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1 192 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月牙周病学专栏口腔干预措施对牙周炎大鼠颈动脉牙龈卟啉单胞菌检出量及 C- 反应蛋白表达的影响任秀云王冲刘欣李豪马千惠林牧石学雪高晋华山西医科大学口腔医院牙周科, 太原 [ 摘要 ] 目的建立慢性牙周炎 (CP) 合并高脂血症 (HL) 的 SD 大鼠模型并对其进行口腔干预, 检测大鼠颈动脉局部 C- 反应蛋白 (CRP) 的表达情况及牙龈卟啉单胞菌的检出量, 探讨牙周炎与动脉粥样硬化的相关性方法 SD 大鼠随机分为 3 组,A 组为对照组,B 组为 HL 组,C 组为 CP+HL 组 C 组分为 C1 组 ( 不治疗组 ),C2 组 ( 基础治疗组 ),C3 组 ( 拔牙组 );C2 组又分为 C2-1 组 ( 单纯牙周基础治疗组 ),C2-2 组 ( 牙周基础治疗 + 米诺环素 + 抗生素组 );C3 组又分为 C3-1 组 ( 拔除患牙组 ),C3-2 组 ( 拔除患牙 + 抗生素组 ) 建模开始 15 周后随机处死 B 组大鼠 1 只, 取颈动脉分叉血管组织进行油红 O 染色, 观察到泡沫细胞形成则 HL 建模成功建模成功后进行 2 次口腔干预, 干预结束后 5 周处死所有大鼠, 取双侧颈动脉血管分叉处组织, 分别采用免疫组织化学法检测 CRP 相对含量,16sRNA 半定量法检测样本中的牙龈卟啉单胞菌的相对含量结果免疫组织化学结果显示,B C 组 CRP 阳性表达明显高于 A 组 (P<0.05), 与 C1 组相比,C 组各干预组的 CRP 表达均降低 (P<0.05), 其中辅助抗生素组较不加抗生素组阳性表达更低 (P<0.05),C2-2 组在各干预组中阳性表达最低牙龈卟啉单胞菌检测结果显示,C1 组检出量最高, 明显高于 A B 组 (P<0.05);C 组各干预组的检出量均较 C1 组低 (P<0.05),C3-2 组最低 (P<0.05) 结论伴 HL 的牙周炎大鼠不加干预任其发展, 颈动脉血管中 CRP 的表达及牙龈卟啉单胞菌检出量都明显增加, 血管病变逐渐加重牙周基础治疗和拔牙均可有效降低颈动脉血管中 CRP 的表达及致病菌含量, 其中牙周基础治疗对 CRP 表达的降低作用更明显, 拔牙对降低牙周致病菌的作用更有效 ; 基础治疗或拔牙时若辅以局部及全身抗炎药物, 均可以有效提高 CRP 和牙周致病菌的降低作用 [ 关键词 ] 高脂血症 ; 牙周炎 ; 牙龈卟啉单胞菌 ; C- 反应蛋白 ; 牙周基础治疗 [ 中图分类号 ] R [ 文献标志码 ] A [doi] /hxkq Effects of oral interventions on carotid artery in rats with chronic periodontitis for the detection of Porphyromonas gingivalis and the expression of C-reactive protein Ren Xiuyun, Wang Chong, Liu Xin, Li Hao, Ma Qianhui, Lin Mu, Shi Xuexue, Gao Jinhua. (Dept. of Periodontology, School of Stomatology, Shanxi Medical University, Taiyuan , China) Supported by: The National Natural Science Foundation of China ( , ); The Natural Science Foundation of Shanxi Province ( ). Correspondence: Ren Xiuyun, rxy611@163.com. [Abstract] Objective This study aimed to establish a SD rat model of chronic periodontitis (CP) merged with hyperlipidemia (HL), perform periodontal treatment, detect the expression of partial C-reactive protein (CRP) and Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) in the rat carotid artery, and explore the relationship between periodontitis and atherosclerosis. Methods SD rats were randomly divided into three groups: control group (A), HL group (B), and CP+HL group (C). Group C rats were divided into natural process group (C1), scaling and root planning group (C2), and tooth extraction group (C3). Group C2 rats were randomly divided into C2-1 (scaling and root planning group) and C2-2 (scaling and root planning+minocyline+systemic antibiotics group). Group C3 rats were randomly divided into C3-1 (tooth extraction group) and C3-2 (tooth extraction+systemic antibiotic group). One rat from group B was randomly selected [ 收稿日期 ] ; [ 修回日期 ] [ 基金项目 ] 国家自然科学基金 ( , ); 山西省自然科学基金 ( ) [ 作者简介 ] 任秀云, 副教授, 博士, rxy611@163.com [ 通信作者 ] 任秀云, 副教授, 博士, rxy611@163.com and sacrificed after 15 weeks. Subsequently, the carotid vascular tissue was collected for oil red O staining. Modeling was successful when foam cell formation was observed. Periodontal treatments were conducted twice, and euthanasia

2 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月 193 was performed after the experiment. Moreover, double-carotid artery bifurcation was carried out to detect the expression of CRP and P. gingivalis. Immunohistochemical and 16sRNA semiquantitative methods were used to detect the CRP expression and the relative contents of P. gingivalis, respectively. Results Immunohistochemical results showed that the CRP-positive expression in groups B and C was significantly higher than that in group A (P<0.05). The CRP-positive expression in other group C rats were significantly lower than that in group C1 (P<0.05). The CRP-positive expression in group C2-2 was the lowest among the groups (P<0.05). The relative quantity of P. gingivalis in group C1 was the highest and significantly higher than that in groups A and B (P<0.05). The relative quantities of P. gingivalis in groups C2-1, C2-2, C3-1, and C3-2 were significantly lower than that in group C1 (P<0.05), and the quantity in group C3-2 was the lowest (P<0.05). Conclusion Rats with CP associated with HL will increase the CRP expression and oral bacteria quantity on carotid artery, and lesions will gradually aggravate. Interventions, such as periodontal basic treatment and tooth extraction, could improve carotid artery lesions. The basic treatment with local and systemic anti-inflammatory drugs exerts the most satisfactory effect on local CRP expression. Tooth extraction with antibiotics is an effective method on reducing oral bacteria in carotid artery. Periodontal basic treatment associated with local and systemic antiflammatory drugs can obviously improve the effect. [Key words] hyperlipidemia; periodontitis; Porphyromonas gingivalis; C-reactive protein; periodontal basic treatment 近年来, 慢性牙周炎 (chronic periodontitis, CP) 与心血管疾病 (cardiovascular disease,cvd) [1] 之间的关系越来越受重视研究证实, 牙周状态不良可能是导致 CVD 发生的危险因素之一, 牙周病患者 CVD 患病率较健康人高 25%~50% CVD 的主要病理基础是动脉粥样硬化, 慢性感染及其相关的炎症过程可直接影响动脉粥样硬化的病理生理学过程, 而慢性牙周炎同样也是一种由牙周致病菌所引起的慢性感染牙周袋内的菌斑微生物及其毒性代谢产物可随咀嚼活动通过破损的牙周袋壁软组织进入血液循环播散至全身, 引起反复的无症状菌血症, 同时可定植于血管内皮细胞, 对心血管系统产生不良影响本研究通过检测 CP 合并高脂血症 (hyperlipidemia,hl) 大鼠模型的颈动脉血管组织中牙龈卟啉单胞菌的相对含量, 同时对血管局部组织 C- 反应蛋白 (C-reactive protein,crp) 的表达情况进行免疫组织化学检测, 以探讨口腔各种干预措施对合并高脂血症的牙周炎大鼠模型的影响, 为临床合并高脂血症的牙周炎患者的治疗提供理论依据 1 材料和方法 1.1 实验材料实验动物健康清洁级 SD 大鼠 50 只, 雄性,6 周龄, 体重 200~250 g, 由北京华阜康生物科技股份有限公司提供, 合格证号 SCXK( 京 ) 主要试剂与实验仪器 OlympusDP72 型显微照相系统 (Olympus 公司, 日本 ) 胆固醇 ( 分析纯 ) 猪胆盐饲料 ( 北京奥博星生物技术有限公司提供 ) 维生素 D 3 注射液 ( 上海通用药业股份有限公司, 批号为 ) 阿莫西林胶囊 ( 哈药集团制药总厂, 批号为 A ) 甲硝唑片( 亚宝药业集团股份有限公司, 批号为 ) 盐酸米诺环素软膏 ( 日本 SunStar INC 公司, 批号为 ) 1.2 细菌培养及鉴定本实验使用的牙周致病菌为牙龈卟啉单胞菌 ATCC 标准菌株, 由首都医科大学口腔微生物研究室提供 1.3 动物分组将 50 只 SD 大鼠分为 3 组,A 组为正常对照组 (7 只 ),B 组为 HL 组 (8 只 ),C 组为 CP+HL 组 (35 只 ) C 组又分为 3 个组,C1 为自然进程组 (7 只 ), C2 为基础治疗组,C3 为拔牙组 ;C2 组再分为单纯牙周基础治疗组 (C2-1 组,7 只 ) 和牙周基础治疗 + 米诺环素 + 抗生素组 (C2-2 组,7 只 ),C3 组再分为拔牙组 (C3-1 组,7 只 ) 和拔牙 + 抗生素组 (C3-2 组,7 只 ) 1.4 动物建模 1)A 组不进行任何干预 2)B 组 HL 模型建立方法如下一次性腹腔注射维生素 D 3 ( 每 100 g 体重注射剂量为 0.23 ml),2 周内逐渐增加高脂饲料 ( 高脂饲料配方 : 质量分数 1.5% 胆固醇 +0.2% 猪胆盐 +5% 猪油 +93.3% 基础饲料 ) 直至完全替代普通饲料 15 周后随机处死 B 组大鼠 1 只, 取其颈动脉分叉处约 1 cm 血管组织, 剥离动脉筋膜, 冰冻切片, 油红 O 染色, 观察红染泡沫细胞 3)C 组为 CP+HL 组, HL 模型建立同上,CP 模型建立方法 ( 与 HL 模型在时间上同步 ) 如下腹腔注射 5% 水合氯醛溶液 ( 每 100 g 体重注射剂量为 0.7 ml) 麻醉以大鼠双侧上颌第一二磨牙作为实验牙先用 3 0 丝线缠绕于 0.20 mm 的正畸结扎丝上, 再将结扎丝以 8 字结扎的形式结扎于双侧上颌第一二磨牙 (M1 M2) 的牙颈部, 定期涂布牙龈卟啉单胞菌悬液并检查结扎

194 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月 [3] 情况术后 15 周 ( 从开始建模起 ), 随机检查 C 组口腔情况, 发现大鼠有牙龈红肿探诊出血深牙周袋实验牙松动等临床牙周炎表现即为 CP 建模成功 ;

5 口腔干预方法拆除结扎丝后, 各组给予不同的口腔干预措施 C1 组 : 任其自然发展, 不加任何口腔干预治疗措施 C2 组 :C2-1 组分别于建模成功后第 2 4 周进行牙周基础治疗 ( 包括牙周刮治和根面平整术 ), 每次选择同侧 2 颗实验牙

2 颗实验牙 ;C3-2 组在此基础上每次拔牙后加用抗生素 (200 mg kg -1 阿莫西林 +100 mg kg -1 甲硝唑 ) 灌胃, 每日 1 次, 疗程 3 d 1.

5 μm 厚度横断切片, 进行 CRP 免疫组织化学染色, 观察染色强度, 并使用医学图像分析系统 (BI-2000), 对所有切片进行半定量分析, 以颈动脉分叉处内侧为测量部位, 细胞质出现棕黄色染色为 CRP 阳性,

提取试剂盒, 采用 16sRNA 法测定各组大鼠颈总动脉血管组织中的牙龈卟啉单胞菌 DNA 相对含量, 具体方法见本课题组前期研究 1.7 统计学分析用 SPSS 13.

1 颈动脉血管组织的 CRP 表达颈动脉血管组织 CRP 表达的定位结果见图 1 A:A 组 ;B:B 组, 红色箭头示泡沫细胞 ;C:C1 组, 黄色箭头示动脉粥样硬化斑块和钙盐沉积, 红色箭头示泡沫细胞 ;D:C2-1 组, 红色箭头示泡沫细胞

expression in carotid artery immunohistochemical staining 400 A 组 ( 正常对照组 ), 血管壁形态正常, 无明显增厚, 弹性纤维排列整齐, 未见 CRP 阳性表达 ( 图 1A) B 组

3 194 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月 [3] 情况术后 15 周 ( 从开始建模起 ), 随机检查 C 组口腔情况, 发现大鼠有牙龈红肿探诊出血深牙周袋实验牙松动等临床牙周炎表现即为 CP 建模成功 ; 同时安乐死法随机处死 1 只 B 组大鼠, 油红 O 染色, 若发现有脂质沉积形成, 说明 HL 建模成功, 即开始进行口腔干预 1.5 口腔干预方法拆除结扎丝后, 各组给予不同的口腔干预措施 C1 组 : 任其自然发展, 不加任何口腔干预治疗措施 C2 组 :C2-1 组分别于建模成功后第 2 4 周进行牙周基础治疗 ( 包括牙周刮治和根面平整术 ), 每次选择同侧 2 颗实验牙 ;C2-2 组, 在基础治疗的基础上局部用米诺环素, 每次干预后同时用抗生素 (200 mg kg -1 阿莫西林 +100 mg kg -1 甲硝唑 ) 灌胃, 每日 1 次, 疗程 3 d C3-1 组基础治疗同步进行 2 次拔牙, 每次拔除同侧 2 颗实验牙 ;C3-2 组在此基础上每次拔牙后加用抗生素 (200 mg kg -1 阿莫西林 +100 mg kg -1 甲硝唑 ) 灌胃, 每日 1 次, 疗程 3 d 1.6 标本采集及处理实验组大鼠进行 2 次牙周干预, 干预结束后 5 周处死所有大鼠, 取双侧颈动脉血管分叉处约 1 cm 组织进行检测左侧血管组织经固定包埋后以 1.5 μm 厚度横断切片, 进行 CRP 免疫组织化学染色, 观察染色强度, 并使用医学图像分析系统 (BI-2000), 对所有切片进行半定量分析, 以颈动脉分叉处内侧为测量部位, 细胞质出现棕黄色染色为 CRP 阳性, 按照分层抽样法在每个部位随机选择 5 个阳性区域, 测定该部位的灰度值, 染色程度越深, 灰度值越小右侧血管新鲜组织置于 -70 C 保存, 放入无菌 Eppendorf 管中, 应用德国 Analytik Jena AG 公司提供的细菌 DNA 提取试剂盒, 采用 16sRNA 法测定各组大鼠颈总动脉血管组织中的牙龈卟啉单胞菌 DNA 相对含量, 具体方法见本课题组前期研究 1.7 统计学分析用 SPSS 13.0 统计学软件处理各组数据, 组间比较采用完全随机设计资料的方差分析, 各组间两两比较采用 LSD-t 检验, 检验水准为双侧 α= 结果 2.1 颈动脉血管组织的 CRP 表达颈动脉血管组织 CRP 表达的定位结果见图 1 A:A 组 ;B:B 组, 红色箭头示泡沫细胞 ;C:C1 组, 黄色箭头示动脉粥样硬化斑块和钙盐沉积, 红色箭头示泡沫细胞 ;D:C2-1 组, 红色箭头示泡沫细胞 ;E:C2-2 组, 红色箭头示泡沫细胞 ;F:C3-1 组, 黄色箭头示钙化坏死组织, 红色箭头示泡沫细胞 ;G:C3-2 组, 红色箭头示泡沫细胞图 1 颈动脉血管壁 CRP 的表达免疫组织化学染色 400 Fig 1 CRP expression in carotid artery immunohistochemical staining 400 A 组 ( 正常对照组 ), 血管壁形态正常, 无明显增厚, 弹性纤维排列整齐, 未见 CRP 阳性表达 ( 图 1A) B 组 (HL 组 ), 血管壁明显增厚, 内膜下可观察到脂质沉积, 内中膜可见大量泡沫细胞 ( 图 1B 中箭头示 ),CRP 阳性表达, 泡沫细胞的细胞质呈黄褐色着色, 平滑肌细胞变性萎缩, 弹性纤维排列紊乱 C1 组 (CP+HL 自然进程组 ) 内膜下观察到多个明显的动脉粥样硬化斑块病灶脂质核并有钙盐沉积 ( 图 1C 中黄色箭头 ), 泡沫细胞 ( 图 1C 中红色箭头 ) 散在, 平滑肌细胞萎缩变性, 细胞数目减少, 并向内膜迁移, 导致内膜增厚,CRP 呈强阳性表达且着色呈深褐色, 弹性纤维萎缩甚至断裂 C2-1 组 (CP+HL 基础治疗组 ), 可见血管壁增厚, 内膜下散在脂质沉积, 泡沫细胞较多,CRP 阳性表达, 呈黄褐色着色, 平滑肌细胞部分变性, 弹性纤维排列较为整齐 ( 图 1D) C2-2 组 (CP+HL 基础治疗 + 米

华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月 195 诺环素 + 抗生素组 ), 可见稍增厚的内中膜, 有阳性表达区, 呈棕黄色至黄褐色, 泡沫细胞较少, 平滑肌细胞少量变性, 弹性纤维排列较为整齐 ( 图 1E) C3-1 组 (CP+HL 拔牙组 ), 血管壁厚薄不均, 平滑肌细胞层观察到多个脂质核, 可见钙化坏死组织纤维帽, 细胞数目显著减少,CRP 强阳性表达,

190,P=0.000), 其中 B C 组灰度值均小于 A 组 (P<0.05),C1 组灰度值最低 ; 与 C1 组相比,C 组各干预组 (C2-1 C2-2 C3-1 C3-2) 中除 C3-1 组外, 其灰度值差异均有统计学意义 (P<0.05), 其中 C2-2 组灰度值最高 ;C3-2 组灰度值大于 C3-1 组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 2.

4 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月 195 诺环素 + 抗生素组 ), 可见稍增厚的内中膜, 有阳性表达区, 呈棕黄色至黄褐色, 泡沫细胞较少, 平滑肌细胞少量变性, 弹性纤维排列较为整齐 ( 图 1E) C3-1 组 (CP+HL 拔牙组 ), 血管壁厚薄不均, 平滑肌细胞层观察到多个脂质核, 可见钙化坏死组织纤维帽, 细胞数目显著减少,CRP 强阳性表达, 泡沫细胞较少 ( 图 1F) C3-2 组 (CP+HL 拔牙 + 抗生素组 ), 可见血管壁增厚, 大量泡沫细胞,CRP 阳性表达呈黄褐色, 平滑肌细胞变性萎缩, 弹性纤维排列紊乱 ( 图 1G) 将 CRP 免疫组织化学染色结果进行半定量分析, 结果见表 1 阳性染色强度与灰度值呈反比, 即阳性染色越强, 则灰度值越小, 分析结果可见 : 不同组的差异有统计学意义 (F= ,P=0.000), 其中 B C 组灰度值均小于 A 组 (P<0.05),C1 组灰度值最低 ; 与 C1 组相比,C 组各干预组 (C2-1 C2-2 C3-1 C3-2) 中除 C3-1 组外, 其灰度值差异均有统计学意义 (P<0.05), 其中 C2-2 组灰度值最高 ;C3-2 组灰度值大于 C3-1 组, 差异有统计学意义 (P<0.05) 2.2 颈动脉血管组织牙龈卟啉单胞菌 DNA 相对含量颈动脉血管组织牙龈卟啉单胞菌 DNA 的相对含量见图 2 和表 2 表 1 CRP 在各组颈动脉血管壁阳性表达的灰度值 Tab 1 Gray values of CRP positive expression in carotid artery in different groups n=7, x±s 组别灰度值 A 150.1±12.2 B 92.2±5.8 a C1 70.9±4.3 ab C ±7.6 ac C ±5.2 abcd C ±8.4 abde C ±6.1 abcde 注 :a b c d e 分别表示与 A B C1 C2-1 C2-2 组相比, P<0.05 左 : 通用引物扩增结果 ;M:Trans2K plus DNA Marker 5000;1: 阳性对照 ;2: 阴性对照 ;3~9:A B C1 C2-1 C2-2 C3-1 C3-2 组的部分样本阳性右 : 牙龈卟啉单胞菌特异性引物扩增结果 ;M:Trans2K plus DNA Marker 5000;1: 阳性对照 ;2: 阴性对照 ;3~9:A B C1 C2-1 C2-2 C3-1 C3-2 组的部分样本阳性图 2 颈动脉部分样本的聚合酶链反应扩增产物电泳结果 Fig 2 Electrophoresis results of polymerase chain reaction amplification product of carotid artery samples 表 2 牙龈卟啉单胞菌在各组颈动脉血管壁的相对含量 Tab 2 The relative expression of Porphyromonas gingivalis in carotid artery in different groups n=7, x±s 组别牙龈卟啉单胞菌相对含量 A 0.58±0.12 B 0.66±0.11 a C1 1.22±0.07 abd C ±0.16 abc C ±0.13 abcd C ±0.04 abcde C ±0.09 cdef 注 :a b c d e f 分别表示与 A B C1 C2-1 C2-2 C3-1 组相比,P<0.05 由图 2 可见, 所有大鼠的颈总动脉分叉区组织标本均扩增出预期条带, 牙龈卟啉单胞菌检出率为 100% 每份标本使用通用引物和细菌特异性引物进行聚合酶链式反应扩增后, 扩增产物的电泳结果表现不完全相同经 16sRNA 半定量检测, 牙龈卟啉单胞菌在各组中的相对含量见表 2 由表 2 可见,C1 组最高, 达到 1.22±0.07, 明显高于 A B 组, 差异有统计学意义 (P<0.05); 与 C1 组相比,C 组各干预组 (C2-1 C2-2 C3-1 C3-2) 的相对含量均降低, 差异有统计学意义 (P<0.05); 在基础治疗组,C2-2 组牙龈卟啉单胞菌的相对含量较 C2-1 组更低 (P< 0.05); 所有干预组 (C2-1 C2-2 C3-1 C3-2) 中, C3-2 组牙龈卟啉单胞菌的相对含量最低 (P<0.05), 提示拔牙 + 抗生素的应用在降低牙龈卟啉单胞菌含量

5 196 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月方面更有效 3 讨论目前已有大量流行病学及实验数据支持牙周炎可促进动脉粥样硬化疾病进程这一观点,CRP 作为联系这两大炎症性疾病的重要炎症标志物, 其作用 [4-5] 已经得到了充分的验证 [2-3] 本课题组在前期研究中发现, 牙周干预治疗不同时期血清 CRP 的含量呈现动态变化, 牙周基础治疗单纯药物治疗以及拔除患牙等口腔干预措施在短期内都可能增加动脉粥样硬化的风险, 而长期效果则显示可能会降低该风险本实验在前期研究基础上, 取大鼠处死后双侧颈动脉血管组织, 一侧血管组织采用免疫组织化学法检测 CRP 的相对含量, 另一侧组织采用 16sRNA 的方法检测牙龈卟啉单胞菌的相对含量, 结果发现 : 自然进程组血管病变最严重, 出现动脉粥样硬化斑块纤维帽及钙盐沉积, 血管 CRP 阳性表达及细菌相对含量最高, 提示伴有 HL 的牙周炎大鼠如果不予治疗任其病变发展, 可能会加重其血管病变, 并且 CRP 和牙龈卟啉单胞菌可能均参与了该病变的过程 [6] DeStefano 等的研究发现, 牙周治疗能够降低包括血清 CRP 在内的一些炎症因子的浓度本实验进行口腔干预后, 各干预组与自然进程组相比, 血管壁 CRP 阳性表达弱, 血管病变程度减轻, 这与 De- [6] Stefano 等的研究结果一致本实验中基础治疗辅助局部米诺环素和服用甲硝唑组的血管最接近正常对照组, 各干预组的颈动脉血管局部 CRP 表达及牙龈卟啉单胞菌检出量均降低, 其中基础治疗辅助局部米诺环素和服用甲硝唑组 CRP 的阳性表达最低这提示在牙周基础治疗的基础上加用局部及全身药物可能会有助于颈动脉血管的改善这与本课题组前期血清 CRP 变化的研究结果一致, 均提示对合并 HL 的牙周炎患者进行治疗时, 辅以局部及全身药物治疗, 可能会降低有创治疗引起的全身炎症反应加剧而可能造成 CVD 发生的风险拔牙组结果显示, 单纯拔牙对颈动脉血管造成的风险可能不亚于自然进程组, 拔牙后辅以甲硝唑则可显著降低该风险这提示临床对于合并 HL 的牙周炎患者, 即使是拔除不能保留的牙周炎患牙, 也应该辅以全身药物以降低风险各型牙周致病菌中, 牙龈卟啉单胞菌是证据充分的牙周致病菌, 各类研究报告的检出率各有不同, [7-8] 84%~100% 不等本实验结果显示: 与自然进程组和牙周基础治疗组相比, 拔牙组的颈动脉血管组织牙龈卟啉单胞菌的相对含量显著下降 (P<0.05), 拔牙时辅以抗生素组的细菌相对含量最低 (P<0.01), 这提示在降低血管内牙龈卟啉单胞菌含量方面, 拔牙措施较常规牙周基础治疗措施更彻底由此推测, 临床上及时拔除无法保留的松动患牙, 可能更有利于降低牙周组织及颈动脉血管中牙周病原菌的数 [9] 量 Takamatsu 等曾采用 DNA 探针法检测牙周基础治疗对牙周致病菌检出率的影响, 发现牙周基础治疗可使牙龈卟啉单胞菌减少, 与本研究结果一致值得注意的是, 本实验在所有的颈动脉标本中均检 [10] 测到牙龈卟啉单胞菌, 检出率为 100% Ford 等采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测动脉粥样硬化斑块, 牙龈卟啉单胞菌的检出率为 100%; 另外的研 [11-12] 究则较低, 分别为 26% 和 21.6% 本研究中, 对照组也检测出牙龈卟啉单胞菌, 提示该细菌可能是口腔常驻菌统计学分析显示, 虽然对照组与 HL 组均有牙龈卟啉单胞菌的检出, 但组间差异有统计学意义, 二者与 HL+CP 组间的差异也均有统计学意义 (P<0.01) 由此推测: 牙龈卟啉单胞菌作为口腔常驻菌, 在健康牙周组织内即存在, 且易通过咀嚼等口腔运动随血液循环播散定植于血管分叉处, 但此时菌量很少, 并不会导致血管的炎症改变本课题组将进一步对牙周组织内牙龈卟啉单胞菌进行检测, 以验证此结论综上所述, 伴有 HL 的牙周炎大鼠如果不干预任其病变发展, 颈动脉血管的动脉粥样硬化病变会明显加重, 并且 CRP 和牙龈卟啉单胞菌可能均参与了病变过程进行各种口腔干预措施时, 拔牙在降低血管内口腔致病菌含量方面有优势, 但是牙周基础治疗对改善血管局部炎症反应较拔牙更有效 ; 但二者均属于侵入性治疗方法, 其造成的炎症反应有加剧动脉粥样硬化病变的风险, 辅助局部和全身抗生素应用则可以有效降低风险临床上对于此类患者的治疗应综合考虑各方面因素, 选出最佳方案 [ 参考文献 ] [1] Bartova J, Sommerova P, Lyuya-Mi Y, et al. Periodontitis as a risk factor of atherosclerosis[j]. J Immunol Res, 2014, 2014: 林牧, 任秀云, 常乐, 等. 大鼠慢性牙周炎模型中牙龈卟啉单胞菌的检测 [J]. 国际口腔医学杂志, 2013, 40(5): Lin M, Ren XY, Chang L, et al. Detection of Porphyromonas gingivalis in SD rats with chronic periodontitis[j]. Int J Stomatol, 2013, 40(5):

6 华西口腔医学杂志第 35 卷第 2 期 2017 年 4 月 197 [3] 任秀云, 常乐, 岳姿洁, 等. 辅以抗生素的牙周机械治疗对伴动脉粥样硬化牙周炎大鼠的颈动脉及血清超敏 C- 反应蛋白的影响 [J]. 华西口腔医学杂志, 2013, 31(5): Ren XY, Chang L, Yue ZJ, et al. Effects of periodontal mechanical therapy with local and systemic drugs on carotid artery and serum high-sensitivity C-reactive protein in rats with chronic periodontitis associated with atherosclerosis [J]. West Chin J Stomatol, 2013, 31(5): [4] Slade GD, Offenbacher S, Beck JD, et al. Acute-phase inflammatory response to periodontal disease in the US population[j]. J Dent Res, 2000, 79(1): [5] Devaraj S, Yun JM, Duncan-Staley C, et al. C-reactive protein induces M-CSF release and macrophage proliferation [J]. J Leukoc Biol, 2009, 85(2): [6] DeStefano F, Anda RF, Kahn HS, et al. Dental disease and risk of coronary heart disease and mortality[j]. BMJ, 1993, 306(6879): [7] 王者玲, 岗本公彰, 杨圣辉, 等. PCR 直接检测龈下菌斑主要可疑牙周致病菌 [J]. 中国微生态学杂志, 2003, 15(2): Wang ZL, Masaaki O, Yang SH, et al. Detection of main putative periodontopathic bacteria in subgingival plaque by polymerase chain reaction[j]. Chin J Microecol, 2003, 15(2): [8] 冯向辉, 孟焕新. 牙周炎可疑致病微生物的检测及抗 Aa 抗体水平的分析 [D]. 北京 : 北京大学, Feng XH, Meng HX. Detecting the suspicious pathogenic microorganism of periodontitis and analyzing the level of Aa antibody[d]. Beijing: Peking University, [9] Takamatsu N, Yano K, He T, et al. Effect of initial periodontal therapy on the frequency of detecting Bacteroides forsythus, Porphyromonas gingivalis, and Actinobacillus actinomycetemcomitans[j]. J Periodontol, 1999, 70(6): [10] Ford PJ, Gemmell E, Hamlet SM, et al. Cross-reactivity of GroEL antibodies with human heat shock protein 60 and quantification of pathogens in atherosclerosis[j]. Oral Microbiol Immunol, 2005, 20(5): [11] Haraszthy VI, Zambon JJ, Trevisan M, et al. Identification of periodontal pathogens in atheromatous plaques[j]. J Periodontol, 2000, 71(10): [12] Ishihara K, Nabuchi A, Ito R, et al. Correlation between detection rates of periodontopathic bacterial DNA in coronary stenotic artery plaque and in dental plaque samples[j]. J Clin Microbiol, 2004, 42(3): ( 本文编辑吴爱华 ) N-Cements 义获嘉伟瓦登特公司推出全新的树脂基粘接类水门汀系列产品义获嘉伟瓦登特公司推出新的自粘接树脂水门汀 Multilink Speed, 自此,N-Cements 的全线产品全面推向中国市场 N-Cements 的所有产品均基于义获嘉伟瓦登特公司在欧美市场获得成功的树脂水门汀产品开发而来, 以合理的价格卓越的粘接强度与美学效果为中国的口腔医师提供完备的产品与服务 Variolink N 是一种多功能美学粘接系统, 采用光 - 双固化设计, 可以选择多种颜色, 为美学修复体提供了强大的粘接支持套装内包含 Syntac 粘接系统, 在确保粘接水门汀颜色稳定的同时提供了足够的粘接强度 Variolink N 适用于粘接由玻璃陶瓷二矽酸锂树脂制成的美学修复体 ( 贴面嵌体前牙单冠等 ) Multilink N 是一种通用型高强度自酸蚀自固化树脂粘接水门汀, 配合全瓷 / 树脂处理液 (Monobond-S) 及金属 / 氧化锆处理液 (Metal/Zirconia Primer) 使用, 可用于粘接各种材料制成的各类修复体, 包括金属烤瓷玻璃陶瓷二矽酸锂氧化锆陶瓷烤塑等, 表现出强大持久的粘接强度并具有广泛的临床适用范围 Multilink Speed 是一种通用型自粘接自固化树脂水门汀由于特殊添加的酸性单体 MDP, 所以 Multilink Speed 能直接与牙体硬组织产生强大的化学粘接力 Multilink Speed 使用方法快捷简便, 可以有效地减少临床步骤, 节约操作时间, 适用于所有高强度修复体, 如二矽酸锂氧化锆陶瓷金属烤瓷烤塑等修复体的粘接义获嘉伟瓦登特公司

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环球中医药 2016 年 5 月第 9 卷第 5 期摇 Global Traditional Chinese Medicine, May 2016,Vol 郾 9, No 郾 5 摇 557 两种电针对脊髓损伤 14 天后大鼠运动功能神经元及 MEK2 p 鄄 ERK1 表达的影响论著宋良玉摇吕威摇景泉凯摇莫雨