18 南昌大学学报 ( 医学版 )2017 年 12 月, 第 57 卷第 6 期 10-8 mol L -1 MPP(mediumdoseGEN + MPPgroup), mol L -1 GEN mol L -1 PHTPP(mediumdoseGEN+PHTPPgro

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忘桶裘
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1 南昌大学学报 ( 医学版 )2017 年第 57 卷第 6 期 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.6 17 金雀异黄酮调节小鼠成骨细胞和破骨细胞的介导受体研究李浩 a, 宋培源 b, 张新爱 b, 胡加伟 c, 罗丹 d, 彭维杰 e ( 南昌大学 a. 研究生院医学部 2015 级 ;b. 研究生院医学部 2012 级 ;c. 研究生院医学部 2016 级 ; d. 基础医学院生理学教研室 ;e. 药学院药理学教研室, 南昌 ) 摘要 : 目的探讨金雀异黄酮 (GEN) 对小鼠成骨细胞和破骨细胞的调节效应是否由雌激素受体 α(erα) 雌激素受体 β ( ERβ ) 所介导方法对小鼠单核 / 巨噬细胞系 RAW264.7 小鼠成骨细胞株 MC3T3-E1 进行体外诱导培养将传至第 3 代的细胞随机分为 8 组 :CON 组 ( 正常对照组 ) 细胞未做任何处理, 低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组分别给予浓度为 mol L -1 的 GEN 孵育处理细胞, 中量 GEN+ MPP 组中量 GEN+PHTPP 组分别给予浓度为 mol L -1 的 GEN 和浓度为 mol L -1 的 MPP PHTPP 孵育处理细胞,MPP 组 PHTPP 组分别给予浓度为 mol L -1 的 MPP PHTPP 孵育处理细胞对各组细胞分别采用 ALP 染色茜素红染色 TRAP 染色及进行骨吸收陷窝实验结果 ALP 染色结果显示,CON 组和低量 GEN 组 ALP 阳性细胞数无明显差异 ; 中量 GEN 组 ALP 阳性细胞数较 CON 组多 ; 高量 GEN 组 MPP 组和 PHTPP 组 ALP 阳性细胞数均较 CON 组少 ; 中量 GEN+MPP 组中量 GEN+PHTPP 组 ALP 阳性细胞数较 MPP 组 PHTPP 组均有明显增多 TRAP 染色结果显示, 低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组 TRAP 阳性细胞数均较 CON 组有明显减少 ;MPP 组 PHTPP 组 TRAP 阳性细胞数与 CON 组比较均无明显变化 ; 中量 GEN+MPP 组与 MPP 组比较 TRAP 阳性细胞数无明显差异 ; 中量 GEN+PHTPP 组与 PHTPP 组比较 TRAP 阳性细胞数明显减少茜素红染色结果与 ALP 染色结果一致, 骨吸收陷窝实验结果与 TRAP 染色结果一致结论 GEN 的促小鼠成骨细胞 MC3T3-E1 分化是由 ERα ERβ 所共同介导, 而抑制小鼠 RAW264.7 诱导的破骨细胞的形成主要由 ERα 介导关键词 : 植物雌激素 ; 雌激素受体 ; 金雀异黄酮 ; 成骨细胞 ; 破骨细胞中图分类号 : R285 ;R96;R97 文献标志码 : A 文章编号 : (2017) DOI: /j.cnki.ncdm GenisteinRegulatesMurineOsteoblastsandOsteoclasts viareceptor-mediatedpathway LIHao a,songpei-yuan b,zhangxin-ai b,hujia-wei c,luo Dan d,peng Wei-jie e (a.2015gradeof Medical Departmentof Graduated School;b.2012Gradeof Medical Departmentof Graduated School;c.2016Gradeof Medical Departmentof Graduated School;d.Departmentof Physiology,Schoolof Basic Medical;e.Department of Pharmacology,Schoolof Pharmacy,Nanchang University,Nanchang330006,China) ABSTRACT:Objective Toinvestigatewhethertheregulatingefectofgenestein(GEN)on murine osteoclastsandosteoblastswasmediatedbyestrogenreceptors(erα/erβ ).Methods RAW264.7 celsand MC3T3-E1celswereculturedandpassagedtothethirdgeneration.Then,celswere randomlytreatedwith mol L -1 GEN(lowdoseGENgroup), mol L -1 GEN(medium dosegengroup), mol L -1 GEN(highdoseGENgroup), mol L -1 GEN+1 收稿日期 : 作者简介 : 李浩 (1992 ), 男, 硕士研究生, 主要从事高糖与雌激素受体对心血管系统影响的研究通信作者 : 彭维杰, 教授, weijiepeng@126.com

2 18 南昌大学学报 ( 医学版 )2017 年 12 月, 第 57 卷第 6 期 10-8 mol L -1 MPP(mediumdoseGEN + MPPgroup), mol L -1 GEN mol L -1 PHTPP(mediumdoseGEN+PHTPPgroup), mol L -1 MPP(MPPgroup),or mol L -1 PHTPP(PHTPPgroup).CelsinCONgroupreceivednotreatment.ALP,alizarin redandtrapstainingandboneresorption-pitassaywerecarriedoutineachgroup.results TherewasnosignificantdiferenceinthenumberofALP-positivecelsbetweenCONgroupand lowdosegengroup.comparedwithcongroup,thenumberofalp-positivecelsincreasedin mediumdosegengroup,butdecreasedinhighdosegengroup,mppgroupandphtppgroup. Comparedwith MPPgroupand PHTPP group,thenumberofalp-positivecelsincreasedin middledosegen+ MPPgroupand middledosegen+phtppgroup.trapstainingshowed thatthenumberoftrap-positivecelsinlowdosegengroup,middledosegengrouporhigh dosegengroupwaslowerthanthatincongroup.however,thenumberoftrap-positivecels incongroupwasnotdiferentfromthatin MPPgrouporPHTPPgroup,andthediferencewas notsignificantbetween MPPgroupandPHTPPgroup.ComparedwithPHTPPgroup,thenum- beroftrap-positivecelsdecreasedinmiddledosegen+phtppgroup.theresultsofalizarin redstainingandboneresorption-pitassaywereconsistentwithalpstainingandtrapstaining, respectively.conclusion BothERαandERβmediatethepromotingefectofGENondiferentia- tionof MC3T3-E1 cels,while ERα mediatedtheinhibiting efectof GEN onformation of RAW264.7cels. KEY WORDS:phytoestrogen;estrogenreceptor;genistein;osteoblasts;osteoclasts 骨质疏松症 (OP) 是以骨量减少及骨微观结构的退化为特征, 并导致骨脆性增加和骨折发生率增 [1] 高的一种常见的慢性疾病 OP 发病率随年龄的增大而增加, 其中绝经后妇女的发病率明显高于同龄老年男性 [2-3] 绝经后的女性雌激素水平的下降是导致 OP 发病率上升的主要原因之一, 临床上多 [4] 用替代疗法 (HRT) 来治疗绝经后综合征有研 [5-7] 究表明, 长期使用外源性雌激素极易造成子宫内膜乳腺卵巢等组织的癌变, 也由于其风险性导致患者对 HRT 的依从性不断降低因此, 寻找安全有效经济的植物来源的雌激素替代物, 已成为世界医学界共同关心的课题植物雌激素 (PE) 是一种来源广泛且无明显的毒副作用的选择性雌激素受体 (ER) 调节, 结构与 17β- 雌二醇相似, 可产生拟雌激素样作用 [8-9] PE 对雌激素的分泌具有双向调控作用 : 在机体雌激素水平下降时,PE 与 ER 结合进入细胞核, 参与调控 ER 蛋白的转录与翻译, 进而促使机体雌激素水平上调 ; 在雌激素水平过高时, 能够竞争性阻断雌激素与 ER 结合, 从而具有抗雌激素作用, 可以减少妇女罹患子宫内膜癌等妇科肿瘤的风险 [10-11] PE 主要通过作用于 ER, 进而调节与骨吸收骨形成有关的多种细胞因子的水平, 发挥骨保护作 [5] 用 PE 分为 3 类 : 异黄酮类木酚素类香豆素类异黄酮类最为常见, 其主要有金雀异黄酮 (GEN) 大豆苷元等目前, 有研究 [12] 认为, 异黄酮类的骨保护作用主要由 ERβ 介导, 其对 ERβ 亲和 [13] 力和活性比 ERα 更强有研究显示,ERα 基因多态性影响膳食异黄酮类 PE 的骨代谢调节作用, 但与 ERβ 多态性无关, 提示异黄酮类 PE 的骨效应可能与 ERα 相关, 这与传统观点不一致为此, 本研究以 GEN 为异黄酮类 PE 的代表, 探讨 GEN 骨保护作用是由何种 ER 受体亚型所介导 1 材料与方法 1.1 实验材料小鼠单核 / 巨噬细胞系 RAW264.7 购自武汉博士德生物工程有限公司 ; 小鼠成骨细胞株 MC3T3- E1 购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心 ; 胰蛋白酶 GEN ERα 阻断 MPP 和 ERβ 阻断 PHTPP 均购自美国 Sigma 公司 ;RANKL MCSF 均购自美国 PeproTech 公司 ;α-dmem 培养基购自北京索莱宝科技有限公司 ; 碱性磷酸酶染色试盒抗酒石酸酸性磷酸酶试盒均购自南京建成生物工程研究所 ;96 孔骨吸收培养板购自美国 Corning 公司 ; 特级胎牛血清 (FBS) 购自中国医学科学院生物医学工程研究所 CO 2 培养箱购自日本 Sanyo 公司, 型号 :MCO-15AC; 荧光显微镜购自日本 Olympus 公司, 型号 :TH4-200; 超净化工作台购自苏州净化设备有限公司, 型号 :SW-CJ-2FD; 电子

李浩等 : 金雀异黄酮调节小鼠成骨细胞和破骨细胞的介导受体研究 19 天平购自上海舜宇恒平科学仪器有限公司, 型号 : FA2004; 恒温水浴锅购自上海智城分析仪器制造有限公司, 型号 :ZSBB-724 1.2 实验方法 1.2.1 细胞培养与实验分组干预方法将冻存的小鼠单核 / 巨噬细胞系 RAW264.

25% 胰酶消化, 待细胞皱缩变圆后, 加入含 10%FBS 的 α-dmem 培养基终止消化并收集细胞于离心管中, 1000r min -1 离心 3 min, 用含 10%FBS 的 α- DMEM 培养基重悬细胞沉淀并种植于新的培养瓶中培养待细胞生长至 80% ~100% 融合时, 以 1 3 进行传代将传至第 3 代的细胞随机分为 8 组 : CON 组 ( 正常对照组 )

组分别给予浓度为 1 10-8 mol L -1 的 MPP PHTPP 孵育处理细胞 1.2.2 成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP) 染色及 ALP 阳性细胞计数采用 ALP 染色检测各组成骨细胞分化程 [14] 度, 具体操作根据试盒说明书进行在光学显微镜下拍照并进行 ALP 阳性细胞计数 1.2.3 茜素红染色及染色情况的观察对各组细胞采用茜素红染色, 具体操作根据试盒说明书进行操作在光学显微镜下拍照并观察红色络合物的情况 1.

3 统计学方法采用 SPSS20.0 统计软件进行数据处理, 计量资料以 x±s 表示, 组间比较采用单因素方差分析, 方差齐性用 LSD 法, 以 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.

3 李浩等 : 金雀异黄酮调节小鼠成骨细胞和破骨细胞的介导受体研究 19 天平购自上海舜宇恒平科学仪器有限公司, 型号 : FA2004; 恒温水浴锅购自上海智城分析仪器制造有限公司, 型号 :ZSBB 实验方法细胞培养与实验分组干预方法将冻存的小鼠单核 / 巨噬细胞系 RAW264.7 小鼠成骨细胞株 MC3T3-E1 取出, 立即放置 37 恒温水浴锅中进行解冻, 将细胞转移至加有完全培养基的离心管中,800r min -1 离心 3min 弃上清, 加入含 10%FBS 的 α-dmem 培养基重悬细胞然后, 将细胞种植于培养瓶中, 置于 37 5%CO 2 培养箱中培养取对数生长期细胞进行传代培养, 吸弃旧培养基, 用 PBS 清洗细胞 3 次, 加入 0.25% 胰酶消化, 待细胞皱缩变圆后, 加入含 10%FBS 的 α-dmem 培养基终止消化并收集细胞于离心管中, 1000r min -1 离心 3 min, 用含 10%FBS 的 α- DMEM 培养基重悬细胞沉淀并种植于新的培养瓶中培养待细胞生长至 80% ~100% 融合时, 以 1 3 进行传代将传至第 3 代的细胞随机分为 8 组 : CON 组 ( 正常对照组 ) 细胞未做任何处理, 低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组分别给予浓度为 mol L -1 的 GEN 孵育处理细胞, 中量 GEN+MPP 组中量 GEN+PHTPP 组分别给予浓度为 mol L -1 的 GEN 浓度为 mol L -1 的 MPP PHTPP 孵育处理细胞,MPP 组 PHTPP 组分别给予浓度为 mol L -1 的 MPP PHTPP 孵育处理细胞成骨细胞碱性磷酸酶 (ALP) 染色及 ALP 阳性细胞计数采用 ALP 染色检测各组成骨细胞分化程 [14] 度, 具体操作根据试盒说明书进行在光学显微镜下拍照并进行 ALP 阳性细胞计数茜素红染色及染色情况的观察对各组细胞采用茜素红染色, 具体操作根据试盒说明书进行操作在光学显微镜下拍照并观察红色络合物的情况酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP) 染色及 TRAP 阳性细胞计数对各组细胞采用 TRAP 染色, 具体操作根据试盒说明书进行操作在光学显微镜下进行 TRAP 阳性多核细胞计数在高倍光学显微镜下细胞胞浆呈紫红色, 且细胞核数 3 计为 TRAP 阳性细胞骨吸收陷窝实验及陷窝面积按文献 [15] 的方法对各组细胞进行骨吸收陷窝实验在光学显微镜下观察骨吸收陷窝数目及陷窝面积 1.3 统计学方法采用 SPSS20.0 统计软件进行数据处理, 计量资料以 x±s 表示, 组间比较采用单因素方差分析, 方差齐性用 LSD 法, 以 P<0.05 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 GEN ER 阻断对成骨细胞 ALP 的影响光学显微镜下 CON 组和低量 GEN 组 ALP 阳性细胞数无明显差异 ; 中量 GEN 组 ALP 阳性细胞数较 CON 组多 ; 高量 GEN 组 MPP 组和 PHTPP 组 ALP 阳性细胞数均较 CON 组少 ; 中量 GEN+MPP 组中量 GEN+PHTPP 组 ALP 阳性细胞数较 MPP 组 PHTPP 组均有明显增多见图 1 A:CON 组 ;B C D: 低中高量 GEN 组 ;E: 中量 GEN+MPP 组 ;F: 中量 GEN+PHTPP 组 ;G:MPP 组 ;H:PHTPP 组图 1 光学显微镜下观察各组 ALP 阳性细胞

２０南昌大学学报医学版２０１７年１２月第５７卷第６期低量ＧＥＮ组ＡＬＰ阳性细胞数与ＣＯＮ

ＰＨＴＰＰ组ＡＬＰ阳性细胞数均明显减少Ｐ００５或Ｐ００１与ＭＰＰ组比较中量ＧＥＮＭＰＰ组

组和 ALP 阳性细胞数 / 个中量ＧＥＮ组ＡＬＰ阳性细胞数明显增多高量 150 * 100

EN+ +PH 量量 N 高量 G GE 中低量中中 PH ＰＨＴＰＰ组红褐色斑块均较ＣＯＮ组明显减少

ＭＰＰＰ０中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组红褐色斑块较ＰＨＴＰＰ组图２各组ＡＬＰ阳性细胞数的比较组比较Ｐ

ＰＨＴＰＰ组ＧＭＰＰ组ＨＰＨＴＰＰ组Ａ图３光学显微镜下观察各组成骨细胞２３ＧＥＮ和ＥＲ

组比较ＴＲＡＰ阳性细胞数无明显差异中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组性细胞数均较ＣＯＮ组有明显减少

4 ２０南昌大学学报医学版２０１７年１２月第５７卷第６期低量ＧＥＮ组ＡＬＰ阳性细胞数与ＣＯＮ组比较差异无统计学意义Ｐ００５与ＣＯＮ组比较明显增多见图３ 200 ＧＥＮ组ＭＰＰ组ＰＨＴＰＰ组ＡＬＰ阳性细胞数均明显减少Ｐ００５或Ｐ００１与ＭＰＰ组比较中量ＧＥＮＭＰＰ组ＡＬＰ阳性细胞数明显增多Ｐ００１与ＰＨＴＰＰ组比较中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组ＡＬＰ阳性细胞数明显增多Ｐ００１见图２２２ＧＥＮ和ＥＲ阻断对成骨细胞分化成熟程度的影响光学显微镜下低中量ＧＥＮ组红褐色斑块均较ＣＯＮ组明显增多高量ＧＥＮ组ＭＰＰ组和 ALP 阳性细胞数 / 个中量ＧＥＮ组ＡＬＰ阳性细胞数明显增多高量 150 * 100 # ## 50 0 CO 组 N GE N 组 N组 N组 P组 P组 P组 P组 TP GE GE MP TP MP 量 EN+ +PH 量量 N 高量 G GE 中低量中中 PH ＰＨＴＰＰ组红褐色斑块均较ＣＯＮ组明显减少中量ＧＥＮＭＰＰ组红褐色斑块较ＭＰＰ组明显增多０５Ｐ００１与ＣＯＮ组比较Ｐ００１与ＭＰＰＰ０中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组红褐色斑块较ＰＨＴＰＰ组图２各组ＡＬＰ阳性细胞数的比较组比较Ｐ００１与ＰＨＴＰＰ组比较ＢＣＤ低中高量ＧＥＮ组Ｅ中量ＧＥＮＭＰＰ组Ｆ中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组ＧＭＰＰ组ＨＰＨＴＰＰ组Ａ图３光学显微镜下观察各组成骨细胞２３ＧＥＮ和ＥＲ阻断对破骨细胞生成数的影响光学显微镜下低中高量ＧＥＮ组ＴＲＡＰ阳变化中量ＧＥＮＭＰＰ组与ＭＰＰ组比较ＴＲＡＰ阳性细胞数无明显差异中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组性细胞数均较ＣＯＮ组有明显减少ＭＰＰ组ＰＨＴ与ＰＨＴＰＰ组比较ＴＲＡＰ阳性细胞数明显减少见图４ＰＰ组ＴＲＡＰ阳性细胞数与ＣＯＮ组比较均无明显ＣＯＮ组ＢＣＤ低中高量ＧＥＮ组Ｅ中量ＧＥＮＭＰＰ组Ｆ中量ＧＥＮＰＨＴＰＰ组ＧＭＰＰ组ＨＰＨＴＰＰ组Ａ图４光学显微镜下观察各组ＴＲＡＰ阳性细胞

李浩等 : 金雀异黄酮调节小鼠成骨细胞和破骨细胞的介导受体研究 21 与 CON 组比较, 低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组 TRAP 阳性细胞数均明显减少 ( 均 P<0.01);MPP 组 PHTPP 组 TRAP 阳性细胞数与 CON 组比较差异均无统计学意义 (P > 0.

4 GEN ER 阻断对破骨细胞骨吸收能力的影响光学显微镜下显示低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组骨吸收陷窝面积较 CON 组均有明显减小 ;MPP 组 PHTPP 组骨吸收陷窝面积较 CON 组无明显变化 ; 中量 GEN+MPP 组骨吸收陷窝面积较 MPP 组无明显变化 ; 中量

异黄酮是最常见的一类膳食 PE 有研究证明,GEN 能明显改善骨组织 BMD 等形态学及生物力学的指标, 对骨质疏松有很好的治疗作用本研究结果显示, 与 CON 组比较, 中量 GEN 组 ALP 阳性细胞数明显增多, 高量 GEN 组 ALP 阳性细胞数均明显减少 (P<0.05 或 P<0.

01), 并且低中高量组的骨吸收陷窝面积也较 CON 组有明显减少, 说明中量 GEN 能抑制破骨细胞的形成, 促进成骨细胞的分化成熟, 从而达到抑制骨吸收, 促进骨形成, 而高量 GEN 能抑制成骨细胞的分化 ER 的两种亚型在骨组织中均有表达, 但有研 [16-17] 究认为 PE 的作用主要来自于 ERβ

5 李浩等 : 金雀异黄酮调节小鼠成骨细胞和破骨细胞的介导受体研究 21 与 CON 组比较, 低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组 TRAP 阳性细胞数均明显减少 ( 均 P<0.01);MPP 组 PHTPP 组 TRAP 阳性细胞数与 CON 组比较差异均无统计学意义 (P > 0.05); 中量 GEN+MPP 组 TRAP 阳性细胞数与 MPP 组比较差异无统计学意义 (P>0.05); 中量 GEN+PHTPP 组 TRAP 阳性细胞数与 PHTPP 组比较明显减少 (P<0.01) 见图 GEN ER 阻断对破骨细胞骨吸收能力的影响光学显微镜下显示低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组骨吸收陷窝面积较 CON 组均有明显减小 ;MPP 组 PHTPP 组骨吸收陷窝面积较 CON 组无明显变化 ; 中量 GEN+MPP 组骨吸收陷窝面积较 MPP 组无明显变化 ; 中量 GEN+PHTPP 组骨吸收陷窝面积较 PHTPP 组明显减小见图 6 TRAP 阳性细胞数 / 个 CON 组低量 GEN 组中量 GEN 组 ## 高量 GEN 组中量 GEN+MPP 组中量 GEN+PHTPP 组 MPP 组 PHTPP 组 P<0.01 与 CON 组比较,##P<0.01 与 PHTPP 组比较图 5 各组 TRAP 阳性细胞数的比较 A:CON 组 ;B C D: 低中高量 GEN 组 ;E: 中量 GEN+MPP 组 ;F: 中量 GEN+PHTPP 组 ;G:MPP 组 ;H:PHTPP 组图 6 光学显微镜下观察各组骨吸收陷窝 3 讨论 [14] 异黄酮是最常见的一类膳食 PE 有研究证明,GEN 能明显改善骨组织 BMD 等形态学及生物力学的指标, 对骨质疏松有很好的治疗作用本研究结果显示, 与 CON 组比较, 中量 GEN 组 ALP 阳性细胞数明显增多, 高量 GEN 组 ALP 阳性细胞数均明显减少 (P<0.05 或 P<0.01); 茜素红染色实验证明低量 GEN 组中量 GEN 组红褐色斑块均较 CON 组明显增多, 高量 GEN 组红褐色斑块均较 CON 组明显减少 ; 低量 GEN 组中量 GEN 组高量 GEN 组 TRAP 阳性细胞数均明显减少 ( 均 P<0.01), 并且低中高量组的骨吸收陷窝面积也较 CON 组有明显减少, 说明中量 GEN 能抑制破骨细胞的形成, 促进成骨细胞的分化成熟, 从而达到抑制骨吸收, 促进骨形成, 而高量 GEN 能抑制成骨细胞的分化 ER 的两种亚型在骨组织中均有表达, 但有研 [16-17] 究认为 PE 的作用主要来自于 ERβ 也有研 [18] 究证明,ERα 敲除 ERα-KO 后小鼠的骨量有明显的缺失, 而 ERβ-KO 小鼠的骨量并无明显的损失 ERα 选择性激动 PPT 能显著抑制卵巢切除大鼠的 BMD 的下降,ERβ 的激动 8β-VE2 却没有类似的效果 [19], 说明 ERα 对于骨组织具有更强的保护作用本研究结果显示, 中量 GEN+ MPP 组中量 GEN+PHTPP 组 ALP 阳性细胞数较 MPP 组 PHTPP 组均有明显增多, 光学显微镜下显示的红褐色斑块也较 MPP 组 PHTPP 组有明显增多, 说明 MPP 与 PHTPP 均能抑制 GEN 对成骨细胞的作用,ERα 和 ERβ 共同参与了 GEN 对成骨细胞的调节作用此外,MPP 组 PHTPP 组 TRAP 阳性细胞数与 CON 组比较以及中量 GEN+MPP 组 TRAP 阳性细胞数与 MPP 组比较差异均无统计学意义 (P>0.05), 而中量 GEN+

6 2 南昌大学学报 ( 医学版 )2017 年 12 月, 第 57 卷第 6 期 PHTPP 组 TRAP 阳性细胞数与 PHTPP 组比较明显减少 (P<0.01), 并且光学显微镜下显示 MPP 组 PHTPP 组骨吸收陷窝面积较 CON 组无明显变化, 中量 GEN+MPP 组骨吸收陷窝面积较 MPP 组无明显变化, 中量 GEN+PHTPP 组骨吸收陷窝面积较 PHTPP 组明显减小, 说明 MPP 能够阻断 GEN 对破骨细胞的抑制作用, 而 PHTPP 没有阻断效果,GEN 对于破骨细胞的作用主要由 ERα 介导, 且 ERα 比 ERβ 具有更强的骨保护作用, 而 ERβ 在骨组织中的作用及在介导异黄酮类 PE 的骨效应中的作用仍需进一步研究参考文献 : [1] StrongA L,OhlsteinJF,JiangQ,etal.Noveldaidzeinanalogs enhanceosteogenicactivityofbonemarrow-derivedmesenchy- malstemcelsandadipose-derivedstromal/stemcelsthrough estrogenreceptordependentandindependentmechanisms[j]. Stem CelResTher,2014,59(4):105. [2] Goh V H,Hart W G.AgingandbonehealthinSingaporean Chinesepre-menopausalandpostmenopausalwomen[J].Matu- ritas,2016,89: [3] vanstaat P,GeusensP,KanisJA,etal.Asimpleclinical scoreforestimatingthelong-term risk offracturein post- menopausalwomen[j].qjm,2006,99(10): [4] MikkolaTS,SavolainenPeltonen H,VenetkoskiM.Newevidence forcardiacbenefitofpostmenopausalhormonetherapy[j].cli- macteric,2017,20(1):5-10. [5] PoluzziE,PiccinniC,RaschiE,etal.Phytoestrogensinpostm- enopause:thestateoftheartfromachemical,pharmacological andregulatoryperspective[j].curr MedChem,2014,21(4): [6] Prentice R L,Petinger M,BeresfordS A,etal.Colorectal cancerinrelationto postmenopausalestrogen andestrogen plusprogestininthe Women s HealthInitiativeclinicaltrial and observationalstudy[j].cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2009,18(5): [7] BachelotA,NicolasC,GricourtS,etal.Poorcomplianceto hormonetherapyanddecreasedbonemineraldensityinwomen withprematureovarianinsuficiency[j].plos One,2016,11 (12):e [8] GirardiA,PiccinniC,RaschiE,etal.Useofphytoestrogens andefectsperceivedbypostmenopausalwomen:resultofa questionnaire-basedsurvey[j].bmccomplementaltern Med, 2014,14:262. [9] LagariVS,LevisS.Phytoestrogensinthepreventionofpost- menopausalboneloss[j].jclindensitom,2013,16(4): [10] UmlandE M,CaufieldJS,KirkJK,etal.Phytoestrogensas therapeuticalternativestotraditionalhormonereplacementin postmenopausalwomen[j].pharmacotherapy,2000,20(8): [11] MigliaccioS,AndersonJJ.Isoflavonesandskeletalhealth: arethesemoleculesreadyforclinicalapplication?[j].osteo- porosint,2003,14(5): [12] KhoslaS.Estrogenandbone:insightsfrom estrogen-resist- ant,aromatase-deficient,andnormalmen[j].bone,2008,43 (3): [13] LuoD,LiuY,ZhouY,etal.Associationbetweendietaryphy- toestrogenintakeandbonemineraldensityvariedwithestro- genreceptoralphagenepolymorphismsinsouthernchinese postmenopausalwomen[j].food Funct,2015,6(6): [14] ArcoraciV,Ateritano M,SquadritoF,etal.Antiosteoporotic activityofgenisteinaglyconeinpostmenopausalwomen:evi- dencefrom apost-hocanalysisofa multicenterrandomized controledtrial[j].nutrients,2017,9(2):e179. [15] ZhangJ,Xu H,HanZ,etal.Pulsedelectromagneticfieldin- hibits RANKL-dependent osteoclastic diferentiation in RAW264.7celsthroughtheCa 2+ -calcineurin-nfatc1sig- nalingpathway[j].biochem BiophysResCommun,2017,482 (2): [16] KostelacD,RechkemmerG,BrivibaK.Phytoestrogensmodu- latebindingresponseofestrogenreceptorsalphaandbetato theestrogenresponseelement[j].jagricfoodchem,2003, 51(26): [17] HernandezG,ZhaoL,FrankeA A,etal.Pharmacokineticsand safetyprofileofsingle-doseadministrationofanestrogenre- ceptorβ-selectivephytoestrogenic(phytoserm)formulation in perimenopausaland postmenopausal women[j].meno- pause,2017.[epubaheadofprint]. [18] WalkerV R,KorachKS.Estrogenreceptorknockoutmiceas amodelforendocrineresearch[j].ilarj,2004,45(4): [19] HertrampfT,Gruca MJ,SeibelJ,etal.Thebone-protective efectofthephytoestrogengenisteinis mediatedviaeral- pha-dependentmechanismsandstronglyenhancedbyphysical activity[j].bone,2007,40(6): ( 责任编辑 : 胡炜华 )

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL

12 (autophagy),imagej,,, 3 [1-4] (self-eating) Transwelinvasion, 20μmol L -1 LY A549 [5] PI3K/AKT 24h,PBS, [6-8],, ml -1 ( ) 600μL ( )2017 57 5JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)2017,Vol.57No.5 11 LY294002, (, 330006) : LY294002 PI3K/AKT 0 10 15 20 25 30μmol L -1 LY294002(LY294002 ) A549,PBS CCK8 LY294002 A549 ; Westernblot