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1 ( ) Journal of Hunan Agricultural University (Natural Sciences), Oct. 2015, 41(5): DOI: /j.cnki.jhau 饲粮精粗比对犊牛组织中基因 GLUT1 和 FATP4 及 PepT1 mrna 表达的影响 ( ) * 摘要 GLUT1 FATP4 PepT1 mrna NRC(2001) 采用 20 型颗粒饲料机组, (Ⅰ) 70 30(Ⅱ) 65 35(Ⅲ) 60 40(Ⅳ) 饲喂 4 组 ( 12 3 ) 14 d 56 d 1) Ⅲ GLUT1 mrna Ⅳ (P<0.05) I GLUT1 mrna (P<0.05) 2) Ⅲ I FATP4 mrna (P<0.05) 3) I Ⅳ Ⅲ PepT1 mrna GLUT1 FATP4 PepT 关键词 饲粮 PCR 中图分类号 S816.8 文献标志码 :A 文章编号 : (2015) Effects of concentrate to forage ratio on gene expression of GLUT1, FATP4 and PepT1 mrna in different tissues of calf Zhan Jinshun, Yang Hongbo, Zhan Kang, Liu Hong, Liu Mingmei, Zhao Guoqi * (College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou, Jiangsu , China) Abstract: To know the relation on concentrate to forage ratio of pellet feed and gene expression of GLUT1, FATP4,PepT1 mrna in different tissues. 12 Holstein bull calves with the similar age and weight were chosed and divided into 4 groups with 3 calves. According to NRC(2001), calves in each group were fed the pellet feed with the concentrate to forage with ratio of 75 25(I), 70 30(Ⅱ), 65 35(Ⅲ) and 60 40(Ⅳ) which were made from the quality ratio of alfalfa to triticale for 3 1 by 20 type granulated feed unit. The experimental time included 14 days of preliminary trial period and 56 days of the experimental period. The results showed that 1) The expression of GLUT1 mrna in liver, rumen, duodenum and cecum in group Ⅲ were significantly higher than that of group Ⅳ (P<0.05).The expression of GLUT1 mrna in abomasum of group I were significantly higher than that of other groups (P<0.05). 2) The expression of FATP4 mrna in liver, cecum of group Ⅲ and rumen, duodenum, abomasum of group I were higher than that of other groups. 3) The expression of PepT1 mrna in rumen, duodenum, abomasum of group I, liver of group Ⅳ and cecum of group Ⅲ were higher than that of other groups. In conclusion, the different concentrate to forage ratio in pellet feed could influence the expression of GLUT1, FATP4 and PepT1 in different tissues. The concentrate to forage ratio with was beneficial for calves to absorb the glucose, fat acid and protein. Keywords: calf; genetic expression; concentrate to forage ratio; RT PCR 收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 (PAPD) (BE ) (KYZZ 0367) 作者简介 (1985 ) zhanjinshun1985@sina.com * gqzhao@yzu.edu.cn

2 514 ( ) [1 2] [3] (GLUTs) GLUT1 GLUT1 [4 6] (FATP) FATP4 FATPs [7 8] (PepT) PepT1 [9 10] 3 1 GLUT1 FATP4 PepT1 1 材料与方法 1.1 试验日粮和犊牛 NRC(2001) 采用 20 型颗粒饲料机组, (104.00±1.50) d (121.25± 4.12) kg ( Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ ) 14 d 56 d :30 20:30 1 6~7 h 2 1 表 1 饲粮组成和营养水平 ( 干物质基础 ) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (DM basis) /% /% Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ ) 1 kg V A 7.5 IU/g V D 20 IU/g V E 25 IU/kg Fe 15 mg/kg Cu 15 mg/kg Mn 70 mg/kg Zn 70 mg/kg I 1 mg/kg Se 0.22 mg/kg Co 1 mg/kg 2)

3 41 5 GLUT1 FATP4 PepT1 mrna 方法 样品采集 h 1.5 ml 组织总 RNA 的提取和 cdna 的合成 RNA ( ) RNA One Drop RNA 1% RNA Takara cdna 10 μl min 85 5 s 4 cdna 引物设计 Genbank GAPDH GLUT1 FATP4 PepT1 Primer 5.0 ( 2) Invitrogen 表 2 设计引物 Table 2 Primer design (5' 3') /bp GAPDH XM_ F GGGTCATCATCTCTGCACCT R GGTCATAAGTCCCTCCACGA 177 GLUT1(SLC2A1) NM_ F CCTGGATGTCCTACCTGAGC R CGCACAGTTGCTCCACATAC 204 FATP4(SLC27A4) NM_ F GCGCTTCATCCGAATCTTTA R GGCCACGCTGTTTGAGTAGT 229 PepT1 (SLC15A1) NM_ F TGTTCTGGGCCTTGTTTGAT R GGATATACCACGGCATCCAC Real Time PCR 反应条件 TaKaRa ( 3) Light Cycler 96 PCR s 95 5 s s s RT PCR 20 μl SYBR Ex TaqⅡ(2 )10 μl( 1 ) 10 μmol/l PCR 0.8 μl( 0.4 μmol/l) 10 μmol/l PCR 0.8 μl( 0.4 μmol/l) cdna 2 μl 6.4 μl 1.3 数据分析 Ct Ct Ct Ct SPSS 17.0 LSD 2 结果与分析 2.1 各试验组犊牛不同组织中 GLUT1 mrna 的相对表达量 3 Ⅲ GLUT1 mrna Ⅳ I GLUT1 mrna Ⅲ Ⅳ Excle 2007 表 3 不同组织中 GLUT1 mrna 的相对表达量 试验组别 Table 3 Relative expression levels of GLUT1 mrna in different tissues 相对表达量 肝脏 瘤胃 皱胃 十二指肠 盲肠 Ⅰ ( ± )ab ( ± )b ( ± )aA ( ± )b ( ± )ab Ⅱ ( ± )a ( ± )b ( ± )bAB ( ± )a ( ± )ab Ⅲ ( ± )a ( ± )a ( ± )bB ( ± )a ( ± )a Ⅳ ( ± )b ( ± )b ( ± )bB ( ± )b ( ± )b (P < 0.05) (P <0.01)

4 516 ( ) 各试验组犊牛不同组织中 FATP4 mrna 的相对表达量 4 Ⅲ FATP4 mrna Ⅳ I Ⅱ I FATP4 mrna Ⅲ I FATP4 mrna Ⅳ Ⅲ FATP4 mrna 表 4 不同组织中 FATP4 mrna 的相对表达量 Table 4 Relative expression levels of FATP4 mrna in different tissues 相对表达量试验组别肝脏瘤胃皱胃十二指肠盲肠 Ⅰ ( ± )bAB ( ± )a ( ± )aA ( ± )a ( ± )b Ⅱ ( ± )cAB ( ± )ab ( ± )bAB ( ± )c ( ± )b Ⅲ ( ± )aA ( ± )b ( ± )bAB ( ± )bc ( ± )a Ⅳ ( ± )cB ( ± )b ( ± )aB ( ± )ab ( ± )b 2.3 各试验组犊牛不同组织中 PepT1 mrna 的相对表达量 5 Ⅱ Ⅳ PepT1 mrna Ⅰ Ⅲ I Ⅳ PepT1 mrna Ⅱ Ⅲ I PepT1 mrna Ⅳ Ⅲ PepT1 mrna I Ⅳ 表 5 不同犊牛组织中 PepT1 mrna 的相对表达量 Table 5 Relative expression levels of PepT1 mrna in different tissues 试验组别 相对表达量肝脏瘤胃皱胃十二指肠盲肠 Ⅰ ( ± )b ( ± )a ( ± )a ( ± )a ( ± )b Ⅱ ( ± )a ( ± )c ( ± )bc ( ± )ab ( ± )ab Ⅲ ( ± )b ( ± )b ( ± )b ( ± )a ( ± )a Ⅳ ( ± )a ( ± )a ( ± )c ( ± )b ( ± )b 3 结论与讨论 [11] [12] [13] GLUT1 [14 15] Ⅲ GLUT1 mrna Ⅳ GLUT1 mrna GLUT1 COS1 FATP4 cdna CoA CoA [16] FATP4 CoA FATP4 A A A [17] [18] Ⅲ FATP4

5 41 5 GLUT1 FATP4 PepT1 mrna 517 I FATP4 I PepT1 mrna [19] I PepT1 [20] I PepT1 mrna GLUT FATP4 PepT 参考文献 : [1] [J] 2012(6) [2] [J] (5) 1 5 [3] [J] (6) [4] 1 [J] (3) [5] Christina P Alexandra C Jordan S et al Effects of cinnamaldehyde on the glucose transport actⅣity of GLUT1[J] Biochimie [6] [J] (12) [7] [J] (5) [8] Blackburn C Guan B Brown J et al Identification and characterization of 4 aryl 3 4 dihydropyrimidin 2 (1H) ones as inhibitors of the fatty acid transporter FATP4[J] Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters [9] Fei Y J Sugawara M Liu J C et al cdna structure genomic organization and promoter analysis of the mouse intestinal peptide transporter PEPT1[J]. Biochimica et Biophysica Acta [10] 1 [J] (10) [11] [J] 2003(5) [12] 3 [J] (10) [13] [D] 2012 [14] 1 [J] (2) [15] l mrna [D] 2008 [16] Thomas H Florian B Isabella G et al Mouse fatty acid transport protein 4 (FATP4): Characterization of the gene and functional assessment as a very long chain acyl CoA synthetase[j] Gene :31 40 [17] [J] (6) [18] [J] (7) [19] [D] 2012 [20] [J] (4) 责任编辑 : 王赛群英文编辑 : 王库

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