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1 摇南京农业大学学报摇 013,36(3):89-94 http: / / nauxb. njau. edu. cn 摇 Journal of Nanjing Agricultural University doi: / j. issn 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試蒋小强, 白井岩, 吴洁, 等. 荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因 SNP 位点与生产性能及乳房炎抗性的相关性研究 [ J]. 南京农业大学学报, 013,36(3):89-94 荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因 SNP 位点与生产性能及乳房炎抗性的相关性研究 * 蒋小强, 白井岩, 吴洁, 李莲, 李倩倩, 王根林 ( 南京农业大学动物科技学院, 江苏南京 10095) 摘要 : 利用测序巢式 PCR(Nest 鄄 PCR) 和限制性片段多态性 PCR( restriction fragment length polymorphism,pcr 鄄 RFLP) 方法, 检测 375 头中国荷斯坦牛热休克蛋白 70 鄄 1(heat shock protein 70 鄄 1,HSP70 鄄 1) 和热休克蛋白 3( HSP3) 基因的编码区单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism,snp) 位点, 并分析其基因多态与生产性能及乳房炎抗性的相关性结果表明 : HSP70 鄄 1 基因的 bp 和 HSP3 基因的 bp 位点都发生了 G 寅 A 突变, 这个位点均是沉默突变, 未引起氨基酸序列的改变 ; 经字适合性检验, 试验牛群在个位点均未达到 Hardy 鄄 Weinberg 平衡状态 ; 群体基因座不同基因型与体细胞评分乳脂率乳蛋白成年当量相关性分析的结果表明,HSP70 鄄 1 和 HSP3 的 SNP 位点与乳脂率乳蛋白成年当量相关性不显著,HSP3 SNP 位点基因型与体细胞评分相关性显著 (P = ),HSP70 鄄 1 SNP 位点基因型与体细胞评分相关性不显著 (P = ) 两基因型组合分析发现,HSP70 鄄 1 的 GG 型和 HSP3 的 AA 型为最佳组合, 其体细胞评分显著或极显著低于其他组合, 可将该组合作为抗乳腺炎性状的分子遗传标记关键词 : 荷斯坦牛 ; 热休克蛋白 70; 热休克蛋白 3;SNP 位点 ; 生产性能 ; 乳腺炎抗性中图分类号 :S85. 1 摇摇摇摇文献标志码 :A 摇摇摇摇文章编号 : (013) Single nucleotide polymorphism of HSP70 鄄 1 and HSP3 gene and correlation with production traits and mastitis resistance in Chinese Holstein JIANG Xiaoqiang,BAI Jingyan,WU Jie,LI Lian,LI Qianqian,WANG Genlin * ( College of Animal Science and Technology,Nanjing Agricultural University,Nanjing 10095,China) Abstract:DNA sequencing,nest 鄄 PCR and restriction fragment length polymorphism(pcr 鄄 RFLP)were used to investigate mutations in the coding region of heat shock protein 70 鄄 1(HSP70 鄄 1) and HSP3 gene in 375 Chinese Holstein dairy cows,and the associations between the polymorphisms and production traits and mastitis resistance were analyzed. The G 寅 A mutation at bp in HSP70 鄄 1 gene and G 寅 A mutation at bp in HSP3 gene were found and both of them were silence mutations that caused no alteration in amino acid sequence. Chi 鄄 square test showed both loci were not in Hardy 鄄 Weinberg equilibrium in Chinese Holstein. In the meanwhile, the associations between the polymorphisms and all production traits,except SCS,were not significant. The polymorphism in HSP3 gene affected somatic cell score(scs)significantly(p =0. 041),however,the association between the HSP70 鄄 1 polymorphism and SCS was not significant ( P = ). After analyzing the relation between SCS and combined genotypes, the result showed that the combination of HSP70 鄄 1 genotype GG and the HSP3 genotype AA was the best one,the SCS of this combination was lower than almost all other combinations significantly or very significantly,so this combination may be used as a molecular and genetic marker to improve the phenotype of anti 鄄 mastitis in Chinese Holstein dairy cows. Key words:chinese Holstein;HSP70;HSP3;SNP locus;production traits;mastitis resistance 奶牛乳腺炎是世界上影响奶牛生产的主要疾病之一按炎症的严重程度可以将乳腺炎分为亚临床临床和慢性 3 种形式 [1] 现在乳品价格与牛奶中体细胞数 (SCCs) 有关, 牛奶中体细胞数过高将会影响牛奶的售价另外乳腺炎不但会导致奶牛产奶量下降, 而且其治疗成本很高, 因此乳腺炎的发生将会明显影响牧场的经济效益 [] 收稿日期 : 基金项目 : 十二五冶国家科技支撑计划项目 (011BAD8B0,01BAD1B00); 江苏省农业三新工程项目 (SX ,SXGC[01]394) 作者简介 : 蒋小强, 硕士研究生 * 通信作者 : 王根林, 教授, 研究方向为动物生殖生理及调控,E 鄄 mail:glwang@ njau. edu. cn

2 90 南摇京摇农摇业摇大摇学摇学摇报第 36 卷热休克蛋白是一个保守伴侣蛋白质家族, 它们易被各种应激诱导, 例如高温紫外线辐射细胞毒素类药物等 [3], 它们能够保护细胞免受损伤并且促进新生蛋白的折叠及变性蛋白的重新折叠 [4] 其中热休克蛋白 70(HSP70) 在抗原的呈递交叉呈递过程, 及淋巴细胞巨噬细胞的活化过程和树突细胞的活化成熟过程中都有重要的作用 [5], 因此它在细胞保护炎症反应和自身免疫等生理病理过程中扮演着不可或缺的角色 [6] 热休克蛋白 3(HSP3) 又称为血红素氧合酶 1( HO 鄄 1), 它对重金属氧化应激和其他病理条件的刺激都十分敏感, 多种有害刺激均可诱导细胞表达 HSP3, 在应激反应中起重要的保护作用 [7] 已有研究表明 HSP3 参与由 T 细胞介导的免疫调节 [8] 而乳腺炎通常是指由病原微生物通过乳头导管进入乳腺内腔而引起乳腺发炎的炎症反应 [9] HSP70 和 HSP3 蛋白的重要作用提示我们如果 HSP70 基因和 HSP3 基因的表达与奶牛乳腺炎存在相关性, 其 SNP 位点可以作为奶牛抗乳腺炎性能的分子标记牛的 HSP70 由个基因编码 (HSP70 鄄 1 HSP70 鄄 ), 这个基因位于 3 号染色体, 无内含子, 编码 641 个氨基酸通过对比 GenBank 公布的荷斯坦牛基因序列发现,HSP70 鄄 1 和 HSP70 鄄基因的编码区仅有处核苷酸差异, 它们的不同在于 3 忆非翻译区 HSP3 基因位于 5 号染色体, 共有 5 个外显子, 编码 89 个氨基酸, 全长 bp 本研究以中国荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因作为候选基因, 利用测序 Nest 鄄 PCR PCR 鄄 RFLP 技术, 分析目的基因的遗传多态性及其与奶牛生产性能和体细胞数之间的相关性, 以期找到与中国荷斯坦牛抗乳腺炎性能相关的分子标记, 为选育抗乳腺炎奶牛提供试验依据 1 摇材料与方法 1. 1 摇材料摇试验样本摇 375 头 1 ~ 3 胎次的荷斯坦牛均来自泰州卫岗奶牛场, 每头奶牛用镊子拔取有毛囊的牛毛数根,-0 益冷冻保存备用试验奶牛具备齐全的奶牛生产性能测定 (DHI) 资料及系谱资料摇主要试剂摇 Loading dye mix 限制性内切酶 Fok 玉购自宝生物工程 ( 大连 ) 有限公司, 限制性内切酶 Rsa 玉购自富酶泰斯生物技术 ( 深圳 ) 有限公司蛋白酶 K 琼脂糖凝胶等购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司 DNA 微量提取试剂盒购自南京润邦生物技术有限公司 1. 摇方法摇基因组 DNA 的提取摇采用痕量 DNA 提取试剂盒提取毛囊样本 DNA 1.. 摇引物设计和 PCR 扩增摇根据 NCBI 登录号为 AY NC_ 的荷斯坦奶牛 HSP70 鄄 1 基因和 HSP3 基因序列共设计了 7 对引物其中, 由于 HSP70 鄄 1 基因和 HSP70 鄄基因序列相似性非常高, 为了避免对 HSP70 鄄的错误扩增, 设计了 1 对引物覆盖 HSP70 鄄 1 基因全长并跨到其 3 忆非翻译区以此 PCR 产物为模板, 再设计引物对相关序列进行扩增 [10] 引物序列扩增的基因范围片段大小及复性温度见表 1 Nest 鄄 PCR 扩增的第 1 步反应体系是 10 滋 L, 包括 : 模板 0. 5 滋 L Loading dye mix 5 滋 L 10 滋 mol L -1 上下游引物各 0. 4 滋 L 超纯水 3. 7 滋 L 第步的反应体系是 0 滋 L, 包括 : 第 1 步 PCR 产物 1 滋 L Loading dye mix 10 滋 L 10 滋 mol L -1 的上下游引物各 0 郾 8 滋 L 超纯水 7. 4 滋 L PCR 条件 :94 益变性 5 min;94 益变性 40 s,54 ~ 67 益复性 40 s,7 益延伸 40 s 第 1 步扩增 0 个循环, 第步扩增 35 个循环并且最后再 7 益延伸 8 min 引物编号 Primer code Table 1 摇表 1 摇根据目的基因编码区序列设计的 7 对引物 Seven couples of primer designed based on HSP70 鄄 1 and HSP3 gene in coding region 引物序列 (5 忆寅 3 忆 ) Primer sequence 扩增位置 Amplification site 目的片段长度 / bp Fragment size 复性温度 / 益 Temperature HSP70 鄄 1 P0 F:GCGGCTTAGTCCGTGAGAACA / R:ATCCCAACAGTCTCCATAACAAACA 1 34 ~ HSP70 鄄 1 P1 F:GACGCGGGACAACAACCT / R:CGTCCAGCCAGGAAATCAC 814 ~ HSP3 P1 F:GGGTTGCATCTTAAAGGTAG / R:CACTAATACCACTGCTCTGC ~ HSP3 P F:AGGTGACAAGGATGACTCTG / R:CCTTAAATACGACCCTTGAC ~ HSP3 P3 F:TCACAACCAAACCTCAGACC / R:AGACACCAGAGCCAGACGAC 5 0 ~ HSP3 P41 F:TCTCAAACTATGGTCCCC / R:CTCAGGCTCCTTTTATCC ~ HSP3 P4 F:CTTTACTAGACGCTGCTGAG / R:ATACAGGGAGACAGCAGGAG 6 34 ~ 摇测序摇取 50 头奶牛 DNA 样本, 用引物 HSP70 鄄 1 P0 HSP3 P1 HSP3 P HSP3 P3 HSP3 P41 进行 PCR 扩增, 然后将每 10 头牛相同的 PCR 产物混合测序, 检测 SNP 位点

摇第 3 期摇摇摇蒋小强, 等 : 荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因 SNP 位点与生产性能及乳房炎抗性的相关性研究 91 1.

3 摇数据处理由于体细胞数是数量性状, 其分布频率是偏态的, 因此本试验利用 DHI 资料中的体细胞评分来进行分析对测得的基因型进行统计, 计算出基因频率和基因型频率并进行 Hardy 鄄 Weinberg 平衡检验, 计算多态信息含量有效等位基因数杂合度纯合度采用 SPSS 0.

并且试验牛群均来自同一奶牛场, 因此忽略了季节效应和场际效应其中成年当量已经是胎次的校正值, 在分析这一性状时忽略了胎次效应摇结果与分析.

3 摇第 3 期摇摇摇蒋小强, 等 : 荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因 SNP 位点与生产性能及乳房炎抗性的相关性研究摇 PCR 鄄 RFLP 分析摇根据测序结果选择合适的内切酶, 采用 PCR 鄄 RFLP 法对试验牛群的目的基因进行酶切酶切反应条件同酶产品说明书酶切后用 % 琼脂糖凝胶电泳, 根据凝胶条带图形对目的基因进行分型电泳条件 :1 伊 TBE 80 V 40 min 1. 3 摇数据处理由于体细胞数是数量性状, 其分布频率是偏态的, 因此本试验利用 DHI 资料中的体细胞评分来进行分析对测得的基因型进行统计, 计算出基因频率和基因型频率并进行 Hardy 鄄 Weinberg 平衡检验, 计算多态信息含量有效等位基因数杂合度纯合度采用 SPSS 0. 0 软件的一般线性模型, 对个体基因型与各生产性状的相关性进行检验分析模型为 Y ijk = u+f i +T j +G k +e ijk, 模型中 Y ijk 为个体性状表型值 ;u 为群体平均值 ;F i 为父系效应 ;T j 为胎次效应 ;G k 为标记基因型效应 ;e ijk 为随机误差由于本试验中分析的乳脂率乳蛋白体细胞评分及成年当量均为全年 DHI 资料的平均值, 并且试验牛群均来自同一奶牛场, 因此忽略了季节效应和场际效应其中成年当量已经是胎次的校正值, 在分析这一性状时忽略了胎次效应摇结果与分析. 1 摇 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因多态性分析对 HSP70 鄄 1 P0 引物的 PCR 产物测序发现, 在 HSP70 鄄 1 基因的 bp 处产生 G 寅 A 突变, 形成 3 种基因型 GG GA AA, 测序图谱见图 1 上左 Primer Premier 5. 0 检测发现该位点可用限制性内切酶 Rsa 玉识别, 当 bp 处为 G 时可以切开, 为 A 时切不开用 HSP70 鄄 1 P1 作为 Nest 鄄 PCR 的第次扩增的引物, 由于第次扩增序列中还存在另外一个酶切位点, 因此酶切后会形成以下 3 种带型 :GG(7 60 和 114 bp) GA( 和 60 bp) AA(7 和 174 bp), 此片段的酶切图谱见图 1 上右对 HSP3 各对引物 PCR 产物测序发现, 仅在 HSP3 P41 引物的 PCR 产物序列中存在 SNP 位点, 该位点位于 bp 处, 是 G 寅 A 突变, 形成 3 种基因型 GG GA AA, 测序图谱见图 1 下左软件分析限制性内切酶 Fok 玉可以识别该突变位点, 当 bp 处是 G 时不能切开, 为 A 时可以切开用 HSP3 P4 引物作为第次扩增的引物由于第次扩增序列中还存在另一个酶切位点, 因此酶切后会形成以下 3 种带型 :GG(310 和 51 bp) GA( 和 51 bp) 和 AA(53 57 和 51 bp), 酶切图谱如图 1 下右 Fig. 1 摇图 1 摇 HSP70 鄄 1 和 HSP3 序列测序结果 ( 左 ) 及 HSP70 鄄 1 和 HSP3 酶切图谱 ( 右 ). 摇基因座位在群体中的遗传特性 Sequencing result of HSP70 鄄 1,HSP3(left)and Rsa 玉,Fok 玉 restriction enzyme(right) 对 375 头奶牛基因座位的群体遗传特性的分析表明,HSP70 鄄 1 和 HSP3 位点多态信息含量分别为 0 郾 373 和 0. 86, 属于中度多态经过字适合性检验, 这个位点字值分别为 3. 11(P<0. 01) 和

4 9 南摇京摇农摇业摇大摇学摇学摇报第 36 卷 (P<0. 01), 位点均未达到 Hardy 鄄 Weinberg 平衡状态 ( 表,3) 基因 Gene 表摇中国荷斯坦奶牛 HSP70 鄄 bp 处和 HSP bp 处突变位点基因频率和基因型频率 Table 摇 Gene frequency and genotype frequency in bp mutation locus of HSP70 鄄 1 个体数 Number and bp mutation locus of HSP3 基因型频率 Genotype frequency AA GA GG 等位基因频率 Allelic frequency HSP70 鄄 (10) (140) (133) HSP3 摇 (35) 0. 59(97) (43) A G Table 3 摇表 3 摇基因座位在群体中的多态信息含量杂合度有效等位基因数 Data of polymorphism information contents(pic),hetero zygosities(h),effective number of alleles(ne) 基因 Gene 突变点 Mutation PIC H Ne 字 HSP70 鄄 ** HSP3 摇 ** 摇摇注 : * ** 和表示在和水平上差异显著 Note:The data with * or ** indicate significant difference at or levels.. 3 摇 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因多态性与群体生产性能的方差分析将基因效应视为固定效应, 分析发现检测到的 HSP70 鄄 1 和 HSP3 的 SNP 位点与乳脂率乳蛋白成年当量相关性不显著,HSP3 SNP 位点基因型与体细胞评分相关性显著 (P = ),HSP70 鄄 1 SNP 位点基因型与体细胞评分相关性不显著 (P = ) 父系效应对于各产奶性状的影响都极显著, 胎次只对乳脂率影响显著对个 SNP 位点联合分析表明,HSP70 鄄 1 的 GG 型和 HSP3 的 AA 型为最佳组合, 其体细胞评分都显著或极显著低于其他组合, 详见表 4 ~ 6 Table 4 摇表 4 摇 HSP70 鄄 1 HSP3 联合基因型及各种因素对各种产奶性状 (F 值 ) 的影响 Effects of HSP70 鄄 1,HSP3,combined genotype and other factors on F value of all production traits 性状 Trait 基因 Gene 摇摇父系效应 Father effect 胎次效应 Fetal times effect 基因型效应 Genotype effect 乳脂率 / % Fat rate HSP70 鄄 ** * 摇摇摇摇 HSP ** * Combined genotype ** * 蛋白率 / % Protein rate HSP70 鄄 ** HSP ** Combined genotype ** 体细胞评分 HSP70 鄄 ** (P = ) Somatic cell score HSP ** * Combined genotype. 300 ** (P = ) 成年当量 HSP70 鄄 **. 588 Adults milk equivalent weight HSP ** Combined genotype ** 摇摇 * ** 注 : 同行和表示在和水平上差异显著 Note:The data with * or ** in same row indicate significant difference at or levels. 基因 Gene Table 5 摇表 5 摇 HSP70 鄄 1 与 HSP3 SNP 位点不同基因型的体细胞评分 ( 軈 x 依 SE) The SCS among the genotypes of HSP70 鄄 1 and HSP3 loci in Chinese Holstein 基因型 Genotype GG GA AA HSP70 鄄依 b 依 a 依 ab HSP 依 a 依 b 依 b 摇摇注 : 同行不同小写字母表示在水平上差异显著 Note:The data with different small letters in same row indicate significant difference at level. Table 6 摇表 6 摇 HSP70 鄄 1 与 HSP3 SNP 位点联合基因型的体细胞评分 ( 軈 x 依 SE) The SCS among the combined genotypes of HSP70 鄄 1 and HSP3 loci in Chinese Holstein 基因 Genotype HSP70 鄄 1 GG HSP70 鄄 1 AA HSP70 鄄 1 GA HSP3 GG 依 B 依 B 依 B HSP3 AA. 556 依 Aa 依 a 依 Bb HSP3 GA 依 b 依 a 依 b 摇摇注 : 不同大小写字母表示分别在和水平上差异显著 Note:The data with different capital letters or small letters indicate significant difference at or levels.

5 摇第 3 期摇摇摇蒋小强, 等 : 荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因 SNP 位点与生产性能及乳房炎抗性的相关性研究 93 3 摇讨论我国南方大部分地区夏季气候炎热潮湿, 每年将近有 5 个月的时间气温都较高由于奶牛维持正常体温的上限是 5 ~ 6 益 [11], 当温度超出等热区上限时, 奶牛会不同程度地产生热应激反应, 影响其生产性能大量研究显示, 动物对细菌或病毒感染的免疫能力及动物的生长性能表现都会受到热应激的不利影响 [1-17] 体细胞评分是由体细胞数转化而来, 因为其与乳腺炎有较高的遗传相关性, 因此它是目前 [18] DHI 测定中反映奶牛乳腺健康状况的重要指标之一刘光磊等经过对上海市所有牧场 008 年所有 DHI 测试数据分析发现, 从 8 月份起体细胞数就维持在一个较高的水平推测是闷热潮湿的天气使得奶牛产生了较为严重的热应激, 致使奶牛免疫能力下降, 从而产生了不同程度的乳腺炎由于 HSP70 和 HSP3 蛋白都易被高温及炎症反应所诱导, 并且都直接或间接地参与了机体的免疫反应, 因此推测这两种蛋白的表达水平与乳腺炎的发病率存在一定的相关性 3. 1 摇 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因座位群体遗传特性分析群体基因频率和基因型频率的平衡是建立在一定条件下的, 即大群体随机交配无突变无迁移无选择在畜牧生产中, 人工选择迁移等因素常常会影响这种平衡本研究发现 HSP70 鄄 1 SNP 位点与体细胞评分的相关性不显著 (P = ),HSP3 SNP 位点与体细胞评分相关性显著, 并且 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因座位都未达到 Hardy 鄄 Weinberg 平衡状态, 推测是因为多年来人工选择的间接干预或被分析牛数目过少等原因所致 HSP70 鄄 1 和 HSP3 位点多态信息含量分别为 , 属于中度多态, 均符合座位分子遗传标记的要求 3. 摇 HSP70 鄄 1 和 HSP3 基因多态性与荷斯坦奶牛各种生产性能的关系 [10] 程维杰等研究发现 HSP70 鄄 1 基因的 1 63 bp 处产生 G 寅 A 寅 C 突变, 并且发现这个 SNP 位点与奶牛体细胞评分显著相关, 而 409 bp 位点与之相关性不显著但在本试验中未检测到这个 SNP 位点, 推测是因为试验牛群不同所造成的由表 4 可以看出,HSP70 鄄 1 和 HSP3 SNP 位点与乳脂率乳蛋白成年当量性状的相关性不显著, 而父系效应对于全部产奶性状的影响都是极显著的, 推测以上性状应该是受到多个基因的影响胎次效应只 [10] 对乳脂率影响较为显著, 这与程维杰等的研究结果不符, 推测是在其研究中未考虑父系效应从而扩大了胎次对体细胞评分的影响, 也可能是本试验所选牛群胎次都较为相近 ( 一胎 89 头二胎 70 头三胎 16 头 ) 所致 HSP3 SNP 位点基因型与体细胞评分相关性显著,HSP70 鄄 1 SNP 位点基因型与体细胞评分的相关性虽然未达到统计学意义上的显著水平, 但由于其 P 值较小 (P = ), 已接近显著范围, 所以本试验在之后的分析中也将其纳入了统计分析范围中将个基因联合分析, 发现父系效应对所有 4 个性状的影响都极显著, 胎次只对乳脂率影响显著基因联合效应对体细胞评分的影响虽然不显著, 但是其 P 值较小 (P = ), 推测在更大的群体中其对体细胞评分的影响也许会达到统计学意义上的显著水平由表 5 可以看出,HSP70 鄄 1 GG 型是优势基因型, 它与 GA 型差异显著, 但与 AA 型差异不显著推测其原因可能是 : 虽然 G 寅 A 的突变未改变氨基酸序列, 但是却改变了 mrna 的序列, 可能引起 mrna 空间构象的改变, 从而导致 GA 型转录的 mrna 翻译效率降低 HSP3 的 AA 型为优势基因型, 它与 GG 型差异显著但是与 GA 型差异不显著, 推测原因是 A 为优势基因, 而 GA 型中存在 1 条 A 型链所致由表 6 可以看出,HSP70 鄄 1 的 GG 型和 HSP3 的 AA 型组合 (GGAA) 与其他各组相比, 该组合的体细胞评分均显著或极显著低于其他各组, 但其与 AAAA 型及 AAGA 型差异不显著, 而 AAAA 型 AAGA 型却与其他基因型组合差异不显著因此认为 GGAA 是最佳基因型组合, 可以将其作为荷斯坦奶牛抗乳腺炎的首选基因型组合试验发现的两个 SNP 位点并没有引起目的基因所编码的氨基酸序列的变化, 最佳基因型组合的基因效应是否是因为 SNP 位点引起了 mrna 构象变化而导致其翻译的速率变化所致, 还需要今后在 mrna 及蛋白表达水平上的进一步验证南京卫岗乳业有限公司为本试验提供了试验样本 DHI 数据系谱资料, 谨致谢意参考文献 : [1] 摇 Viguier C,Arora S,Gilmartin N,et al. Mastitis detection:current trends and future perspectives[j]. Cell Press,009,7(8):

6 94 南摇京摇农摇业摇大摇学摇学摇报第 36 卷 [] Yalcin C. Cost of mastitis in Scottish dairy herds with low and high sub 鄄 clinical mastitis problems[ J]. Turk J Vet Animal Science,000,4: [3] Lanneau D,Wettstein G,Bonniaud P,et al. Heat shock proteins:cell protection through protein triage[ J]. The Scientific World Journal,010, 10: [4] Borges T J,Wieten L,van Herwijnen M J,et al. The anti 鄄 inflammatory mechanisms of HSP70[J]. Frontiers in Immunology,01,3:95 [5] Tsan M F,Gao B C. Heat shock proteins and immune system[ J]. Journal of Leukocyte Biology,009,85: [6] Kono H,Rock K L. How dying cells alert the immune system to danger[ J]. Nature Reviews Immunology,008,8(4):79-89 [7] Immenschuh S,Ramadori G. Gene regulation of heme oxygenase 鄄 1 as a therapeutic target[j]. Biochemical Pharmacology,000,60: [8] Yachie A. Heme oxygenase and its role in defense system:paradigm shift of anti 鄄 inflammatory therapy[j]. The Japan Society for Clinical Immu 鄄 nology,007,30(1):11-1 [9] Zhao X,Lacasse P. Mammary tissue damage during bovine mastitis:causes and control[ J]. Journal of Animal Science,008,86:57-65 [10] 程维杰, 李秋玲, 王长法, 等. 荷斯坦牛 HSP70 鄄 1 基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系 [J]. 遗传,009,31(): [11] Berman A,Folman Y,Kaim M,et al. Upper critical temperatures and forced ventilation effects for high yielding dairy cows in a subtropical climate[ J]. Dairy Science,1985,68: [1] Goligorsky M S. The concept of cellular fight 鄄 or 鄄 flight 冶 reaction to stress[j]. American Journal of Physiology:Renal Physiology,001,80(4): [13] Hu Y X,Jin H L,Du X G,et al. Effects of chronic heat stress on immune responses of the foot 鄄 and 鄄 mouth disease DNA vaccination[j]. DNA and Cell Biology,007,6(8): [14] Khajavi M,Rahimi S,Hassan,Z M et al. Effect of feed restriction early in life on humoral and cellular immunity of two commercial broiler strains under heat stress conditions[ J]. British Poultry Science,003,44(3): [15] le Bellego L,van Milgen J,Noblet J. Effect of high temperature and low 鄄 protein diets on the performance of growing 鄄 finishing pigs[j]. Journal of Animal Science,00,80(3): [16] Lu Q,Wen J,Zhang H. Effect of chronic heat exposure on fat deposition and meat quality in two genetic types of chicken[ J]. Poultry Science, 007,86(6): [17] Odongo N E,Alzahal O,Lindinger M I,et al. Effects of mild heat stress and grain challenge on acid 鄄 base balance and rumen tissue histology in lambs[ J]. Journal of Animal Science,006,84(): [18] 刘光磊, 林嵘, 刘文忠, 等. 008 年上海市奶牛生产及原料奶质量分析报告 [J]. 中国奶牛,009(6):59-6 责任编辑 : 周广礼

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Microsoft Word _new_.doc HEREDITAS (Beijing) 2009 2, 31(2): 169 174 ISSN 0253-9772 www.chinagene.cn 研究报告 DOI: 10.3724/SP.J.1005.2009.00169 荷斯坦牛 HSP70-1 基因遗传多态性与乳腺炎抗性关系 1, 程维杰 2, 李秋玲 1, 王长法 1, 王洪梅 1, 李建斌 1, 孙延鸣 2, 仲跻峰 1., 250100;