2 上海海洋大学学报 25 卷 1 材料与方法 1.1 实验材料 幼鱼取自安徽省池州市秋浦特种水产开发有限公司, 鳜 斑鳜 杂交鳜 ( 斑鳜 鳜 ) 为同批繁殖鱼, 每种鱼 120 尾, 体长 5~6cm 运回之后, 分养在条件相同的 3 个循环水箱中, 水箱大小是 1.2m 0.7m 0.5m 水

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1 文章编号 : (2016) 种鳜鱼生长与摄食量 胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达相关分析 1 1 李传阳, 许淼洋,THAMMARATSUNTORNJeerawat 1 1 2, 赵金良, 钱叶洲, 吴 2 2 超, 钱德 (1. 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室, 上海 ;2. 安徽省池州市秋浦特种水产开发有限公司, 安徽池州 ) 摘要 : 为了解不同种类鳜鱼生长差异的生理基础与机制, 比较研究了鳜 (Sinipercachuatsi) 斑鳜 (Siniperca. scherzeri) 和杂交鳜 ( 斑鳜 鳜 ) 幼鱼 30d 内的生长速率与日摄食量 胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原 (PGA1 PGA2 PGC) 基因相对表达量间的关系 结果表明, 鳜 杂交鳜和斑鳜日增重率分别为 (1.171±0.180)g/d (1.019±0.104)g/d 和 (0.433±0.078)g/d, 生长速率快慢次序是鳜 > 杂交鳜 > 斑鳜 鳜 杂交鳜和斑鳜平均日摄食量分别为 (6.1±0.31)g/d (5.26±0.33)g/d (4.24±0.23)g/d 胃蛋白酶比活力最高部位是胃, 实验前期,3 种鳜鱼胃蛋白酶比活力差异不显著 ; 后期, 鳜 杂交鳜和斑鳜胃蛋白酶比活力分别为 (347.8± 13.3)U/g (303.4±12.1)U/g 和 (272.1±10.9)U/g 胃蛋白酶原基因表达量随生长阶段缓慢增加,PGC PGA1 PGA2 基因相对表达量比例是 ; 鳜胃蛋白酶原基因的相对表达量均为最高, 杂交鳜相对表达量略高于斑鳜 (P<0.05) 结果表明,3 种鳜鱼的生长速率快慢与它们的摄食量大小之间呈正相关, 摄食量大小与其消化能力间也具有相对应的关系 关键词 : 鳜鱼 ; 生长 ; 日摄食量 ; 胃蛋白酶 ; 活性 ; 基因表达中图分类号 :S917 文献标志码 :A 鱼类的生长意味着蛋白质的合成和增加, 最直观体现在体长和体质量的增加 [1] 鱼类的生长问题一直都是鱼类生理学研究的热点话题 同种鱼的不同个体生长速率与其摄食量大小有直接关系, 生长较快的个体摄食量较大 [2-5] 由于不同种类的摄食习性 食物组成和消化酶多样性, 种间生长比较往往十分困难, 因此, 对不同种鱼生长差异机制的报道并不多 鳜 (Sinipercachuatsi) 和斑鳜 (S.scherzeri) 是鳜鱼养殖的主要种类 它们摄食习性相同, 但是生长差异明显 在人工养殖条件下, 鳜达到商品规格需要 6 个月, 斑鳜却需要大约 2 年时间 [6] 通过人工授精获得的杂交鳜 ( 斑鳜 鳜 ) 生长性状介于两亲本之间 [7] 由于它们都只以活 饵为食 [8], 这为不同种类鳜鱼生长与摄食量间关系研究提供了基础与方便 胃蛋白酶 (pepsin) 是肉食性鱼类胃消化能力 [9-10] 的重要参数 实验室前期已克隆了鳜和斑鳜 [11-12] 3 种胃蛋白酶原基因 (PGA1 PGA2 PGC) cdna 全序列 原位杂交表明, 鳜胃蛋白酶原 胃质子泵基因均在胃腺细胞中表达 [10],PGA1 PGA2 和 PGC 基因不同发育表达模式暗示它们在胃内消化作用中的特殊性 [6] 在前期工作的基础上, 本研究目的是进一步探究不同种鳜鱼生长差异与其摄食量 胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达间的内在联系, 旨在通过摄食量和消化水平对鳜鱼种间生长差异进行分析和比较, 为理解鱼类种间生长差异提供生理与分子基础 收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 上海市科委基础研究重点项目 (09JC ); 水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心 (ZF1206); 池州市秋浦特种水产开发有限公司专项资金 (2012A01) 作者简介 : 李传阳 (1990 ), 男, 硕士研究生, 研究方向为动物遗传育种与繁殖 E mail:lichuanyang123@126.com 通信作者 : 赵金良,E mail:jlzhao@shou.edu.cn

2 2 上海海洋大学学报 25 卷 1 材料与方法 1.1 实验材料 幼鱼取自安徽省池州市秋浦特种水产开发有限公司, 鳜 斑鳜 杂交鳜 ( 斑鳜 鳜 ) 为同批繁殖鱼, 每种鱼 120 尾, 体长 5~6cm 运回之后, 分养在条件相同的 3 个循环水箱中, 水箱大小是 1.2m 0.7m 0.5m 水箱所使用的循环水是提前准备好的曝气水, 并且加入适量的消菌液, 水体温度保持在 (27±1),pH 为 (7.4± 0.3), 水质较好 养殖期间, 每天上午 8:00 和下午 16:00 喂食充足的饵料鱼, 饵料鱼是规格相当的草鱼 (Ctenopharyngodonidelus) 苗, 小于鳜鱼体长的 1/3; 每次的投喂量是 160~180 尾, 定期清理粪残, 每周换水一次, 每次换水一半 实验的当天, 早上 8 点投喂, 下午 6 点进行实验, 中间时间不投喂, 随机选择 6 尾个体 冰上解剖, 分别取全胃 肠道中段 幽门垂和部分肝脏, 剔除组织附属物,4 去离子水冲洗, 滤纸吸干 将胃平均分成左右两半, 一半用于测量胃蛋白酶比活力, 另一半用于分析胃蛋白酶原基因的表达 1.2 实验方法 生长实验 3 种鳜分养在 3 个水箱, 每个水箱 80 尾, 每隔 10d(0d,10d,20d,30d) 测量一次, 每次每种鱼随机捞取 20 尾, 测量体长 体质量 然后按照如下公式, 分别计算日均增重率和日均增长率 : A GW =(W t -W 0 )/D (1) A GL =(L t -L 0 )/D (2) 式中 :A GW 为日均增重率 (g/d);w t 为称量的末体质量 ;W 0 为称量的初体质量 ;A GL 为体长日均增加率 (cm/d);l t 为称量的末体长 ;L 0 为称量的初体长 ;D 为实验的间隔天数 日摄食量 [13] 摄食量参照 AGUADO 等方法, 在每次生长实验的中间 3 天 ( 第 4 天, 第 5 天和第 6 天 ) 连续进行, 每天测量一次 上午投喂前, 清理全部剩余饵料鱼, 称重投喂饵料鱼, 记为 m 1 ; 下午投喂前称重饵料鱼, 记为 m 2 ; 第二天上午投喂前, 捞起剩余饵料鱼并称重, 记为 m 3 日摄食量的计算公式为 : D F (g/f) =(m 1 +m 2 -m 3 )/n (3) 式中 :D F 为平均日摄食量 ;m 1 m 2 m 3 分别为饵料鱼的质量 ;n 为实验鱼的数目 胃蛋白酶比活力测定每种组织 ( 胃 幽门垂 肠道 肝脏 ) 称量 0.1 g, 加入 1mL 预冷的去离子水 (4 ), 用组织匀浆器打碎, 冷冻离心机 8000r/min 离心 10min 收集上清液, 即为酶液 酶液中胃蛋白酶浓度用 BCA 蛋白定量试剂盒 ( 美国 Thermo 公司 ) 测量, 按说明书计算出胃蛋白酶的浓度, 记为 C 每个个体的酶液单独测量, 最后计算平均值 [14] 胃蛋白酶比活力的测定参照 ANSON 等的方法进行, 用 2% 牛血红蛋白作为消化底物, 用 Tris HCl 调节反应液 ph 到 2 酶标仪 (Synergy H1Bio tek, 美国 ) 读出反应液在 280nm 吸光值 胃蛋白酶比活力的计算公式为 : SP=(A 280nmtest A 280nmblank )/T C V (4) 式中 :SP 为胃蛋白酶比活力 ;T 为孵育时间 ;C 为酶液浓度 ;V 为样品溶液体积 ;0.001 为 280nm 吸光度变化单位 胃蛋白酶原基因表达采用 Trizol 抽提法提取胃组织总 RNA, 琼脂糖凝胶电泳检测 RNA 质量, 分光光度计测量 RNA 浓度 cdna 合成采用 PrimeScript R RT reagentkitwithgdnaeraser 试剂盒进行, 取 1μg 总 RNA 为模板,42 条件下反应 反应液放入 4 冰箱里保存 根据鳜胃蛋白酶原基因 (GenBank 登录号为 PGA1:EU ,PGA2:FJ ,PGC: EU ) 保守区序列设计, 用 Primer5 软件分别设计特异性引物 ( 表 1) β actin 基因 (GenBank 登录号 :AY ) 用作内参基因 经标准曲线筛选之后, 保证引物扩增效率在 95% 以上 荧光定量 PCR 采用 SYBRPremixExTaq TM 试剂盒进行 反应体系是 25μL, 反应条件为 :95 30s 预变性,95 5s,59.4~ s,65 10 s,40 个循环,95 5min 延伸 每个样品做 3 个重复, 内参基因也做 3 个重复 PGA1 PGA2 PGC 基因的相对表达量按 2 ΔΔCt 方法计算 [21]

3 1 期李传阳, 等 :3 种鳜鱼生长与摄食量 胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达相关分析 3 表 1 鳜鱼胃蛋白酶原基因 qpcr 分析特异性引物和退火温度 Tab.1 Gene specificprimersofpgsandannealingtemperatureforqpcranalysisforsinipercaspecies 引物 primer 序列 (5-3 ) sequence(5-3 ) 退火温度 annealingtemperature 登录号 accesionnumber PGA1 F CCAGAACGGAGACTATGT 59.4 EU PGA1 R GTATTGAGACTGACGGAC 59.4 EU PGA2 F GAGAACCACAGGAGATTC 60.5 FJ PGA2 R CCTCAACAGTGTCAATGG 60.5 FJ PGC F CTACGCTGATACCACCTA 59.4 EU PGC R GTTACAGTAGACGGAGTC 59.4 EU act F GCGTGACATCAAGGAGAA 59.4 AY act R CATACCGAGGAAGGAAGG 59.4 AY 数据处理所有的实验数据都记为平均值 ± 标准差 (SD), 所用软件为 SPSS(StatisticalProductand ServiceSolutions)10.0 多组对照的数据采用多因素进行显著性分析, 显著性水平为 P<0.05 数据作图均采用 SigmaPlot10.0 软件 (Sigma Plot 10.0,USA) 2 实验结果 2.1 生长实验起始,3 种鳜鱼的平均体质量 体长差异 不显著 ; 实验后期,3 种鱼的平均体质量 体长差异显著 鳜和杂交鳜体质量的日增加率分别是 (1.171±0.180)g/d 和 (1.019±0.104)g/d, 鳜和杂交鳜之间差异不显著, 斑鳜的日增重率 (0.433±0.078)g/d 明显低于鳜与杂交鳜 (P< 0.05, 图 1a); 鳜 杂交鳜和斑鳜体长的日增加率分别是 (0.196±0.033)cm/d (0.172±0.028) cm/d 和 (0.121±0.021)cm/d( 图 1b) 体重与体长结果一致表明, 鳜生长最快, 杂交鳜次之, 斑鳜最慢 图 1 鳜 斑鳜和杂交鳜幼鱼体重 (a) 体长 (b) 生长比较 Fig.1 GrowthcomparisonofbodyweightandbodylengthamongS.chuatsi,S.scherzeriandtheirhybridF 1 不同的字母代表不同种鱼之间的差异显著性 (P<0.05), 下同 Diferentletersdenotesignificantdiferencesbetweendiferentspecies(P <0.05),thesameinbelow. 2.2 日摄食量鳜 斑鳜和杂交鳜日摄食量随鱼体生长不断增加, 平均日摄食量为鳜 (6.1±0.31)g/d, 斑鳜 (4.24±0.23)g/d, 杂交鳜 (5.26±0.33)g/d ( 图 2) 实验初期,3 种鳜鱼平均日摄食量差异 不显著 (P>0.05), 中 后期阶段, 鳜与杂交鳜 斑鳜间差异显著 2.3 消化道胃蛋白酶比活力在 4 种消化道组织中, 胃蛋白酶比活力从高到低的顺序是 : 胃 > 幽门垂 > 肠 > 肝脏 ( 图 3)

4 4 上海海洋大学学报 25 卷 结果显示,3 种鳜鱼实验个体之间的胃蛋白酶比活力差异不显著 (P>0.05), 种间差异较显著 (P<0.05) 实验期间,3 种鳜鱼胃中胃蛋白酶比活力都呈增加趋势 实验后期, 鳜 斑鳜和杂交鳜胃中胃蛋白酶比活力分别是 (347.8± 13.3)U/g (272.1±10.9)U/g 和 (303.4± 12.1)U/g 鳜与杂交鳜 斑鳜间差异显著 (P< 0.05) 图 2 鳜 斑鳜和杂交鳜的平均日摄食量比较 Fig.2 Comparisonofaverageamountofdailyfood 幽门垂中, 鳜 斑鳜和杂交鳜胃蛋白酶比活力分别是 (157.1±5.2)U/g (78.9±3.4)U/g 和 (93.3±3.7)U/g, 鳜胃蛋白酶比活力最高, 种间差异显著 (P<0.05) 在肠道和肝脏也检测到了胃蛋白酶的比活力, 但是, 与胃和幽门盲囊的比活力相比, 要低很多 2.4 胃蛋白酶原基因相对表达量实验结果表明 3 种鳜鱼的种内个体之间的胃蛋白酶原基因表达量差异均不显著 (P> 0.05) 3 种鳜鱼 PGA1 PGA2 和 PGC 的相对表达量均随生长阶段缓慢增加 ( 图 4) PGC PGA1 PGA2 基因相对表达量比例是 PGC 与 PGA1 相对表达量间差异不显著,PGA2 相对表达量明显较 PGA1 和 PGC 低 (P<0.05) 相比之下, 鳜 3 种基因 (PGA1 PGA2 和 PGC) 相对表达量均较杂交鳜 斑鳜高 ;3 种鳜鱼基因表达量从高到低的顺序是 : 鳜 > 杂交鳜 > 斑鳜 实验后期,3 种鱼基因相对表达量的差异较显著 (P<0.05) intakeamongs.chuatsi,s.scherzeriandf 1 图 3 3 种鳜鱼胃 (a) 幽门垂 (b) 肠 (c) 和肝脏 (d) 中胃蛋白酶比活力比较 (n=6) Fig.3 Specificactivityofpepsininstomach(a),pyloriccaeca(b),intestine(c)andliver(d) ofs.chuatsi,s.scherzeriandf 1 (n=6)

5 1 期李传阳, 等 :3 种鳜鱼生长与摄食量 胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达相关分析 5 图 4 3 种鳜鱼胃中胃蛋白酶原基因 PGA1(a),PGA2(b),PGC(c) 相对表达 Fig.4 mrnaexpresionofpga1(a),pga2(b),pgc(c)instomachofs.chuatsi,s.scherzeriandf 1 3 讨论本研究中的 3 种鳜鱼为同批繁殖鱼苗培育而来 实验期间, 饲养环境条件相同, 鱼种放养密度一致, 饵料鱼投放足量 适口, 结果表明,3 种鳜鱼体质量 体长的生长速率高低次序均为 : 鳜 > 杂交鳜 > 斑鳜 在野外或人工养殖条件下, 鳜生长速率明显快于杂交鳜 斑鳜 [15] 因此, 室内生长实验结果与野外实验结果一致, 基本反映了不同鳜鱼种间生长快慢特征 实验期间,3 种鳜鱼的日摄食量间存在明显差异 : 鳜 > 杂交鳜 > 斑鳜 鱼类的日摄食量一般是由消化器官结构 摄食习性共同决定的 研究表明, 鳜和斑鳜的口裂 / 体长比值差异不显著, 且 3 种鳜鱼的胃重 / 体质量比也无明显差异 [16] ; 但在摄食节律方面, 鳜摄食频率相对较高, 斑鳜摄食频率较低 [17] 初步认为, 不同鳜鱼日摄食量差异主要是由于摄食习性差异所致 鉴于 3 种鳜鱼的生长速率次序与其摄食量大小次序一致, 推测不同鳜鱼的生长速率与其摄食量大小间存在正相关 这是因为食物摄取是鱼类生长发育的重要物质基础, 摄食量大, 同化作用较强, 营养物质积累多, 生长速率快 ; 摄食量小, 同化作用较弱, 生长速率慢 这与同一种鱼不同品系生长速率的差异与其摄食水平间关联的结果相类似, 如鲶 (Silurus asotus) [18] 虹鳟 (Oncorhynchus mykis) [19], 生长较快的品系一般摄食量大, 而生长较慢的品系则摄食量较小 胃是肉食性鱼类初始消化的主要器官, 胃蛋白酶是食物蛋白质的主要消化酶 在选取的 4 种消化道组织中, 胃蛋白酶比活力最高的部位是 胃, 这与前期对鳜主要消化酶的组织分布研究结果一致 [20-21] 3 种鳜鱼胃中胃蛋白酶比活力高低顺序是 : 鳜 > 杂交鳜 > 斑鳜 由于胃蛋白酶原分泌后需要胃酸激活, 不同鳜鱼的胃酸分泌特征与激活途径尚不清楚 最近研究表明, 鳜 杂交鳜胃粘膜层相对厚度较斑鳜厚, 且胃酸酶原细胞密度也较斑鳜大, 因此, 鳜 杂交鳜胃蛋白酶的分泌水平可能高于斑鳜 另一方面, 伴随摄入食物量增大, 食物消化对消化酶 ( 胃蛋白酶 ) 需求也随之增加 [22] 与分泌水平相比, 高活性的胃蛋白酶可以明显提高消化效率, 完成食物消化的作用, 促进胃排空 本研究中,3 种鳜鱼取样时均保持胃排空的状态, 测定胃蛋白酶比活力的温度和 ph 是相同的, 这就使得 3 种鳜鱼的胃蛋白酶比活力具有可比性, 且都是胃排空状态时的活力 鳜胃蛋白酶比活力高与其摄食量大 消化生理需求高间有一定关联, 消化能力强也是摄食频率高形成的重要生理基础 本研究中, 幽门垂和肠道中也检测到了胃蛋白酶活性, 由于前期研究未检测到胃蛋白酶原基因和质子泵基因的表达 [7-12], 推测这些部位的胃蛋白酶可能来自胃腔的食物残渣, 伴随胃排空, 胃蛋白酶和食物残渣混合物进入幽门垂 肠道引起, 而到了肠道, 胃蛋白酶的活性要比幽门垂的胃蛋白酶活性还低 因此, 幽门垂仍担负部分消化作用 肝脏中缺乏酸性环境, 也检测到有胃蛋白酶活性, 这些活性是在体外的酸性环境作用 ( 激活胃蛋白酶原 ) 后检测出来的, 并非肝脏中直接分泌后激活形成 推测肝脏中的胃蛋白酶原不是用于食物消化, 可能是维持肝脏中其他生理 [11] 功能 DENG 等在鳜鱼的肝脏中检测到胃蛋

6 6 上海海洋大学学报 25 卷 白酶原的表达, 本文的研究更支持了肝脏中有未被激活的胃蛋白酶原, 而胃蛋白酶原并不发挥消化的作用 本实验中,3 种鳜鱼胃中 PGA1 PGA2 和 PGC 相对表达量均随个体生长不断增加, 这与其胃组织结构的发育过程一致 3 种鳜鱼胃中 PGA1 PGA2 PGC 相对表达量高低次序为鳜 > 杂交鳜 > 斑鳜, 这一次序和其胃蛋白酶比活力次序也是对应的 胃蛋白酶原基因表达量高低可直接影响胃蛋白酶原的合成水平 在其他鱼类中, 也观察到胃蛋白酶原基因表达水平与胃蛋白酶活性同步变化的现象, 如美洲拟鲽 (Pseudopleuronectes americanus) [23] 牙鲆 (Paralichthysolivaceus) [24] 等 尽管目前尚难鉴定引起胃蛋白酶比活力增加的确切酶原类型, 但胃蛋白酶原基因相对表达水平也可作为鳜鱼消化生理能力判别的一项重要指标 参考文献 : [1] CARTERCG,HEZY,HOULIHANDF,etal.Efectof feedingontisuefreeaminoacidconcentrationsinrainbow trout(oncorhynchusmykiswalbaum)[j].fishphysiology andbiochemistry,1995,14(2): [2] CHRISTIANSENJS,JOBLINGM.Thebehaviourandthe relationshipbetweenfoodintakeandgrowthofjuvenilearctic char,salvelinusalpinusl.,subjectedtosustainedexercise [J].CanadianJournalofZoology,1990,68(10): [3] LAMBERTM,DUTILJD.Foodintakeandgrowthofadult Atlanticcod (Gadusmorhua L.) reared underdiferent conditionsofstockingdensity,feedingfrequencyandsize grading[j].aquaculture,2001,192(2/4): [4] MANDIKISN M,BLANCHARD G,MELARD C,etal. Efectsofgeographicoriginongrowthandfoodintakein Eurasian perch (Perca fluviatilis L.) juveniles under intensivecultureconditions[j].aquaculture,2004,229(1/ 4): [5] NEELYKG,MYERSJM,HARDJJ,etal.Comparisonof growth,feedintake,andnutrienteficiencyinaselected strainofcohosalmon(oncorhynchuskisutch)anditssource stock[j].aquaculture,2008,283(1/4): [6] XUE Y, ZHAO JL, DENG Y F, etal. Cloningand spatiotemporalexpresionofpepsinogen and gastricproton pumpgenesfrom mandarinfish(sinipercachuatsi)during earlyontogeny[j].fishphysiologyandbiochemistry,2013, 39(4): [7] HE S, LIANG X F, SUN J, etal. Insightsintofood preferenceinhybridf 1 ofsinipercachuatsi( ) Siniperca scherzeri( ) mandarinfishthroughtranscriptomeanalysis [J].BMCGenomics,2013,14(1): [8] CHIANG IK.Onthebiologyofmandarinfish,Siniperca chuatsiofliang TzeLake[J].ActaHydrobiologicaSinica, 1959,(3): [9] 吴雪峰, 赵金良. 鳜胃蛋白酶原基因 cdna 全长的克隆与序列分析 [J]. 水产学报,2008,32(6): WU X F,ZHAO JL.Cloningandsequencingoftheful lengthcdna ofpepsinogengenefrom themandarinfish, Sinipercachuatsi[J].JournalofFisheriesofChina,2008,32 (6): [10] 薛洋, 赵金良, 邓燕飞, 等. 鳜胃蛋白酶原 A 胃质子泵基因 cdna 全长的克隆与细胞表达定位 [J]. 水产学报, 2011,35(7): XUEY,ZHAOJL,DENGYF,etal.Ful lengthcdna cloningand celularexpresion ofthepepsinogen A and gastricproton pump genes ofmandarin fish (Siniperca chuatsi)[j].journaloffisheriesofchina,2011,35(7): [11] DENG Y F, ZHAO JL, LU G Q, etal. Cloning, characterizationandexpresionofthepepsinogencfrom the golden mandarin fish Siniperca scherzeri (Teleostei: Perciformes)[J].FisheriesScience,2010,76(5): [12] 邓燕飞, 薛洋, 赵金良, 等. 斑鳜 (Sinipercascherzeri) 胃蛋白酶原 A 胃质子泵基因的克隆与组织表达分析 [J]. 海洋与湖沼,2013,44(3): DENGYF,XUEY,ZHAOJL,etal.Cloningandtisue expresionanalysisofthepepsinogena andgastricproton pumpgenesfrom Siniperca scherzeri[j]. Oceanologiaet LimnologiaSinica,2013,44(3): [13] GIMENEZFA,GARCIA B G.Growthandfoodintake modelsinoctopusvulgariscuvier(1797):influenceofbody weight, temperature, sex and diet[j]. Aquaculture International,2002,10(5): [14] ANSONML.Theestimationofpepsin,trypsin,papain,and cathepsinwith hemoglobin[j]. The JournalofGeneral Physiology,1938,22(1): [15] 许建红, 劳顺健. 斑鳜人工养殖技术初探 [J]. 科学养鱼,2002(7):26. XUJH,LAOSJ.Firstexplorationofartificialcultivationof Sinipercascherzeri[J].ScientificFishFarming,2002(7):26. [16] 韩德举, 胡菊香, 洪峰. 陆水水库鳜属鱼类食性及消化器官的比较研究 [J]. 水产学报,1996,20(2): HANDJ,HUJX,HONG F.Comparativestudiesonthe feedinghabitanddigestiveorgansofsinipercafishesoflushui reservoir[j].journaloffisheriesofchina,1996,20(2): [17] 高少波, 朱志荣. 网箱中鳜鱼摄食行为的初步观察 [J]. 水利渔业,1994(1): GAOSB,ZHU Z R.Preliminaryobservationoffeeding behaviorofsinipercachuatsiincage[j].reservoirfisheries, 1994(1):12-14.

7 1 期李传阳, 等 :3 种鳜鱼生长与摄食量 胃蛋白酶活性和胃蛋白酶原基因表达相关分析 7 [18] SILVERSTEINJT,WOLTERSW R,HOLLANDM.Diferences ingrowthandfoodintakeregulationindiferentgeneticstrains ofchannelcatfish[j].journaloffishbiology,1999,54 (3): [19] VALENTELM P,FAUCONNEAUB,GOMESEFS,etal. Feedintakeandgrowthoffastandslow growingstrainsof rainbowtrout(oncorhynchusmykis)fedbyautomaticfeedersor byself feeders[j].aquaculture,2001,195(1/2): [20] 庆宁, 吕凤义, 陈曼娜, 等. 不同 ph 条件下鳜鱼消化道蛋白酶活性研究 [J]. 华南师范大学学报 ( 自然科学版 ), 2003,(4): QINGN,LV FY,CHEN M N,etal.Studyonprotease activitiesindigestivetubeofsinipercachuatsiatdiferentph [J].JournalofSouthChinaNormalUniversity(Natural ScienceEdition),2003,(4): [21] 马燕梅, 梅景良, 林树根. 鳜胃肠道和肝脏主要消化酶活性的研究 [J]. 江西农业大学学报,2004,26(4): MAYM,MEIJL,LINSG.Studiesonthemaindigestive enzymeactivitiesinstomachintestineandliverofsiniperca chuatsi[j]. ActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensis, 2004,26(4): [22] CARTERC,HOULIHAND,KIESSLINGA,etal.Physiological efectsoffeeding[m]//houlihan D, BOUJARD T, JOBLINGM,eds.FoodIntakeinFish.Oxford:Blackwel Science,2001: [23] DOUGLASSE,GAWLICKAA,MANDLAS,etal.Ontogenyof the stomach in winter flounder: characterization and expresionofthepepsinogenandproton pump genesand determinationofpepsinactivity[j].journaloffishbiology, 1999,55(5): [24] SRIVASTAVA A S,KUROKAWA T,SUZUKIT.mRNA expresionofpancreaticenzymeprecursorsandestimationof proteindigestibilityinfirstfeedinglarvaeofthejapanese flounder, Paralichthys olivaceus [ J]. Comparative BiochemistryandPhysiologyPartA:Molecular& Integrative Physiology,2002,132(3): Comparisonofgrowth,foodintake,pepsinactivityandpepsinogengenes expresionamongsinipercaspecies LIChuanyang 1,XUMiaoyang 1,THAMMARATSUNTORNJeerawat 1,ZHAOJinliang 1,QIANYezhou 2,WU Chao 2,QIANDe 2 (1.LaboratoryofFreshwaterFisheriesGermplasm Resources,MinistryofAgriculture,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai ,China;2.ChizhouQiupuSpecialAquacultureDevelopmentCompanyLimited,Chizhou ,Anhui,China) Abstract:Tofurtherunderstandthephysiologicalmechanism ofgrowthofdiferentmandarinfish,the relationshipbetweengrowthratesanddailyfoodintake,pepsinactivities,relativeexpresionofpepsinogen PGA1,PGA2,PGCinstomachofjuvenilesofS.chuatsi,S.scherzeriandtheirhybrids(S.scherzeri S. chuatsi F 1 )werecomparedandanalyzedduring30days experiment.resultsshowedthataveragegrowth weight(agw)ofthreespecieswas(1.171±0.180)g/dofs.chuatsi,(1.019±0.104)g/dofhybrids, (0.433±0.078)g/dofS.scherzeri,respectively,andtheirgrowthratesrankedasS.chuatsi>F 1 >S. scherzeri.dailyfoodintakeofthethreespecieswas(6.1±0.31)g/dofs.chuatsi,(4.24±0.23)g/dof S.scherzeriand(5.26±0.33)g/dofhybrids,respectively,S.chuatsiwashigherthanhybridsandS. scherzeri.themaximumspecificpepsinactivitywasfoundinstomach,specificpepsinofthethreespecieswas (347.8±13.3)U/gofS.chuatsi,(272.1±10.9)U/gofS.scherzeri(303.4±12.1)U/gofhybrids duringlaterperiods.amongthethreespecies,pepsinactivitiesrankedass.chuatsi> F 1 >S.scherzeri. GastricPGsmRNA expresionofthreespeciesalincreasedduringtheexperiment.proportionofpgc PGA1 PGA2was ThehighestexpresionlevelofPGswasobservedinS.chuatsi,PGs expresionoff 1 wasslightlyhigherthans.scherzeri(p<0.05).growthratewasindirectcorelationwith amountoffoodintakeofthethreesinipercaspecies,andtherewasacorespondingrelationshipbetween amountoffoodintakeanddigestivecapacity. Keywords:Sinipercaspecies;growthrate;foodintake;pepsin;activity;geneexpresion

材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析

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