394 中国组织化学与细胞化学杂志第 24 卷 Rho, 转化生长因子, 成纤维细胞特异蛋白, 成纤维细胞生长因子等亦表达上调, 对 EMT 有辅助作用的基质金属蛋白酶 2 和基质金属蛋白酶 9 等表达亦上调 [3] 作为上皮细胞的标志物, 细胞黏附分子的表达缺失对于诱导和完成 EMT 都是十分必要

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愉由万
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1 第 24 卷第 5 期 205 年 0 月中国组织化学与细胞化学杂志 CHINESEJOURNALOFHISTOCHEMISTRYANDCYTOCHEMISTRY Vol.24.No.5 October.205 Slug 和 E cadherin 在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达变化李长思徐爱华杨杨李斌 2 李建华孙永新 ( 中国医科大学附属第一医院康复医学科, 2 中国医科大学附属一医院病理科, 辽宁 000) 摘要目的研究锌指转录因子 Slug E cadherin 和 Vimentin 在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达方法应用免疫细胞化学和 westernblot 检测 Slug E cadherin 和 Vimentin 在非小细胞肺癌胸水中的表达结果在 2 例非小细胞肺癌胸水中,Slug E cadherin 和 Vimentin 的阳性表达率分别为 35.5%(43/2) 7.9% (87/2) 和 39.7% (48/2), 在非小细胞肺癌细胞中 Slug 和 E cadherin 阳性表达率均高于正常胸水,Slug 表达的增强通常伴随 E cadherin 表达下调及 Vimentin 表达的增强结论 Slug 与 E cadherin 在胸水中非小细胞肺癌细胞中的表达呈负相关, 在胸水中提取非小细胞肺癌细胞, 研究 Slug 和 E cadherin,vimentin 的表达及其在上皮间质转化中的调节作用对探讨肿瘤细胞在人体中的转移进展很有意义关键词 Slug;E cadherin;emt; 胸腔积液 ; 非小细胞肺癌细胞中图分类号 R734.2 文献标识码 A DOI:0.6705/j.cnki SlugandE cadherinexpressioninnonsmalcellungcancer LiChangsi 牞 XuAihua 牞 YangYang 牞 LiBin 牞 LiJianhua 2 牞 SunYongxin 牗 DepartmentofRehabilitation 牞 2 DepartmentofPathology 牞 FirstHospital 牞 chinamedicaluniversity 牞 Liaoning000 牞 China 牘 Abstract ObjectiveTostudySlugandE cadherinexpresionsinnonsmalcellungcancer.methodstheexpresionof Slug 牞 E cadherinandvimentininthelungcancerwasdetectedbyimmunocytochemistryandwesternbloting.resultsinthepleural efusionof2patientswithnonsmalcellungcancer 牞 thepositiveexpresionratesofslug 牞 E cadherinandvimentinwererespectively 35.5% 牗 43/2 牘牞 7.9% 牗 87/2 牘牞 and39.7% 牗 48/2 牘牞 andtheratesofpositiveexpresionofslugande cadherinwerehigher thaninnormalpluralefusion.theaugmentationofslugexpresionwasusualyaccompaniedbydown regulatede cadherinexpresion andenhancedvimentinexpresion.conclusiontheexpresionsofslugande cadherininpluralefusionofnonsmalcellungcancer arenegativelycorelated 牗 P<0.05 牘.Itisverymeaningfultoextractnonsmalcellungcancercelsfrompluralefusionandtostudy Slug 牞 E cadherinandvimentinexpresionsandtheirregulatoryroleintheepithelialmesenchymaltransformationinordertoexplorethe metastaticprogresionoftumorcelsinthehumanbody. Keywords Slug 牷 E cadherin 牷 EMT 牷 Pleuralfluid 牷 Nonsmalcellungcancer 肺癌是目前世界范围内引起死亡人数最多的肿瘤虽然关于肺癌发生的蛋白和转移机制已经部分阐明, 但位居死亡率之首的肺癌五年存活率仍无明显改善 ( 仅 5% -20%), 缺乏有效的早期诊断和治疗手段是两大主要原因之一 [] 因此, 充分利用痰脱落细胞支气管灌洗液等临床诊断材料进行肿瘤进展阶段及侵袭机制的研究具有重要的理论和实践意义上皮细胞间质转化 (epithelialmesenchymal 收稿日期修回日期作者简介李长思, 男 (983 年 ), 汉族, 住院医师通讯作者 (Towhom corespondenceshouldbeaddresed): LIJH@mail.cmu.edu.cn transition,emt) 是多细胞生物胚胎发生中的基础过程, 也存在于多种慢性疾病以及肿瘤的发生发展过程中, 它以上皮细胞极性丧失及其间质特性的获得为主要特征 EMT 与肿瘤细胞的原位侵袭和远处转移有着密切的关系 [2] EMT( 上皮间质转化 ) 表现为上皮细胞失去极性, 与周围的细胞和基质接触减少, 细胞间黏附力下降, 迁移和运动能力下降, 同时细胞表型发生变化这些特点与肿瘤细胞的原位侵袭和远处转移密切相关传统观点认为, 在 EMT 的发生过程中, 上皮细胞的标志物如 E 钙黏蛋白 (E Ca) 桥粒斑蛋白紧密连接蛋白角蛋白黏蛋白等表达下调, 间叶表型标记物如波形蛋白, 纤维连接蛋白,N 钙粘蛋白等表达上调, 以及诱导 EMT 的细胞因子和转录因子如 Snail,Slug,twist,

2 394 中国组织化学与细胞化学杂志第 24 卷 Rho, 转化生长因子, 成纤维细胞特异蛋白, 成纤维细胞生长因子等亦表达上调, 对 EMT 有辅助作用的基质金属蛋白酶 2 和基质金属蛋白酶 9 等表达亦上调 [3] 作为上皮细胞的标志物, 细胞黏附分子的表达缺失对于诱导和完成 EMT 都是十分必要的, 而它的重新激活可能也会导致相反的过程间质上皮转化 (MET) [5 7] 在肿瘤侵袭过程中, EMT 可能只是一个瞬时现象, 当肿瘤细胞完成侵袭过程后将重新获得上皮特征 E cadherin 重新表达 [5,7] EMT 概念的提出使人们对肿瘤侵袭转移机制有了更深刻的理解锌指因子 Slug 属于 Snail 转录抑制子超家族, 编码的转录因子表达在不同组织发育的各阶段, 在原肠胚和中胚层的形成中发挥重要作用 Slug 基因有高度保守的 C2H2 型锌指结构域, 连接到 E box 可以抑制靶基因的转录 [8,9] 另外,Slug 还可以促进上皮细胞间充质细胞的转换 (epithelial mesenchymal transition,emt) 和抑制上皮细胞钙黏蛋白 (E cadher in) 在内的粘附分子和上皮细胞标记物表达, 促进细胞的迁移功能获得和缺失实验同样表明在鸡和爪蟾胚胎特定区域的 Slug 可以启动 EMT [8] 目前, 国内外有很多体内和体外研究显示了 Slug 在不同类型的肿瘤侵袭和转移中的作用然而, 试验中使用的材料和方法不同, 得出的结论也具有很大差异, 说明 Slug 在肿瘤发生侵袭过程中的作用还需要进一步去证实本研究采用免疫细胞化学免疫荧光及 western blot 方法检测 Slug 蛋白 E cadherin 蛋白及 Vimentin 蛋白在非小细胞肺癌细胞中的表达, 旨在了解它们的相关性及在肿瘤细胞发生 EMT 中的作用材料和方法. 材料. 病例收集 2008 年 2 月至 200 年 2 月中国医科大学附属第一医院门诊及病房恶性胸水患者标本, 优选以肿瘤细胞为主炎性细胞较少未接受过治疗的 2 例作为研究对象 ( 经支气管镜及术后组织学证实为非小细胞肺癌细胞 ) 另外 28 例良性胸水标本作为对照, 共计 49 例其中, 男性患者 69 例, 女性患者 52 例 ; 年龄岁, 平均年龄 56 岁.2 试剂兔抗人 E cadherin 抗体购自美国 abcam 公司, 鼠抗人 Slug 抗体购自美国 santacruz 抗体试剂公司产品, 鼠抗人 Vimentin,SP B SP A CK7 E cadherin TTF 抗体购自福州迈新公司销售的美国 Biox 公司产品 2. 方法 2. 液基细胞薄层检测技术 (TCT) 收集新鲜胸水 20ml 左右, 室温下 800r/min 离心 5 分钟, 弃去上清, 取沉淀底层细胞, 加入清洗液后再次离心取沉淀与保存液混合后机器自动制片 2.2 细胞包埋块的制备采用液基细胞薄层方法 (TCT) 常规制片诊断后, 每份标本收集新鲜胸水标本 200ml 左右, 经 95% 乙醇固定 24 小时后石蜡包埋切片每份标本切片 7 张, 分别用做 HE 染色 SP B SP A CK7 E cadherin Vimentin TTF 免疫细胞化学 SP 法染色此外, 每份标本制备 3 张 TCT 涂片, 分别做 Slug E cadherin 的免疫荧光染色及 Slug 的免疫细胞化学 SP 法染色 2.3 免疫荧光染色采用间接免疫荧光染色法检测 Slug 和 E cad herin 的表达定位首先,TCT 涂片放入 4% 福尔马林中固定 20 分钟加非免疫动物血清 37 封闭 30 分钟, 滴加一抗 (:00 稀释 ),4 孵育过夜 ; 免疫荧光二抗 (:00 稀释 ),37 孵育 30 分钟 DAPI 复染细胞核 50% 缓冲甘油封片, 荧光显微镜 Nikon90i 下观察并照相孵育二抗以后步骤均在避光条件下进行阴性对照实验 : 用等量的 0.0mol/LPBS 代替一抗, 其余步骤同前结果判定 : 以细胞中呈现明亮的绿色荧光信号定位 0ct3/4 阳性 2.4 SP 法采用链霉菌抗生物素过氧化物酶 (streptavidin peroxidase,sp) 法,PBS 缓冲液代替第一抗体作为空白对照,DAB 显色, 苏木素复染常规脱水透明, 中性树胶封片以细胞出现棕黄色颗粒为阳性, 阳性程度判断 : 细胞无着色或着色细胞数占总细胞数 < 0% 为 (-); 阳性着色细胞数占总细胞数 0% ~25% 为 (+);26% ~50% 为 (+ +), 5% 为 (+ + +); 阳性表达即 + ~ 每张切片选取 0 个高倍视野 (400 ), 对免疫细胞化学结果进行评估 2.5 WesternBlot 在 2 例非小细胞肺癌胸水和 28 例良性胸水中检测 Slug,E cadherin 和 Vimentin 的蛋白水平总

第５期３９５李长思等Ｓｇ和Ｅｄ在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达变化蛋白从胸水细胞中提取冰上超声处理４静置２６统计分析４离心２０ｍ１０００ｍ提取上清孵育５０ｍ应用ＳＰＳＳ１１０软件进行统计学处理多组数据放入７０冰箱里保存使用前用Ｂｄｆｄ法测的阳性率比较采用卡方检验以Ｐ００５为差异有定蛋白浓度以每孔

3 第５期３９５李长思等Ｓｇ和Ｅｄ在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达变化蛋白从胸水细胞中提取冰上超声处理４静置２６统计分析４离心２０ｍ１０００ｍ提取上清孵育５０ｍ应用ＳＰＳＳ１１０软件进行统计学处理多组数据放入７０冰箱里保存使用前用Ｂｄｆｄ法测的阳性率比较采用卡方检验以Ｐ００５为差异有定蛋白浓度以每孔８０μｇ蛋白加入１０ＳＤＳＰＡＧＥ统计学意义凝胶电泳后４５０ＶＳｇ１００ＶＥｄ条实验结果２２μｍＰＶＤＦ膜５脱件下湿电转移仪将蛋白转入０脂奶粉封闭液封闭２一抗Ｓｇ１１００稀释Ｅｄ１非小细胞肺癌的鉴定１１０００稀释４过夜Ｘ底片曝光显影定影常规使用液基细胞薄层方法检测胸水中细胞成后拍照以 β 为内参每组结果均为相同条件分之后细胞石蜡包埋ＨＥ染色免疫细胞化学染重复３次色阳性表达证实为非小细胞肺癌肺癌细胞图１患者经手术后切除肺经组织学进一步证实为非小细胞肺癌图１胸水中非小细胞肺癌免疫细胞化学染色表达图１Ａ恶性胸水ＴＣＴ涂片细胞学Ｂ细胞包埋石蜡切片ＨＥＣ免疫细胞化学染色ＣＫ７在胸水非小细胞肺癌细胞中阳性表达Ｄ免疫细胞化学染色ＴＴＦ１在胸水非小细胞肺癌细胞中阳性表达Ｅ免疫细胞化学染色ＳＰＡ在胸水非小细胞肺癌细胞中阳性表达Ｆ免疫细胞化学染色ＳＰＢ在胸水非小细胞肺癌细胞中阳性表达ＧＣＫ５６在非小细胞肺癌细胞中阴性表达ＨＣＫ５６在非小细胞肺癌组织中阴性表达ＳＰ法ＩＴＴＦ１在非小细胞肺癌组织中阳性表达ＳＰ法Ｊ非小细胞肺癌组织切片ＨＥ染色Ｆｇ１ＡＴｍｗｄｄｆｄｆｍｇｂｔｃｔＢＴｍｗｄｄｆｄｆｍｇｂｈｅＣＣＫ７ｆｄｆｍｇｂｍｍｍｍｍｂＤＴＴＦ１ｆｄｆｍｇｂｍｍｍＥＳＰＡｆｄｆｍｇｂｍｍｍｍＦＳＰＢｆｄｆｍｇｂｍｍｍｍＧＣＫ５６ｆｄｆｍｇｂｍｍｍｍＨＣＫ５６ｆｍｇｂｍｍｍｍＩＴＴＦ１ｆｍｇＳＰＩｆｍｇＨＥ

单个散在分布的非小细胞肺癌细胞 E cadherin 表达较弱或不表达 ( 图 5) 在高分化非小细胞肺癌细胞中,Vimentin 呈胞浆弱表达, 而在低分化非小细胞肺癌细胞, 排列成腺腔样, 紧密排列或成团状排列的非小细胞肺癌细胞中染色增强 ( 图 6) 良性上皮细胞中,Slug 与 E cadherin 都没有表达图 2 A 免疫荧光染色 E cadherin 膜表达,600 ;B

ExpresionofSlugbyimmunofluorescence(600 ) 在大多数非小细胞肺癌标本中,Slug 的表达与 E cadherin 呈相反的趋势 ( 表 ) 低分化, 单个无连接的非小细胞肺癌细胞中 Slug 表达较好, 而在分化好, 呈乳头样结构的非小细胞肺癌细胞中,Slug 通常弱阳性或阴性表达 ( 图 3, 图 4) Slug 在非小细胞肺癌细胞中表达增强通常伴有 E

4 Slugexpresioninpleuralfluidofnonsmallungcancerbyim munocytochemistry(cytoplasmpositiveweaklyornegative400 ) +(%) E cadherin -(%) 合计 Slug +(%) (9 %) 32(26 4%) 43(35 5%) -(%) 76(62 8%) 2( 7%) 78(64

4 396 中国组织化学与细胞化学杂志第 24 卷 2.Slug,E cadherin 和 Vimentin 在非小细胞肺癌中的表达免疫光结果显示 Slug 表达定位于非小细胞肺癌细胞核,E cadherin 表达定位于非小细胞肺癌细胞膜 ( 图 2) 及 Vimentin 的表达对于高分化或中等分化的非小细胞肺癌细胞, 排列呈腺腔样结构紧密连接的非小细胞肺癌细胞,E cadherin 蛋白通常高表达而对于那些分化较差, 单个散在分布的非小细胞肺癌细胞 E cadherin 表达较弱或不表达 ( 图 5) 在高分化非小细胞肺癌细胞中,Vimentin 呈胞浆弱表达, 而在低分化非小细胞肺癌细胞, 排列成腺腔样, 紧密排列或成团状排列的非小细胞肺癌细胞中染色增强 ( 图 6) 良性上皮细胞中,Slug 与 E cadherin 都没有表达图 2 A 免疫荧光染色 E cadherin 膜表达,600 ;B 免疫荧光染色 Slug 核表达,600 Fig 2 A.ExpresionofE cadherinbyimmunofluorescence(600 );B.ExpresionofSlugbyimmunofluorescence(600 ) 在大多数非小细胞肺癌标本中,Slug 的表达与 E cadherin 呈相反的趋势 ( 表 ) 低分化, 单个无连接的非小细胞肺癌细胞中 Slug 表达较好, 而在分化好, 呈乳头样结构的非小细胞肺癌细胞中,Slug 通常弱阳性或阴性表达 ( 图 3, 图 4) Slug 在非小细胞肺癌细胞中表达增强通常伴有 E cadherin 表达的减弱表 Slug 和 E cadherin 蛋白在胸水中非小细胞肺癌细胞中的表达 Table ExpresionofSlugandE cadherin ininpleuralfluidofnonsmallungcancer 图 4 Slug 在胸水非小细胞肺癌细胞中弱表达或阴性表达,400 Fig.4 Slugexpresioninpleuralfluidofnonsmallungcancerbyim munocytochemistry(cytoplasmpositiveweaklyornegative400 ) +(%) E cadherin -(%) 合计 Slug +(%) (9 %) 32(26 4%) 43(35 5%) -(%) 76(62 8%) 2( 7%) 78(64 5%) 合计 87(7 9%) 34(28 %) 2 图 5 E cadherin 在胸水非小细胞肺癌细胞中表达, 细胞膜阳性表达,400 Fig.5 E cadherinexpresioninpleuralfluidofnonsmallungcanc erbyimmunocytochemistry(membranepositive400 ) 图 3 Slug 在胸水非小细胞肺癌细胞中的表达, 细胞核阳性表达, 400 Fig.3 Slugexpresioninpleuralfluidofnonsmallungcancerby immunocytochemistry(nuclearpositive400 ) 收集细胞量大且肿瘤细胞含量大于 85% 的恶性胸水标本 40 例采用 Westernblot 方法检测 Slug,E cadherin 和 Vimentin 的表达结果显示 Slug,E cad herin 和 Vimentin 在恶性胸水中肿瘤细胞中阳性表达, 而在对照组的增生上皮细胞中不表达 Slug 表达的增强通常伴随 E cadherin 表达下调及 Vimentin 表达的增强而 E cadherin 表达较强的标本通常 Slug 表达较弱 ( 图 7)

7 ExpresionofSlug,E cadherinandvimentininpleuralfluidby westernblot.

5 第 5 期李长思等.Slug 和 E cadherin 在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达变化 397 图 6 Vimentin 在胸水非小细胞肺癌细胞中的表达, 细胞浆阳性表达,400 Fig.6 E cadherinexpresioninpleuralfluidofnonsmallungcancer byimmunocytochemistry(cytoplasmpositive400 ) 图 7 Slug E cadherin 及 Vimentin 在胸水中提取细胞蛋白的表达. 良性上皮细胞 ;2.3. 非小细胞肺癌细胞 ;4. 腺鳞混合型 ;5. 异型增生上皮细胞 Fig.7 ExpresionofSlug,E cadherinandvimentininpleuralfluidby westernblot.(,hyperplasiaepithelialcels;2,3nonsmallungcancer cels;4,adenosquamouscarcinomacels;5,dysplasiaepithelialcels) 讨 EMT 通常在胚胎发育过程中在组织形态方面发生, 在恶性肿瘤侵袭转移过程中发挥重要作用, 是肿瘤侵袭转移的关键步骤 [0] 通过上皮间质转化, 肿瘤细胞变得更有活动性, 并且能够通过获得间质细胞的特征来增加侵袭能力 [] 从恶性胸水中提取的非小细胞肺癌细胞属于具有高侵袭性的转移肿瘤细胞在我们的研究中, 我们利用转移肿瘤细胞探索 EMT 的标记蛋白 Slug 作为锌指转录因子, 是 snail 超家族的成员之一 Snail 作为 E cadherin 抑制因子, 在果蝇小鼠的发育过程, 鼠类和人类肿瘤及黑色素瘤细胞系中的作用早已被证实先前的研究也已经证明 Slug 的过表达与非小细胞肺癌 [2 4,2,24], 食管鳞状细胞癌 [5,6], 消化道肿瘤 [7], 结肠癌 [8], 肝细胞癌 [9], 胰腺癌 [20] [2] [2,23], 肺癌和卵巢癌有关关于部分肿瘤的研究发现,Slug 的过表达与肿瘤的浸润深度淋巴结转移和不良预后有关 [5], 与 E cadherin 表达呈论负相关 [7] 且有关直结肠癌的研究发现,Slug 高表达的患者预后较差 [8] 此外, 体外实验证明 Slug 的过表达能够增加肺癌细胞的侵袭力, 血管发生和加速细胞生长 [2] 而 VictoriaBolós 等在 MDCK 细胞中的研究发现,Slug 在上皮细胞中的过表达能够有效的抑制 E cadherin, 诱导完整的 EMT 过程 [25] 这些文献都证明了 Slug 对 E cadherin 的抑制作用, 并与上皮间质转化有关然而,Slug 在人体非小细胞肺癌细胞中的表达的相关报道还十分有限在研究中, 我们选取恶性胸水中的非小细胞肺癌细胞作为研究对象, 发现 Slug 选择性的表达于胸水中的非小细胞肺癌细胞 2 例标本中,43 例发现了 Slug 阳性表达, 而 78 例标本未见 Slug 明显表达, 这可能与胸水中脱落的肿瘤细胞退行性改变有关先前的研究说明,Slug 高表达的肺癌组织侵袭和转移能力更强 Slug 可诱导肿瘤细胞向间质表型转化, 同时上皮标记物表达降低, 促使细胞发生上皮间质转化当肿瘤细胞侵破胸膜, 转移至胸水, 可在胸水中继续分化, 发生间质上皮转化 (MET), 重新获得上皮表型, 形成新的细胞连接 MarceloGuarino 等人在关于 EMT 的综述中也曾提出过类似的观点 :EMT 的反相过程 MET 可能使发生过 EMT 之后的细胞得以继续生长分化, 形成新的转移灶在我们的实验中, E cadherin 在恶性胸水中肿瘤细胞中表达, 阳性细胞大都分化成腺腔样结构, 形成新的细胞连接, 这与 MET 的理论相符合我们发现, 免疫细胞化学和 westernblot 的结果都显示 Slug 与 E cadherin 表达呈负相关这些结果显示 Slug 的高表达抑制 E cadherin 表达, 伴随 Vim entin 的表达 Westernblot 结果中, 样本 2 和 3 显示 Slug 高表达,E cadherin 表达减弱及 Vimentin 的表达增强然而, 样本 4 中,E cadherin 与 Vimentin 同时阳性表达这可能是同一个标本中可能存在上皮表型的肿瘤细胞和间质表型的肿瘤细胞在肿瘤细胞侵破胸膜的过程中,Slug 和其他转录因子抑制 E cadherin 的表达, 从而使肿瘤细胞间质化, 获得侵袭能力 Slug 和 E cadherin 在胸水非小细胞肺癌中表达, 在对照组的增生上皮中不表达,Slug 与 E cadher in 在胸水中非小细胞肺癌细胞中的表达呈负相关, 即 Slug 表达的增强通常伴随 E cadherin 表达下调及 Vimentin 表达的增强而 E cadherin 表达较强的标本通常 Slug 表达较弱在胸水中提取非小细胞肺癌

6 398 中国组织化学与细胞化学杂志第 24 卷细胞, 研究 Slug 的表达及其在上皮间质转化中的调节作用对探讨肿瘤细胞在人体中的转移进展很有意义, 进一步研究将会为临床诊断及指导临床预后有更大帮助参考文献犤犦 MeyersonM 牞 CarboneD.Genomicandproteomicprofilingof lungcancers 牶 lungcancerclasificationintheageoftargeted therapy.jclinoncol 牞 2005 牷 23 牶犤 2 犦 MareelM 牞 LeroyA.Clinical 牞 celular 牞 andmolecularaspects ofcancerinvasion.physiolrev 牞 2003 牷 83 牶犤 3 犦 HayED.Themesenchymalcel 牞 itsroleintheembryo 牞 and theremarkablesignalingmechanismsthatcreateit.devdyn 牞 2005 牷 233 牶犤 4 犦 BirchmeierW.andJ.Behrens.Cadherinexpresionincarcino mas 牶 roleintheformationofceljunctionsandtheprevention ofinvasivene s.biochimbiophysacta 牞 994 牷 98 牞 26 犤 5 犦 BrabletzT 牞 HlubeckF 牞 SpadernaS 牞 etal.invasionandmetas tasisincolorectalcancer 牶 epithelial mesenchymaltransition 牞 mesenchymalepithelialtransition 牞 stem celsandb catenin. CelsTisuesOrgans 牞 2005 牷 79 牶犤 6 犦 HayED.Themesenchymalcel 牞 itsroleintheembryo 牞 and theremarkablesignalingmechanismsthatcreateit.devdyn 牞 2005 牷 233 牶犤 7 犦 GuarinoM 牞 MicheliP 牞 PalotiF 牞 etal.pathologicalrelevance ofepithelialandmesenchymalphenotypeplasticity.pathol ResPract 牞 999 牷 95 牶犤 8 犦 NietoMA 牞 SargentMG 牞 WilkinsonDG 牞 etal.controlofcel behaviorduringvertebratedevelopmentbyslug 牞 azincfinger gene.science 牞 994 牞 264 牗 5 牶 60 牘牶犤 9 犦 BolósV. 牞 H.Peinado 牞 M.A.Pérez Moreno 牞 etal.thetran scriptionfactorslugrepresese cadherinexpresionandin ducesepithelialtomesenchymaltransitions 牶 acomparison withsnailande47represors.jcelsci 牞 2003 牷 6 牞犤 0 犦 ThieryJP.Epithelial mesenchymaltransitionsindevelopment andpathologies.curopincelbiol 牞 2003 牷 5 牶犤犦 ThieryJP.Epithelial mesenchymaltransitionsintumour progresion.natrevcancer 牞 2002 牷 2 牶犤 2 犦 EloulS 牞 M.B.Elstrand 牞 J.M.Nesland 牞 C.G.etal.Slug 牞 and Smad interactingproteinasnovelparametersofdisease aggresivenesinmetastaticovarianandbreastcarcinoma. Cancer 牞 2005 牷 03 牶犤 3 犦 MartinTA 牞 AGoyal 牞 GWatkins 牞 etalexpresionofthetran scriptionfactorssnail 牞 Slug 牞 andtwistandtheirclinicalsig nificanceinhumanbreastcancer.annsurgoncol 牞 2005 牷 2 牶犤 4 犦 C mec. 牞 F.Magnino 牞 F.Bibeau 牞 etal.snailandslugplay distinctrolesduring breastcarcinoma progresion.clin CancerRes 牞 2006 牷 2 牶犤 5 犦 UchikadoY 牞 S.Natsugoe 牞 H.Okumura 牞 etal.slugexpresion inthee cadherinpreservedtumorsisrelatedtoprognosisin patientswith esophagealsquamouscelcarcinoma.clin CancerRes 牞 2005 牷牶犤 6 犦 KumarA 牞 T.Chatopadhyay 牞 M.Raziuddin 牞 etal.discoveryof deregulationofzinchomeostasisanditsasociatedgenesin esophagealsquamouscelcarcinomausingcdna microar ray.intjcancer 牞 2007 牷 20 牶犤 7 犦 CastroAC 牞 E.Rosivatz 牞 C.Schot 牞 R 牞 etal.slugisoverex presedingastriccarcinomasandmayactsynergisticaly withsipandsnailinthedown regulationofe cadherin.j Pathol 牞 2007 牷 2 牶犤 8 犦 ShioiriM 牞 T. 牞 ShidaK. 牞 KodaK 牞 etal.slugexpresionisan independentprognosticparameterforpoorsurvivalincolor ectalcarcinomapatients.brjcancer 牞 2006 牷 94 牶犤 9 犦 GianneliG 牞 C.Bergamini 牞 E.Fransvea 牞 etal.laminin 5with transforminggrowthfactorbetainducesepithelialtomesen chymaltransitioninhepatocelularcarcinoma.gastroenterol ogy 牞 2005 牷 29 牶犤 20 犦 HotzB 牞 M.Arndt 牞 S.Dulat 牞 S.etal.Epithelialtomesenchy maltransitionexpresionoftheregulatorssnail 牞 Slug 牞 and twistinpancreaticcancer.clincancerres 牞 2007 牷 3 牶犤 2 犦 ShihJY 牞 MFTsai 牞 TH Chang 牞 etal.transcriptionrepresor Slugpromotescarcinomainvasionandpredictsoutcomeof patientswithlungnonsmallungcancer.clincancerres 牞 2005 牷牶犤 22 犦 SivertsenS 牞 R.Hadar 牞 S.Eloul 牞 L.etal.Expresionof Snail 牞 SlugandSipinmalignantmesotheliomaefusionsis asociatedwithmatrixmetaloproteinase 牞 butnotwithcad herinexpresion.lungcancer 牞 2006 牷 54 牶犤 23 犦 EloulS 牞 I.Silins 牞 CGTropé 牞 etal.expresionofe cadherin transcriptionalregulatorsin ovarian carcinoma.virchows Arch 牞 2006 牷 449 牶犤 24 犦 HajraKM 牞 DYChen 牞 ER.Fearon.TheSLUGzincfingerpro teinrepresese cadherininbreastcancer.cancerres 牞 2002 牷 62 牶犤 25 犦 VictoriaBolós 牞 HectorPeinado 牞 MirnaA.etal.Thetran scriptionfactorslugrepresese cadherinexpresionandin ducesepithelialtomesenchymaltransitions 牶 acomparison withsnailande47 represors.jcelsci 牞 2003 牷 6 牶 499 5

材料方法

材料方法生物技术通报姜燕采用鼠抗人血红蛋白单克隆抗体和胶体金标记鼠抗人血红蛋白单克隆抗体及对照抗体羊抗鼠利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原在内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克隆一步法胶体金检测试卡用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白抗体方法检测效价免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡法检测效价的结果显示鼠抗人