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励宇路
5 years ago
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1 -( 论著微 & 在甲状腺乳头状癌中的表达及与化疗敏感性的关系谢珲张欢欢应华忠余陈欢张松照陈勤 +' '+ 杭州浙江省医学科学院浙江省实验动物与安全性研究重点实验室谢珲张欢欢应华忠余陈欢 +' - 通信作者陈勤 6 9"< =',+ " #> ' $$ ',+'- ' ( 杭州浙江大学医学院附属第二医院检验科张松照陈勤摘要目的研究微 & & 在甲状腺乳头状癌组织血清和细胞系中的表达及其与化疗敏感性的关系方法收集例临床确诊为甲状腺乳头状癌病例资料组织血清样本同时收集例健康体检者和例甲状腺结节患者血清样本作为对照采用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法检测在癌组织癌旁组织血清人甲状腺正常细胞系和人甲状腺乳头癌细胞系中的表达并进行统计学分析利用生物信息学软件预测的靶基因及参与的信号通路结果在癌组织中的表达显著低于癌旁组织在癌患者血清中的表达显著高于健康体检者和甲状腺结节患者在癌组织中的表达与血清中表达呈负相关 (') ' 在 *+* 期癌组织中的相对表达量为 ( 低于 *'* 期的,' ' -) ' 在期癌组织中的相对表达量为, ', 高于. 期的 ' -) ' 在 *+ * 期患者血清中的相对表达量为 ',', 高于 *'* 期的 - -',) ' 在化疗高敏感组患者癌组织中的相对表达量为 ' ' 高于化疗低敏感组的 '+ (() ' 利用生物信息学软件预测 / *' 和 01 ' 为的靶基因其参与细胞内吞作用肌动蛋白细胞骨架调节丝裂原活化蛋白激酶和癌症等多个信号通路结论在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中的表达量显著降低且与肿瘤 * 分期和化疗敏感性有关但在血清中的表达量显著升高参与多个信号通路可能通过靶向调控 / *' 和 01 ' 影响甲状腺乳头状癌的发生发展关键词微 &$ 甲状腺乳头状癌表达量化疗敏感性基金项目浙江省科技计划院所专项 ' '++'( (,( 浙江省自然科学基金 ',0 + 浙江省医药卫生一般研究计划 '23&-!" # $%$ &&%" % ' % %'# &% '! $!!!%$" ' "! " #$ % & $ ' ( ) '$ * " + ( $ ',(+ )+ +-./00/ ( '' ( - + ',(+ " *-$./000! - ( $ /5.6+ % * 4$ $$! " & & "6 " 6 $$: $ : 6 " $ 6 $ 6 $7 ; 7 " $$ 4 9 (!# *7 "6 " $ "6 " 6 $$: 6 $ : $6 $! ' "6$$ 65$ "6 " 6 ; " " / : $6 $! ' 4 :6 $ : $ " ' 6 $ ; 7 79 : $ ; 6 $ " " 6$ " $ *7 8 $$ $! "6 " 6 $$: 6 6"6 " 6 $$: $ : 6 79 " 6 79 "6 " 6 " ; " 9 6! : $" : $ "76 6" * $ 6 $ ;69$! ; " 9! 6 "$ $!;6 )& *7 8 $$! "6 " 6 $$: ;6$ $ 5! "6 9 ; "6" :$ $$: ;7 7 8 $$ $ :! 79

2 国际流行病学传染病学杂志年月第卷第期!" # $% & ' " " $ $ $ (! " ) () ) )! ) ) ) * $ $ +, - $$. " " $$* $ (. " ) ) " " $ * /0 1 ' ' +,. - $$ " " $$*! $ ( 1 $ $ (! " ) )! ' $ ( '0 '1 / '2 ) ),. - $$ " " $$*! $ ( 0 0 ' $ $ (! " ) () ) )! 3 $ ( 1 ' / 1 ' ). - $$!, " " $ *! $ ( ' ' $ $ (! " ) () ) )! ' $ ( ' / 1 ' ). - $$!, $ ) ) () $$. ")) ' ' $ $ (! " ) () ) ) $ ) $$. ")) ' / ' ) ( ($!, 4, ' 5+67' " 8 8! "$ $! ) 9 $ ( ( ) $ $*") $ " $ $ (*! " " $9 +&:; $ ( ( ) ) $ " " $ ) - $$!, ( *"$ " " $$* " $ $ $$" ) $ ($ ")) $$. 5. ) - $$ " $$ $ *! ) " " $ +, 9$ $ ( ) $!!" ) ""* ".! ) " " ) *() ( (* ( ) - $$! 4, ' 5+67' + ", &$ ) " " - $$ * )) $$.!"# ) ( 4 " *!,$ ") $ *$0' '00 0' 00 ) ( * 4" " * <' ) ( 6 + ",$ ") : ( 0';=&0 0 甲状腺乳头状癌 : 是人类内分泌系统中最常见的恶性肿瘤也是甲状腺癌的主要类型近年来 : 发病率急剧上升已成为内分泌系统肿瘤领 >'? 域的关注焦点微, &, &, 是一类长 '@ 的非编码小分子, & 参与调控靶基因表达在细胞生长分化代谢和凋亡中发挥重要作 >? >? 用研究发现 : 的, & 出现异常表达然而目前关于, 在 : 中异常表达研究仍不多见本研究采用实时荧光定量聚合酶链式反应, :, 的方法检测 : 患者癌组织血清和 : 细胞系中, 的表达情况分析其与化疗敏感性的关系同时预测, 的靶基因及生物学功能有助于研究, 与 : 发生发展的相关性为 : 的临床早期诊断和预后评估提供依据材料与方法一实验材料 ' 研究对象选取浙江大学医学院附属第二医院 0' 0' 年 ' 例 : 患者为观察组在患者化疗前收集癌组织癌旁组织距肿瘤边缘大于 ' " 经病理证实为正常腺体组织和血清样本男例女 ' 例年龄岁中位年龄岁然后收集同期 ' 例健康体检者其中男例女 ' 例年龄 0 岁中位年龄岁和 ' 例甲状腺结节患者其中男例女 '1 例年龄岁中位年龄岁血清样本为对照组 : 患者纳入标准 ' 具备完整的临床诊断治疗资料全部病例均为手术切除组织经病理确诊为乳头状甲状腺癌部分患者见颈部淋巴结转移经过甲状腺素片 3 ' ' 化疗个疗程或以上可比较化疗效果患者无严重全身性疾病所有家属及患者均知情同意排除标准 ' 首次术后原发灶无癌残留术后有复发有远处脏器转移的病例除甲状腺乳头状癌之外也伴有其他系统的恶性肿瘤仪器和试剂 ) 000 分光光度计 ) 美国荧光定量 :, 仪器! 德国总, & 纯化试剂盒血清, & 提取试剂盒 4" " 美国 A (. ( 美国人甲状腺正常细胞 ) ' B ' 分化型人 : 细胞 ' 人甲状腺乳头状鳞癌细胞 4C 人甲状腺乳头状癌细胞 6 &6 7 :&: :& : ' 和

3 1 为浙江省医学科学院实验动物中心自有二方法样本中的表达量测定利用 ( ) * 提取样本总 & 详细步骤见说明书用分光光度计检测 & 的浓度和纯度取 ' * 总 & 合成 "# & 采用实时荧光定量 +, 检测表达量以 -. 作为内参反应总体积为 / 0 引物由上海生工合成序列见表 ' 反应条件为 1 预变性 1 $. $ $ 共个循环所有反应设立个复孔得到值值代表荧光达到阈值的循环数计算目的基因相对表达量其中路同时利用 $ 和 2 *$"2 4.5 预测的靶基因取三者预测结果重叠部分为最终靶基因结合预测结果分析的生物学功能三统计学分析采用 + ' 软件进行统计学分析癌组织与癌旁组织患者血清与对照组血清表达量比较采用表示组间比较采用秩和检验癌组织血清相对表达量与临床指标化疗敏感性关系采用表示采用检验其余各指标组间采用 0 # 检验多组间比较采用方差分析相关性分析采用 +2 $ 检验检验水准 / / 以 :/ / 为差异有统计学意义观察组对照组表示观察组相对于对照组目的基因表达量而 -. 表示目的基因相对于结果内参基因的表达量表及其靶基因引物序列名称序列 &&3, 3,,&3 3&&3&&, 3 & 通用引物 2* -. $ &,,3,,33,&3,&,& -. $ & &&,3,,&,3&& 3,3 9 '; &&3 3&, 3 3&&3, 3 &,3 9 '; 3, &, 33, &, 3& '; & 33,&&&&3,33&,&& ';,,3,&&,&,&,,&& 33& 93&+# 33&3,3&3&,,,,,&&&& 93&+# 33, 3 3,& &,,,& 33 注微 & 化疗敏感性判定采用国际抗癌联盟实体肿瘤客观疗效标准完全缓解, 肿瘤完全消失持续 ' 个月以上部分缓解 + 病灶最大横径与最大垂直径乘积缩小以上持续 ' 个月以上疾病稳定 # 病灶最大横径与最大垂直径乘积缩小不足增大不超过持续 ' 个月进展 +# 病灶最大横径与最大垂直径乘积增大以上或有新病灶出现高敏感组为, + 低敏感组为 # +# 本文高敏感组一各组表达的比较通过 ;+, 检测样本的表达量发现 +, 患者癌组织中的表达量为 /.1 / / ' 低于癌旁组织 / 11/ 1/ ' ' :/ /' 但 +, 患者血清中的表达量为 '' 1. ' ' 高于正常体检者的 11 / 1' 和甲状腺结节患者的 '.. 差异均有统计学意义和均 :/ /' 且 +, 患者癌组织中的表达与血清中的表达呈负相关相关系数 / ' :/ / 图 ' 癌组织中相对表达量 ' / / /. / / / / / / /. / ' / 血清中相对表达量注微 & 患者 ' 例低敏感组患者例的靶基因预测及功能分析图在甲状腺乳头状癌癌组织和血清中表达量的相关性 ' 通过生物学软件 " " 2! 3$ 2 3$ 预测参与的信号通二 +, 患者表达水平与临床指标的关系根据 +, 患者的性别年龄分期和分期

4 0, 国际流行病学传染病学杂志年月第卷第期!" # $% & ' 进行分组分析不同临床指标与患者癌组织和血清中表达水平的关系结果显示分期与 ( 患者癌组织中的相对表达量有关其中在 )* 期癌组织中的相对表达量为 +, 低于 ' 期的 -' ',.,/01 ' 在期癌组织中的相对表达量为 - '- 高于期的 /,/ /.,01/ / 在 ) 期患者血清中的相对表达量为 - -/ 高于期的 0 0.,/-1/ / 见表表临床检测项目性别男例数 + 癌组织 / -// ' 血清 '' 0 0 女 '- / +,/ ' '/ ') '- 年龄岁不同临床指标与 ( 癌组织血清中的相对表达量的关系 / ' / ++/ ' '/ )') /- / 0 / -/ '' '', - 分期 ' / -'/ ', 0 0' ) ' / +/ /, ' -' -/ 2 分期 '+ /,/ '/ '/ 0)) 0/ - / -/ '- " '' ' -0 注 ( 甲状腺乳头状癌微 & 与 ' 期癌组织比较.,/01/ /' 2 与 ' 期血清比较.,/,1/ /' " 与期癌组织比较.,01/ /' 三 ( 患者表达水平与化疗敏感性的关系分析 ( 患者癌组织血清中的表达水平与化疗敏感性的关系发现高敏感组患者癌组织中表达量为 / / 显著高于低敏感组 / / ). ++1/ / 但两组患者血清中表达量分别为 /-) ) 和 )./ )) / / 表明血清中表达与化疗敏感性无关四参与的信号通路及靶基因预测结果通过生物学软件预测参与的信号通路发现主要参与细胞内吞作用癌症丝裂原活化蛋白激酶和肌动蛋白细胞骨架调节等信号通路见表 ) 说明参与细胞生长分裂分化代谢等过程同时可能通过影响机体炎症反应细胞凋亡等通路在 ( 发展过程中发挥重要作用通过 2 $ 和 3$" 预测 4 ' 和 5 6' 均为的靶基因检测靶基因和在细胞系中的表达量并进行相关性分析结果显示 7& --6( & & (' ' 和 48+0 细胞系中的表达量显著低于人甲状腺正常细胞 9)' 均 1/ /' 而 : (')) 细胞系中的表达量则显著高于 9)' 1 / /': (')) 7& --6( & & (' ' 和 48+0 细胞系中 4 ' 的表达量显著高于 9)' 均 1/ /': (')) 7& --6( & (' ' 和 48+0 细胞系中 5 6' 的表达量显著高于 9)' 均 1/ /+ 而 & 细胞系中 5 6' 的表达量显著低于 9)' 1/ /'4 ' 与的相关系数为 / -'5 6' 与的相关系数为 / )'-) 通路分类表微 & 参与调控的信号通路讨通路基因总数 & 作为一种调控因子在多种肿瘤组织中的表达水平出现异常可通过增强或抑制靶基因的功能来影响肿瘤的发生发展研究发现多种 & 在 ( 中有上调或下调现象如 ' ' '- '++ 等 ;0 其中 ' 和 ',' 在 ( 中特异性高表达并且可能参与 ( 癌细胞的增殖迁移和浸 ;0 润过程等此外亦有文献报道 '0+ 可通过 ;'/ 雌激素受体抑制 ( 细胞的生长本研究通过检测在 ( 患者各组织患者血清和细胞中的表达水平发现在癌组织中的表达显著低于癌旁组织且在患者血清中的表达显著高于正常人群和甲状腺结节患者提示可用作潜在的 ( 的诊断指标之一根据不同临床病理特征分类发现在患者癌组织和论调控基因数目评分 " $ $ /' /, / $ " " )+ ', ) 0- & $ 3 3 '+ ) ' 3! " " $ ') ' 0 :" $ '00 '/ $ 3 3 ' 0 ) // $ " ",0 '

5 血清中的表达在不同年龄性别间差异无统计学意义在不同分期间差异有统计学意义因此对于预测 ( 的侵袭转移和预后具有应用价值根据化疗敏感性分类发现化疗高敏组患者癌组织中表达显著高于化疗低敏感组 ) * 而患者血清中表达与化疗敏感性无关因此有望成为 ( 患者化疗的筛选指标为选择治疗方案提供依据为深入研究与 ( 发展的相关性我们进一步预测了的靶基因及生物学功能 +,, 分析结果显示主要参与条信号通路包括细胞内吞作用癌症 -& + 肌动蛋白细胞骨架和细胞因子受体互作等信号通路其中 -&+ 通路异常在 ( 发生发展中扮演重要角色相关基因. ( &/ 及 0 &1 点突变在 ( 中最常见典型 ( 的 0 &1 点突变达 + &/ 和 &/ 密码子突变能激活 -& + 通路再通过一系列反应促进 ( 的进展生物学软件预测结果显示 / ' 和 -,0' 是的靶基因同时检测靶基因和在各细胞系中的表达发现多种人 ( 细胞系中的表达量显著低于人甲状腺正常细胞 23'/ ' 的表达量显著高于 23'1 ('33,4&, 和 +' 细胞系中 -,0' 的表达量显著高于 23' / ' 是酵母沉默信息调节因子的同源蛋白主要作用是通过调节靶基因的乙酰化状态来调控多种信号通路大量研究证实肿瘤组织中 / ' 呈异常表达与肿瘤预后相 '3 关 -0,' 是一种非组蛋白 # & 结合蛋白参与调节基因转导 # & 修复基因重组和端粒稳定等过程研究还发现 -,0' 基因可与晚期糖基化终产物受体 &, 结合介导肿瘤细胞和免疫细胞的 ' 趋化移动增殖和分化作用因此我们推测可能是 / ' 和 -,0' 的潜在调控因子参与与 ( 的发生发展过程综上所述在 ( 组织中显著低表达而在 ( 患者血清中显著高表达并且的表达变化与 ( 患者的化疗敏感程度临床分期和淋巴结转移等肿瘤进程密切相关可作为潜在的 ( 临床分子标记物用于 ( 患者的早期诊断和预后分析参考文献 ' 45 ""6 5 ( $ ( 5 69 "5" " ": 5 ; (5" '* '3 : ' ' * #2: ' '. " *' - -5, "" / - " & "! $ ;5 5$ " ( 0 ' '': * 3 #2: ' ' 3. 3 # - & -"6 5 ( 6$ 7 " & < $$! ;! $ 7 5 = $! " ! "5 " 5 69 '3 3 '': '3 3 '3 #2: ' '.69 ' 3 贺梦子赵银龙刘晓冬等甲状腺乳头状癌组织中差异表达 & 及其靶基因的筛选和预测吉林大学学报医学版 '3 3 ': ' 3 #2: '. <9< '3 '3 -> >65?4 5 /" ; 5 "!!! 5 < $$ & ; ;$ "5 " 5 $$ 5! A 7 $ 9 - " '3 3 ': ' 3 #2: '. <9< '3 '3 * +56 $5 - & 5= -, / 5 +,,! = ; ;$! " " &" $ $ 3 #55 5$ $$ : # # #2: ' ' 3.5.;= 5 > B 4 4 5! "5 < $$ 5 5 ; ; 55 9$$! " &$ 4/ 2 *: 33 #2: $ 1 5" " & ; "5 " 5$ " 5 (5" 3: * #2:. ",5!5 - C 575 ( # 475, 5 - " & $ ;5 $! &4 $ $5" 6 5 $5 " ; "5" 2"; :3 *3 ** #2: 3." 唐海林苏坚邓敏等胃癌组织中与 - 3 的表达及临床意义中国肿瘤临床 3 : #2: 3. $$ 5; 4 / #; - 5 < $$ 5 " "5 $ ;! "5"! 5-3 ;5$ " "5" (6 ( 2 " 3 : #2: 3. $$ 5; ( (5 > 5; - 5 * 5$ " ; 6! "5 " ; ; $ ; " ( " -5 * : 3 #2:. " 3 /6 /? 5 = B? /6 5 ;6 9 "" 5 =9 ; " 5 5 $ 5 9 $ 5 5"6 $5 5$5$$!! 5 69 "5" 69 *: #2:.69 * * > - 05? & &/ 5 (" 5 &/. ( 0 &1 5 $ 5 75" $5;! "5 " 5 69 : * #2: ? $! 5 5 ; 5! 5$ "5" 6 ;6 ; 5! 0" 5 / ( < : #2:. $ 3 * +5; 5; # /" ,0. &,! $ 5" 5 " ; 6 9 ; 5 ; "6 5 ; "$ 2"; 33*: * * #2: 3." 3 收稿日期 3

南通大学杂志社南通大学学报医学版. */(& 0 1&( () (' / ' '-& -' (- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用张玉邵建国陈琳卞兆连管海涛南京中医药大学南京江苏省南通市第三人民医院肝病研究所摘要目的探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志

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国际流行病学传染病学杂志 年 月第 卷第 期!" # $% & ' " " $ $ $ (! " ) () ) )! ) ) ) * $ $ +, - $$. " " $$* $ (. " ) ) " " $ * /0 1 ' ' +,. - $$ " " $$*! $ ( 1 $ $ (! " )

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