Med J Chin PLA, Vol. 4, No. 6, June 1, 广应用 [1-3] 因此, 寻找一种简便 无创 快速和 准确的胸腔积液诊断指标迫在眉睫 近年来, 临床 已探索利用多项生物标志物来检测和诊断结核性胸 膜炎, 其中腺苷脱氨酶 (adenosine deami

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1 458 解放军医学杂志 215 年 6 月 1 日第 4 卷第 6 期 论 著 临床研究 腺苷脱氨酶 γ- 干扰素和 γ- 干扰素诱导蛋白 1 对结核性胸膜炎的诊断作用研究 董雅坤, 栗爱珍, 郑立恒, 池跃朋, 王玉红, 王秋梅, 朱桂云, 谢兰品 [ 摘要 ] 目的探讨胸腔积液中腺苷脱氨酶 (ADA) γ- 干扰素 (IFN-γ) 和 γ- 干扰素诱导蛋白 1(IP-1) 水平对结核性胸膜炎的诊断价值 方法检测 63 例结核性胸膜炎及 5 例恶性胸腔积液患者胸腔积液中 ADA IFN-γ 和 IP-1 的含量, 经统计学分析, 评价其对结核性胸膜炎的诊断价值 结果结核性胸腔积液中 ADA IFN-γ 和 IP-1 含量明显高于恶性胸腔积液, 差异有统计学意义 (P<.1) ADA( 以 45U/L 为临界值 ) 诊断结核性胸膜炎的敏感度为 71.4%, 特异度为 94.%, 诊断比值比 39.17;IFN-γ( 以 138.5pg/ml 为临界值 ) 诊断结核性胸膜炎的敏感度为 93.7%, 特异度为 82.%, 诊断比值比 67.19;IP-1( 以 9.21μg/ml 为临界值 ) 诊断结核性胸膜炎的敏感度为 85.7%, 特异度为 9.%, 诊断比值比 项指标联合检测时任何 2 项阳性诊断结核性胸膜炎的敏感度为 95.2%, 特异度为 96.%, 诊断比值比 结论联合检测 ADA IFN-γ 和 IP-1 可提高结核性胸膜炎的诊断效能 [ 关键词 ] 分枝杆菌, 结核 ; 胸腔积液, 恶性 ; 腺苷脱氨酶 ; 干扰素 γ, 重组 [ 中图分类号 ] R521.7 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (215) [DOI] /j.issn The value of adenosine deaminase, interferon-gamma, and interferon-gamma induced protein of 1kD in the diagnosis of tuberculous pleuritis DONG Ya-kun 1, LI Ai-zhen 1, ZHENG Li-heng 2, CHI Yue-peng 1, WANG Yu-hong 1, WANG Qiu-mei 1, ZHU Gui-yun 1, XIE Lan-pin 1* 1 Department of Tuberculosis, 2 Department of Clinical Laboratory, Chest Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 541, China * Corresponding author, xielanpin21@163.com This work was supported by the Project of Talented Clinician of Hebei Province ( ) [Abstract] Objective To explore the value of adenosine deaminase (ADA) activity, interferon-gamma (IFN-γ) and IFN-γ induced protein of 1kD (IP-1) levels in pleural effusion for the diagnosis of tuberculous pleuritis. Methods ADA activity, IFN-γ and IP-1 levels in pleural effusion were determined in sixty-three patients with tuberculous pleuritis and 5 patients with malignant pleural effusion. Results The mean levels of ADA, IFN-γ and IP-1 in the tuberculous pleural effusion were significantly higher than those in malignant pleural effusion (P<.1). When 45U/L was regarded as cut off value for ADA, the sensitivity, specificity and diagnostic odds ratio in the diagnosis of tuberculous pleurisy were 71.4%, 94.% and respectively. When 138.5pg/ml was regarded as cut off value for IFN-γ in tuberculous pleural effusion, the sensitivity, specificity and diagnostic odds ratio were 93.7%, 82.% and respectively. When 9.21μg/ml was regarded as cut off value for IP-1 in tuberculous pleural effusion, the sensitivity, specificity and diagnostic odds ratio were 85.7%, 9.% and 54. respectively. The combined determination of the three markers for the diagnosis of tuberculous pleurisy had a sensitivity of 95.2%, specificity of 96.% and diagnostic odds ratio of Conclusion The accuracy of diagnosis for tuberculous pleurisy can be improved by combined determination of ADA, IFN-γ and IP-1. [Key words] mycobacterium tuberculosis; pleural effusion, malignant; adenosine deaminase; Interferon-gama recombinant [ 基金项目 ] 214 年政府资助省级临床医学优秀人才培养项目 ( ) [ 作者简介 ] 董雅坤, 主治医师, 硕士研究生 主要从事结核病的临床诊治工作 [ 作者单位 ] 541 石家庄河北省胸科医院结核科 ( 董雅坤 栗爱珍 池跃朋 王玉红 王秋梅 朱桂云 谢兰品 ), 检验科 ( 郑立恒 ) [ 通讯作者 ] 谢兰品, xielanpin21@163.com 结核性胸膜炎是我国胸腔积液的常见原因, 约占胸腔积液的 5%, 且发病率呈上升趋势 该病在临床上表现多样, 缺乏特异性, 仅根据临床表现 实验室检查和影像学结果很难准确判断引起胸腔积液的原因 传统的细菌学检查阳性率很低, 虽然胸膜活检 胸腔镜活检病理组织学检查可明显提高阳性率, 但均为有创性检查, 限制了其在临床上的推

2 Med J Chin PLA, Vol. 4, No. 6, June 1, 广应用 [1-3] 因此, 寻找一种简便 无创 快速和 准确的胸腔积液诊断指标迫在眉睫 近年来, 临床 已探索利用多项生物标志物来检测和诊断结核性胸 膜炎, 其中腺苷脱氨酶 (adenosine deaminase,ada) 是目前诊断结核性胸膜炎较为准确的辅助指标 [4], 但其敏感度略低 当前已有多项研究逐渐证实了 γ- 干扰素 (interferon-gama,ifn-γ) 的诊断价值, 但其 特异度较低 γ- 干扰素诱导蛋白 1(IFN-γ inducible protein of 1kD,IP-1) 是一种 Th1 型趋化因子, 可 趋化多种炎性细胞 本研究检测结核性胸膜炎患者 胸腔积液中 ADA IFN-γ 和 IP-1 的水平, 探讨其对 结核性胸膜炎的诊断意义 1 资料与方法 1.1 研究对象及分组 213 年 5 月 -214 年 11 月在 河北省胸科医院住院或门诊治疗的结核性胸腔积 液患者 63 例, 纳入结核组 其中男 41 例, 女 22 例, 年龄 47±14(37~76) 岁 ; 单纯结核性胸膜炎 39 例, 结核性胸膜炎合并肺结核 24 例 该院同期收治的恶 性胸腔积液患者 5 例, 纳入肿瘤对照组 其中男 29 例, 女 21 例, 年龄 57±15(48~67) 岁 ; 包括胸膜转 移癌 36 例, 原发性胸膜恶性病变 5 例 ( 淋巴瘤 2 例 胸膜间皮瘤 3 例 ), 肺炎旁胸腔积液 4 例, 风湿性疾 病 4 例, 肺栓塞 1 例 肿瘤病例均经病理细胞学证 实, 其他疾病根据临床症状 体征 常规化验检 查 影像学表现及疗效等证实, 未经化疗, 既往无 结核病史,X 线胸片未见活动性结核病变 所有患 者均无人免疫缺陷病毒感染, 无肝炎 免疫系统疾 病和应用免疫抑制剂治疗史, 无严重肝肾及神经精 神系统疾病, 并签署知情同意书 [3] 1.2 结核组纳入标准 1 起病较急, 有不同程 度的发热 气短及与呼吸 咳嗽相关的锐性胸痛 等 ;2X 线胸片 B 超和 ( 或 ) 胸部 CT 示有可抽取的 胸腔积液, 肺内或其他部位与结核病相符的病变 和 ( 或 ) 痰涂片或培养阳性 ;3PPD 试验阳性或强 阳性 ;4 渗出性胸腔积液, 淋巴细胞比例 >7%, ADA 45U/L 和 ( 或 ) 抗结核抗体阳性 MTB 的 DNA 检测阳性 胸腔积液沉渣涂片或培养检查 MTB 阳 性, 癌细胞阴性, 肿瘤标记物阴性 ;5 抗结核治疗 和抽取胸腔积液后结核中毒症状迅速改善, 胸腔积 液明显减少或吸收 ;6 胸膜活检或胸腔镜活检明 确诊断为结核病变 纳入上述 6 项标准中至少符合 5 项, 并排除其他原因所致胸腔积液及抗结核治疗 <2 周的初治结核性胸腔积液患者 1.3 方法 主要仪器及试剂 ADA 检测试剂盒 ( 北京九 强生物技术股份有限公司 ), 人趋化因子 I P-1 I FN-γ 检测试剂盒 ( 荷兰 Hyc ult Biotechnolog y 公司 ) Varioskau Flashversion 型酶标仪 F1162 型洗板机 ( 美国 Thermo Scientific 公司 ),18K 高速冷冻离心机 ( 德国 Sigma 公司 ),DHP-9162 型电热恒温培养箱 ( 上海一恒科学仪器有限公司 ) 标本采集及指标检测患者于治疗前以标准的胸腔穿刺术抽取新鲜胸腔积液 1ml, 抽出后立即冰浴,4 下 5g 离心 1min, 取上清液分装于 1.5ml EP 管, 置 86 冰箱冻存, 待测人趋化因子 IP-1 和 IFN-γ ADA 活性测定采用 Giusti 改良法, 由检验科协助检测,ADA 45U/L 定义为阳性 依照试剂盒说明书采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法检测受试者胸腔积液中人趋化因子 IP-1 和 IFN-γ 浓度 1.4 统计学处理采用 SPSS 17. 软件进行统计分析, 采用 GraphPad Prim 4 软件绘制 ADA IFN-γ 和 IP-1 水平散点图 正态分布数据采用 x±s 表示, 非正态分布资料数据用中位数 ( 四分位间距 ) 表示, 计数资料采用连续核正 χ 2 检验, 计量资料采用 Mann Whitney U 检验 P<.5 为差异有统计学意义 绘制受试者工作特征曲线 (receiver operating characteristic curve,roc), 以总体诊断符合率最大为标准, 确定诊断临界值 2 结果 2.1 胸腔积液 ADA IFN-γ 和 IP-1 水平比较 63 例结核性胸腔积液和 5 例恶性胸腔积液 A D A IFN-γ 和 IP-1 水平见图 1 结核组胸腔积液中 ADA IFN-γ 和 IP-1 水平分别为 49.21(39.42~61.9)U/L 387.(278.9~673.7)pg/ml 和 13.87(4.88~4.39)μg/ ml, 而肿瘤对照组分别为 9.8(5.61~13.47)U/L 57.14(36.32~86.22)pg/ml 和 1.14(.14~3.33)μg/ml, 两组比较差异均有统计学意义 (P<.1) 2. 2 胸腔积液中 I F N -γ 和 I P- 1 诊断结核性胸膜炎的最佳临界值根据结核组和肿瘤对照组的 I F N -γ 和 I P- 1 水平建立 R O C 曲线 ( 图 2 ), 确定胸腔积液 I F N - γ 和 I P - 1 水平的诊断临界值分别为 138.5pg/ml 和 9.21μg/ml 根据 ROC 曲线得出 ADA I F N - γ 和 I P - 1 诊断结核性胸膜炎的曲线下面积分别为.91(95%CI.843~.958).922(95%CI.875~.969) 和.932(95%CI.883~.98) 2.3 胸腔积液中 ADA IFN-γ 和 IP-1 的诊断效能根据 ROC 曲线确定的胸腔积液 IFN-γ 和 IP-1 水平的诊断临界值以及 ADA>45U/L 的诊断界值, 得到 IFN-γ ADA 和 IP-1 的诊断效能 ( 表 1) 其中 ADA 的敏感度为 71.4%(45/63) 特异度为 94.%(47/5) 阳性预测值为. 9 4 阴性预测值为. 7 2 阳性似然比为 阴性似然比为.3, 诊断比值比为

3 46 解放军医学杂志 215 年 6 月 1 日第 4 卷第 6 期 ADA (U/L) (n=5) Fig.1 图 1 IFN-γ (pg/ml) 两组 ADA IFN-γ 及 IP-1 浓度散点图 Distributions of ADA, IFN-γ and IP-1 in two groups A. ADA; B. IFN-γ; C. IP-1 (n=5) IP-1 (μg/ml) (n=5) Sensitivity (%) 图 2 胸腔积液 IFN-γ ADA 和 IP-1 检测水平的 ROC 曲线图 Fig Specificity (%) Receiver operating characteristic (ROC) cur ve of IFN-γ, ADA and IP-1 in pleural effusion for the diagnosis of pleural tuberculosis ADA[.91(95%CI )] IFN-γ[.922(95%CI )] IP-1[.91(95%CI )] 39.17;IFN-γ 的敏感度为 93.7%(59/63) 特异度为 82.%(41/5) 阳性预测值为.87 阴性预测值为.91 阳性似然比为 5.2 阴性似然比为.8, 诊断比值比为 67.19;IP-1 的敏感度为 85.7%(54/63) 特异度为 9.%(45/5) 阳性预测值为.92 阴性预测值为. 7 6 阳性似然比为 阴性似然比为.16, 诊断比值比为 54. 提示 3 种指标均对结核性胸膜炎有辅助诊断价值 结核组 ADA 的敏感度 (71.4%) 与 IFN-γ 和 IP-1( 分别为 93.7% 和 85.7%) 比较差异有统计学意义 (P<.1); 肿瘤对照组中 ADA IFN-γ 和 IP-1 的特异度分别为 94.% 82.% 和 9. %,IFN-γ 与 A D A 比较差异有统计学意义 (P<.5) 表 1 IFN-γ ADA 和 IP-1 对结核性胸膜炎的诊断效能 (95% CI) Tab.1 Diagnostic effectiveness of IFN-γ, ADA and IP-1 in tuberculous pleurisy (95% CI) Item Sensitivity (%) Specificity (%) Likelihood ratio Predictive value Positive Negative Positive Negative OR ADA 71.4( ) 94.( ) 11.91( ).3(.2-.45).94(.87-1.).72( ) 39.17( ) IFN-r 93.7( ) 82.( ) 5.2( ).8(.3-.2).87( ).91( ) 67.19( ) IP ( ) 9.( ) 8.57( ).16(.9-.29).93(.9-.96).83( ) 54.( ) 2.4 胸腔积液中 ADA IFN-γ 和 IP-1 联合检测的诊断效能检测胸腔积液 ADA IFN-γ 和 IP-1 三种指标中任何 2 项阳性对结核性胸膜炎诊断的敏感度为 95.2%(6/63), 特异度为 96.%(48/5) 3 讨论诊断结核性胸膜炎依赖于患者的临床症状 体征 胸腔积液常规化验检查 胸腔积液 MTB 培养 病理学检测 排除其他疾病及抗结核治疗疗效等, 但上述指标的敏感度和特异度均不理想, 且现有检测方法对于结核性胸膜炎的诊断存在局限性, 临床上迫切需要新的检测指标以提高结核性胸膜炎的诊断准确性 ADA 是核酸分解代谢酶类, 可特异性催化腺嘌 呤核苷产生不可逆脱氨反应, 生成次黄嘌呤, 最终氧化为尿酸排出体外, 在淋巴细胞分化和单核细胞成熟为巨噬细胞的过程中起一定作用 当发生结核性胸膜炎时, 宿主通过细胞免疫抵抗 MTB 感染, 胸膜的淋巴细胞明显增多 活性增强, 故 ADA 在胸腔积液中含量明显增多 有关结核性胸膜炎诊断的荟萃分析显示, 胸腔积液中 ADA 具有较高的诊断价值 [5-6], 但也有文献报道 ADA 诊断的敏感度或特异度偏低, 敏感度低的原因可能是炎症早期或机体免疫功能减退 ( 如感染人免疫缺陷病毒 ), 而特异度低可能出现在肺炎旁积液和类风湿性疾病中 [7] 本研究中 ADA 的敏感度 (71.4%) 略低, 而特异度与文献报道相符 结核组中部分胸腔积液 ADA 假阴性病例的临床表现 检验指标等不尽相同, 但没有免疫功能

4 Med J Chin PLA, Vol. 4, No. 6, June 1, 缺陷和处于炎症早期的患者, 其原因尚不明确 对 照组中胸腔积液 ADA 假阳性的 3 例分别为胸膜间皮 瘤 1 例 淋巴瘤 1 例和肺炎旁积液 1 例, 可能因淋巴 细胞活性增加所致 IFN-γ 是一种由 Th1 细胞分泌的重要的免疫调 节因子, 不仅具有抗病毒和抗细胞活性, 还能调节 免疫系统其他细胞的反应 IFN-γ 还能激活巨噬细 胞, 增加它们对结核分枝杆菌的杀菌能力, 在局 部抗结核杆菌感染的防御机制中起重要作用 [2,8] 由于 IFN-γ 具有活化巨噬细胞 抑制结核分枝杆菌 生长的作用, 在机体抗结核免疫中发挥着重要作 用 而肿瘤胸腔积液中 IFN-γ 处于较低水平, 可能 与肿瘤免疫逃逸有关 [9] 本研究结果显示结核组 中 IFN-γ 呈高水平 [387.(278.9~673.7)pg/ml], 对 照组 IFN-γ 呈低水平 [57.14(36.32~86.22)pg/ml], 两组比较差异有统计学意义 (P<.1) 应用 RO C 曲线分析 IFN-γ 对结核性胸膜炎的诊断效能, 结 果显示曲线下面积为.922, 说明其诊断准确性较 高 本研究确定 IFN-γ 诊断结核性胸膜炎的最佳临 界值为 138.5pg/ml, 相应的诊断敏感度和特异度 分别为 93.7% 和 82.%, 较 ADA 和 IP-1 的敏感度高 (P<.5) IP-1 是近年发现的 CXC 类趋化因子, 由 IFN-γ 和 ( 或 ) 脂多糖诱导产生, 又名 CXCL1 IP-1 能趋 化高度表达特异受体 CXCR3 的多种炎性细胞, 在炎 症部位淋巴细胞的募集中起重要作用 [1] IP-1 与 Th1 型炎症反应性疾病的关系密切, 如自身免疫性 肝病 Ⅰ 型糖尿病和冠心病等 在抗结核免疫中, Th1 型免疫应答占优势, 肺结核患者的血浆中 IP-1 的水平显著高于对照组 [11-15] 本研究结核性胸膜 炎胸腔积液中的 IP-1 含量为 13.87(4.88~4.39)μg/ ml, 显著高于恶性胸腔积液的 1.14(.14~3.33)μg/ ml, 差异有统计学意义 (P<.1), 且 IP-1 的 ROC 曲 线下面积为.932, 较 ADA 和 IP-1( 分别为.91 和.922) 高 以 IP μg/ml 为临界值, 其诊断结 核性胸腔积液的敏感度为 85.7% 特异度为 9.%, 表明 IP-1 可作为结核性胸腔积液的诊断指标 多 项研究报道 IP-1 的检验效能与 IFN-γ 相近, 与本 研究结果一致 [15-18] 在本次 IFN-γ 检测为假阴性的 4 例结核性胸膜炎中, 有 1 例 IP-1 检测呈阳性, 提 示 IP-1 对 IFN-γ 检测可能起一定的互补作用 该病 例为老年患者, 机体反应性弱, 可能是 IFN-γ 升高 不明显的主要原因 IP-1 是 IFN-γ 的下游诱生因 [17] 子, 且升高幅度较 IFN-γ 更加明显,Okamoto 等 的研究表明肺结核患者血浆中 IP-1 的水平明显高 于 IFN-γ 因此, 对于此类 IFN-γ 升高不明显, 未 达诊断临界值的病例,IP-1 可能具有更高的诊断 价值 [17] 在本次 IFN-γ 检测为假阳性的 9 例恶性胸腔积液患者中, 有 4 例 IP-1 检测呈阴性, 提示 IP-1 对 IFN-γ 检测可能起一定互补作用, 因此 IP-1 可能具有更高的诊断价值 综上所述, 胸腔积液 ADA IFN-γ 和 IP-1 检测对结核性胸膜炎的早期诊断与鉴别诊断具有很高的价值 其中 ADA 诊断特异度高,IFN-γ 诊断敏感度高, 而 IP-1 的 ROC 曲线下面积较高 3 种指标联合检测提高了结核性胸膜炎的诊断敏感度和特异度, 具有较高的临床应用价值 参考文献 [1] Chinese Medical A ssociation of Tuberculosis. China TB classifications[ J]. Chin J Tuberc Respir Dis, 1998, 46(12): [ 中华医学会结核病学分会. 中国结核病分类法 [ J]. 中华结核和呼吸杂志, 1998, 46(12): ] [2] Guo F, Wu CL, Chen SY, et al. Clinical value of tumor markers assay in differential diagnosis of pleural effusion[ J]. Chin J Health Lab Tech, 21, 2(5): [ 郭锋, 吴春龙, 陈世勇, 等. 肿瘤标志物联合检测对良恶性胸水鉴别的意义 [ J]. 中国卫生检验杂志, 21, 2(5): ] [3] Bu JL, Ma M. The clinical diagnosis status and progress of tuberculous pleurisy[ J]. Chin J Antituberc, 29, 31(1): [ 卜建玲, 马玛. 结核性胸膜炎的诊断现状与研究进展 [ J]. 中国防痨杂志, 29, 31(1): ] [4] Wang Q, Wang JD, Duan QL, et al. Value of the diagnostic adenosine deaminase activity in tuberculous pleuritis[ J]. J Logist Univ PAPF (Med Sci), 213, 22(11): [ 王茜, 王婧聃, 段黔琳, 等. 腺苷脱氨酶在结核性胸膜炎临床诊断中的价值 [ J]. 武警后勤学院学报 ( 医学版 ), 213, 22(11): ] [5] Patel VB, Singh R, Connolly C, et al. Cerebrospinal T-cell responses aid in the diagnosis of tuberculous meningitis in a human immunodeficiencv virus-and tuberculosis-endemic population[ J]. Am J Respir Crit Care Med, 21, 182(4): [6] Liang QL, Shi HZ, Wang K, et al. Diagnostic accurac y of adenosine deaminase in tuberculous pleurisy: a meta-analysis[ J]. Respir Med, 28, 12(5): [7] Yu YX, Tong ZH, Gong JN, et al. Evaluation of the diagnostic value of adenosine deaminase activity in tuberculous pleuritis[ J]. Chin J Tuberc Respir Dis, 21, 33(4): [ 尉艳霞, 童朝晖, 龚娟妮, 等. 腺苷脱氨酶诊断结核性胸膜炎价值的再评价 [ J]. 中华结核和呼吸杂志, 21, 33(4): ] [8] Aoe K, Hiraki A, Murakami T, et al. Diagnostic significance of interferon-γ tuberculou pleural effusions[ J]. Chest, 23, 123(3): [9] Zou J, Li YQ. The value of interferon-γ and adenosine deaminase in diagnosis of tuberculosis and malignant pleural fluid[ J]. J Diagn Conc Pract, 26, 5(2): [ 邹静, 李燕芹. 干扰素 腺苷脱氨酶对结核性 恶性胸腔积液诊断价值 [ J]. 诊断学理论与实践, 26, 5(2): ] [1] Guo SJ, Jia LQ, Hu QJ, et al. Diagnostic accuracy of interferon gamma-induced protein 1 for tuberculosis: a meta-analysis[ J]. Int J Clin Exp Med, 214, 7(1): 93-. [11] Villatoro-Hernandez J, Loera-Arias MJ, Gamez-Escobedo A, et

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