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1 黄芪多糖对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜的修复作用 及其作用机制研究 臧凯宏1ꎬ2 ꎬ李应东3ꎬ4 ꎬ朱丽娟1ꎬ2 ꎬ李 徐厚谦4ꎬ6 ꎬ刘 凯3ꎬ4 ꎬ宋 彤1 ꎬ陈立娟3 ꎬ岳 鹏4 ꎬ吴建军4ꎬ5 (1.甘肃中医药大学药学院ꎬ甘肃 2.甘肃省中药药理与毒理学重点实验室ꎬ甘肃 3.甘肃中医药大学中西医结合学院ꎬ甘肃 4.甘肃省中医药防治慢性疾病重点实验室ꎬ甘肃 5.甘肃中医药大学公共卫生学院ꎬ甘肃 6.甘肃中医药大学中医临床学院ꎬ甘肃 摘要:目的 嘉4ꎬ5 ꎬ 730000) 研究黄芪多糖对溃疡性结肠炎( UC) 大鼠结肠黏膜的修复作用及对肠道炎症反应 黏膜屏 障的影响ꎬ旨在阐明黄芪多糖治疗 UC 的分子机制ꎮ 方法 将 60 只 Wister 雄性大鼠随机分为空白组ꎬ模型 组ꎬ柳氮磺胺吡啶组ꎬ黄芪多糖高 中 低剂量组ꎬ每组 只ꎮ 采用三硝基苯磺酸诱导 UC 大鼠模型ꎬ空白组 及模型组予生理盐水灌胃ꎬ各药物组分别予柳氮磺胺吡啶及高 中 低剂量的黄芪多糖灌胃ꎬ连续灌胃 7 d 后ꎬ取结肠组织 进 行 病 理 组 织 学 观 察 评 分 和 髓 过 氧 化 物 酶 ( MPO) 活 性 测 定ꎬ 并 采 用 酶 联 免 疫 吸 附 法 ( ELISA) 测定结肠组织中肿瘤坏死因子 α( TNF α) 表皮生长因子( EGF) 和转化生长因子 β( TGF β) 的含 量ꎬ通过免疫印迹实验测定结肠紧密连接蛋白 Occludin 及 ZO 1 的表达ꎮ 结果 黄芪多糖可剂量依赖性地降 低 UC 大鼠结肠病理组织学评分ꎬ结肠组织中的 MPO 活性及 TNF α TGF β 含量ꎬ升高 EGF 含量及 Occlu din ZO 1 蛋白表达水平( P<0.05 或 P<0.01) ꎬ改善大鼠结肠黏膜的病理改变ꎮ 结论 黄芪多糖对 UC 的治 疗作用与减轻肠道炎症反应 促进肠道黏膜修复 改善肠道黏膜屏障功能有关ꎮ 关键词:溃疡性结肠炎ꎻ黄芪多糖ꎻ肿瘤坏死因子 αꎻ表皮生长因子ꎻ转化生长因子 βꎻ紧密连接蛋白ꎻ大 鼠ꎻ实验研究 文献标志码:B 文章编号:03 8450(2018)03 0005 06 DOI:.16841 / j.issn03 8450.2018.03.02 中图分类号:R285.5 溃疡性结肠炎( ulcerative colitisꎬuc) 是一种以 表止汗 托毒排脓 祛腐生肌的功效ꎮ 中医学认为 统常见疾病ꎮ 目前ꎬUC 的确切发病机制尚未阐明ꎬ 耗伤等导致脾虚ꎬ使脾失健运ꎬ清浊不分下注于肠而 结肠非特异性炎症及溃疡形成为病理特点的消化系 其中遗传因素 环境因素 肠道炎症及免疫反应都参 与 UC 的发病过程 [1 2] ꎮ 现代研究认为ꎬ各种因素引 起肠道黏膜损伤进而导致肠道黏膜屏障功能降低是 UC 发生的关键环节 [3 5] ꎮ 因此ꎬ促进肠道黏膜修复 并改善肠道黏膜屏障功能已经成为 UC 的主要治疗 手段ꎮ 黄芪性温 味甘ꎬ归脾 肺经ꎬ具有补气升阳 固 UC 多因外感湿邪 饮食不洁 忧思 劳倦过度 久病 致泄泻ꎮ 黄芪为补气要药ꎬ可大补脾肺之气ꎬ故为治 疗 UC 的常用药物ꎮ 刘元艳等 [6] 采用文本挖掘方法 对临床常用的治疗 UC 的中药复方进行统计分析ꎬ 发现黄芪是组成治疗 UC 复方的主要中药之一ꎮ 现 代研究表明ꎬ黄芪提取物或黄芪与其他药物组成的 复方对 UC 均具有治疗作用ꎮ 贺 海 辉 等 [7] 研 究 表 明ꎬ黄芪对三硝基苯磺酸( TNBS) 诱导的 UC 大鼠模 收稿日期:2017 09 01 基金项目:甘肃省自然科学基金项目( 1606RJZA062)ꎻ甘肃省中医药防治慢性疾病重点实验室开放基金项目( GSMBKY2015 ꎬGSMBKY2015 11)ꎻ甘肃中医药大学中青年科研基金项目(ZQ2015 13)ꎮ 作者简介:臧凯宏(1975 ) ꎬ男ꎬ讲师ꎬ医学硕士ꎮ 研究方向:炎症性肠病发病机制及药物治疗ꎮ 通信作者:吴建军(1972 ) ꎬ男ꎬ副教授ꎬ医学博士ꎬ主要从事中医药防治慢性病的研究ꎮ E mail:wjj gszy.edu.cn 5

2 型的治疗作用与降低结肠组织中肿瘤坏死因子 α ( TNF α) 白 细 胞 介 素 ( IL) 1β 水 平 有 关ꎮ 常 慧 1.2.2 α IL 6 水平ꎮ 本课题组前期研究也表明ꎬ黄芪多糖 白组和模型组灌胃生理盐水ꎻSASP 组以 300 mg / kg 芳 [8] 研究表明ꎬ黄芪仙鹤草汤可降低 UC 患者 TNF 对 UC 具有治疗作用ꎬ其治疗作用与降低肠道黏膜 通透性有关 [9] ꎬ但具体作用机制尚不清楚ꎮ 本研究 在前期研究的基础上ꎬ进一步探讨黄芪多糖对 UC 大鼠结肠黏膜的修复作用及对肠道炎症反应 黏膜 屏障的影响ꎬ旨在阐明黄芪多糖治疗 UC 的分子机 制ꎬ为黄芪多糖治疗 UC 的应用研究奠定基础ꎮ 1 1.1 材料与方法 1.1.1 材料 实验动物 SPF 级健康成年雄性 Wister 大鼠 60 只ꎬ体质量(200 ± 20) gꎬ由甘肃中医药大学动物 实验 中 心 提 供ꎬ 实 验 动 物 许 可 证 号: SCXK ( 甘 ) 2015 0002ꎮ 动物饲养温度 20 ~ 25 ꎬ自由进食 饮 水ꎬ适应性饲养 1 周后开始实验ꎮ 1.1.2 药品及试剂 黄芪多糖(70 ) ꎬ购自大连美 仑生物科技有限公司ꎬ批号 AO418Aꎻ柳氮磺胺吡啶 ( SASP) 片ꎬ由上海福达制药有限公司生产ꎬ国药准 字 H320840ꎮ TNBSꎬ 购 自 美 国 Sigma 公 司ꎬ 编 号 p2297ꎻ表皮生长因子( EGFꎬ批号 JL12974) TNF α 分组 给药及标本采集 造模后第 2 天ꎬ采 用随机数字表法将 60 只大鼠分为空白组ꎬ模型组ꎬ SASP 组ꎬ黄芪多糖低 中 高剂量组ꎬ每组 只ꎮ 空 剂量灌胃 SASP 混悬液ꎻ黄芪多糖低 中 高剂量组 分别以 0ꎬ200ꎬ400 mg / kg 剂量灌胃黄芪多 糖 溶 液ꎮ 连续灌胃 7 dꎬ末次给药后大鼠禁食 12 hꎬ采用 7 水合氯醛麻醉ꎬ取结肠组织ꎬ一部分结肠采用 4 多聚 甲 醛 固 定ꎬ 制 备 组 织 切 片ꎻ 另 一 部 分 结 肠 于 70 保存ꎬ用于测定结肠组织中的细胞因子水平 髓过氧化物酶( MPO) 活性及 Occludin ZO 1 蛋白的 表达ꎮ 1.2.3 病理组织学观察及评分 结肠组织采用 4 多聚甲醛固定 48 h 后ꎬ标本经梯度乙醇脱水及二甲 苯透化ꎬ采用石蜡包埋ꎬ切片后进行 HE 染色ꎬ然后 置于 显 微 镜 下 观 察 并 拍 照ꎬ 病 理 切 片 参 照 Morris 等 [] 提出的方法进行病理组织学评分ꎮ 1.2.4 MPO 活性测定 称取结肠组织 50 mgꎬ采用 0.5 HTBA 溶液制成 的匀浆ꎬ在 4 温度下以 14 000 r / min 离 心 15 minꎬ 取 上 清 80 μlꎬ 加 入 含 0.1 H 2 O 2 的 0.000 5 二盐酸苯联茴香胺120 μlꎬ 用酶标仪每隔 30 s 测定 A460 吸光值ꎬ根据2 min内 ( 批号 JL17005) ELISA 检测试剂盒ꎬ均购自上海江 莱生物科 技 有 限 公 司ꎻ 转 化 生 长 因 子 β ( TGF β) 1.2.5 司ꎬ批号 ER0152ꎻOccludin 蛋白抗体ꎬ购自 Abcam 公 匀浆ꎬ在 4 温度下以 5 000 r / min 离心 minꎬ取 ELISA 检测试剂盒ꎬ购自上海浩本生物科技有限公 司ꎬ产品号 ab168986ꎻ ZO 1 蛋白抗体ꎬ 购自 Thermo 公司ꎬ 产 品 号 61 7300ꎻ 十 六 烷 基 三 甲 基 溴 化 胺 ( HTBAꎬ编号 ARK2188) 二盐酸苯联茴香胺( 编号 MFCD00012488) ꎬ均购自美国 Sigma 公司ꎮ 1.1.3 主要仪器 3K15 型低温离心机( 德国 Sigma 公司) ꎬ全波长酶标仪( Multiskan TM GOꎬ赛默飞科技 有限公 司) ꎬ EG1150 型 组 织 包 埋 机 ( 德 国 LEXICA 公司) ꎬ RM2135 型 石 蜡 切 片 机 ( 德 国 LEXICA 公 司) ꎬXB51 32H01 型病理图像分析系统( 日本奥林 巴斯公司) ꎬ1658001 型蛋白印迹电泳仪( Bio Rad 公 司) ꎮ 1.2 1.2.1 方法 UC 大鼠模型的制备 大鼠适应性饲养 1 周 后禁食 12 hꎬ采用 7 水合氯醛麻醉ꎬ将聚乙烯管从 吸光值的平均变化率计算 MPO 活性ꎮ TNF α EGF TGF β 含量测定 称取结肠组 织 0.5 gꎬ用 ph 为 7.4 的磷酸缓冲溶液制成 的 上清ꎮ 按照 ELISA 试剂盒的操作说明进行 TNF α EGF TGF β 的含量测定ꎬ每个样品设 2 个复孔ꎬ根 据标准曲线计算样品含量ꎬ结果取平均值进行统计 分析ꎮ 1.2.6 Occludin ZO 1 蛋白表达水平测定 通过免 疫印迹实验测定结肠组织中 Occludin ZO 1 蛋白的 表达水平ꎮ 具体方法:取结肠组织提取并制备组织 蛋白样品ꎬ测定蛋白含量ꎬ样品采用 SDS PAGE 凝胶 电泳分离蛋白ꎬ然后转到 PVDF 膜上ꎬ使用 5 脱脂 牛奶封闭 1 hꎬ将 PVDF 膜与相应的一抗在 4 温度 下孵育( Occludinꎬ1 1 000ꎻZO 1ꎬ1 1 000) ꎬ洗去 一抗ꎬ加入 对 应 的 二 抗ꎬ 室 温 孵 育 1 hꎮ 然 后 加 入 ECL 发光试剂ꎬ暗房曝光ꎬ应用 Image J 软件计算灰 度值ꎬ以内参 β actin 为参照ꎬ定量分析蛋白表达量ꎮ 大鼠肛门端逆行插入结肠ꎬ在距离肛门端 8 cm 处的 1.2.7 0.8 mlꎮ 灌肠后将大鼠头部朝下倒提 2 minꎬ然后将 单因素方差分析ꎬ2 组间比较采用 Dunnett T 检验ꎮ 结肠内灌注含 50 乙醇的 TNBS 溶液(2.5 mg / ml) 大鼠保持头低足高的体位直至自然苏醒ꎮ 6 采用 SPSS 13.0 统计软件进行统 表示ꎬ采用 计分析ꎬ计量资料服从正态分布时以 x±s 统计方法 P<0.05 表示差异有统计学意义ꎮ

3 2 2.1 分 MPO活性及 TNF α 含量均明显升高ꎬ2 组比较差 结果 黄芪多糖对 UC 大鼠结肠病变程度的影响 空白组:大鼠结肠黏膜结构完整清晰ꎬ未见溃疡 及炎细胞浸润ꎮ 模型组:大鼠正常黏膜结构破坏ꎬ腺 体破坏并有明显的溃疡形成ꎬ黏膜及黏膜下层充血 肿胀ꎬ伴有大量炎细胞浸润ꎮ 黄芪多糖低剂量组:大 鼠结肠黏膜下层有大量炎细胞浸润ꎬ结肠黏膜排列 紊乱ꎮ 黄芪多糖中 高剂量组:大鼠结肠黏膜病变减 轻ꎬ溃疡面愈合ꎬ上皮组织连续完整ꎬ大部分腺体结 构完 整ꎬ 黏 膜 组 织 充 血 及 水 肿 减 轻ꎮ 详 见 图 1ꎮ 与空白 组 比 较ꎬ 模 型 组 大 鼠 结 肠 病 理 组 织 学 评 异均有 统 计 学 意 义 ( P < 0. 01 ) ꎮ 与 模 型 组 比 较ꎬ SASP 组及黄芪多糖中 高剂量组结肠病理组织学评 分 MPO 活性及 TNF α 含量均明显降低ꎬ差异均有 统计学意义( P<0.01) ꎻ黄芪多糖低剂量组 TNF α 含 量明显降低ꎬ差异有统计学意义( P < 0.01) ꎬ结肠病 理组织学评分 MPO 活性降低不明显ꎬ差异均无统 计学意义( P>0.05) ꎮ 黄芪多糖各剂量组之间比较ꎬ 高剂量组对于各项指标的改善作用明显优于低剂量 组ꎬ2 组比较差异均有统计学意义( P < 0.05) ꎮ 详见 表 1ꎮ Aꎬ空白组ꎻBꎬ模型组ꎻCꎬSASP 组ꎻDꎬ黄芪多糖低剂量组ꎻEꎬ黄芪多糖中剂量组ꎻFꎬ黄芪多糖高剂量组ꎮ 图1 各组大鼠结肠病理组织学评分 MPO 活性及 TNF α 含量比较 ( x ±s) 表1 组别 n 空白组 模型组 SASP 组 黄芪多糖低剂量组 黄芪多糖中剂量组 黄芪多糖高剂量组 黄芪多糖对 UC 大鼠结肠组织病理学的影响( HEꎬ 20) 剂量 / ( mg / kg) 300 200 病理组织学评分 MPO 活性 / TNF α 含量 / 0.05±0.02 0.12±0.06 212.55±53.27 0 400 3.83±0.54 2.47±0.65 3.15±0.57 2.86±0.35 2.27±0.68 ( U / mg) 2.18±0.34 0.92±0.23 1.92±0.58 1.54±0.59 1.12±0.45 ( pg / g) 465.95±84.41 275.56±41.40 367.46±65.34 318.98±34.34 282.84±69.11 注:与空白组比较 P<0.01ꎬ与模型组比较 P<0.01ꎬ与黄芪多糖低剂量组比较 P<0.05ꎮ 2.2 黄芪多糖对 UC 大鼠结肠组织中 EGF TGF β 意义( P< 0.01) ꎮ 与模型组比较ꎬSASP 组及黄芪多 与空白组比较ꎬ模型组大鼠结肠组织中 EGF 含 高ꎬTGF β 含量明显降低ꎬ差异均有统计学意义( P< 含量的影响 量明显降低ꎬTGF β 含量明显升高ꎬ差异均有统计学 糖中 高剂量组大鼠结肠组织中 EGF 含量明显升 0.01) ꎻ黄芪多糖低剂量组大鼠结肠组织中 EGF 含 7

4 量明显升高ꎬ差异有统计学意义 ( P < 0. 05) ꎬTGF β 含量降低不明显ꎬ差异无统计学意义( P>0.05) ꎮ 黄 芪多糖各剂量组之间比较ꎬ高剂量组对于各项指标 表2 组别 n 空白组 模型组 SASP 组 黄芪多糖低剂量组 黄芪多糖中剂量组 黄芪多糖高剂量组 300 200 的改善作用明显优于低剂量组ꎬ2 组比较差异均有 统计学意义( P<0.05) ꎮ详见表 2ꎮ 各组大鼠结肠组织中 EGF TGF β 含量比较( x ±sꎬpg / g) 剂量 / ( mg / kg) 0 400 EGF 265.97±28.98 140.42±29.85 TGF β 123.26±22.25 226.29±43.63 230.46±28.87 172.79±38.75 206.73±27.88 177.06±32.35 212.90±20.86 244.31±45.09 162.69±37.61 154.02±22.53 注:与空白组比较 P<0.01ꎻ与模型组比较 P<0.05ꎬ P<0.01ꎻ与黄芪多糖低剂量组比较 P<0.05ꎮ 2. 3 黄 芪 多 糖 对 UC 大 鼠 结 肠 组 织 中 Occludin ZO 1蛋白表达的影响 与空白组比较ꎬ模型组大鼠结肠组织中 Occlu din ZO 1 蛋白 表 达 水 平 明 显 降 低ꎬ 差 异 均 有 统 计 学意义( P < 0.01) ꎻ与模型组比较ꎬSASP 组及黄芪 多糖中 高剂量组大鼠结肠组 织 中 Occludin ZO 1 蛋白表达水平明显升高ꎬ差异均有统计学意义( P< 0.05) ꎻ黄芪 多 糖 各 剂 量 组 之 间 比 较ꎬ高 剂 量 组 对 于 Occludin 蛋白的改善作用明显优于低剂量组ꎬ2 组比较差异有统计学意义 ( P < 0. 05) ꎮ 详 见 图 2 图 3ꎮ Aꎬ空白组ꎻBꎬ模型组ꎻCꎬSASP 组ꎻDꎬ黄芪多糖低剂量组ꎻ Eꎬ黄芪多糖中剂量组ꎻFꎬ黄芪多糖高剂量组ꎮ 图2 黄芪多糖对 UC 大鼠结肠组织中 Occludin ZO 1 蛋白表达的影响 与空白组比较 P<0.01ꎬ与模型组比较 P<0.05ꎬ与黄芪多糖低剂量组比较 P<0.05ꎮ 图3 3 各组大鼠结肠组织中 Occludin ZO 1 蛋白相对表达水平比较 讨论 目前研究认为ꎬUC 的发生与环境ꎬ遗传 心理因 8 素ꎬ肠道微生物感染ꎬ炎症因子及肠道黏膜免疫有 关ꎬ多种因素相互作用引起肠道黏膜免疫应答异常ꎬ

5 肠道炎症反应造成黏膜组织损伤ꎬ进而导致肠道黏 膜屏障功能异常ꎬ肠道微生物渗透进入组织并引起 局部及全身炎症反应ꎮ 因此ꎬ促进肠道黏膜修复 改 善肠道黏膜屏障功能是 UC 关键的治疗措施之一ꎮ MPO 由活化的中性粒细胞释放ꎬ 结 肠 组 织 中 MPO 活性的高低可反映肠道中性粒细胞浸润的程 度ꎬ在 UC 的发生 发展过程中ꎬ大量的中性粒细胞 浸润进入结肠组织ꎮ 由于中性粒细胞在参与炎症反 应的过程中可释放一系列的溶酶体酶ꎬ从而引起结 肠组织损伤ꎬ导致肠道黏膜功能受损ꎮ TNF α 作为 炎症介质ꎬ可诱导诱生型一氧化氮合酶表达增加ꎬ产 织中的 MPO 活性及 TNF α 含 量 减 轻 肠 道 炎 症 反 应ꎬ从而减轻黏膜损伤ꎻ通过调节结肠组织中 EGF TGF β 含 量 促 进 结 肠 黏 膜 修 复ꎻ 通 过 升 高 肠 道 Occludin ZO 1 蛋白表达水平改善肠道黏膜屏障功 能ꎮ 本研究丰富了黄芪多糖治疗 UC 的作用机制ꎬ 为黄芪多糖治疗 UC 的应用研究提供了重要的实验 依据ꎮ 参考文献: [1] Neurath M.Current and emerging therapeutic targets for IBD [ J]. Nature Reviews Gastroenterology Hepatologyꎬ2017ꎬ 14 (5) :269 278. 生的氧自由基可引起结肠黏膜的病理性损伤ꎮ 临床 [2] Zmora NꎬLevy MꎬPevsner Fishcer Mꎬet al. Inflammasomes 用 TNF α 单克隆抗体对 UC 患者有显著的疗效 [11] ꎬ [3] 张俊ꎬ王朋川ꎬ李贵轲ꎬ等.溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤 究结果表明ꎬ黄芪多糖可降低结肠组织中的 MPO 活 [4] Lechuga Sꎬ Ivanov A I. Disruption of the epithelial barrier 结肠黏膜的损伤作用ꎬ表明黄芪多糖对 UC 的治疗 mechanisms [ J]. Biochimica Et Biophysica Acta Molecular 研究表明ꎬUC 患者血液中 TNF α 含量明显升高ꎬ采 表明 TNF α 与 UC 发生 发展密切相关ꎮ 本实验研 性及 TNF α 含量ꎬ而炎症因子水平下降可减少其对 作用与减轻炎症反应有关ꎮ 肠道黏膜损伤后ꎬ通过结肠细胞的增殖 移行和 and intestinal inflammation[ J]. Mucosal Immunologyꎬ2017ꎬ (4) :865 883. 机制的研究进展[ J].广州化工ꎬ2017(8) :28 30. during intestinal inflammation:quest for new molecules and Cell Researchꎬ2017(7) :1183 1194. [5] Sánchez de Medina FꎬRomero Calvo IꎬMascaraque Cꎬet al. 分化实现对结肠黏膜的修复ꎬ从而恢复结肠黏膜的 Intestinal inflammation and mucosal barrier function[ J]. In 细胞的分化与增殖ꎬ是促进肠道黏膜修复的主要调 [6] 刘元艳ꎬ刘学文ꎬ谭勇ꎬ等.基于文本挖掘探索溃疡性结肠 屏障功能ꎮ EGF 由结肠杯状细胞产生ꎬ可诱导结肠 节因子ꎮ 此外ꎬ肠道中 TGF β 与 UC 的发生密切相 关ꎮ 研究表明ꎬUC 患者肠道中 TGF β 含量显著升 高ꎮ 此外ꎬ体外实验研究表明ꎬTGF β 可抑制肠道细 胞的增殖 [12] ꎮ 本实验结果显示ꎬ 黄 芪 多 糖 可 升 高 UC 大鼠结肠中的 EGF 含量ꎬ并降低 TGF β 含量ꎬ表 明黄芪多糖具有促进黏膜修复的作用ꎮ 肠道细胞间的紧密连接蛋白在维持肠道黏膜屏 障完整性方面发挥着重要作用ꎮ 肠道上皮紧密连接 蛋白一旦发生变异 减少或缺失ꎬ肠道黏膜的完整性 flammatory Bowel Diseasesꎬ2014ꎬ20(12) :2394 2404. 炎药物的 治 疗 规 律 [ J ]. 中 国 实 验 方 剂 学 杂 志ꎬ 2013 (15) :329 332. [7] 贺海辉ꎬ沈洪ꎬ朱宣宣ꎬ等.黄芪对三硝基苯磺酸诱导的大 鼠结肠炎的作用[ J].中华中医药杂志ꎬ2013( ) :3082 3085. [8] 常慧芳.黄芪仙鹤草汤治疗溃疡性结肠炎的临床特点及 疗效观察[ J]. 世界最新医学信息文摘ꎬ2016( 51) :156 157. [9] 臧凯宏ꎬ吴建军ꎬ秦红岩ꎬ等.黄芪多糖对溃疡性结肠炎大 鼠肠道黏膜屏障的影响[ J].中药材ꎬ2017(1) :208 211. 就会破坏ꎬ导致黏膜通透性增加ꎬ细菌 内毒素及大 [] Morris G PꎬBeck P LꎬHerridge M Sꎬet al.hapten induced 肠道黏膜紧密连接蛋白主要包括 Occludin 和 ZO 1ꎬ [11] Leppkes MꎬRoulis MꎬNeurath M Fꎬet al.pleiotropic func 整性ꎮ 本实验结果表明ꎬUC 大鼠结肠组织中 Occlu lial response to inflammation [ J]. International Immunolo 分子物质可通过黏膜进入体循环ꎬ介导 UC 的发生ꎮ 其蛋白表达量可一定程度地反映肠道黏膜屏障的完 din ZO 1 蛋白表达水平明显降低ꎬ表明由 TNBS 诱 导的 UC 大鼠结肠黏膜屏障功能降低ꎻ采用黄芪多 糖治疗后ꎬUC 大鼠结肠组织中 Occludin ZO 1 蛋白 表达水平显著升高ꎬ表明黄芪多糖对 UC 的治疗作 用可能与改善肠道黏膜屏障功能有关ꎮ 综上所述ꎬ黄芪多糖通过降低 UC 大鼠结肠组 model of chronic inflammation and ulceration in the rat co lon[ J].Gastroenterologyꎬ1989ꎬ96(3) :795 803. tions of TNF alpha in the regulation of the intestinal epithe gyꎬ2014ꎬ26(9) :509 515. [12] Vizio BꎬPoli GꎬChiarpotto Eꎬet al. 4 Hydroxynonenal and TGF beta1 concur in inducing antiproliferative effects on the CaCo 2 human colon adenocarcinoma cell line[ J].Bio factorsꎬ2005ꎬ24(1 / 4) :237 246. [ 编辑:徐 燕] 9

6 第 35 卷第 3 期 2018 年 6 月 J GANSU UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE Vol 35 No 3 Jun.2018 Study on the repair effect on colon mucosa and mechanism of astragalus polysaccharides in rats with ulcerative colitis ZANG Kaihong 1ꎬ2 ꎬLI Yingdong 3ꎬ4 ꎬZHU Lijuan 1ꎬ2 ꎬLI Tong 1 ꎬCHEN Lijuan 3 ꎬYUE Jia 4ꎬ5 ꎬ XU Houqian 4ꎬ6 ꎬLIU Kai 3ꎬ4 ꎬSONG Peng 4 ꎬWU Jianjun 4ꎬ5 (1.Pharmacy CollegeꎬGansu University of Chinese MedicineꎬLanzhouꎬGansuꎬ730000ꎬChinaꎻ 2.Key Laboratory of TCM Pharmacology and Toxicology in Gansu ProvinceꎬLanzhouꎬGansuꎬ730000ꎬChinaꎻ 3.College of Chinese and Western Integrative MedicineꎬGansu University of Chinese MedicineꎬLanzhouꎬ Gansuꎬ730000ꎬChinaꎻ 4.Key Laboratory for Prevetion of Chronic Disease by TCM in Gansu ProvinceꎬLanzhouꎬGansuꎬ730000ꎬChinaꎻ 5.School of Public HealthꎬGansu University of Chinese MedicineꎬLanzhouꎬGansuꎬ730000ꎬChinaꎻ 6.Clinical College of TCMꎬGansu University of Chinese MedicineꎬLanzhouꎬGansuꎬ730000ꎬChina) Abstract: Objective To study the repair effect on colon mucosaꎬand the influences on gut inflammation and mucosal barrier of astragalus polysaccharides ( APS) and illuminate its molecular mechanisms in treating ulcerative colitis ( UC). Methods 60 male Wister rats were randomly divided into blank groupꎬmodel group and 4 drug groups SASP ( suffasalarin) groupꎬaps high ꎬmedium and low dose groupꎬ10 rats in each group. Rat models were induced by TNBS ( trinitro benzene sulfonic acid) ꎬblank group and model group took normal saline by ga vageꎬdrug groups were intervened with corresponding drugs by gavage for 7 days. Colonic tissue was used for his topathological observationꎬscore and myeloperoxidase ( MPO) activity determinationꎻelisa was used to determine TNF αꎬegf and TGF β in colonic tissueꎻexpression of Occludin and ZO 1 protein was investigated by Western blotting.results APS can dose dependently decrease histopathological score of colonꎬmpo activity and the con tents of TNF αꎬtgf β in colonic tissueꎬincrease the content of EGF and expression level of Occludin and ZO 1 protein( P<0.05 or P<0.01) ꎬimprove the pathological changes of colon mucosa in rats.conclusion Therapeutical effect of APS on UC is related to alleviating gut inflammation reactionꎬpromoting rehabilitation of intestinal mucosa as well as improving function of gut mucosal barrier. Key words: ulcerative colitisꎻastragalus polysaccharidesꎻtnf αꎻegfꎻtgf βꎻtight junction proteinꎻratꎻex perimental study 征稿启事 是面向国内外公开发行的综合性中医药学术期刊 ꎮ 本刊辟有专家诊疗经验 理论研究 学术探讨 实验研究 临床研究与报道 针灸推拿 敦煌医学 中药研究 中药资源 技术与方法 工艺研究 藏医藏药 武威汉代医简 陇医陇药等栏目 ꎬ 欢迎广大作者踊跃投稿 ꎮ 凡基金资助项目论文 ꎬ 一经审查合格即优先发表 ꎮ 文稿请注明作者单位和单位所在地区邮政编码 ꎬ 并附第一作者姓名 ( 出生年 ) 性别 民族( 汉族不写 ) 职称 学位 主要研究方向 ꎮ 临床研究与报道 实验研究 技术与方法 工艺研究等栏目文稿 ꎬ 须附单位证明并加盖公章 ꎬ 以负责其内容的核实和保密审查 ꎮ 基金项目论文 ꎬ 请在文稿后注明项目来源和编号 ꎮ 本刊已被 «中国期刊全文数据库»«中国学术期刊综合评价数据库»«中国核心期刊 ( 遴选 ) 数据库» 等数据库收录 ꎬ 凡不愿被其转载文章者 ꎬ 请勿投本刊 ꎮ 稿件录用后 ꎬ 将一次性支付作者稿酬 ( 包括刊物内容上网服务费 )ꎮ 编辑部地址 : 甘肃省市定西东路 35 号甘肃中医药大学期刊编辑部邮政编码 : 咨询电话 :(0931) 投稿请登录 网站 (http: / / gszyxyxb.gszy.edu.cn)ꎬ 通过在线投稿系统投稿并查询稿件处理情况 ꎮ 10

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