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钰儿晏
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1 htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(2) 169 DOI: /j 二氢杨梅素对小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎的疗效危蓉 1, 李佩容 1, 吴志平 1, 齐国卿 1, 谢瑞霞 1, 杭卫红 2, 阎俊 1 1,3, 张德奎院消化科 1, 甘肃省人民医院西院消化科 2, 甘肃省消化系肿瘤重点实验室 3 ) ( 兰州, 兰州大学第二医 [ 摘要 ] 目的观察二氢杨梅素 (dihydromyricetin,dhm) 治疗溃疡性结肠炎 (ulcerativecolitis,uc) 的效果并探讨其机制方法 60 只 BALB/c 小鼠采用随机数字表法分为正常组, 模型组,DHM 低剂量 [50mg/(kg d)] 中剂量 [100mg/(kg d)] 高剂量 [200mg/(kg d)] 组,5 氨基水杨酸 [5amino saliciylicacid,5asa,50mg/(kg d)] 组分组当日给予正常组小鼠蒸馏水自行饮用, 其余组小鼠给予 4% 葡聚糖硫酸钠 (DSS) 水溶液 7d 诱导急性 UC 模型于饮用 DSS 当日开始, 用 DHM 各剂量组及 5 氨基水杨酸组按各组拟定剂量分别进行灌胃处理, 连续给药 14d 对比各组疾病活动指数(DAI) 结肠长度脾脏指数的变化结肠组织学评分, 肠组织 TLR2 TLR4 和 NFκB 的活性以及炎性细胞因子 IL1β TNFα IL6 表达及 MPO NO SOD 的活性变化结果与模型组比较,DHM 可显著降低结肠组织中 TLR2 TLR4 NFκB 的表达, 减少炎性因子如 IL1β TNFα IL6 水平, 同时还能够减少肠组织中 MPO NO 活性及增加 SOD 的活性其中 DHM 高剂量组优于低中剂量组, 差异有统计学意义 (P< 005), 治疗效果最明显, 其与 5 氨基水杨酸组相比差异无统计学意义 (P>005), 治疗效果相当结论 DHM 可显著缓解 DSS 诱导的小鼠结肠炎症, 其作用机制可能与抗炎抗氧化有关 [ 关键词 ] 二氢杨梅素 ; 葡聚糖硫酸钠 ; 结肠炎 ;TLR2;TLR4 [ 中图法分类号 ] R284.1;R285.6;R [ 文献标志码 ] A Eficacyofdihydromyricetinintreatmentofdextransulfateinducedcolitisinmice WeiRong 1,LiPeirong 1,WuZhiping 1,QiGuoqing 1,XieRuixia 1,HangWeihong 2,YanJun 1,ZhangDekui 1,3 ( 1 DepartmentofGastroenterology,LanzhouUniversitySecondHospital, 2 DepartmentofGastroenterology,WestBranch ofgansuprovincialpeople shospital, 3 KeyLaboratoryofDigestiveTumorsofGansuProvince,Lanzhou,Gansu Province,730030,China) [Abstract] Objective Toobservethecurativeefectofdihydromyricetin(DHM) intreating ulcerativecolitis(uc)andtoexploreitsmechanism.methods SixtyBALB/cmicewererandomlydivided intonormalgroup,modelgroup,low,middle,andhighdoseddhm treatmentgroupsand5asacontrol group,with10miceineachgroup.thenormalgroupwasgivendistiledwatertodrink,andtheothergroups weregiven4% dextransodiumsulfate(dss)solutionfor7dtoinducetheacuteucmodel.atthebeginning ofthedayofdrinkingdss,thedrugsweregiventothemiceofdhmand5asatreatmentgroupsrespectively throughintragastriccontinuousadministrationfor14d.diseaseactivityindex(dai),colonlength,spleen indexchanges, histologicalscores, activitiesoftlr2, TLR4 and NFkappaB, expresion levelsof inflammatorycytokinesil1β,tnfα,il6andactivitiesofmpo,no,sod inintestinaltisuewere comparedamongthegroups.results Comparedwithmodelgroup,DHM couldsignificantlyreducethe expresionoftlr2,tlr4,nfκbincolontisue,reducethelevelsofinflammatorycytokinessuchasil 1β,TNFαandIL6,andalsoreducetheproductionofMPOandNOandincreaseSODactivityinintestinal tisue.thehighdosedtreatmentgrouphadbeterresultsthanlowandmiddledosedtreatmentgroups,with significantwithdiferences(p<005),andthetreatmentefectwasmostobviousandwasequivalenttothe actionof5asa(p>005).conclusion DHM cansignificantlyaleviatethedssinducedcolitisinmice, [ 基金项目 ] 国家自然科学基金面上项目 ( ); 甘肃省自然科学基金 (1506RJZA204) [ 通信作者 ] 张德奎, sczdk1972@163.com [ 优先出版 ] htp://

2 170 第三军医大学学报,2017,39(2) htp://aammt.tmmu.edu.cn anditsmechanismmayberelatedtoitsantiinflammatoryandantioxidantactivities. [Keywords] dihydromyricetin;dextransulphatesodiumsalt;ulcerativecolitis;tollikereceptor2; Tollikereceptor4 SupportedbytheGeneralProgram ofnationalnaturalsciencefoundationofchina( ) andthenaturalsciencefoundationofgansuprovince 炎症性肠病 (inflammatoryboweldisease,ibd) 是一种病因未明的累积胃肠道的慢性非特异性炎症疾病, 主要包括了克罗恩病 (Crohnsdisease,CD) 和溃疡性结肠炎 (ulcerativecolitis,uc), 在我国发病率逐年提升由于其发病机制仍不清楚, 可能与免疫遗传感染及精神因素有关 [1], 目前尚缺少有效地治疗药物因此, 临床仍致力于开发安全高效的新药物中药或天然产物因安全性高副作用小, 一直是当前 IBD 研究的热点二氢杨梅素 (dihydromyricelin, DHM) 又称蛇葡萄素, 是一种二氢黄酮醇类黄酮化合物其广泛存在于蛇葡萄科蛇葡萄属植物中, 在藤茶中的量可以达到 30% [2] 近年来, 药理实验研究证实二氢杨梅素具有抗自由基抗氧化抗肿瘤广谱抗菌解酒保肝及降低血糖血脂等多方面的药理作用新近的研究显示二氢杨梅素还可以抑制核因子 κb (nuclearfactorκβ,nfκb) 的活性本实验以 4% 葡聚糖硫酸钠 (dextransulfatesalt, DSS) 诱导小鼠急性溃疡性结肠炎模型, 通过给予不同剂量的 DHM 灌胃治疗, 并与治疗溃疡性结肠炎传统药物 5 氨基水杨酸 (5aminosalicylicacid,5ASA) 做对照, 观察结肠炎小鼠的一般情况结肠长度病理损伤程度, 肠组织中 Tol 样受体 (Tollikereceptor,TLR)2 TLR4 NFκB 的表达, 炎性因子如 IL1β TNFα IL6 水平, 以及肠组织中髓过氧化物酶 (myeloperoxidase, MPO) 一氧化氮 (nitricoxide,no) 及超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase,sod) 的变化, 探讨 DHM 对小鼠溃疡性结肠炎的作用及可能机制 1 材料与方法 1.1 动物 SPF 级 BALB/c 雌鼠 60 只, 体质量 17~22g,8 周龄, 购于中国农业科学院兰州兽医研究所 1.2 药物二氢杨梅素 ( 批号 :MUST ), 由成都曼斯特生物科技有限公司提供 ; 葡聚糖硫酸钠 (DSS) 由 Sigma 公司提供 ;5 氨基水杨酸 ( 美沙拉嗪肠溶片 ) 由葵花药业集团佳木斯鹿灵制药有限公司生产 1.3 主要试剂 AntiTLR2 AntiTLR4 由艾博抗 ( 上海 ) 贸易有限公司提供 ;IL1β TNFα IL6 检测 ELISA 试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供 MPO NO SOD 检测 ELISA 试剂盒由南京建成科技有限公司提供 ; NFκB 非放射性 EMSA 检测试剂盒由微奥基因科技常州有限公司提供 1.4 UC 模型的建立与处理小鼠采用随机数字表法分为 6 组 : 正常组, 模型组,DHM 低剂量组 [50mg/(kg d)] 中剂量组 [100 mg/(kg d)] 高剂量组 [200mg/(kg d)] 及 5 氨基水杨酸组 [50mg/(kg d)], 每组 10 只小鼠分组当日给予正常组小鼠蒸馏水自行饮用, 其余组小鼠给予 4%DSS 水溶液自行饮用 ( 记为第 1 天 ), 连续饮用 7d 于饮用 4%DSS 水溶液当日开始, 对 DHM 低中高剂量组及 5 氨基水杨酸组按各组拟定剂量分别进行灌胃治疗, 连续给药 14d 后采用颈椎脱位法处死小鼠, 游离结肠及远端回肠, 取出肛门至盲肠末端的整个结肠和直肠段, 对其进行肉眼观察, 并测量长度摘取小鼠脾脏称量以 PBS 溶液将小鼠结肠内容物及管壁冲洗干净, 于病变部位取材, 置于 4% 多聚甲醛溶液中固定, 留待进行常规石蜡包埋切片,HE 染色剩余肠段封存于 EP 管中, 迅速转移到 -80 冰箱中冷冻保存, 留待下一步提取肠组织蛋白 1.5 疾病活动指数每日对各组小鼠进行体质量测量, 观察小鼠的活动毛色精神状态以及大便性状颜色等参照文献 [4], 结合小鼠体质量下降百分率 ( 体质量不变为 0, 1~5 为 1 分,6~10 为 2 分,11~15 为 3 分, 大于 15 为 4 分 ) 大便黏稠度 ( 正常为 0, 松散的大便为 2 分, 腹泻为 4 分 ) 和便血 ( 正常 0 分, 隐血阳性为 2 分, 显性出血为 4 分 )3 种情况进行疾病活动指数 (diseaseactivity index,dai) 评分, 即 DAI=( 体质量指数 + 大便形状 + 出血情况 )/3 1.6 光镜下病理组织学观察小鼠结肠组织病理切片观察用常规 HE 染色法光镜下观察结肠组织损伤情况, 结肠病灶病理组织显微镜检查并评分 (CMDI), 评分标准如下,1 溃疡,0 无,1 小溃疡 (<3mm),2 大溃疡 (>3mm);2 炎症 0 无,1 轻度, 2 重度 ;3 肉芽组织 :0 无,1 有 ;4 病变深度 :0 无,1 黏膜下层,2 肌层,3 浆膜层 ;5 纤维化 :0 无,1 轻度, 2 重度, 各项相加即为总分

１７１第三军医大学学报２０１７３９２７脾脏指数根据公式计算脾脏指数ｍｇｇ脾脏质量小鼠体质量８ＥＬＩＳＡ检测用ＥＬＩＳＡ测定ＤＨＭ治疗前后肠组织细胞因子ＩＬ１β ＴＮＦＬ６含量以及治疗前后肠组织ＭＰＯ α ＩＮＯＳＯＤ的活性变化分别按照相应的ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书进行测定９

５为差异有统计学意义２结果２１小鼠ＤＡＩ结果统计结果显示除正常组外其余各组小鼠从饮用４ＤＳＳ３ｄ后开始出现烦躁不安精神倦怠腹泻血便毛色黯淡无光泽消瘦等情况经过治疗后各剂量治疗组均有不同程度的改善药物治疗１４ｄ后ＤＨＭ中剂量组高剂量组５氨基水杨酸组ＤＡＩ均显０１图１ＤＨＭ高剂量组与５氨著低于模型组Ｐ０

3 １７１第三军医大学学报２０１７３９２７脾脏指数根据公式计算脾脏指数ｍｇｇ脾脏质量小鼠体质量８ＥＬＩＳＡ检测用ＥＬＩＳＡ测定ＤＨＭ治疗前后肠组织细胞因子ＩＬ１β ＴＮＦＬ６含量以及治疗前后肠组织ＭＰＯ α ＩＮＯＳＯＤ的活性变化分别按照相应的ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书进行测定９ＥＭＳＡ检测用非放射性ＥＭＳＡ测定通用试剂盒检测治疗前后肠组织ＮＦ κｂ的活性１０Ｗｅｓｅｒｎｂｌｏ检测采用Ｗｅｓｅｒｎｂｌｏ检测ＤＨＭ治疗前后肠组织ＴＬＲ２ＴＬＲ４含量的表达１１统计学分析采用ＳＰＳＳ１９０统计软件正态分布计量资料数据以ｘ珋±ｓ表示两组间均数比较采用检验Ｐ００５为差异有统计学意义２结果２１小鼠ＤＡＩ结果统计结果显示除正常组外其余各组小鼠从饮用４ＤＳＳ３ｄ后开始出现烦躁不安精神倦怠腹泻血便毛色黯淡无光泽消瘦等情况经过治疗后各剂量治疗组均有不同程度的改善药物治疗１４ｄ后ＤＨＭ中剂量组高剂量组５氨基水杨酸组ＤＡＩ均显０１图１ＤＨＭ高剂量组与５氨著低于模型组Ｐ０基水杨酸组相比差异无统计学意义Ｐ０６１１说明中高剂量ＤＨＭ对缓解小鼠疾病活动具有显著的抑制作用高剂量组与５氨基水杨酸治疗效果相当!" # ',- 23 ｈｐａａｍｍｍｍｕｅｄｕｃｎ + $ + + % & "!"# $%# '() & '() ) '() + * -./ '(# *(#,(# 01# #4 ａＰ００１与模型组比较图１治疗１４ｄ后各组小鼠ＤＡＩ评分比较２２病理组织学评分正常组光镜下可见正常肠道黏膜模型组光镜下可见黏膜固有层大量炎性细胞浸润多灶性大小不一的溃疡无黏膜覆盖ＤＨＭ低剂量组光镜下可见黏膜固有层可见炎性细胞浸润多灶性大小不一溃疡肉芽填充可见上皮覆盖ＤＨＭ中剂量组光镜下可见多灶性溃疡但可见肉芽组织填充腺体增生修复部分上皮覆盖ＤＨＭ高剂量组光镜下可见溃疡面积较小肉芽组织修复可见上皮覆盖但炎症较重５氨基水杨酸组光镜下可见溃疡面积较小黏膜修复较为完整图２! " # $ % & Ａ正常组Ｂ模型组ＣＤＨＭ低剂量组ＤＤＨＭ中剂量组ＥＤＨＭ高剂量组Ｆ５氨基水杨酸组图２光学显微镜观察各组小鼠结肠组织学变化ＨＥ２００

172 第三军医大学学报,2017,39(2) htp://aammt.tmmu.edu.

各剂量组小鼠肠组织 TLR2 TLR4 蛋白表达水平均有明显降低, 其中 DHM 高剂量治疗组给药后显著抑制了 DSS 给药后小鼠结肠组织中 TLR2 TLR4 的高表达 (P<001), 治疗效果与 5 氨基水杨酸相当 ( 图 6) & a:p<0.05,b:p<0.

"# $% 正常组小鼠肠黏膜无充血水肿, 饮用 4%DSS7d 后, 模型组小鼠结肠肠壁充血水肿, 严重者自结肠至肛门肠段均可见血性内容物统计结果显示, 各治疗组与模型组相比, 均可不同程度的抑制溃疡性结肠炎小鼠结肠缩短 (P<005, 图 4)!"# $ a:p<0.

4 小鼠脾脏指数模型组,DHM 低中高剂量组,5 氨基水杨酸组小鼠脾脏指数较正常组升高, 差异有统计学意义 (P< 005) DHM 低剂量组高剂量组 5 氨基水杨酸组与模型组相比, 差异有统计学意义 (P<005), 而 DHM 中剂量组与模型组比较差异无统计学意义 (P> 005),DHM

4 172 第三军医大学学报,2017,39(2) htp://aammt.tmmu.edu.cn 与正常组相比, 其余各组的病理组织学评分均显著升高, 差异有统计学意义 (P<001),DHM 低中剂量组与高剂量组相比, 差异也有统计学意义 (P< 001), 高剂量组与 5 氨基水杨酸组差异无统计学意义 (P>005, 图 3) 较正常组明显升高, 给予 DHM 灌胃治疗后, 各剂量组小鼠肠组织 TLR2 TLR4 蛋白表达水平均有明显降低, 其中 DHM 高剂量治疗组给药后显著抑制了 DSS 给药后小鼠结肠组织中 TLR2 TLR4 的高表达 (P<001), 治疗效果与 5 氨基水杨酸相当 ( 图 6) & a:p<0.05,b:p<0.01, 与模型组比较图 3 光镜下小鼠结肠病理组织学评分 2.3 DHM 对小鼠结肠长度的影响!"# $% 正常组小鼠肠黏膜无充血水肿, 饮用 4%DSS7d 后, 模型组小鼠结肠肠壁充血水肿, 严重者自结肠至肛门肠段均可见血性内容物统计结果显示, 各治疗组与模型组相比, 均可不同程度的抑制溃疡性结肠炎小鼠结肠缩短 (P<005, 图 4)!"# $ a:p<0.05, 与模型组比较图 4 各组小鼠治疗 14d 后结肠长度比较 2.4 小鼠脾脏指数模型组,DHM 低中高剂量组,5 氨基水杨酸组小鼠脾脏指数较正常组升高, 差异有统计学意义 (P< 005) DHM 低剂量组高剂量组 5 氨基水杨酸组与模型组相比, 差异有统计学意义 (P<005), 而 DHM 中剂量组与模型组比较差异无统计学意义 (P> 005),DHM 各剂量组与 5 氨基水杨酸组之间差异均无统计学意义 (P>005, 图 5) 2.5 Wseternblot 测定小鼠结肠组织中 TLR2 TLR4 的表达变化模型组小鼠结肠组织 TLR2 TLR4 蛋白表达水平 a:p<0.05, 与模型组比较图 5 各组小鼠治疗 14d 后脾脏指数比较! 1: 正常组 ;2: 模型组 ;3:DHM 低剂量组 ;4:DHM 中剂量组 ;5:DHM 高剂量组 ;6:5 氨基水杨酸组图 6 Wseternblot 检测各组小鼠结肠组织中 TLR2 TLR4 的表达 2.6 EMSA 测定 NFκB 的表达模型组小鼠结肠组织 NFκB 表达水平较正常组明显升高, 表明溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜中 NFκB 信号通路被激活给予 DHM 治疗后, 明显抑制了 NF κb 的高表达各治疗组对 NFκB 均具有显著的抑制作用 (P<001), 而高剂量组与 5 氨基水杨酸组相比, 差异有统计学意义 (P<001, 图 7) 1~8:NFκB 阳性 NFκB 阴性正常组模型组 DHM 低剂量组 DHM 中剂量组 DHM 高剂量组水杨酸对照组图 7 各组小鼠 NFκB 表达情况比较

5 htp://aammt.tmmu.edu.cn 第三军医大学学报,2017,39(2) ELISA 法测定细胞因子 IL1β TNFα IL6 的含量模型组小鼠组织蛋白中 IL1β TNFα IL6 含量显著升高 (P<001) 而高剂量组 5 氨基水杨酸组与模型组相比, 差异均有统计学意义 (P<005, 表 1) 表 1 各组小鼠肠组织 IL1β TNFα IL6 的含量 (pg/ml, x±s) 珋组别 n IL1β TNFα IL6 正常组 ± ± ±34.61 模型组 ±25.10 a ±24.27 a ±81.42 a DHM 低剂量组 ± ± ±12.44 DHM 中剂量组 ±18.14 b ± ±27.72 DHM 高剂量组 ±11.47 b ±7.01 b ±40.72 b 5 氨基水杨酸组 ±18.04 b ±25.84 b ±18.91 b a:p<0.01, 与正常组比较 ;b:p<0.05, 与模型组比较 2.8 ELISA 法测定 NO SOD MPO 的活性模型组小鼠结肠组织中 SOD 活性明显下降 (P< 001),NO MPO 活性明显升高 (P<001) 给予药物治疗后,DHM 各剂量组及 5 氨基水杨酸组小鼠结肠组织中 SOD MPO 活性均有不同程度变化, 与模型组比较差异均有统计学意义 (P<005, 表 2), 但 DHM 低中剂量组 NO 活性与模型组比较, 差异无统计学意义 (P>005);DHM 高剂量组 5 氨基水杨酸与模型组比较, 差异有统计学意义 (P<005, 表 2) 表 2 各组小鼠肠组织 MPO SOD NO 的活性 ( x±s) 珋组别 n MPO(U/g) SOD(U/mg) NO(μmol/g) 正常组 ± ± ±0.06 模型组 ±0.69 a 7.05±0.06 a 4.76±0.14 a DHM 低剂量组 ±0.18 b 18.86±1.84 b 4.64±0.18 DHM 中剂量组 ±0.00 b 18.84±1.66 b 4.41±0.29 DHM 高剂量组 ±0.23 b 29.24±3.97 b 2.01±0.14 b 5 氨基水杨酸组 ±0.29 b 26.91±1.61 b 2.05±0.11 b a:p<0.01, 与正常组比较 ;b:p<0.05, 与模型组比较 3 讨论目前,UC 的发病机制仍未明确, 主要观点认为 UC 是免疫遗传环境肠道菌群等多种因素共同作用的结果由于其发病机制不明, 所以目前临床上仍缺少有效的治疗药物, 因此, 开发高效且安全副作用小的药物仍然是目前炎性肠病的研究热点 5 氨基水杨酸 (5ASA) 又名美沙拉嗪, 是当前治疗 UC 的一线药物, 能够有效缓解轻度和中毒活动期 UC 患者的症状国内外众多研究对 5ASA 治疗实验性小鼠结肠炎的机制见解各异, 但相关数据对其疗效都是一致的认可 [3-4] DSS 诱导的结肠炎动物模型在 UC 相关研究中应用广泛, 病理表现近似于人类 UC, 可用于评价新的治疗方法对 UC 的治疗作用 [5-6] 本实验通过 DSS 诱导建立小鼠的急性 UC 模型, 发现使用不同剂量 DHM 后, 可不同程度缓解 DSS 诱导的小鼠急性溃疡性结肠炎的疾病活动指数 (DAI), 结肠长度及脾脏指数变化镜下可见 DHM 可以减轻溃疡性结肠炎模型肠黏膜的组织病理炎症改变说明 DHM 对急性溃疡性结肠炎小鼠具有一定的干预机制近年来, 随着对核因子 NFκB 结构与功能研究的深入, 细胞因子与 NFκB 的关系已引起了人们高度的重视, 成为当今研究的热点, 而通过激活 NFκB 从而释放的如 IL1β TNFα IL6 等炎性刺激因子, 越来越多的研究证实,UC 患者肠黏膜组织血清及粪便中肿瘤坏死因子 TNFα IL1β IL6 等多种细胞因子的表达均增强 [7-8] 本实验应用 EMSA 测定 NFκB 结果显示出经过 DHM 治疗的溃疡性结肠炎小鼠与模型组小鼠相比, 差异有统计学意义 (P<005) 通过 ELISA 法, 结果显示出 IL1β TNFα IL6 在模型组小鼠肠黏膜中表达明显升高, 经过 DHM 治疗的溃疡性结肠炎小鼠肠组织中 IL1β TNFα IL6 等炎性刺激因子较模型组相比, 均有不同程度的降低, 差异有统计学意义 (P<005) 说明 DHM 能够降低 DSS 诱导的小鼠结肠组织中 IL1β TNFα IL6, 具有一定的抗炎作用 TLRs 是一族具有信号转导功能的固有免疫识别受体, 其中 TLR2 主要识别革兰阳性肽聚糖, 而 TLR4 主要识别革兰阴性菌的脂多糖 (lipopolysaccharide, LPS) [9-10] 研究表明,TLR2 和 TLR4 在正常的结肠黏膜中呈现低表达, 而在溃疡性结肠炎的结肠黏膜中则呈现异常的高表达 [11], 大量研究表明,TLR4/NFκB 信号通路在 UC 中发挥至关重要的作用, 因此,TLR2 TLR4 受体及其信号传导通路可能是溃疡性结肠炎发病过程中的重要环节本实验 Westernblot 检测结果显示, 溃疡性结肠炎模型组小鼠肠组织 TLR2 TLR4 表达明显增高, 对照组小鼠结肠黏膜 TLR2 TLR4 表达较少, 通过二氢杨梅素治疗的小鼠 TLR2 TLR4 及 NF κb 表达含量明显降低, 与模型组相比, 差异均有统计学意义 (P<005) 说明 TLR2 TLR4 可能参与了溃疡性结肠炎的发生和发展, 而 DHM 可抑制 UC 模型中 TLR2 TLR4 的表达, 发挥抗炎作用免疫因素也被公认为是 UC 发病机制的重要因素

6 174 第三军医大学学报,2017,39(2) htp://aammt.tmmu.edu.cn 之一有报道肠黏膜超氧化物歧化酶 (SOD) 活性降低, 髓过氧化物酶 (MPO) 活性一氧化氮 (NO) 水平升高与 UC 的发病关系密切 [12] SOD 是机体超氧自由基的清除剂, 广泛分布于细胞内和各种体液中, 机体多种病理过程如缺血性疾病炎症肿瘤损伤衰老等均与 SOD 密切相关 SOD 活性的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力 [13] MPO 是中性粒细胞嗜天青颗粒的重要组成部分, 是粒细胞聚集的指标, 也是炎症和组织损伤的指标据报道, 实验性动物和炎症性肠病患者的 MPO 活性都会显著增加 [14] NO 作为另一种氧自由基也对肠黏膜具有氧化损伤和促炎作用, 研究表明 UC 病变黏膜中 NO 浓度的增加与炎症程度呈平行关系 [15] 本实验 ELISA 结果显示, 模型组小鼠 SOD 活性明显下降,NO MPO 活性明显升高, 治疗组小鼠 SOD 活性不同程度升高,NO MPO 活性不同程度降低, 与模型组相比具有明显的统计学差异 (P< 005), 提示氧化应激在 DSS 诱导的 UC 模型中发挥了作用, 而 DHM 具有一定的抗氧化作用, 抑制组织的过氧化反应因此, 我们认为二氢杨梅素确实具有一定的抗氧化作用, 增加 SOD 活性, 抑制 MPO NO 产生可能是其缓解小鼠结肠炎的机制之一以上研究结果表明, 不同剂量 DHM 灌胃给药, 可以不同程度有效缓解 DSS 诱导的小鼠结肠炎, 对 DSS 小鼠结肠炎具有良好的保护作用其作用机制是多方面的, 可能通过抑制结肠黏膜组织 TLR2 TLR4 蛋白的合成, 进而阻断了 TLR/NFκB 信号通路的转导, 使 NFκB 的活性受到抑制, 减少 IL1β TNFα IL6 等炎性因子的表达分泌, 阻断炎症的放大效应从而有效减轻炎症反应对机体造成的损伤同时, 增加 SOD 活性, 抑制 MPO SOD 产生可能是其重要作用机制之一本实验结果为确定信号通路中的关键分子和 DHM 最佳治疗剂量以及临床研发治疗 UC 药物提供了实验依据参考文献 : [1] KorzenikJR,PodolskyDK.Evolvingknowledgeandtherapy ofinflammatoryboweldisease[j].natrevdrugdiscov, 2006,5(3): DOI: /nrd1986 [2] 陈夏静, 姚汉玲, 张秋琼, 等. 大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的高效液相色谱法测定 [J]. 时珍国医国药,2010,21 (5): DOI: /j.isn [3]DengX,TolstanovaG,KhomenkoT,etal.Mesalaminere storesangiogenicbalanceinexperimentalulcerativecolitisby reducingexpresionofendostatinandangiostatin:novelmo lecularmechanismfortherapeuticactionofmesalamine[j].j PharmacolExpTher,2009,331(3): DOI: /jpet [4] KruisW,KiudelisG,RaczI,etal.Oncedailyversusthree timesdailymesalazinegranulesinactiveulcerativecolitis: adoubeblind, doubledummy, randomised, noninferiority trial[j].gut,2009,58(2): doi: / gut [5] 农辉, 黄雪. 葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎模型的研究进展 [J]. 世界华人消化杂志,2014,22(22): [6] WirtzS,NeurathMF.Mousemodelsofinflammatorybowel disease[j].advdrugdelivrev,2007,59(11): doi: /j.addr [7] 甘华田, 欧阳钦, 贾道全, 等. 溃疡性结肠炎患者核因子 NFκB 活化与细胞因子基因表达 [J]. 中华内科杂志, 2002,41(4): [8] GrivennikovSI,KarinM.Dangerousliaisons:STAT3and NFKB colaboration and crostalk in cancer[j]. Cytok GrowthFactorRev,2010,21(1):11-19.DOI: / j.cytogfr [9]MuzioM,MantovaniA.Tollikereceptors.MicrobesInfect, 2000,2(3): DOI: /s (00) [10]DogiCA,GaldeanoCM,PerdigónG.Gutimmunestimu lationbynonpathogenicgram(+)andgram(-)bacteria. Comparisonwithaprobioticstrain[J].Cytokine,2008,41 (3): DOI: /j.cyto [11]SzebeniB,VeresG,DezsfiA,etal.Increasedexpresion oftollikereceptor(tlr)2andtlr4inthecolonicmuco saofchildrenwithinflammatoryboweldisease[j].clin ExpImmunol,2008,151(1):34-41.DOI: /j x [12]MylonasC,KouretasD.Lipidperoxidationandtisuedam age[j].invivo,1999,13(3): [13] 游宇, 刘玉晖, 卢放根, 等.N 乙酰半胱氨酸对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的保护作用 [J]. 中南药学.2007,5(4): DOI: /j.isn [14] FakhfouriG,RahimianR,DaneshmandA.etalGranise tronamelioratesaceticacidinducedcolitisinrats[j].hum ExpToxicol,2010,29(4): DOI: / [15] 金惠铭. 病理生理学 [M].5 版. 北京 : 人民卫生出版社,2000:150. ( 收稿 : ; 修回 : ) ( 编辑邓强庭 )

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中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (