERING VIBRATION Vol. 31 No. 5 Oct. 2011 1000-1301 2011 05-0075 - 09 510405 1 /35 TU3521 P315. 8 A Earthquake simulation shaking table test and analysis
% GIS / / Fig. 1 Characteristics of flood disaster variation in suburbs of Shang
20 6 2011 12 JOURNAL OF NATURAL DISASTERS Vol. 20 No. 6 Dec. 2011 1004-4574 2011 06-0094 - 05 200062 1949-1990 1949 1977 0. 8 0. 03345 0. 01243 30 100 P426. 616 A Risk analysis of flood disaster in Shanghai
标题
中国保健食品配方及配方审评现状及分析 中国保健食品配方及 配方审评现状及分析 赵洪静 摘 要: 目标: 介绍中国保健食品配方现状及配方审评原则 要点, 以 期为申请人 保健食品生产 研发机构及相关人员提供一些帮助和参考 方 法: 从保健食品配方设计的理论依据 原料配伍情况着手, 介绍保健食品配 方现状; 综述相关法律法规, 分析总结了配方审评原则 依据及要点 结 论: 中医养生保健理论是指导中国保健食品研发最具影响力的基础理论
130 36 4 260 1. 1 1926 5 1 1935 6 1940 106 13 17 20 20 635 6 3 7 400 10 80 8 1 1 1 1929 1937 1933 1928 1941 1940 1934 1938 ~ 1944 1945 ~ 1946 1929 193
36 2 2015 129 ~ 141 The Chinese Journal for the History of Science and Technology Vol. 36 No. 2 2015 530006 210095 - - N092 S-092 A 1673-1441 2015 02-0129-13 1 2 1 1932 1937 3 17 2015-02-13 2015-03-13
Thesis for the Master degree in Engineering Research on Negative Pressure Wave Simulation and Signal Processing of Fluid-Conveying Pipeline Leak Candi
U17 10220 UDC624 Thesis for the Master degree in Engineering Research on Negative Pressure Wave Simulation and Signal Processing of Fluid-Conveying Pipeline Leak Candidate:Chen Hao Tutor: Xue Jinghong
Newcomer-Thesis
Chinese Travel Agencies & The Internet Age: An Analysis of the Adoption of Internet Tourism in Chengdu, China Thesis Presented in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree Master of Arts in
p
49 2 Vol 49 No 2 2016 3 Journal of Jiangxi Normal University Social Sciences Mar 2016 200042 341000 1936 1949 K262 9 A 1000-579 2016 02-0136 - 13 On the Salaries of Staffs in County Judicial Department
第 33 卷 第 2 期 2010 年 4 月 - 149 - 脱 蛋 白 较 好 的 方 法 是 Sevag 法, 它 是 根 据 蛋 白 质 在 氯 仿 等 有 机 溶 剂 中 变 性 的 特 点, 使 蛋 白 质 变 性 成 胶 状, 此 法 条 件 温 和, 可 避 免 多 糖 的 降 解
- 148 - Drug Evaluation Research Vol.33 No.2 April 2010 植 物 多 糖 的 研 究 进 展 陶 遵 威 1, 郑 夺 1, 邸 明 磊 2, 单 晓 菊 1 天 津 市 医 药 科 学 研 究 所, 天 津 300020; 2 天 津 中 医 药 大 学, 天 津 300073 2 摘 要 多 糖 是 由 单 糖 连 接 而 成 的 多 聚 物,
黑面琵鷺2015
PG10402-0124 104-01-01 104 年 度 台 江 國 家 公 園 黑 面 琵 鷺 族 群 生 態 研 究 及 其 棲 地 經 營 管 理 計 畫 台 江 國 家 公 園 管 理 處 委 託 研 究 報 告 (104 年 ) ( 本 報 告 內 容 及 建 議, 純 屬 研 究 小 組 意 見, 不 代 表 本 機 關 意 見 ) 中 華 民 國 104 年 12 月 PG10402-0124
be invested on the desilting of water sources and to paved canals with cement mortar while drinking water project can focus on the improvement of wate
2011 9 100101 101 3 2007 2000 10 F303 A 1002-9753 2011 09-0030 - 11 Trends on Public Infrastructure and Public Investment Priority in Rural China LUO Ren - fu ZHANG Lin - xiu ZHAO Qi - ran HUANG Ji - kun
. 3. MOOC 2006 MOOC Automated Text Marker 2014 e-rater Yigal et al MOOC Coursera Edx 97
23 3 2017 6 Open Education Research Vol. 23 No. 3 Jun. 2017 1 2 1 2 1. 100875 2. 100875 PPT G434 A 1007-2179 2017 03-0096-09 Coursera Edx MOOC 100 2 3- social network services SNS 4 2008 2009 2017-03-
蒋 哲等 基于 CVM 的有机农业认知程度和消费意愿研究 201 (P 0.000). On the basis of these results, enhancing publicity, pricing reasonably, focusing on high- income groups ar
中国农学通报 2016,32(5):200-204 Chinese Agricultural Science Bulletin 基于 CVM 的有机农业认知程度和消费意愿研究 以江西省居民为例 蒋 哲 1 朱 波 1 田 媛 1 梁 超 1 刘章勇 1 陈 阜 1,2 2 1 长江大学农学院 湖北荆州 434025 中国农业大学农学与生物技术学院 北京 100193 摘 要 为探讨参与者对有机农业的认知程度
谢禄山 等 油桐种子 FAD2 基因全长 cdna 序列分析 2 油 桐 Vernicia fordii 是 我 国 特 有 经 济 林 木 又 名 三 年 桐 光 桐 桐 籽 树 与 油 茶 Camellia oleifera 核桃 Juglans regia 乌桕 Triadica sebife
第 30 卷 第 2 期 2012 年 6 月 经 济 林 研 究 Nonwood Forest Research Vol. 30 No.2 Jun. 2012 油桐种子 FAD2 基因全长 cdna 序列分析 谢禄山 a,b 谭晓风 a,c 张 琳 a,c 龙洪旭 a 中南林业科技大学 a. 经济林育种与栽培国家林业局重点实验室 b. 风景园林学院 c. 林学院 湖南 长沙 410004 摘 要
Public Projects A Thesis Submitted to Department of Construction Engineering National Kaohsiung First University of Science and Technology In Partial
Public Projects A Thesis Submitted to Department of Construction Engineering National Kaohsiung First University of Science and Technology In Partial Fulfillment of the Requirements For the Degree of Master
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中 草 药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 44 卷 第 8 期 2013 年 4 月 989 养 阴 清 肺 糖 浆 指 纹 图 谱 研 究 1, 姜 姗 2, 冯 丽 君 2, 孔 慧 2, 曲 昌 海 2, 尹 兴 斌 2, 倪 健 1. 北 京 中 医 药 大 学 教 务 处, 北 京 100029 2. 北 京 中 医 药 大 学 中 药 学
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20 1 2014 2 Open Education Research Vol. 20 No. 1 Feb. 2014 1 2 1. 100875 2. - 100875 G434 A 1007-2179 2013 06-0100 - 11 10 2013 2013 Microlecture Minicourse Microlesson Microlecture A Le Roy A. McGrew
211 better than those in the control group, with significant difference between two groups (P < 0.05). The ocular hypertension of patients in the cont
210 毛 果 芸 香 碱 联 合 拉 坦 前 列 素 治 疗 原 发 性 急 性 闭 角 型 青 光 眼 的 疗 效 观 察 符 元 党 1, 郑 振 优 2, 林 再 雄 2, 周 吉 良 1. 昌 江 黎 族 自 治 县 中 西 医 结 合 医 院, 海 南 昌 江 572700 2. 海 南 医 学 院 附 属 医 院 眼 科, 海 南 海 口 570100 1 摘 要 : 目 的 探 讨
1 1. M J M M J M J M M J
2018 3 40 2 Modern Law Science Mar. 2018 Vol. 40 No. 2 1001-2397 2018 02-0041 - 16 100872 DF092 A DOI 10. 3969/j. issn. 1001-2397. 2018. 02. 03!"# 1 2017-12 - 05 2017 17CFX006 1. 1982 M. 1997 73-146 216-244.
600 现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 were significantly decreased, but the levels of IL-12 in two groups were significantly increa
现 代 药 物 与 临 床 Drugs & Clinic 第 31 卷 第 5 期 2016 年 5 月 599 喘 可 治 注 射 液 联 合 细 辛 脑 注 射 液 治 疗 小 儿 毛 细 支 气 管 炎 的 临 床 研 究 唐 辉 英, 佘 定 平, 马 颐 娇 深 圳 市 儿 童 医 院 呼 吸 科, 广 东 深 圳 518026 摘 要 : 目 的 探 讨 喘 可 治 注 射 液 联 合
1. 2. 3. 1 4. 5. 2 Session VI Evolution of Narrative singing in Nanguan Music over Times and Places Lin Po-chi Taipei National University of the Arts, Taiwan Abstract Nanguan music has been circulated
:1949, 1936, 1713 %, 63 % (, 1957, 5 ), :?,,,,,, (,1999, 329 ),,,,,,,,,, ( ) ; ( ), 1945,,,,,,,,, 100, 1952,,,,,, ,, :,,, 1928,,,,, (,1984, 109
2006 9 1949 3 : 1949 2005, : 1949 1978, ; 1979 1997, ; 1998 2005,,, :,,, 1949, :, ;,,,, 50, 1952 1957 ; ; 60 ; 1978 ; 2003,,,,,,, 1953 1978 1953 1978,,,, 100,,,,, 3,, :100836, :wulijjs @263. net ;,, :
50 2011, Vol. 32, No. 18 食 品 科 学 工 艺 技 术 对 象, 立 足 改 善 产 品 耐 煮 性 和 食 用 品 质, 在 已 有 单 螺 杆 挤 压 的 工 艺 参 数 方 面 的 基 础 上, 适 当 添 加 对 人 体 有 利 又 能 改 善 产 品 食 用 品
49 熊 善 波 1, 张 志 清 1, *, 李 远 志 2, 姚 艳 艳 1 (1. 四 川 农 业 大 学 食 品 学 院, 四 川 雅 安 625014;2. 重 庆 博 食 米 业 有 限 公 司, 重 庆 402660) 以 米 粉 为 主 要 原 料, 通 过 单 螺 杆 挤 压 机 生 产 工 程 重 组 米 在 单 因 素 试 验 基 础 上, 通 过 对 工 程 重 组 米 生
亚临界大容量电站锅炉过热器系统阻力
能 源 研 究 与 信 息 第 28 卷 第 1 期 Energy Research and Information Vol. 28 No. 1 2012 文 章 编 号 : 1008-8857(2012)01-0001-06 我 国 地 源 热 泵 相 关 技 术 专 利 综 合 分 析 焦 文 静, 戴 传 山 ( 天 津 大 学 机 械 学 院, 天 津 300072) 摘 要 : 地 源 热
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不 同 人 群 对 护 理 硕 士 专 业 学 位 能 力 培 养 和 课 程 设 置 认 知 的 比 较 研 究 姚 雅 青 王 爱 敏 李 茜 茜 刘 钰 [ 摘 要 ] 目 的 : 了 解 护 理 专 家 及 硕 士 研 究 生 主 要 生 源 对 专 业 学 位 研 究 生 能 力 培 养 课 程 设 置 和 教 学 方 法 的 认 知 及 差 异 方 法 : 采 用 问 卷 调 查 结 合
48 5 ( Pinctada) ( P. fucata ), 3 [ 7 ] ( P. maxima ) ( P. albina), ( P. margaritifera) ( P. nigra) RAPD, ( P. chemnitzi), ( Pteria penguin) [ 1-2 ] [
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5 6 2 00 9 1 2 South China Fisheries Science Vol. 5, No. 6 Dec., 2009 doi: 10. 3969/ j. issn. 1673-2227. 2009. 06. 009 16S rrna,,, (, 510300) : PCR ( Pinctada fucata) ( P. chemnitzi) ( Pteria penguin)
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网 络 环 境 下 元 认 知 策 略 运 用 的 性 别 差 异 研 究 王 志 茹 ( 湖 北 大 学 外 国 语 学 院, 武 汉 430062) 摘 要 : 研 究 以 问 卷 的 形 式 对 参 加 网 络 英 语 课 程 学 习 的 520 名 大 学 生 的 元 认 知 策 略 使 用 中 的 性 别 差 异 进 行 调 查 研 究 采 用 独 立 样 本 T 检 验 对 性 别 差
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5 10 15 20 25 BP 神 经 网 络 在 中 国 创 业 板 企 业 成 长 性 预 测 研 究 ** 孙 静 稳, 刘 金 平 ( 中 国 矿 业 大 学 管 理 学 院, 江 苏 徐 州 221116) 摘 要 : 根 据 创 业 板 企 业 的 高 科 技 和 高 成 长 性 特 点, 成 为 金 融 证 券 市 场 热 门 关 注 的 对 象, 其 成 长 性 研 究 是 资 本
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广 西 壮 族 自 治 区 护 理 人 力 资 源 配 置 现 状 及 其 公 平 性 研 究 邹 雄 贝 为 武 黄 芳 苏 惠 李 连 凤 [ 摘 要 ] 目 的 : 通 过 对 2 011 年 广 西 壮 族 自 治 区 3 大 经 济 区 域 14 个 辖 市 护 理 人 力 资 源 的 现 状 及 其 配 置 公 平 性 进 行 分 析, 为 卫 生 行 政 部 门 进 一 步 优 化 护
Prasenjit Duara 3 nation state Northwestern Journal of Ethnology 4 1. A C M J M M
N.W.J.E 1001-5558 2012 02-0115-14 C95 A 1945 N. W. Journal of Ethnology 2012 2 73 2012.No.2 Total No.73 1 2 56 Prasenjit Duara 3 nation state Northwestern Journal of Ethnology 4 1. A C 1945. 2 1905. M.
标题
012 Journal of Library Science in China 嘉 兴 模 式 的 延 伸 与 深 化 : 从 总 分 馆 体 系 到 图 书 馆 服 务 体 系 李 超 平 摘 要 嘉 兴 模 式 包 含 两 个 体 系 : 一 是 以 总 分 馆 为 核 心 的 公 共 图 书 馆 服 务 体 系, 二 是 跨 系 统 的 图 书 馆 服 务 联 盟 体 系 研 究 发 现, 从
南華大學數位論文
南 華 大 學 ( 文 學 所 ) 碩 士 論 文 論 文 題 目 ( 陳 千 武 小 說 活 著 回 來 及 其 相 關 事 例 研 究 ) 論 文 題 目 (Chen Chien Wu Return Alive And Some Research About It) 研 究 生 : 朱 妍 淩 指 導 教 授 : 林 葉 連 中 華 民 國 一 0 一 年 6 月 8 日 陳 千 武 小 說
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137 黃 永 寬 國 立 體 育 學 院 本 研 究 的 目 的 是 了 解 幼 兒 運 動 遊 戲 課 程 在 幼 稚 園 實 施 的 現 況, 並 進 一 步 分 析 北 中 南 三 區 實 施 現 況 差 異 情 形 及 幼 稚 園 教 師 對 幼 兒 運 動 遊 戲 課 程 的 認 知 以 355 名 幼 稚 園 教 師 為 研 究 對 象 研 究 工 具 為 自 編 幼 兒 運 動 遊
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EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 分 期 的 关 系 蔡 永 林, 郑 裕 明, 成 积 儒, 李 军, 莫 永 坤, 钟 青 燕 ( 广 西 梧 州 市 红 十 字 会 医 院, 梧 州 市 肿 瘤 防 治 研 究 所, 广 西 梧 州 543002) 摘 要 : 目 的 探 讨 EB 病 毒 Rta/IgG 抗 体 与 鼻 咽 癌 临 床 分 期 的 关 系 方 法 用 酶
文章
农 学 学 报 2014,4(11):80-84 Journal of Agriculture www.caaj.org 海 带 属 配 子 体 DNA 提 取 及 ISSR-PCR 体 系 优 化 李 言, 崔 翠 菊, 罗 世 菊, 李 晓 捷, 赵 聚 萍, 赛 珊, 钱 瑞, 武 瑞 娜 ( 山 东 东 方 海 洋 科 技 股 份 有 限 公 司 / 国 家 海 藻 工 程 技 术 研 究
142 () Fig. 2 Tracks of typhoon 35 m/ s.,. NASA QuikSCA T L3 (10 m ),, km, 25 km,20, 2 m/ s (320 m/ s) 10 %(2030 m/ s)., ()
46 1 () Vol. 46 No. 1 2007 1 Journal of Xiamen University (Nat ural Science) Jan. 2007 1,2, 1,2 3, 2, 2 (1.,2. ( ), 361005) : 19992005 QuikSCA T,.,,,. ( > 10 m/ s) ()..,. : ; ;; ;QuikSCA T : P 444 :A :043820479
南華大學數位論文
Modern Dance and Cultural Identity A Study on Contemporary Indigenous Choreographers in Taiwan Modern Dance and Cultural Identity A Study on Contemporary Indigenous Choreographers in Taiwan Chen Yang-Wei
标题
第 34 卷 摇 第 2 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015 年 2 月 情 摇 报 摇 杂 摇 志 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 JOURNAL OF INTELLIGENCE Vol. 34 摇 No. 2 Feb. 摇 2015 * 科 学 计 量 学 在 技 术 预 见 中 的 应 用 研 究 以 新 能 源 汽 车 产 业 为 例 梁 摇
20-25%,
2011.19 笮 1929 1957 / 361005-8 - 20-25%, http://www.hedb.xmu.edu.cn 1 2000-12000 3500-20000 20 80 4628 1000 600 300-9 - 1 / 3 4 2 1800-4500 2800-20000 1800-20000 3 P
論文集29-1_前6P.indd
土木史研究論文集 Vol.29 2010 年 * ** Abstract Fukuchiyama Line, which locates in suburban of Osaka Megalopolis, has performed a part of Japanese trunk railway network. Because it was chosen as a national railway
4期
中 国 农 学 通 报 2013,29(04):39-43 Chinese Agricultural Science Bulletin 中 药 荆 芥 最 新 研 究 进 展 1,2 1,2 赵 立 子, 魏 建 和 ( 1 北 京 协 和 医 学 院 药 用 植 物 研 究 所, 北 京 100193; 2 中 草 药 物 质 基 础 与 资 源 利 用 教 育 部 重 点 实 验 室, 北 京
[1] Nielsen [2]. Richardson [3] Baldock [4] 0.22 mm 0.32 mm Richardson Zaki. [5-6] mm [7] 1 mm. [8] [9] 5 mm 50 mm [10] [11] [12] -- 40% 50%
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38 2 2016 4 -- 1,2, 100190, 100083 065007 -- 0.25 mm 2.0 mm d 10 = 0.044 mm 640 3 300. Richardson--Zaki,,, O359 A doi 10.6052/1000-0879-15-230 EXPERIMENTAL STUDY OF FLUID-SOLID TWO-PHASE FLOW IN A VERTICAL
31 17 www. watergasheat. com km 2 17 km 15 km hm % mm Fig. 1 Technical route of p
31 17 215 9 CHINA WATER & WASTEWATER Vol. 31 No. 17 Sep. 215 < > 232 SUSTAIN BMP SUSTAIN TU992 C 1-462 215 17-111 - 8 Planning and Design of Sponge City Case Study of Beijing Yongding River Ecological
111 OF
Southwest Associated University and Middle School Teacher Training in Yunnan Wen Liming National 8 1938 1939 OF Abstract: As the largest university in China during the war with Japan, the National Southwest
, GC/MS ph GC/MS I
S00017052 O O , GC/MS ph GC/MS I Abstract Drug abuse is a serious issue throughout the world. Amphetamine-type stimulants (ATS) are substances frequently used by drug abusers. There are significant needs
标题
环 球 中 医 药 2016 年 5 月 第 9 卷 第 5 期 摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两 种 电 针 对 脊 髓 损 伤 14 天 后 大 鼠 运 动 功 能 神 经 元 及 MEK2 p 鄄 ERK1 表 达 的 影 响 论 著 宋 良 玉 摇 吕 威 摇 景 泉 凯 摇 莫 雨
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2006, Vol. 27, No. 01 263 周 建 新 ( 南 京 财 经 大 学 江 苏 省 粮 油 品 质 控 制 及 深 加 工 技 术 重 点 实 验 室, 江 苏 南 京 210003) : 回 顾 了 近 年 来 国 内 外 开 发 利 用 植 物 源 天 然 食 品 防 腐 剂 的 情 况 和 最 新 研 究 进 展, 分 析 了 目 前 开 发 植 物 源 天 然 食 品 防
2012 2 157 No. 2 2012 Jinan Journal Philosophy and Social Sciences Sum No. 157 100871 I127. 41 A 1000-5072 2012 02-0002 - 10 4 1 1 2 1540 1503 2 2011-06 - 27 1969 1 1985 19 2 3 1997 1998 3 2 34 2 3 1540
21 13 D / 2 10 ig ig 10 d 1. 0 g kg /2 2 β- 5 g kg g kg mg kg - 1 ig ig 24 h 5% 1 2% CMC-Na 2. 5 ml 30
21 13 1 2 1* 2 1. 430065 2. 445000 20 10 5 g kg - 1 5 mg kg - 1 ig 10 d ig HE 1 TFF1 TFF1 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 01 P < 0. 05 R285. 5 doi 10. 13422 /j. cnki. syfjx. 2015130100 A 1005-9903 2015 13-0100-05
幻灯片 1
第 二 章 基 因 工 程 与 食 品 产 业 第 五 节 基 因 工 程 在 食 品 产 业 中 的 应 用 第 五 节 基 因 工 程 在 食 品 产 业 中 的 应 用 一 利 用 基 因 工 程 改 造 食 品 微 生 物 二 利 用 基 因 工 程 改 善 食 品 原 料 的 品 质 三 利 用 基 因 工 程 改 进 食 品 生 产 工 艺 四 利 用 基 因 工 程 生 产 食 品 添
49 0 Journal of Peking University Philosophy and Social Sciences Vol. 49No. Mar. 0 0087 J 0 A 000-599 0 0-009- 470 5 0--0 98 40 0 4 4 4 00 4 0 99 00 00 4 988 540 44 0 7 4 54 8 5 9 6 56 47 瑏瑠 4 5 6 7 8
应 雪 萍 罗 媛 媛 张 永 普 水 404 生 生 物 学 报 28 卷 续表 必 需 氨 基 酸 半 必 需 氨基酸 太湖种群受精卵 温州种群受精卵 温州种群流产卵 Amino acid Fert ilized egg of Taihu Fert ilized eggs of Wenzhou Lost eggs of Wenzhou populat ion population populat
Fig. 1 1 The sketch for forced lead shear damper mm 45 mm 4 mm 200 mm 25 mm 2 mm mm Table 2 The energy dissip
* - 1 1 2 3 1. 100124 2. 100124 3. 210018 - ABAQUS - DOI 10. 13204 /j. gyjz201511033 EXPERIMENTAL STUDY AND THEORETICAL MODEL OF A NEW TYPE OF STEEL-LEAD DAMPING Shen Fei 1 Xue Suduo 1 Peng Lingyun 2 Ye
《中国科学》A、E、G与F小开本版式设计
222 E 2006, 36(2): 222~234 * 1** 1,2 1,2 1,2 1,2 3 3 1 1 1,2 (1., 100080; 2., 100039; 3., 200031),. ;,,.. 20 90 (human genome project, HGP), ; HGP 2003, 21. (proteomics) ; (computational proteomics),,,
Microsoft Word - 29李天星1085-1092.doc
生 态 环 境 学 报 2013, 22(6): 1085-1092 Ecology and Environmental Sciences http://www.jeesci.com E-mail: editor@jeesci.com 国 内 外 可 持 续 发 展 指 标 体 系 研 究 进 展 李 天 星 楚 雄 师 范 学 院 化 学 与 生 命 科 学 系, 云 南 楚 雄 675000 摘
金 鹏 等 体 育 锻 炼 缓 解 公 务 员 心 理 压 力 相 关 量 表 的 编 制 及 常 模 的 建 立 89 此, 本 文 从 探 索 性 研 究 入 手, 对 体 育 锻 炼 缓 解 公 务 员 心 理 压 力 展 开 研 究, 尝 试 编 制 一 个 基 于 本 土 化, 具 有 良
天津体育学院学报 研究报道 88~ 88 ~92 Short Comunications 体育锻炼缓解公务员心理压力相关量表的编制及常模的建立 金 摘要 鹏 1 刘 慧2 以体育锻炼促进心理健康理论为依据 在前期访谈和问卷调查的基础上 对体育锻炼缓解公务员心理压力问题进行了研究 结果表明 体育 锻炼缓解公务员心理压力量表 的结构由 4 个维度构成 可累计解释总方差的 58.319% 构成 4 个因子的题项分布合理
新能源汽车蓝皮书
Reprint UCD-ITS-RP-16-23 A Comparison of Plug-in Electric Vehicle Markets Between China and the U.S. Based on Surveys Chapter in Blue Book of New Energy Vehicles 2016, Social Sciences Academic Press (In
Time Estimation of Occurrence of Diabetes-Related Cardiovascular Complications by Ching-Yuan Hu A thesis submitted in partial fulfillment of the requi
Time Estimation of Occurrence of Diabetes-Related Cardiovascular Complications by Ching-Yuan Hu Master of Science 2011 Institute of Chinese Medical Sciences University of Macau Time Estimation of Occurrence
权 利 要 求 书 1/2 页 1. 一 种 RAMOSA2 多 肽 或 其 编 码 基 因 或 RAMOSA2 多 肽 的 调 节 剂 的 用 途, 用 于 调 节 植 物 株 高 穗 表 型 或 支 梗 长 度 ; 所 述 RAMOSA2 多 肽 选 自 : (a)seq ID NO :2 所
(19) 中 华 人 民 共 和 国 国 家 知 识 产 权 局 (12) 发 明 专 利 申 请 *CN103305524A* (10) 申 请 公 布 号 CN 103305524 A (43) 申 请 公 布 日 2013.09.18 (21) 申 请 号 201210060208.3 (22) 申 请 日 2012.03.08 (71) 申 请 人 中 国 科 学 院 上 海 生 命 科 学
182 第 41 卷 方面发挥了重要作用 因此研究留日物理学生是中 国近现代物理学史研究的一项重要内容 出身 并任翰林院编修 不久 云贵总督李经羲上 奏 要求调其回云南兴办新学 他欣然回滇办学宣 1 统二年( 1910) 他接任云南优级师范学堂监督 兼 专任理化教员 负责筹办云南工矿学堂 并担任第一
2011 年 2 月 第 41 卷第 1 期 Feb 2011 Vol 41 No 1 Journal of Northwest University ( Natural Science Edition) 清末民初留日物理学生及其科学贡献 咏 1 2 3 梅 冯立昇 ( 1 北京科技大学 冶金与材料史研究所 北京 100083; 2 内蒙古师范大学 科学技术史研究院 呼和浩特 010022; 3 清华大学
20
37 92 19 40 19 20 21 1 7 22 1/5 6/30 5/3030 23 24 25 26 1 2 27 1 2 28 29 30 5 8 8 3 31 32 33 34 35 36 37 38 39 A Study Investigating Elementary School Students Concept of the Unit in Fraction in Northern