郭翔等 : 花叶络石组织培养研究 55 重要的意义 1 材料与方法 1 1 试验地自然概况试验地位于东莞市, 地处广东省南部, 珠江口东岸, 东江下游的珠江三角洲 ; 属亚热带季风气候, 长夏无冬, 日照充足, 雨量充沛, 温差小, 季风明显 ; 常受台风暴雨春秋干旱寒露风及冻害的侵袭 1 2

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福非戈
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1 54 林业与环境科学 ForestryandEnvironmentalScience 2016 年 12 月第 32 卷第 6 期花叶络石组织培养研究郭翔秦国权李春辉刘黾 ( 岭南园林股份有限公司, 广东东莞 ) 摘要文章以花叶络石 (Trachelospermumjasminoides Variegatum ) 幼嫩茎段为外植体, 研究了不同消毒时间的外植体消毒效果激素质量浓度配比对腋芽增殖及生根的影响和移栽基质配比, 建立花叶络石快速繁殖体系结果表明 :0 1% 升汞消毒 10min 效果最好, 成活率达 72%; 花叶络石腋芽增殖较好的培养基组合为 MS+BA2 0mg/L+NAA0 05mg/L, 增殖倍数 4 23; 最佳的生根培养基为 1/2MS+IBA0 3mg/L, 生根率达到 97 2%; 花叶络石移栽较优的基质配比为蛭石珍珠岩泥炭 =6 1 3, 成活率达 93% 关键词花叶络石 ; 茎段 ; 组织培养 ; 快速繁殖中图分类号 :S723 3 文献标识码 :A 文章编号 : (2016) InVitroPropagationofTrachelospermumjasminoides Variegatum GUOXiang QINGuoquan LIChunhui LIUMian (LingnanLandscapeCo,Ltd,Dongguan,Guangdong532125,China,) Abstract TheaxilarybudsofTrachelospermumjasminoides Variegatum wereselectedastheresearchobject inthisstudy.theefectsofexplantsdisinfectedatdiferentdisinfectiontime,theefectsofhormoneconcentration onaxilarybudproliferationandrootingandthetransplantingmedium werestudiedinordertoestabilisharapid propagationsystem.theresultsshowedthatthebeststerilizationtimeof0 1% HgCl 2 was10minutes,therateof survivalreached72%.theoptimum multiplicationmedium wasms+ba2 0mg/L+NAA0 05mg/L, the multiplicationratewas4 23.Thebestrootingmediumwas1/2MS+NAA0 3mg/L,andtherootingratereached 97 2%.Theoptimaltransplantationmediumwasvermiculite perlite peat=6 1 3andthesurvivalratewas93%. Keywords Trachelospermumjasminoides Variegatum ;nodalexplants;tisueculture;rapidpropagation 随着城市化进程的发展和居民物质生活的提高, 人们对城市绿化有了更高的需求, 高层建筑交通道路等立体绿化已成为改善城市景观及居民生活环境的重要手段因此, 攀援和垂悬式植物越来越受人们的青睐 [1 2] 花叶络石(Trachelospermum jasminoides Variegatum ) 具有极强的吸附和缠绕攀援能力, 是立体绿化的良好材料 [3] 其形态绚丽多姿, 叶色艳丽多变, 生长旺盛抗逆性强, 有独特的盆栽地被和垂直绿化等园林应用功能和生态防护价值, 具有十分广阔的市场前景 [4 6] 花叶络石常用扦插及压条方式繁育种苗, 但繁殖系数低, 繁苗速度慢, 不能满足生产需求, 且多代扦插易造成性状退化, 组织培养技术能保持母本优良性状, 且不受季节影响, 繁殖系数高, 生产周期短 [7 9] 因此, 研究花叶络石组织培养繁殖技术各个阶段的生长激素配比, 对其良种繁殖及工厂化生产具有十分基金项目 : 广东省农业领域科技计划资助项目园林彩叶植物引种驯化与快繁技术研究 (2013B ) 第一作者 : 郭翔 (1991 ), 女, 助理工程师, 主要从事园林植物资源与应用研究,E mail: @qq com 通信作者 : 刘黾 (1955 ), 男, 高级工程师, 主要从事园林绿化技术研究,E mail:liumian400@163 com

2 郭翔等 : 花叶络石组织培养研究 55 重要的意义 1 材料与方法 1 1 试验地自然概况试验地位于东莞市, 地处广东省南部, 珠江口东岸, 东江下游的珠江三角洲 ; 属亚热带季风气候, 长夏无冬, 日照充足, 雨量充沛, 温差小, 季风明显 ; 常受台风暴雨春秋干旱寒露风及冻害的侵袭 1 2 试验材料试验材料引种自杭州萧山欧凯园艺场, 外植体选取生长健壮且无病虫害的花叶络石当年生幼嫩茎段 1 3 试验方法外植体灭菌幼嫩茎段去除叶片, 用自来水将表面冲洗干净,1% 洗洁精水浸泡 10min 后用流动的清水冲洗 20min 在超净工作台上,0 1% 升汞 min, 无菌水冲洗 4~5 次, 用消过毒的刀切去与升汞接触的茎段两端, 保留 0 5~1cm( 含腋芽 ), 将其接到培养基 (MS+ BA2 0mg/L+NAA0 1mg/L) 上每 30 个外植体,15d 后统计污染率死亡率和成活率继代培养当诱导的不定芽长至 1~2cm 时, 将其从茎段上剪下, 接种到不同质量浓度的 BA NAA( 广州市林国化肥有限公司生产 ) 组合培养基中每 20 个芽, 重复 3 次,25d 后统计增殖倍数, 并观察芽苗的生长状况表 1 不同质量浓度的 BA 与 NAA 配比的继代培养基 mg L -1 基本培养基 BA 质量浓度 NAA 质量浓度 1 MS MS MS MS MS MS 生根培养当芽长至 2~3cm 时, 切取芽枝接入到不同质量浓度的 IBA 和 NAA( 广州市林国化肥有限公司生产 ) 培养基中进行生根培养每处理 15 根, 重复 3 次,25d 后统计生根率根数根长指标, 并观察苗的生长状况表 2 不同质量浓度的 IBA 与 NAA 配比的生根培养基 mg L -1 基本培养基 IBA 质量浓度 NAA 质量浓度 1 1/2MS /2MS /2MS /2MS /2MS /2MS 以 MS 为基本培养基, 添加琼脂 6g/L, 蔗糖 30g/L,pH5 8 培养温度(25±2), 光照时间 12h/d, 光照强度 1500~2000lx 的培养条件炼苗及移栽将组培瓶移至棚内炼苗 5~7 d, 然后打开瓶盖 1~2d 将苗从瓶中取出并洗净培养基, 用千分之一浓度的多菌灵溶液浸泡根部 3 min, 最后种植到不同体积比的蛭石珍珠岩和泥炭基质中,10d 后统计成活率表 3 不同体积比的移栽基质蛭石珍珠岩泥炭数据试验的基础数据采用 MicrosoftExcel2010 整理, 采用 SPSS22 0 分析软件作系统分析, 用单因素方差分析 (one wayanova) 和 Duncan 多重比较对数据进行显著性分析 2 结果与分析 2 1 外植体灭菌消毒时间对外植体的灭菌试验结果表明 ( 表 4), 随着灭菌时间的增加, 外植体的污染率下降, 但部分外植体失去活性, 最终死亡, 不能诱导出

林业与环境科学年月第卷第期芽这可能是由于升汞对外植体有毒性作用结合污染率与死亡率综合分析以升汞消毒ｍｉｎ效果最好成活率达到继代培养继代培养ｄ后开始出芽ｄ后统计结果并分析由表可知在继代培养过程中花叶络石的增殖倍数随ＢＡ质量浓度的增加呈上升趋势当表花叶络石不同消毒时间污染率比较时间ｍｉｎ污染率ＢＡ质量浓度为ｍｇＬ时

3 林业与环境科学年月第卷第期芽这可能是由于升汞对外植体有毒性作用结合污染率与死亡率综合分析以升汞消毒ｍｉｎ效果最好成活率达到继代培养继代培养ｄ后开始出芽ｄ后统计结果并分析由表可知在继代培养过程中花叶络石的增殖倍数随ＢＡ质量浓度的增加呈上升趋势当表花叶络石不同消毒时间污染率比较时间ｍｉｎ污染率ＢＡ质量浓度为ｍｇＬ时增殖倍数显著死亡率成活率小于Ｐ当ＢＡ质量浓度为ｍｇＬ时增殖倍数最高为但芽基愈伤组织多而明显不利于芽的生长图因此ＢＡ质ＬＮＡＡ质量浓度为ｍｇＬ量浓度为ｍｇ时增殖效果最好增殖倍数为注外植体接种数为个培养时间ｄ表激素不同对花叶络石腋芽增殖的影响Ｌ增殖倍数苗生长状况ＭＳＢＡＮＡＡ ± ＭＳＢＡＮＡＡ ± ＭＳＢＡＮＡＡ ± ｂＭＳＢＡＮＡＡ ± ｂＭＳＢＡＮＡＡ ± ａ无生根现象长势较好愈伤多ＭＳＢＡＮＡＡ ± ａ无生根现象长势较好愈伤多注表中数据为平均值 ±标准差同列不同小写字母表示差异显著Ｐ接种数为个培养时间为ｄ生根培养生根培养ｄ开始长出白色小根ｄ后统计生根表现表结果表明ＩＢＡ对花叶络石生根诱导更有利在号培养基中生根率为而号培养基生根率较低仅为其中较其他处理显著促进苗的生根和根长生长Ｐ平均根数为条平均根长ｍ当注图从左到右分别为ＭＳＢＡｍｇＬＮＡＡｍｇＬ添加ＮＡＡ时苗基部出现愈伤组织不利于苗生和ＭＳＢＡｍｇＬＮＡＡｍｇＬ根从生根率平均根数和平均根长综合分析ＭＳＩＢＡｍｇＬ为花叶络石最佳生根培养基图继代培养ｄ花叶络石生长情况表不同ｄ对花叶络石生根的影响Ｌ生根率ＭＳＩＢＡ ± ｂ ± ｂ根细长基部无愈伤ＭＳＩＢＡ ± ａ ± ａ根细长基部无愈伤ＭＳＮＡＡ ± ｂ ± ｂ根粗基部少愈伤平均根数条平均根长ｍ根生长状况

郭翔等花叶络石组织培养研究续上表Ｌ生根率平均根数平均根长ｍ根生长状况ＭＳＮＡＡ ± ｄ ± 根粗基部多愈伤ＭＳＩＢＡＮＡＡ ± ｂ ± ｂ根有粗有细基部少愈伤ＭＳＩＢＡＮＡＡ ± ｄ ± ｂ根有粗有细基部少愈伤注表中数据为平均值 ±标准差同列不同小写字母表示差异显著Ｐ接种数为个培养时间为ｄ注移栽基质为蛭石珍珠岩泥炭

ｄ的增殖倍数为综合芽的增殖效果较好生根培养ｄ根长至ｍ生根率达到苗的长势以及根的诱导情况可知适合花叶络石生以上时将培养瓶置于温室大棚中炼苗避免根的培养基配方是ＭＳＩＢＡｍｇＬｄ生ｄ后将组阳光直射遮光率为根率达到平均根数为平均根长为培苗取出用流水洗干净附着在根部的培养基然ｍ花叶络石生根苗在移栽过程中注意保后移栽到花盆中

4 郭翔等花叶络石组织培养研究续上表Ｌ生根率平均根数平均根长ｍ根生长状况ＭＳＮＡＡ ± ｄ ± 根粗基部多愈伤ＭＳＩＢＡＮＡＡ ± ｂ ± ｂ根有粗有细基部少愈伤ＭＳＩＢＡＮＡＡ ± ｄ ± ｂ根有粗有细基部少愈伤注表中数据为平均值 ±标准差同列不同小写字母表示差异显著Ｐ接种数为个培养时间为ｄ注移栽基质为蛭石珍珠岩泥炭移栽时间ｄ图花叶络石移栽生长情况结论与讨论试验表明以升汞花叶络石幼嫩茎注图从左到右分别为ＭＳＩＢＡｍｇＬ和ＭＳｎ的灭菌效果最理想成活率达段外植体ｍｉＩＢＡｍｇＬ到图生根培养ｄ花叶络石长势及根的生长状况综合组培苗的生长状况以及增殖倍数可知培ｍｇＬＮＡＡｍｇＬ对茎段腋养基ＭＳＢＡ炼苗及移栽ｄ的增殖倍数为综合芽的增殖效果较好生根培养ｄ根长至ｍ生根率达到苗的长势以及根的诱导情况可知适合花叶络石生以上时将培养瓶置于温室大棚中炼苗避免根的培养基配方是ＭＳＩＢＡｍｇＬｄ生ｄ后将组阳光直射遮光率为根率达到平均根数为平均根长为培苗取出用流水洗干净附着在根部的培养基然ｍ花叶络石生根苗在移栽过程中注意保后移栽到花盆中栽后第次浇透水期间注意保持湿度和温度较好的基质配比为蛭石珍珠岩泥湿表结果表明在外界环境相同的条件下花炭成活率可达叶络石移栽较优的基质配比为蛭石珍珠岩泥炭成活率为以往的试验中常采用乙醇消毒因酒精的穿透能力强易伤害外植体细胞因此在该试验中直接用升汞进行灭菌避免酒精对外植体表不同基质对花叶络石试管苗移栽成活的影响的伤害降低其死亡率有效避免因清洗次数过少蛭石珍珠岩泥炭成活率等造成的操作污染本试验方案设计在继代培养和生根试验在培养基配方设置多个激素质量浓度梯度提高试验的科学性和数据的可靠性在继代培养过程中ＢＡ对花叶络石腋芽增殖倍数的影响随着其质量浓度的增加呈上升趋势但当其质量浓度达到ｍｇＬ时芽基愈伤组织多

5 58 林业与环境科学 2016 年 12 月第 32 卷第 6 期而明显, 不利于芽的生长与低浓度的 NAA 配合使用时, 随着 BA 质量浓度的增加, 增殖倍数增加, 当质量浓度超过一定值时, 不利于芽的生长, [10] 这与高燕会等对花叶络石组织培养的研究结果 [11] 相同 ; 与李峰卿等对黄金锦络石 (T asiaticum Ougonnishiki ) 研究结果类似生根试验中, 当 NAA 质量浓度为 0 3mg/L 时, 苗基部出现较多愈伤当 NAA 超过一定值时, 会诱导苗基部产生愈伤组织, 对苗生根不利, 这与李 [12] 永欣等对金叶络石研究结论相同另外, 在花叶络石生根培养过程中, 单独使用 IBA 的苗根细长, 而单独使用 NAA 的苗根粗短, 同时添加 IBA 和 NAA 的苗根生长状况则介于中间上述所产生的组培苗根系发生特征不同, 是否会影响后续的移栽和生长状况, 有待于进一步观察和探讨在组织培养以及移栽初期, 花叶络石幼苗叶片缺乏粉红叶和纯白色叶, 而在移栽后期, 花叶络石自身形成由红叶粉红叶纯白叶斑叶和绿叶的色彩群实际生产中, 花叶络石喜阳耐荫阳光充足时色彩斑斓, 而光照不充足时为绿色原因可能是光照强度较高时, 植株合成花色素苷能力强, 使叶片呈现明显的色彩 [13] 参考文献培选择试验 [J]. 江苏林业科技,2002,29(4): [2] 马跃, 王红娟. 攀缘植物及其在城市中的应用 [J]. 西南园艺,2005,33(2): [3] 杨锋利, 杜保国, 罗国荣, 等. 花叶络石愈伤组织培养初探 [J]. 北方园艺,2010(23): [4] 韩旭. 花叶络石开发前景预测 [J]. 中国花卉报,2005 (6):1 2. [5] 陈建霞, 斯桂龙. 花叶络石的栽培特性与景观应用特点 [J]. 安徽农学通报,2012,18(12): [6] 陈旭君, 林于絰, 潘文龙, 等. 花叶络石的耐荫性试验和应用 [J]. 华东森林经理,2006,20(2): [7] 李浚明. 植物组织培养教程 [M]. 北京 : 中国农业大学出版社,2000: [8] 祝泽刚, 俞振良, 陈旭, 等. 花叶络石扦插快繁技术 [J]. 农技服务,2009,26(3):128. [9] 陈黎. 观赏植物的组织培养繁殖技术研究综述 [J]. 黄山学院学报,2005,7(3): [10] 高燕会, 童再康, 黄华宏, 等. 花叶络石的组织培养 [J]. 浙江林学院学报,2006,23(6): [11] 李峰卿, 曾满生, 姚甲宝, 等. 黄金锦络石组织培养快繁技术体系的建立 [J]. 江西农业学报,2012,24(1): [12] 李永欣, 王晓明, 曾慧杰, 等. 金叶络石组培快繁技术体系的建立 [J]. 中国农学通报,2010,26(12): [13] PHUONGN,VALERIANOD.Theroleoflightonfoliage colourdevelopmentincoleus(solenostemonscutelarioides (L.)Codd)[J].PlantPhysiologyandBiochemistry,2009 (47): [1] 李玉巧, 吴纲, 梁珍海, 等. 立体绿化花卉优良品种栽

福建农业学报材料与方法外植体无菌株系的建立启动培养增殖培养继代培养生根培养瘤状苗的细胞学观察

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