期 冯 将等 猪源大肠杆菌脂多糖的提取 纯化及活性分析 * 4/1/%7).70-/1/-%,' ,%%9/ /9.,)7 %0/%7%0 ','0'47,', )7% % 0 ' 07%'0 % 04'77/%')1,%08 0$*."3 # ## 8,'0 ' ).74 '0,)
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- 蚁耿 范
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1 中国畜牧兽医! " # 猪源大肠杆菌脂多糖的提取 纯化及活性分析 冯 将 王玉坤 魏玉好 易 琼 王 鲁 鲜思美 贵州大学动物科学学院 贵阳 贵州大学生化工程中心 贵阳 摘 要 为了从猪源大肠杆菌中获得纯度高 产率高的脂多糖,)),-8'/'7%8 并评价其毒力 本试验采集仔猪腹泻粪便作为病料 进行细菌分离鉴定和 7!"# 鉴定 采用热酚水法提取细菌的 通过!"'8% "'8%# 蛋白酶 5 和醇沉法对 进行纯化 通过苯酚硫酸法 &7'47 法和紫外分光光度法测定 多糖 蛋白及核酸含量 鲎试剂定量法测定其活性 采用小鼠急性毒性试验方法测定小鼠半数致死量! 结果显示 分离获得一株具有高致病性的猪源大肠杆菌 纯化的猪源大肠杆菌 平均产率为 > 其中多糖含量为 > 蛋白含量为 > 核酸含量为 > 主要条带集中在. 范围内 鲎试剂定量法测定其活性为 +1 提取 对小鼠的! 为 1 1 该猪场仔猪腹泻是由致病性大肠杆菌引起 获得其毒力因子 纯度高 产率高 毒力强 这将为临床防制猪大肠杆菌病及 提取纯化提供理论依据 关键词 大肠杆菌 提取纯化 脂多糖 急性毒性试验中图分类号 文献标识码 # 文章编号 * %&))#) );)**""4' '*" -$"( '# % '%$% ")$ (,.$ B #"% & ## 6(! &0 #!3!6(# /"))7%70(0' /1/%7).70-' /1/-%,48,'0%47 3 # ## ' % ',.'0%08 7.,%%%: 7% % 04'77/%')1,%09'8,% 0%'8)'0/,1 ',8' ),%84 9/ /8 %807' 843 # ## 9%7%8,'0%' % 04%# 4.70/%7 7%'807' 4 3 # ## 9'8' ;.7%(- 7!"#% 04 '0 6/%47 0/8807' 43 # #- # 9'88,'0%90/0/%/0)/%,9'0%7 %0/' ).74%(-!"'8% "'8%#)7 0% '8%507%'0 % 0' ', /,)7% )0'0 6/%),-8'/'7%)70% '.,% ' 0% 04).74% 9%7%%0% 0%(-)/%,8.,4.7 ' %0/&7'47 %0/' A ) 088)% 07)/0 %07%0/# 08(' 0 0-' '.0% %',%0/',8%9'8%0%7 '0%(-0' /-),%.8' %( -0%,-8'0%6#%0/' '.0%0: 0-%:)%7 % 0 %0/7% 8)% 0 %,-6/%7%8.,088/9%0/'0'807' 4/1/,-)'0/1%3 # ## 9'88.%884.,,-8,'0%6/%' %7'1%-%,4).74%9'8>0/%)7)70 40/%),-8'/'7% 9'8 >0/%)70% 9'8 >' 0/%.,% ' 9'8>!#$+%,% 07)/7% 88' 8, %780' 8/9%0/'00/%(' 89%7% ',-% 07'0% 0/%7' 1%40. 6/% # (' /%)7%)'7%9'8 +1! 40/%.8%'(', ' 0-9'81 16/%7%8.,087% %',%0/'00/%'77/%')1,%08 0/%4'7 9'8 '.8%(- )'0/1%3 # ## ).74%47 0/8807' 43 # ## /'0/%' ' 0'1%8 收稿日期 ** 基金项目 国家自然科学基金项目 贵州省科技厅 省农科院联合基金项目 黔科合 3 字 贵州省科学技术基金项目 黔科合 3 字 贵州省动物疫病防控与兽医公共卫生保障科技创新人才团队 黔科合人才团队 作者简介 冯 将 ** 男 贵州石阡人 硕士生 研究方向 预防兽医学 + ',4% 1 ' 11 通信作者 鲜思美 * 女 贵州遵义人 博士 副教授 研究方向 兽医公共卫生学 + ',:' 8 %
2 期 冯 将等 猪源大肠杆菌脂多糖的提取 纯化及活性分析 * 4/1/%7).70-/1/-%,' ,%%9/ /9.,)7 %0/%7%0 ','0'47,', )7% % 0 ' 07%'0 % 04'77/%')1,%08 0$*."3 # ## 8,'0 ' ).74 '0,)),-8'/'7%'.0%0: 0-0%80 仔猪大肠杆菌病是一类多发性 致死性肠道传染病 是导致仔猪死亡率高的主要原因 也是猪场中最 为常见的长期困扰养猪业的传染病之一 因其毒力因子 黏附素 定植因子 内毒素 外毒素 类志贺毒素 大肠杆菌素等 不同引起不同的病理过程 内毒素为细胞壁外膜中的脂多糖,)),-8'/'7%8 是主要致病因素之一 主要引起宿主发热 内皮细胞 的损伤 多器官功能衰竭 脓毒症休克甚至死亡 的提取 纯化方法很多 不同提取纯化方法对 的产率 纯度和生物活性有很大影响 目前提取 的热酚水 法 $',' 88** 的苯酚 氯仿 石油醚法 但在 提取过程中存在蛋白 核酸污染 可能影响下游其他研究与应用 为了获得纯度高 产率大 生物活性好的 本试验从临床病料中分离到一株猪源大肠杆菌 采用热酚水法及酶解法对其 进行提取纯化 分析其活性并评价其毒力 这将进一步为该菌 的生物活性和致病机理奠定基础 材料与方法 1 病料采集及试验动物 从贵州省某猪场无菌采集有腹泻症状的病猪粪便和肠道内容物 作为待检病料 级昆明小白鼠 雌雄各半 体重 1 1 购自解放军第三军医大学实验动物中心 1 主要试剂及仪器 肠杆菌科细菌生化鉴定管购自杭州微生物试剂有限公司!!"# '7 %7 购自康为试剂有限公司 "'8%# 购自 $%%9 公司 +$ 购自 #,' 公司 透析袋! 考马斯亮蓝 牛血清白蛋白 & # 和!"'8% 均购自,'7( 公司 凝胶配制试剂盒购自博士德生物公司 " 购自 1 ' 公司 鲎试剂 批号 细菌内毒素检查用水 批号 均购自湛江博康海洋生物有限公司 细菌内毒素标准品 由中国食品药品检定研究院提供 6 6/%7 ', -,%7 温度梯度 仪 $%,! 凝胶成像系统均购自 & ' 公司 冷冻干燥机 '( 7%% 2 % ),.8 购自 '( 公司 细菌内毒素测定仪 型号 &+6 # 购自天津市天大天发科技有限公司 1 引物设计与合成 1 等合成 对大肠杆菌 7!"# 引物 引物序列为 上游引物 =#$#$666 $#66$$ 6 #$ = 下游引物 =6# $ $ 6#66$66# $# 66 = 预期扩增片段长度为 () 引物由上海英骏生物科技有限公司合成 1 病原菌分离鉴定将采集的病料直接涂片 干燥 革兰氏染色 镜检 观察结果 同时接种在普通琼脂培养基上 恒温培养 / 观察菌落生长状况 挑选符合大肠杆菌生长特性的菌落接种于麦康凯琼脂 伊红美蓝琼脂 恒温培养 / 观察结果 再挑取表面光滑 边缘整齐 灰白色 半透明的单个微隆起小菌落 划线接种于肉汤中 在 恒温培养 / 根据培养特性和镜检结果 将分离所得菌株采用肠杆菌科细菌微量生化鉴定管 参照伯杰氏细菌 鉴定手册进行试验 参考文献方法 选择大肠杆菌 7!"# 进行种属鉴定 经鉴定选出的分离菌接种于普通肉汤培养物中 培养 / 调整菌浓度 调整 4 值固定为 取健康 级小鼠 只 雌雄各半 随机分为试验组和对照组 每组 只 试验组腹腔注射培养液 只 对照组腹腔注射灭菌生理盐水 只 观察并记录小鼠发病及死亡情况 1 4, 提取与纯化 * 病原菌 的提取方法参照热酚水法 并进行了改进 将初始 4 值为 过夜培养的菌液转接到 & 培养液中 7 震荡培养至 4 为 然后 7 离心 收集菌体 用磷酸缓冲液洗涤菌体两次 沉淀称取湿重 加入倍体积的去离子水悬起细菌 反复冻融 次 冰上超声 加入等体积 *> 苯酚溶液于 震荡混合 冰上冷却 7 离心 收集上层水相 下层酚相加入等量去离子水重复抽提 次 合并两次水相再加苯酚重复抽提 次 收集所有水相置于透析袋中 流水透析 / 蒸馏水透析 / 每 / 换一次水 经冷冻干燥得到 粗提的样品 取
3 * 中 国 畜 牧 兽 医 卷 的, 6783 )3 复溶 加终浓度为 1 的!"'8% 和 1 "'8%# 消化过夜 而后加入终浓度为 1 的蛋白酶 5 作用 / 加入水饱和酚 混匀 7 离心 取上清液 置于透析袋中蒸馏水透析 / 每 / 换一次水 浓缩透析袋中溶液 加入 倍体积 * > 乙醇 过夜沉淀 7 离心 冷冻干燥称重 保存备用 14, 成分测定 蛋白含量测定 采用 &7'47 法测定蛋白含量 分别取 1 & # 溶液 装入试管 用去离子水溶液补至 分别加入 考马斯亮蓝 摇匀 后用酶标仪检测 4 * 值 重复 次 取平均值绘制标准曲线 另取 样品加入 * 去离子水 按上述方法 检测 4 * 值 重复 次 取平均值 利用标准曲线方程计算出样品蛋白含量 多糖含量测定 采用苯酚 硫酸法测定 糖含量 分别取 1 葡萄糖溶液 装入试管 用去离子水补至 每管加入 > 苯酚溶液 再加入 浓硫酸 摇匀 沸水浴 取出流水冷却至室温 用酶标仪检测 4 * 值 重复 次 取平均值绘制标准曲线 另取 样品加入 * 去离子水 按上述方法 检测 4 * 值 重复 次 取平均值 利用标准曲线方程计算出样品多糖含量 核酸含量测定 利用! 核酸蛋白检 测仪检测纯化的 样品 4 值 并计算其含量 1,,7+% 电泳及银染 参考文献方法 对提取的 进行! #$+ 电泳 电泳结束后将凝胶取出进行银染 染色结束后进行拍照 分析 13 鲎试剂定量法测定 4, 活性 将内毒素标准品稀释成 + 个浓度梯度 内毒素检查用水作空白对照 参照定量法鲎试剂使用说明书操作方法 于细菌内毒素测定仪中自动采集数据 参照说明书所述方法计算出 的活性 1 急性毒性试验评价其毒力 按照改良寇氏法 用预试验确定! 与! 在此剂量区间范围内设置 个剂量组 每个剂量组随机取 只小鼠 雌雄各半 将商品化 与提取的 按不同浓度梯度剂量对小鼠进行腹腔注射给药 按每只小鼠的体重计算给药量 1 求出! 和 * > 可信区间 结 果 1 病原菌分离鉴定结果病料划线在普通琼脂平板上生长出光滑 灰白 湿润 圆形 边缘整齐 稍有隆起的菌落 在麦康凯琼脂平板上形成红色菌落 在伊红美蓝琼脂平板上形成黑色带金属光泽的菌落 经涂片 革兰氏染色 镜检 可见革兰氏阴性 散在或成对存在 两端略显钝圆的中等大小杆菌 图 # 普通琼脂培养基 & 麦康凯培养基 伊红美蓝培养基! 分离株革兰氏染色 # '1'7.,0.7% %. & #.,0.7% %.+ &.,0.7% %.!$7' 80'148,'0% 807' 8 图 分离株菌落形态 *('-*")$ ")" 分离株发酵葡萄糖 棉子糖 山梨醇 木糖 蛋白胨水 赖氨酸结果呈阳性 不发酵侧金盏花醇 硫化氢 苯丙氨酸 葡萄糖磷酸盐 葡磷胨水 枸橼酸盐 尿素 半固体琼脂 鸟氨酸呈阴性 参照伯杰氏细菌鉴定手册 符合大肠杆菌的生化特性 表
4 期 冯 将等 猪源大肠杆菌脂多糖的提取 纯化及活性分析 * 表 生化鉴定结果! / $ $"# )/ -$()$")" 生化试验 结果 生化试验 结果 & /%',0%808 %8.,08 & /%',0%808 %8.,08 硫化氢 3 枸橼酸盐 07'0% 苯丙氨酸 /% -,','% 尿素 7%'8% 葡萄糖酸盐 $,.'0% 半固体 % 8, %. 蛋白胨水 %)0 %9'0%7 葡萄糖 $,. 8% 葡磷胨水 A 赖氨酸 -8 % 鸟氨酸 <7 0/ % 侧金盏花醇 # 0, 棉子糖 '4 8% 木糖 $,. :-,8% 山梨醇 7(0, 阳性 阴性 80 % "%1'0 % 1 病原菌的, 扩增 测序及致病性试验结果 提取菌液!"# 进行 7!"# 扩增 经 > 琼脂糖凝胶电泳分析 得到大小约 () 片段 图 与预期结果相符 回收目的片段进行测序 测序结果与 $% &' 中大肠杆菌序列进行比对 同源性达 **> 以上 即分离株为大肠杆菌 试 验组经腹腔注射菌液后均表现出了明显的临床症状 主要有精神沉郁 弓背 被毛松乱 昏睡等症状 小鼠在 / 陆续死亡 死亡率达 > 空白对照组无异常 病死小鼠肝脏和脾脏肿大 充血 取肝脏分离细菌 鉴定结果为大肠杆菌 由此证明本次分离株为致病性大肠杆菌!!"# '7 %7 阴性对照 7!"#!!"# '7 %7"%1'0 %07, 7!"# 图, 扩增结果 $"# ), /* 14, 提取与纯化结果通过 7 培养 / 收集菌体湿重为 1 提取纯化的 为 1 产率为 > 14, 蛋白含量以 & # 制作标准曲线 其方程式为 -D : D*** 将所测样品的 4 * 平均值代入方程 从标准曲线中得出样品中蛋白浓度为 1 通过计算得出纯化的 中蛋白含量为 > 图
5 * 中 国 畜 牧 兽 医 卷 图, 标准曲线,)# ;$, 1 4, 多糖含量 硫酸 苯酚法测定多糖含量 以 1 葡萄糖为标准品制作标准曲线 其方程式为 -D: D** 将所测样品的 4 * 平均值代入方程 得出多糖浓度为 1 纯化的 中多糖含量为 > 图 图 葡萄糖标准曲线,)# ;$ # "$ 14, 核酸含量! 核酸蛋白检测仪测得核酸浓度为 *1 通过计算得出核酸含量为 > 1,,7+% 电泳和银染结果对猪源大肠杆菌 进行!#$+ 电泳 银染 结果见图 由图可知 提取 纯化的 条带分布在. 之间 且有特异性的 < 抗原指纹条带 表明该菌株的 含有由不同数量的重复性糖单元组成的 < 抗原结构
6 期 冯 将等 猪源大肠杆菌脂多糖的提取 纯化及活性分析 * 蛋白质分子质量标准 1 ' 70% '7 %7 1 ' 图 脂多糖银染图 4' '*" -$.)-" ;$ ") 134, 活性测定结果 以内毒素标准品绘制标准曲线 结果见图 其 次测定样品的平均值代入标准曲线求得样品 活性为 +1 方程式为,16D,1 D* 将 图 内毒素标准曲线,)# ;$$) & 1 急性毒性试验通过腹腔注射染毒 连续观察 1 ' 与提取 腹腔注射小鼠死亡情况见表 根据改良寇氏法计算小鼠腹腔注射染毒! 其 1 '! 为 * 1 1* > 可信区间为 * 1 1 提取! 为 1 1* > 可信区间为 * * 1 1
7 * 中 国 畜 牧 兽 医 卷 表 急性毒性试验小鼠死亡结果! / $ $$ )- #)$) &)*)$") 1 1 剂量!8% 1 1 * 1 ' 讨 论大肠杆菌是自然界普遍存在的一类细菌 除了存在于肠道正常菌群中的大肠杆菌对动物没有致病性外 其他各种血清型大肠杆菌均可导致动物发病 幼龄动物以发生腹泻为主 对成年动物多发生局部感染 严重的发生全身感染形成败血症导致死亡 本试验通过形态 生理生化 7!"# 扩增及序列分析试验证实分离得到一株大肠杆菌 致病性试验证实该大肠杆菌具有极强的致病性 是革兰氏阴性菌细胞膜的重要组成部分 是主要致病因素之一 大剂量 可引起内皮细胞的损伤和屏障功能的改变 导致呼吸道疾病 发热 低血压 脓毒性休克甚至死亡 而微量 能活化单核巨噬细胞系统 促进细胞因子释放 促进补体的活化和抗体的产生 对特异性免疫反应具有调节作用 如抗肿瘤作用 增强机体特异性抵抗力 等 的提取主要有酚水法 酯抽提法 三氯乙酸提取法 水抽提法 吡啶抽提法 酚 氯仿 石油醚法 异丁醇抽提法和! 抽提法 目前国内外报道的主要有 种 三氯乙酸法 酚水法和酚 氯仿 石油醚法 不同的提取纯化方法对 的产率 纯度和生物活性有很大的影响 绳秀珍 等通过酚 氯仿 甲醇法 乙醇 酚水法和传统热酚水法 种不同方法提取海分枝杆菌 腹腔注射大鼠体内比较发现 传统热酚提取的 免疫 原性强于其他两种方法 康洁通过改良热酚水法 超声波处理法和煮沸法 种不同方法提取大肠杆菌 免疫草鱼发现 热酚法提取的 浓度和免疫活性也高于其他两种方法 等于 * 年提出 并由.%70,'7 % 等在此后做了改进 由于酚水法提取的 产量较高 操作简单而 * 被广泛用于 的提取 因此本试验采取酚水法提取猪源大肠杆菌 其产率为 > 高于宋宏 新等 > 刘红亮等 > 的报道 在 提取过程中存在的污染物质影响下游免疫学和生物学试验 潜在的污染物质包括荚膜多 糖 核酸及蛋白 特别是外膜蛋白与 具有高亲 * 和性 为了有效去除污染物质 目前多采用酶解法降解其蛋白和核酸 国内不少试验研究中利用 不溶于乙醇 丙酮 乙醚等有机溶剂的特性使 沉淀 以去除杂质获得低蛋白的 由于无水乙醇化学性质温和且易挥发 不会损坏 提取物的活性 也不会干扰 致病性试验研究 本试验采用 倍 * > 的乙醇 纯化 检测方法有家兔热原试验法 鲎试剂法 免疫学法 生物学法 化学发光法 流式细胞术及高 效液相色谱等方法 但目前而言 鲎试剂法灵敏度高 假阳性少 耗费的试剂量少 且设备简单 试验时间短 为检测内毒素的最好方法 同时银染法也是一种灵敏度极高的染色方法 不仅广泛应用于蛋白质 核酸等的染色 也应用于多糖类物质的染色 是 检测的经典方法 具有高敏感性 本试验银染结果出现 的特征性条带 主要分布在. 之间 采用鲎试剂定量法测定提取 的活性为 +1 1 ' 公司市售的 的活性为 +1 以上 本试验提取的 符合市售标准 同时对提取的 和 1 ' 公司的 进行急性毒性试验比较 结果表明提取的! 1 1 毒力强于 1 ' 公司的! * 1 1 表明提取的 生物活性好 具有很强的毒力 为该菌 的生物活性和致病机理研究奠定基础 结 论本试验通过临床样本成功分离到一株高致病性猪源大肠杆菌 证实该猪场仔猪腹泻是由致病性大肠杆菌引起 采用热酚水法及酶解法对其 进行提取纯化 获得了纯度高 产率高 生物活性好 毒力强的 这将为该菌 的生物活性和致病机理研究奠定基础 参考文献 马增军 芮 萍 逯春香 等 猪源肠外致病性大肠
8 期 冯 将等 猪源大肠杆菌脂多糖的提取 纯化及活性分析 ** 杆菌的分离与鉴定? 中国人兽共患病学报 0798 '6 ','5 5&'/?'98 '5 %0', )),-8'/'7%8-0%8'07 : %'4% 08% 7%0 4)780'1,'8',%. 07% %8 (-(% ''7-1,'.7 1%:)%7 % 0',-. % '8008(( ' (!? 4!#- 3# *** 5'('!7 /7% ',' ',-884, )),-8'/'7%847 17'%1'0 %(' 0%7'? 0 - #! 1 B.?+ 0: %4.0 ' 7% 1 0? 0 #! 杨成兰 罗 薇 刘内生 等 丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析? 中国畜牧兽医 % ' ' # 7'4'7"6'('77'%&%0',+: 07' 0 ).74 '0 '/'7' 0%7 '0 4,)),-8'/'7%47 3 # ## '! *? (#1" #0!#- 1 3%',%957'.8%!<%0',,%.,'7 /'7' 0%7 '0 40/%7(',8)% %80/'0,% /. ',%',',. 8'( !"#8% ;.%%' ',-88? 1** "# * 李 鹏 藏猪源大肠杆菌和肠球菌耐药性调查及其耐药机制的研究! 北京 中国农业大学 * 9%,! # /'4%7 #%0',7% %, 18' %, %8.7',807'0%1-47(' 0%7'? #!,! # ##!!!! 1? 1 2%0', ' /'7' 0%7 '0 4' 3 # ##.0' 0)7. 15,)#? " 4 12@' 1? % $%0',4,.%%4 7%,1 8'/'7%4,)),-8'/'7%0.0%7 % (7' % (%/' 74 3 # ##? " 4 * 2/' 16'$%0', /'7' 0%7 '0 4,) # #!%6%? 3*1 1 B.?+ 0: 8 )),-8'/'7 %8417'%1'0 %(' 0%7'? -# 0 - #! '%0 3@/04%,)),-8'/'7%% 0: 8? 0 #! 翟如英 # 抗逆性的研究及其脂多糖的结构解析! 南京 1 B.?.74 '0 '/'7' 0%7 '0 4, )),-8'/'7%8? 0 #! 绳秀珍 孟 鹏 徐晓丽 等 从许氏平 体表分离海分枝杆菌的鉴定及其脂多糖的抗原性分析? 水产学报 康 洁 种方法提取大肠杆菌 3&# 脂多糖的比较? 中国农学通报 * 夏小成 刘晓颖 布鲁氏杆菌 抗原制备及其免疫原性测定? 特产研究 * 宋宏新 刘晓阳 李 宏 改良热酚水法制备大肠杆菌 < 3 脂多糖抗原的研究? 食品科学 刘红亮 陈学忠 李克生 等 肠出血性大肠杆菌 <3 脂多糖抗原的提取鉴定及间接 +# 法的建立? 中国人兽共患病学报 郭 萌 李冠民 黄清泉 细菌内毒素研究进展? 中国实验动物学报 ** 徐先栋 谢珍玉 王世锋 等 脂多糖快速银染检测方法的改良? 生物技术通报 * ** 责任编辑 董晓云
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
第一章 图 １ １ 传染病的特征 ９ Ｔ ｈ１ Ｔ ｈ２ 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 Ｔ Ｎ Ｆα 和 ＩＦＮγ 可抑制放线菌的生长而 ＩＬ ６ 的作用则 反之 ＩＬ １ ２ 和 ＧＭ ＣＳＦ 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 ＩＬ １ｒａ 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
7 北京大学学报 医学版 # +94* 4 ' % 论著!! "# $ #% %"&!%'!! $ "( )& * $ +,-.)/ ) 01 " * ). " 2")3 )01 ( /" 433% /1 " 0 "51 " -.)/$ 6',)") 4.))%) 0
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食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(
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吴亦明 : '. ',,, -,,, -,., -..., -. - -.,, ( ),,,,,,,,,,,,,,,, :,,, :,, ; (, : ) :, ;,,,, ;, ; ;,,, -,,. %, %,,. %, ;. % ;. % (, : ),,, :,,,, (, : ),,,, -,, (, : ), -,,,,,,,,, - (, : ),,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,.
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
期 周 凯等 欧 洲 鳗 鲡 红 头 病 病 原 的研 究 酒 精 棉 球 将 尾 部 反 复 擦 洗 消 毒 然 后 用 灭 菌 剪 刀 剪 断 尾 巴 将 血 液滴 加 在 营 养 琼 脂 或 琼脂 平板 上作 划线 分 离 在 获 得 纯 培 养 后 移 人 斜 面 保存备 用 培养 后 取
期 周 凯等 欧 洲 鳗 鲡 红 头 病 病 原 的研 究 酒 精 棉 球 将 尾 部 反 复 擦 洗 消 毒 然 后 用 灭 菌 剪 刀 剪 断 尾 巴 将 血 液滴 加 在 营 养 琼 脂 或 琼脂 平板 上作 划线 分 离 在 获 得 纯 培 养 后 移 人 斜 面 保存备 用 培养 后 取 形 态 致 的 单 个 菌 落 进 步 划 线 纯化 人 工 感 染试 验 肌 注 感染是 将 斜 面
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生入学考成绩 准考证号 报考专业 外语政治业务 1 业务 2 总成绩 备注 病理学与病理生理学 病理学与病理生理学
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生入学考成绩 准考证号 报考专业 外语政治业务 1 业务 2 总成绩 备注 103357000912484 病理学与病理生理学 72 72 242 0 386 103357000912003 病理学与病理生理学 71 72 242 0 385 103357000911503 病理学与病理生理学 77 73 234 0 384 103357000911098
第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用!!!!!!!! 花茶冲泡方法 荧光扫描方法 # 稳定性试验方法 重复性试验方法
年 月 华南师范大学学报 自然科学版 年第 期 赵金莲 曾佑炜 李 宽 彭永宏 采用荧光光谱扫描法定性定量研究了 种花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用 结果表明 桂花茶 复合花茶 绿茶和芍药花茶的保护作用要优于红玫瑰花茶和金莲花茶 且各花茶的保护作用在 范围内均随质量浓度的增加而增强 该方法的稳定性和重复性都较好 花茶 氧化损伤 荧光光谱扫描 第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基
材料 方法
生物技术通报 陆敏 许黎明 吴宏宇 张继恩 李国栋 黄青山 溶葡萄球菌酶 是一种能高效裂解葡萄球菌细胞壁的肽链内切酶 已有研究表明其能够有效预防和去除奶牛乳腺中葡萄球菌的感染 但该酶在牛奶中的性质研究还缺少详细的研究数据 现对重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的一些性质进行研究 检测了加入溶葡萄球菌酶后牛奶性状的变化和重组溶葡萄球菌酶在牛奶中的酶活的稳定性以及溶葡萄球菌酶在牛奶中的抑 杀菌活性 结果显示 重组溶葡萄球菌酶未改变牛奶的外观性状
中国科学技术大学 材料工程 05 校外调剂 0870 化学工程 吉林大学 应用化学 05 校外调剂 0870 化学工程 四川大学 制药
045700000787 东北大学 07030 分析化学 05 校外调剂 07030 无机化学 68 66 94 04 34 063700000004 沈阳药科大学 07030 分析化学 04 校内跨专业调剂 070303 有机化学 73 56 9 00 30 0007008903 北京大学 0780Z 药学类 05 校外调剂 070303 有机化学 75 67 09 8 4 085750830 苏州大学
刘陈立 邵宗泽 以柴油为惟一碳源 从胜利油田黄河码头和厦门储油码头两个海水样品中富集得到两组柴 油降解菌 共 株细菌 株真菌 它们对柴油都有降解能力 鉴定结果表明这 株细菌 中有 株摩加夫芽孢杆菌 株施氏假单胞菌 株腊样芽孢杆菌 株反硝化产碱杆菌 株阿氏葡萄球菌 株食烷菌和 株类似很小海旋菌的未知新菌 其中 对柴油的降解能力最强 已 报道的食烷菌属中其他种的同源性最高 为 表明它是该属中的一个新种
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
考生编号政治政治分外语外语分科目 1 科目 1 分科目 2 科目 2 分总分专业代码专业名称考试方式报名号 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 药理学全国统考 思想政治理论
100019008910001 思想政治理论缺考英语一 45 生物综合 38 生理学缺考 83 078006 药理学全国统考 110190172 100019008910002 思想政治理论 61 英语一缺考药学综合 ( 缺考生理学 51 112 078006 药理学全国统考 110199187 100019008910003 思想政治理论缺考英语一缺考生物综合缺考 生物化学与分子生物学 缺考 --
流式细胞术临床应用的建议 作者 : 中华医学会检验医学分会, 卫生部临床检验中心, 中华检验医学杂志编辑委员会 作者单位 : 刊名 : 中华检验医学杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Laboratory Medicine 年, 卷 ( 期 ): 2013,36(12) 本文链接 :http://d.g.wanfangdata.com.cn/periodical_zhyxjy201312003.aspx
中 国 畜 牧 兽 医 卷 禽致病性大肠杆菌 &9 $ %#( #1 ##&,-*) 是导致禽大肠杆菌病的重要病因 主要临床表现为急性败血症 卵巢炎 输卵管炎 眼球炎 心包炎 肝周炎 气囊炎 脐炎等 大肠杆菌病的发病率和死亡率较高 每年给世界养禽业带 来严重损失 作为一种重要的肠外致病性菌 可能是人
中国畜牧兽医 0! " # 鸭致病性大肠杆菌分离鉴定及其相关致病性分析 邓伯雄 刘 情 邓安元 李文文 宋志刚 余 琼 陈光芬 刘述皇 刘亚刚 西南民族大学生命科学与技术学院 成都 西昌市畜牧局 西昌 西昌市华宁农牧科技有限公司 西昌 云南大理市畜牧工作站 大理 摘 要 为研究鸭大肠杆菌的致病性及相关生物特性 本试验从西昌市某规模化鸭场采集病料 通过传统分离培养及理化性质鉴定 分离得到 株鸭致病性大肠杆菌
目录 附录 A 实验室结果统计汇总和评价... 1 附录 A1 菌落总数项目结果汇总和统计评价... 1 附录 A2 大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 5 附录 A3 粪大肠菌群项目结果汇总和统计评价... 9 附录 A4 大肠杆菌项目结果汇总和统计评价 附录 A5 沙门氏菌项目结果
中国检验检疫科学研究院测试评价中心 CNAS PT0026 ACAS-PT030 食品微生物学能力验证计划 中期报告 2014 年 10 月 13 日 本报告是中国检科院测试评价中心 (ACAS) 组织的 ACAS-PT030 食品微生物能力验证计划的中期报告 该中期报告供实验室参考, 结果以最终的结果报告单和技术报告为准 本能力验证计划中定量检测项目按照 ISO13528 标准, 采用稳健统计技术,
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品 试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng
Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna
国内高等医学院校基础医学二级学科评价结果（1）
国内高等校基础医学二级学科竞争力评价简介 北京大学医学图书馆参考国内外各项评价指标体系, 建立了一套基础医学二级学科竞争力评价指标体系 分别从人才队伍 科学研究和教学成果三方面一共涉及 34 项指标, 对全国 39 家校的 12 个基础医学二级学科进行了评价 我们已经连续做了 4 年的评价,2012 年度的评价结果见下表或 http://library.bjmu.edu.cn/ 名 次 2012 年度国内高等校基础医学二级学科评价结果
第 卷 第 期 年 月 半 导 体 学 报! " # $%&'%' $!&' #% #$1 /#1 $'! / ?/ ?/ / 3 0,?/ ) * +!!! '!,!! -. & ' $! '! 4% %&1)/1(7%&)03 (% )
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材料 方法 载体构建 转基因植株的获得
生物技术通报 唐宏琨 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 通过根癌农杆菌 介导转化法 将含有激发子基因 的植物表达载体 转化三生烟 获得了转基因烟草植株 用 检测确认了阳性转化株 用 杂交 和 杂交进一步证实了 基因的整合 转录和表达 对 代转基因阳性株进行 接种试验 结果显示 与非转基 因对照相比 表达 的烟草叶片枯斑数量减少 表明蛋白激发子基因 的表达提高了转基因烟草对 的抗性 激发子 基因 烟草 转化 材料
干细胞和再生医学 科学学位 免考 免考 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 85 非定向 干细胞和再生医学 科学学位 免考 69 非定向 护理学 科学学位 免考 免考 非定向 护理学 科学学位
2018 年秋季报考博士上线考生名单 序号 准考证号 报考专业名称 学位类型外语成绩专业基础课成绩报考类别 备注 1 180371 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 2 180393 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 3 180427 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 4 180436 病理学与病理生理学 科学学位 免考 免考 非定向 5 180474
卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严
卢全 章等 鳗鲡 肾病病原 菌 的研 究 期 鱼 放 人 水 族箱 中 饲 养 观 察 发 病情 况 生 化试 验 采用 和 常 规 方 法 药物 敏 感 试验 用 试 管稀释 方法 步 骤 和 结果 鳗鲡 肾病 症 状 病 鳗 症 状 主 要 表 现 在 鳗 鱼 前 腹 部 区 部 位 肿 大 严重 时 区 腹 部 皮 肤 软 化 溃 烂 穿 孔 脏 露 出 的 粘稠 状 液 体 肾脏 部 位和
福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳
福建农业学报 赵 健 高晓丹 邱荣洲 翁启勇 材料与方法 种子罐的制备 发酵条件单因素试验 发酵最佳 值的确定 发酵最佳温度的确定 福建农业学报 发酵最佳转速的确定 确定 发酵周期 培养基配方试验 最优培养条件下碳源筛选 最优培养条件下氮源筛选 结果与分析 均匀设计 最佳 赵 健等 应用均匀设计优化生防细菌 发酵培养基组分及条件研究 最佳温度 碳源 最佳转速 氮源 福建农业学报 均匀设计 讨 论 赵
武洪庆 田 黎 张久明 温占波 用 方法对黄杆菌属产红色素菌株 的培养基进行了优化 首先用部分重复因子实验对培养基组分蛋白胨 酵母粉 葡萄糖及 浓度对菌株产红色素的影 响进行评价 找出主要影响因子为葡萄糖和 浓度 两者均为正影响 其他组分对色素含量的 影响不显著 第二步用最陡爬坡路径逼近最大响应区域 最后用中心组合设计及响应面分析确定主 要影响因子的最佳浓度 菌株在优化培养基中培养较初始培养基色素含量提高
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
中 国 畜 牧 兽 医 卷 国自 - 年以来 许多省市相继报道了鸡的大肠杆菌病 其普遍性和严重性及对养鸡业发展构成的威 胁越来越严重 目前 随着中国养鸡业的快速发展 鸡大肠杆菌病的发生也愈来愈受到养鸡者的关注 为探明大肠杆菌病在中国部分养鸡集中地区的发生和流行情况 作者对 年 月 年 月自河北 山东
中国畜牧兽医! " - 禽致病性大肠杆菌的分离 ) 血清群鉴定及药物敏感试验 马兴树 朱美霞 石 虎 杨广平 河北工程大学农学院分子生物学实验室 邯郸 河北科星药业有限公司河欣科技中心 石家庄 摘 要 对 年 月 年 月自河北 山东 河南 江苏 陕西 辽宁等省发病鸡场疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的 株禽致病性大肠杆菌进行了生化特性测定 抗原血清群鉴定及药敏试验 试验用 种大肠杆菌单因子 - 阳性血清进行血清群鉴定
中 草 药
中 草 药 致 谢 李 沛 赵 继 敏 郑 智 敏 江 亚 楠 等 病 理 生 理 学 教 研 室 老 师 在 实 验 中 给 予 的 指 导 和 帮 助 狄 建 彬 顾 振 纶 赵 笑 东 钱 培 刚 蒋 小 岗 郭 次 仪 中 草 药 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (
<4D F736F F D204B B C8E9CBE1CDD1C7E2C3B8A3A84C4448A3A9B2E2CAD4BAD0A3ACD0DEB6A9C8D5C6DAA3BA
乳酸脱氢酶 (LDH) 测试盒 Cat numberkgt02424/kgt02448 Store at -20 for 3 months For Research Use Only( 科研专用 ) 说明书修订日期 2015.07.13 一. 测定原理乳酸脱氢酶 (Lactate dehydrogenase LDH) 能催化乳酸生成丙酮酸, 丙酮酸与 2,4- 二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙,
结果与讨论
苏德森 陈涵贞 林 虬 对花生油 大豆油 菜籽油 玉米油和葵花籽油分别进行加热试验 采用气相色谱法测定其不同加热温度和不同加热时间脂肪酸组成 分析研究食用油中反式脂肪酸形成和变化特点及其影响因素 结果表 明食用油加热至 时 其反式脂肪酸含量是未加热时的 倍以上 随着加热温度的升高或加热时间的延 长 食用油中反式脂肪酸种类和含量都增加 加热温度 加热时间和食用油中脂肪酸组成均是影响反式脂肪酸形成和变化的因素
儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 儿科学 ( 专业学位 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 非定向 全国统考
2017 年医学院 ( 含转化院 遗传所 ) 硕士研究生上线考生名单 准考证号 报考专业 外语政治 业务 1 业务 2 总分 报考类别 考试方式 备注 103357000912484 72 72 242 0 386 非定向 全国统考 103357000912003 71 72 242 0 385 非定向 全国统考 103357000911503 77 73 234 0 384 非定向 全国统考 103357000911098
杨锐 方文雅 单媛媛 陈海敏 孙雪 叶央芳 为研究藻际微生物多样性与紫菜健康养殖的关系 从江苏南通 养殖 山东青岛 野生 浙江温州 养殖 三地的条斑紫菜叶状体和江苏东台条斑紫菜贝壳丝状体及其周围的海水样品中分离 了条斑紫菜外生细菌 根据菌落特征和菌体形态将获得的 株细菌分为 种表型 片段 分析结合序列测序比对结果表明 这些菌株与假交替单孢菌 嗜冷单胞菌 和芽孢杆菌 等 属相应菌株具有较高的同源性 通过对条斑紫菜外生细菌区系多样性分析得出
高 云 钟良军 张源明 周晓欢 梁 平 徐 隽 探讨兔牙周炎对动脉粥样硬化炎性因子的影响及抗生素对其的作用 将 只雄性新西兰大白兔随机分为 组 组为对照组 组为牙周炎组 组为动脉粥样硬化组 组为牙周炎 动脉粥样硬化组 组为干预组 牙周炎 动脉粥样硬化 替硝唑组 各组分别按照实验设计进行相应干预处理 周末处死动物 检测牙周指标 血清中总胆固醇 三酰甘油 高密度脂蛋白胆固醇 低密度脂蛋白胆固醇 反应蛋白
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Singlepath Duopath 致病菌胶体金免疫测试片 AOAC RI Approved! 查询更多产品信息及价格, 请浏览默克密理博中文网站 : http://www.merckmillipore.com/china/ www.merckmillipore.com 客服电话 : 400 889 1988 上海 上海市浦东新区张江高科晨晖路 88 号二号楼 2 楼电话 :(021)38529000
福建农业学报 材料与方法 外植体无菌株系的建立 启动培养 增殖培养 继代培养 生根培养 瘤状苗的细胞学观察
福建农业学报 邓素芳 杨 旸 赖钟雄 福建农业学报 材料与方法 外植体无菌株系的建立 启动培养 增殖培养 继代培养 生根培养 瘤状苗的细胞学观察 邓素芳等 朱砂根成年茎段的离体培养研究 结果与分析 福建农业学报 第3期 邓素芳等: 朱砂根成年茎段的离体培养研究 带空洞, 无法观察 图1 朱砂根成年茎段的离体繁殖 Fig 1 I n vitro propagation of A crenata 图 2
中 国 畜 牧 兽 医 卷 度过高等诱因引起 猪关节炎主要表现为病猪生长缓慢 饲料转化率降低 种猪繁殖性能降低 关节肿大 化脓 肿胀逐渐变软 破溃后流出黄绿色或浅绿色脓汁 软骨坏死 共济失调 抽搐 严重时死 亡 本试验从云南 个猪场采集有猪关节炎症状的病猪病料进行分离培养 生化试验 药敏试验 动物致
中国畜牧兽医! " # 云南猪关节炎细菌性病原的分离鉴定 周玉照 张小苗 柴 俊 李三平 张娜娜 张以芳 云南农业大学动物科学技术学院 昆明 摘 要 本试验旨在了解云南 个猪场猪关节炎的细菌性病因及其耐药性 通过分离培养 生化试验 药敏试验 动物致病性试验及 # 鉴定 对 个猪场出现猪关节炎症状的样品进行了分析 结果显示 " 和 个猪场共 份样品中 检出金黄色葡萄球菌 份 阳性率分别为 和 检出链球菌
赵世嘏 高乃云 楚文海 微曝气工艺是在常规 基础上发展起来的 试验表明在紫外光强 投加量为 三氯乙酸 初始浓度约为 的情况下 后该工艺对 的去除达到 以上 工艺效果受 光强 投加量 初 始浓度和 的影响 其他条件一定时 随着 光强和 投加量的增大 去除率增加 然而 投加量超过 后 去除效果增加缓慢 对不同初始浓度 时去除率最 高 而后浓度增加 去除率下降 中性或弱酸性 条件下更有利于降解 消毒副产物
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图 对片剂累积释放度的影响
岳红坤 常明 游雅 邱树虹 王婧 乔宇 石家庄学院化工学院 河北石家庄 为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性 根据辅料性质及制剂质量要求 通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数 确定了最优 处方 采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片 在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度 并用 紫外可见分光光度法检测其释药量 优选的处方为每片含 碳酸氢钠 羧甲基淀粉钠 聚乙二醇
标题
第 35 卷第 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 3 年 月 Vol.35 No. JouralofSouthwestUiversity (NaturalScieceEditio) Feb. 3 文章编号 :673 9868(3) 69 4 一类积分型 Meyer-KiḡZeler-Bzier 算子的点态逼近 赵晓娣, 孙渭滨 宁夏大学数学计算机学院, 银川 75 摘要 : 应用一阶 DitziaṉTotik
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* 李 煜 :. -. -.,,, -,,. :( ) -, -. -.( ) -.,, -,., (, ),, ( )( ),,,,,,,,,, ;,,,, ;,,, *,, ,, (, ),,,, (, ),,, :, :,, :,, ( ),,, ( ) ( &, ), :(),, ( ),, (, ;., ), ()( ),,, ( ) ( ) ()(, ),,,,, ;,, ;, ( ),,,,,,,
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
结果与讨论
金青哲 谢 峰 丁志华 施峰华 王兴国 利用碳同位素比值法进行花生油和玉米油掺合物的检测研究 用气相色谱仪获得 转化途径 的玉米油和 转化途径的花生油的脂肪酸组成 再用气相色谱 燃烧 同位素比值质谱仪确定三种主要脂肪 酸 的 值 利用所测得的数据 构建了玉米油与花生油混合油中主要脂肪酸的 值 混合比例的标准曲线 结果表明 玉米油与花生油的 值差异很大 应用试验中将花生油与一种未知的其他植物油进行掺和
自然科学版 预处理 视盘粗定位 视盘垂直坐标的粗定位 视盘水平坐标的粗定位
自然科学版 文章编号 视网膜图像中视盘的快速自动定位方法 赵晓芳 林土胜 李碧 摘 要 基于眼底视网膜血管的分布结构及视盘本身的特点 提出一种快速自动定位视盘的方法 首先根据视网膜血管的网络分布结构大致定位视盘的垂直坐标 然后根据视盘 的亮度信息及视盘与血管的关系来定位视盘的水平坐标 最后把视盘限定在以粗定位的视盘为中心的一个小窗口内 用 变换精确定位视盘中心 该方法不需要事先分割视网膜血管 也不需要对算法进行训练
生命科学研究 房 蓓 武泰存 王景安 以玉米沈单 号为材料 用溶液培养的方法研究了缺锌 低锌和正常供锌对玉米生长发育的影响 进一步明确了一定量低锌比缺锌对玉米的伤害更大 并对其 同工酶谱及蛋白质表达进行了分析 结果表明 一定浓度的低锌培养使玉米生长受抑及受害最重 且地上部分比地下部分更敏感 低锌和缺锌处理时 种同工酶的酶谱和蛋白表达与正常供锌时均有明显的差异 尤其在一定量低锌浓度时 有些同工酶的表达增强或被特异性诱导
期 曹 敏等 贵州部分地区猪源大肠杆菌耐药性分析及. 基因型检测.3" / &,-/ +-+ <A AA /A-++,+*',++,+,-/,+ +-+/ *, +,/,,+-3-+,/+&,-/ -) /*+/-) / /,++,+,-/,+.,-/
中国畜牧兽医 3 " 贵州部分地区猪源大肠杆菌耐药性分析及 -% 基因型检测 曹 敏 谭艾娟 吕世明 常 鑫 丁昌庆 陈 婷 王珍燕 贵州大学药学院 贵阳 贵州大学生命科学学院 贵阳 贵州大学动物科学学院 贵阳 摘 要 为了解贵州地区规模养猪场大肠杆菌菌株耐药情况和. 基因型的流行情况 试验采用 推荐的方法对采自贵州省 个地区规模养猪场的 株大肠杆菌进行药物敏感性试验和产. 菌的检测 并用 % 方法对."3
生物技术通报 改善食品原料品质 改良食品工业用菌种 生产酶制剂 改良食品加工性能 生产保健食品
生物技术通报 张占军 王富花 综述基因工程技术在改善食品原料品质 改良食品工业用菌种和食品加工性能 生产酶制剂和保健食品方面的应用 同时对转基因食品及其安全性问题进行了总结归纳 最后对基因工程技术在食品中的发展前景进行展望 基因工程 转基因食品 食品安全 应用 基因工程定义 发展 生物技术通报 改善食品原料品质 改良食品工业用菌种 生产酶制剂 改良食品加工性能 生产保健食品 食品检测 转基因食品定义
期 冯旭芳等 贵州省猪流行性腹泻病毒 %& " 基因克隆及序列分析 4)0!&7*:( (4 0 0*7 )(5(0*(4&04<1 &1 4)0 ((4( * (*7)(*04(4"& ( ( 4)0 )(0 4)0 0 &0 4)0 0 4&()( 8()(:( (4 0*7()( 4) 4&(
中国畜牧兽医! " # 贵州省猪流行性腹泻病毒 & % 基因克隆及序列分析 冯旭芳 周碧君 张双翔 王跃章 文 明 程振涛 毛黎红 王开功 贵州大学动物科学学院 贵阳 贵州省生猪质量安全工程技术研究中心 贵阳 贵州省动物疫病预防控制中心 贵阳 贵州都匀市黔昌畜牧发展有限责任公司 都匀 花溪区农业局 贵阳 摘 要 为了解贵州省猪流行性腹泻病毒 ) (( ( 0))&(05)1!/$D 毒株 %& 及
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第 第 卷 海 欺 环 洋 科 境 学 月 年 铜 锌 镐 汞 锰 铬 对 斑 节 对 虾仔虾 急性 致毒 的研 究 高淑 英 邹栋梁 厦 门 大学 海洋 系 厦 门 摘 仔虾 的 急 性 致 毒 效 应 土 本文在恒温 要 结果 表 明 值 分别 为 充 气条 件下 研 究 了 值分 别为 十 对斑节对虾 对 斑 节对 虾 仔 虾 值分 别 为 值 分别 为 六 种重 金 属 的 毒性 顺 序 为
标题
中华人民共和国国家标准 GB 4789.8 2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 2016-08-31 发布 2017-03-01 实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 前 言 本标准代替 GB/T4789.8 2008 食品卫生微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 本标准与 GB/T4789.8 2008 相比, 主要变化如下 : 标准名称修改为 食品安全国家标准
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南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版!!' C!! J2KL@! 摘 要!"#$ %& '" ()*+#,-./01,!/0", 23456.1 "789:, ;?$& +@,A BC"/D?E,DF"GH,IJ KLD"MN& +,O, D, PQRST UVWXYK, CKZD["\ ]^_ " `abvwc ", 4 M",P " Y_ 关键词 2 中图分类号 文献标识码
中 国 公 路 学 报 年
第 卷 第 期年 月 中 国 公 路 学 报 孟 瑾 朱 平 胡志刚 根据耐久性试验中常用的整车台架试验方法 通过多体动力学模型仿真模拟整车在四轮路面 激励下的运动状态 提取车身与底盘连接位置的载荷历程 采用有限元法分析动载荷作用下的车身 结构响应 基于传统的应力 寿命方法 方法 寻找车身薄弱环节 辨识危险零件应力 双轴性 并选择多轴疲劳损伤参量预测车身疲劳寿命 分析结果表明 结合多体动力学与多轴疲劳的寿命
$$$ # 水 $ 产 $ 学 $ 报 卷 司 偶氮酪蛋白购自西格玛奥德里奇 上海 贸易有限公司 其余试剂为进口或国产分析纯 细菌的分离培养剖开后 病鱼肝脏出血 溃烂 腹腔有积水 无菌采取肝 鳃 脾 肾等脏器 接种环火焰灭菌后蘸取病料 划线接种于普通琼脂平板 ' 培养 : "! 细菌形态特征观察和生
第 卷第 期!"# 年 月 $ 水 $ 产 $ 学 $ 报!!"# 文章编号 "!!! %!"#!"#! %!# %! ""!"" #$%!"""!# 水族箱气单胞菌的鉴定及致病特性分析 吴亚锋 $ 王旭远 $ 庞茂达 $ 陆承平 $ 刘永杰 南京农业大学动物医学院 江苏南京 $ "!!# 摘要 为了确定南京市某渔场发病鱼感染的病原 本研究采集患鱼脏器 采用平板培养 生化实验和特异性 基因扩增测序等方法进行细菌的分离鉴定
１０５ 化学消毒剂按其效力不同可 分为哪几类 １ 灭菌剂 能杀灭一切微生物使 其达到灭菌效果 ２ 高效消毒剂 杀灭一切细菌繁 殖体 包括分枝杆菌 病毒 真菌及其 孢子 并对细菌芽孢有显著杀灭作用 ３ 中 效 消 毒 剂 杀 灭 细 菌 繁 殖 体 真菌 病毒等除细菌芽孢以外的其 他微生物 ４ 低效消毒剂 只能杀灭细菌繁 殖体 亲脂病毒和某些真菌 １０６ 化学消毒剂的适用原则是什 么 １ 坚持合理使用的原则
价样 品 川 振 荡汉 取 叮 盛极 曲 的 示差 溶 出脉 具 体 方 法 见 有 机质 含 量 用 丘 林 法 测 定 沉积 物 的 矿 物 组 成 由 本 所 地质 室 测 数 据 由厦 门 大 学 海 洋 系 洪 家 珍 同志 提 供 三 各站 位 于表 谱 分析仪 进行 微 米膜 滤 后 分 斯 其 酿 可溶 部 分 的 含 鼠 零 用 冲测定 卷 报 分析 三 定 学 洋 海 表示 结
中国畜牧兽医! " # 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 刘永安 李学瑞 周建华 马丽娜 刘永生 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部草食动物疫病重点开放实验室 兰州 摘 要 试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株 为进一步确定该致病菌株及其
中国畜牧兽医! " # 一株羊源致病性屎肠球菌的分离鉴定及耐药性分析 刘永安 李学瑞 周建华 马丽娜 刘永生 中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部草食动物疫病重点开放实验室 兰州 摘 要 试验从甘肃肃南县某羊场死亡羊中分离出疑似某球菌菌株 为进一步确定该致病菌株及其耐药性情况 进行了病原菌分离 革兰氏染色 生化试验 1$+/0+ 扩增鉴定 小鼠致病力试验 药敏试验
微生物学通报 Microbiology China 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍
微生物学通报 Microbiology China tongbao@im.ac.cn 研究报告 NOV 20, 2010, 37(11): 1628 1633 2010 by Institute of Microbiology, CAS 茶多酚对金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的抑菌机理 * 钱丽红陶妍 谢晶 ( 201306) 摘要 : 以革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌和革兰氏阴性的铜绿假单胞菌为试验菌,
王军淋 等 超高效液相色谱 大体积流通池荧光法检测奶及奶制品中的黄曲霉毒素 Ｍ １ 第２期 １９５ 左 １ 为国标法 经典提取法 提取 其余为乙腈法提取 从左到右依次为 ｍ 牛奶 Ｖ 乙腈 １ ０ １ １ １ ２ １ ３ １ ４ １ ５ Ｔ ｈｅ ｌｅｆ ｔ ｏｎｅ ｗ ａｓ ｅｘ ｔ ｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｅｘ ｔｒａｃｔｉｏｎ
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南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版 3 9 S ^ 9 F = S ]( ^ >? 67 = D ^ E Y GH I 摘要!"#$%&' ()*+,-./*+01. 23456789:;1 < =>?
2014 年度军队文职人员招聘信息
序号 1 军事交通学院讲师 研究生 : 新闻传播学本科 : 新闻传播学类 天津 022-84657561 2 军事交通学院讲师 研究生 : 俄语语言文学本科 : 俄语 天津 022-84657561 3 军事交通学院讲师 1 硕研以上音乐与舞蹈学天津 022-84657561 4 军事交通学院药师 研究生 : 药学本科 : 药学类 天津 022-84657561 5 军事交通学院护师 3 大专以上
招生人数 其中合计推免推免硕士连读 考 试 科 目 01( 全日制 ) 耳鼻咽喉科学 ( 专业学位 ) 肿瘤学 01( 全日制 ) 内科学 ( 专业学位 ) 康复医学与理疗学 01( 全日制 ) 康复医学与理疗学 ( 专业学位 ) 麻醉学
001 北京协和医院 100104 病理学与病理生理学 01( 全日制 ) 病理学与病理生理学 ( 学术型 ) 1 1 只招收推荐免试生, 不接受统考生报名 100201 内科学 01( 全日制 ) 内科学 ( 学术型 ) 12 10 西医 ) 或 654 基础医学综合 4 一无 100208 临床检验诊断学 01( 全日制 ) 临床检验诊断学 ( 学术型 ) 1 1 只招收推荐免试生, 不接受统考生报名
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期 王秀 兰 种 新 试荆 在 岩石 牡 含 量 测 定 中 的应 用 吸取 稀至 刻 度 舍 牡溶 液于 试 司 容量 瓶中 加 乙 放 置 却 分钟 在 验 盐酸 型 分 光 光度 计 上 于 欲 夕 草酸 及 处 侧定 其 吸 光 度 布 全 显 色 荆 用 蒸馏水 显色 吸 收 曲线 的侧 定 按 照 操 作手 续 以水的 式剂 空 白 为 参 用 不 同 的 波长侧定 其吸 光 度 结 果
气溶胶光学厚度 的测量原理 Ê
肖钟湧 江洪 余树全 周国模 陈然 宋晓东 焦荔 洪盛茂 常杰 江波 南京大学国际地球系统科学研究所 南京 浙江林学院国际空间生态与生态系统生态研究中心 杭州 杭州市环境监测总站 杭州 浙江大学生命科学学院 杭州 浙江省林业科学研究院 杭州 气溶胶光学厚度 的测量原理 Ê 仪器和观测 实验场地 数据处理 气溶胶光学厚度的高光谱反演 浑浊度系数 波长指数 Ê Ê 精度检验 气溶胶光学厚度 浑浊度系数
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
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天 津体育 学 院 学 报 卷第 第 运 动生 理 期 月 年 武 术 长 拳 训 练 前 后 血 液有 形成分 的 变 化! 苏振 萍! 摘要 通过 对 长拳 运 动 员 血液有形 成分变 化的 测 试 和 分析 证 明 长 拳运 动 员 训 练 前 后 血 红 蛋 白含量无变 化 运 动 后 白细 胞 明显 增 加 嗜中性粒 细 胞百分 比 偏 低 淋 巴 细 胞 百分 比 偏 高 武术 关 锐词
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中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准食品微生物学检验阪崎肠杆菌检验 National food safety standard Food microbiological examination:enterobacter sakazakii 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 中华人民共和国卫生部 发布 前 言 本标准代替 GB/T 4789.40-2008 食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验
177 购自河南省安阳路德药业有限责任公司 ; 磺胺嘧啶钠 ( 含量 99%), 购自上海三维制药有限公司 ; 强力霉素 ( 含量 88%), 购自河北省邯郸久鹏精细化工有限公司 1.5 细菌的分离和鉴定 细菌分离无菌采集猪直肠拭子, 置于灭菌的营养肉汤中 37 培养 16~18h, 用
176 黄东璋, 陈 琳, 魏冬霞, 等. 猪腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性分析 [J]. 江苏农业科学,2013,41(10):176-180. 猪腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性分析 黄东璋, 陈琳, 魏冬霞, 刘俊栋, 朱丽佳, 陶进亚 ( 江苏农牧科技职业学院, 江苏泰州 22530) 摘要 : 采集腹泻猪直肠拭子分离鉴定大肠埃希菌, 采用微量稀释法测定分离菌对卡那霉素 氟苯尼考 氨苄西林
第 期 等 乙腈 碳酸氢钠溶液混合物电嫁接叔丁氧羟基 乙二胺 7B7! " # $% # &'#! "% #!! #& (& )&# &#&# #*$% + %!, # $% "( ( # ( # "! #-.& #% & (& %" & %& & #& (& & )&# &#& # & "%&/
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
药 学 实 践 杂志 年第 卷第 期 药理 学 大 承 气 汤 改 善 家 兔 实 验 性 肺 水 肿 及 多脏 器 损 害 的 病 理 学 研 究 摘要 目的 研 究 大 承 气 汤 改 善 阳 明 腑 实喘 满 证 中 肺通 气 功 能 和 肺组 织 病 变 的 机 制 朱 晓梅 时照 组 章 忱 陈列平 李 玉梅 曾兆 麟 和 大承 气汤 组 治 疗组 卫洪昌 上 海中 医 药 大 学病理教研