第 5期 龚圣勇等G 9 CD5 6和 TPO联合检测鉴别甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生 在 PTC与 BPH中的表达水平 探讨四者联合应用在 结 甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生鉴别诊断中的价 值 为解决诊断中的困扰提供实验依据 材料和方法 1材料 389 果 G 3在甲状腺乳头状癌中阳性表达 定位

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1 第 24 卷第 5 期 205 年 0 月 中国组织化学与细胞化学杂志 CHINESEJOURNALOFHISTOCHEMISTRYANDCYTOCHEMISTRY Vol.24.No.5 October.205 Galectin 3 CK9 CD56 和 TPO 联合检测鉴别甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生 龚圣勇 肖 阳 宋 芳 魏万敏 田 龙 2 陈洪雷 ( 湖北省谷城县人民医院病理科, 谷城 44700; 2 武汉大学基础医学院病理学教研室, 武汉 43007) 摘要 目的探讨 Galectin 3 CK9 CD56 TPO 联合检测在甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生鉴别诊断中的价值 方法采用免疫组织化学 EnVision 两步法检测 30 例甲状腺乳头状癌 (papilarythyroidcarcinoma,ptc) 及 30 例良性乳头状增生 (benignpapilaryhyperplasisa,bph) 中 Galectin 3 CK9 CD56 TPO 的表达 结果 Galectin 3 CK9 CD56 TPO 在 PTC 的阳性表达率分别为 00% 00% 6 7% 3 3%, 在 BPH 中的阳性表达率分别为 0% 43 3% 73 3% 00%, 四者在甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生中的阳性表达率有显著性差异 Galectin 3 CK9 CD56 TPO 用于 PTC 诊断时的灵敏度分别是 00% 00% 6 7% 3 3%, 特异度分别是 90% 56 7% 26 7% 0, 联合应用时灵敏度及特异度分别为 00%,96 7%; 用于 BPH 诊断时灵敏度分别是 0% 43 3% 73 3% 00%, 特异度分别是 % 86 7%, 联合应用时灵敏度及特异度分别是 73 3% 00% 结论 Galectin 3 CK9 CD56 TPO 联合检测可应用于甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生的鉴别诊断, 并能显著提高病理诊断的准确性 关键词 甲状腺乳头状癌 ;Galectin 3;CK9;CD56;TPO; 免疫组化 中图分类号 R736 文献标识码 A DOI:0 6705/j cnki Diagnosisofpapilarythyroidcarcinomaandbenignpapilaryhyperplasia bycombineddetectionofgalectin 3 牞 CK9 牞 CD56andTPO proteins GongShengyong 牞 XiaoYang 牞 SongFang 牞 WeiWanmin 牞 TianLong 牞 ChenHonglei 2 牗 DepartmentofPathology 牞 thepeople shospitalofguchengcounty 牞 Gucheng44700 牷 2 DepartmentofPathology 牞 ColegeofBasicMedicalScience 牞 WuhanUniversity 牞 Wuhan43007 牞 China 牘 Abstract ObjectiveTodetecttheexpresionsofGalectin 3 牞 CK9 牞 CD56andTPOproteinsinpapilarythyroidcarcinoma 牗 PTC 牘 andbenignpapilaryhyperplasisa 牗 BPH 牘牞 andtoexplorethevalueofdiferentialdiagnosisbetweenthembycombineddetection ofthesefourmarkers.methodsenvisiontwo stepmethodwasusedtodetecttheexpresionsofgalectin 3 牞 CK9 牞 CD56andTPOpro teinsin30casesofptcand30casesofbph.resultspositiveratesofgalectin 3 牞 CK9 牞 CD56andTPOexpresionswere00% 牞 00% 牞 6 7% and3 3% respectivelyinptc 牞 and0% 牞 43 3% 牞 73 3% and00% respectivelyinbph 牞 withsignificantdiferences betweenptcandbph 牗 P<0 05 牘.ThediagnosissensitivityofGalectin 3 牞 CK9 牞 CD56andTPOforPTCwas00% 牞 00% 牞 6 7% and3 3% respectively 牞 andthespecificitywas90% 牞 56 7% 牞 26 7% and0respectively 牞 whilethesensitivityandspecificityofcom bineddetectionwere00% and96 7% respectively.thediagnosissensitivityforbphwas0% 牞 43 3% 牞 73 3% 牞 00% respectively 牞 andthespecificitywas0 牞 0 牞 93 3% 牞 86 7% respectively 牞 whilethesensitivityandspecificityofcombineddetectionwere73 3% and 00% respectively.conclusionscombineddetectionofgalectin 3 牞 CK9 牞 CD56andTPOmarkerscancontributetodiferentialdiagno sisbetweenptcandbph 牞 significantlyimprovingtheaccuracyofthepathologicaldiagnosisandprovidingareliablebasisforclinical treatment. Keywords Papilarythyroidcarcinoma 牷 Benignpapilaryhyperplasisa 牷 Galectin 3 牷 Cytokeratin 9 牷 CD56 牷 TPO 牷 Immunohisto chemistry 甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤, 主要发生在年轻人和中年人, 女性较男性发病率高 对甲状腺癌早期正确诊断和及时治疗可以最大程度地提高患者的生存率, 延长生存时间 甲状腺乳头状癌 (papilarythyroidcarcinoma,ptc) 起源于滤泡上 收稿日期 修回日期 作者简介 龚圣勇, 男 (975 年 ), 汉族, 主治医师 皮细胞, 是甲状腺癌中最常见的病理组织学类型, 占甲状腺恶性肿瘤的 70% ~80% 典型 PTC 的诊断并无困难, 但对某些形态学不典型的病例, 在与良性乳头状增生 (benignpapilaryhyperplasisa,bph) 鉴别时仍有一定的困难, 其结果直接影响到临床治疗及预后 为了进一步认识该疾病 减少误诊, 我们采用免疫组化法观察分析 Galectin 3 CK9 CD56 和 TPO

2 第 5期 龚圣勇等G 9 CD5 6和 TPO联合检测鉴别甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生 在 PTC与 BPH中的表达水平 探讨四者联合应用在 结 甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生鉴别诊断中的价 值 为解决诊断中的困扰提供实验依据 材料和方法 1材料 389 果 G 3在甲状腺乳头状癌中阳性表达 定位 于细胞质 图 1 在大多数良性乳头状增生中为阴 性 图 2 CK1 9在甲状腺乳头状癌中阳性表达 定 位于细胞质 图 3 在多数良性乳头状增生中为阴 选取谷城县人民医院病理科 2 1 2 2 1 5年诊 性 图 4 CD56在大多数良性乳头状增生中阳性表 断的 6例甲状腺手术切除标本的组织蜡块 其中 达 定位于细胞膜 图 5 在绝大多数甲状腺乳头状 PTC3例 女性 27例 男性 3例 年龄 15 6 4岁 平 癌中为阴性 图 6 TPO在良性乳头状增生中阳性 均年龄 42 28岁 中位年龄 42岁 BPH3 例 其中女 表达 定位于细胞质 图 7 在大多数甲状腺乳头状 性 29例 男性 1例 年龄 16 64岁 平均年龄 4 7 64 癌中为阴性 图 8 岁 中位年龄 5岁 2方法 21 免疫组织化学染色 所有标本均由 1 中性福尔马林固定 常规组 织处理 石蜡包埋 切片厚度为 3μm 采用免疫组化 E V 两步法检测 每例均选用 G 9 CD56及 TPO抗体进行染色 一抗均为鼠抗人单克 隆抗体 稀释度分别为 2 6 5 5 购 自上海长岛公司 二抗及显色系统购自 DAKO公司 产品编号 K5 7 按试剂说明书操作 DAB显色 苏木精复染 每组均设有阴性及阳性对照 用正常 图 1 甲状腺乳头状癌 PTC G 3 4 倍 F 1 P y hy d m PTC G 3 4 组织中血管内皮细胞做为 G 3的阳性对照 胃 腺癌做为 CK1 9的阳性对照 肺小细胞癌做为 CD5 6 的阳性对照 正常甲状腺组织做为 TPO的阳性对照 用子宫平滑肌瘤做为 G 9 CD5 6及 TPO 的阴性对照 以阳性对照组织呈阳性表达 同时阴性 对照组织呈阴性表达判定为染色成功 22 结果判定 阳性产物为棕黄色 G 9和 TPO均 定位于细胞的胞质 CD5 6定位于细胞膜 根据 B 图 2 甲状腺良性乳头状增生 BPH G 3 4 倍 y分级方法 观察乳头状病变区 按阳性细胞数所 F 2 Th y db P yh y BPH G 3 4 占百分数并参考着色强度确定分级 无着色细胞或 着色细胞数 1 为阴性 着色细胞百分数 1 25 者为 着 色 细 胞 百 分 数 26 5 者 为 着色细胞百分数 5 为 均定义为该蛋白呈阳性表达 23 统计学处理 敏感性 真阳性 真阳性 假阴性 特异性 真阴性 真阴性 假阳性 准确度 真阳性 真阴 性 所有阳性 所有阴性 所有统计学数据均采 用S PS S 1 7 软件处理 计数资料用 χ2检验和四格表 图 3 甲状腺乳头状癌 PTC CK1 9 4 倍 精确概率法 P! 5为统计学差异有显著性 F 3 P y hy d m PTC CK19 4

3 390 中国组织化学与细胞化学杂志第 24 卷 图 4 甲状腺良性乳头状增生 (BPH)CK9()400 倍 Fig.4 ThyroidbenignPapilaryhyperplasisa(BPH)CK9()400 图 7 甲状腺良性乳头状增生 (BPH)TPO()400 倍 Fig.7 ThyroidbenignPapilaryhyperplasisa(BPH)TPO() 400 图 5 甲状腺良性乳头状增生 (BPH)CD56()400 倍 Fig.5 ThyroidbenignPapilaryhyperplasisa(BPH)CD56( ) 400 图 8 甲状腺乳头状癌 (PTC)TPO()400 倍 Fig.8 Papilarythyroidcarcinoma(PTC)TPO()400 图 6 甲状腺乳头状癌 (PTC)CD56()400 倍 Fig.6 Papilarythyroidcarcinoma(PTC)CD56() 例甲状腺手术切除标本中四种抗体的表达结果 ( 表 ):Galectin 3 在 PTC 与 BPH 中的阳性表达率分别为 00%(30/30) 与 0%(3/30), 差异有显著性 (P<0 05);CK9 在 PTC 与 BPH 中的阳性表达率分别为 00%(30/30) 与 43 3%(3/30), 差异有显著性 (P<0 05);CD56 在 PTC 与 BPH 中的分别为 6 7%(2/30) 与 73 3%(22/30), 差异有显著性 (P<0 05);TPO 在 PTC 与 BPH 中的阳性表达率分别为 3 3%(4/30) 与 00%(30/30), 差异有显著性 (P<0 005) 表 Galectin 3 CK9 CD56 及 TPO 蛋白在 PTC 和 BPH 中的表达 Table Galectin 3 CK9 CD56andTPO proteinexpresioninptcandbph 组织性质 n Galectin 3 CK9 CD56 TPO BPH % % % % PTC % % % % 示与 BPH 组比较,P<0.05; versusbphgroup,p<0.05

4 第 5 期龚圣勇等.Galectin 3 CK9 CD56 和 TPO 联合检测鉴别甲状腺乳头状癌与良性乳头状增生 39 Galectin 3 CK9 CD56 及 TPO 蛋白单独用于 PTC 诊断时的灵敏度分别是 00% 00% 6 7% 和 3 3%, 特异度分别是 90% 56 7% 26 7% 和 0, 但联合应用时灵敏度及特异度分别是 00% 和 96 7% ( 表 2) 四个蛋白单独用于 BPH 诊断时灵敏度分别是 0% 43 3% 73 3% 00%, 特异度分别是 % 86 7%, 联合应用时灵敏度及特异度分别是 73 3% 和 00%( 表 2) 组织性质 表 2 Galectin 3 CK9 CD56 和 TPO 联合检测在 PTC 和 BPH 中的表达 Table2 Galectin 3 CK9 CD56andTPO combined detectioninptcandexpresionofbph Galectin 3 n 与 CK9 同时阳性 表达率 (%) CD56 与 TPO 同时阳性 表达率 (%) BPH % % PTC % 0 0 示与 BPH 组比较,P<0.05; versusbphgroup,p<0.05 讨 Galectin 3 是由氨基酸末端区和羟基末端糖类识别区组成的多肽, 属凝集素蛋白家族成员 [] Fin ley [2] 研究发现,galectin 3 在甲状腺乳头状癌中的灵敏度和特异度分别为 93% 和 00%, 有助于甲状腺良 恶性乳头状增生的鉴别, 是一个有价值的抗体 [3,4] Cvejic [5] 等的研究也支持此观点 在本实验中, 甲状腺乳头状癌 galectin 3 蛋白表达的为 00%, 而良性乳头状增生的仅为 0%, 二者差异有显著性, 进一步表明 galectin 3 蛋白可用于甲状腺乳头状癌与乳头状增生的鉴别诊断 CK9 是一种低分子量细胞角蛋白, 主要存在于单层上皮细胞中, 关于其在甲状腺良 恶性增生性病变中的诊断与鉴别作用已有不少报道 [6] 有文 [7,8] 献提出 CK9 在 PTC 中多数呈弥漫强阳性, 而在 BPH 中多数为阴性, 即使有表达也多为局灶弱阳性 [9,0] 本试验研究发现,CK9 在 PTC 中的阳性表达率为 00%(30/30), 全部为强阳性, 在 BPH 中阳性表达率为 43 3%(3/30), 其中强阳性仅 4 例 由此推断 CK9 对甲状腺乳头状癌的灵敏度高, 说明 CK9 对乳头状癌及良性乳头状增生有鉴别诊断价值 CD56 又称神经细胞黏附分子, 是一种细胞表面的唾液酸糖蛋白, 是免疫球蛋白家族中的一员, 正常 论 表达于自然杀伤细胞 肌细胞 浆液黏液腺, 在神经内分泌肿瘤 NK 细胞淋巴瘤 皮肤 T 细胞淋巴瘤中也有表达 [], 其表达可影响肿瘤细胞的迁移能力和肿瘤相关淋巴管的生成, 其阳性表达越低, 肿瘤恶性程度越高, 预后越差 研究认为 CD56 失表达有助于 PTC 的诊断 [2] 本实验研究发现,CD56 在 PTC 中的阳性表达率为 6 7% (2/30), 为散在弱阳性, 在 BPH 中阳性表达率为 73 3%(22/30), 两者差异有显著性, 因此认为 CD56 可用于 PTC 与 BPH 的鉴别诊断 TPO 是一种糖基化血红蛋白, 位于甲状腺细胞内质网 核周膜与顶膜 [3], 参与甲状腺素合成中甲状腺球蛋白酪氨酸残基的碘化和碘化酪氨酸的偶联作用 其表达与滤泡细胞的组织分化和功能相关, 甲状腺乳头状癌多表达阴性, 甲状腺良性乳头状增生多为阳性表达 [4,5] 本研究再次证明绝大多数甲状腺乳头状癌病例为阴性, 阳性表达率仅为 3 3%(4/30), 而在甲状腺良性乳头状增生的病倒中阳性表达率为 00% 在病理诊断中对不能定性的甲状腺乳头状病变, 辅以免疫组化测定组织中 TPO 蛋白表达情况,TPO 阴性者诊断为乳头状癌是比较可靠的 但应提出, 由于小部分甲状腺乳头状癌具有功能性, 可合成和分泌甲状腺素, 故也可表达 TPO 上述 4 种免疫标志物应用于 PTC 的诊断时, CK9 与 Galectin 3 灵敏度均较高,Galectin 3 特异度较高, 本实验中, 四个标志物联合应用时灵敏度及特异度达到最高 ; 用于 BPH 的诊断时,TPO 灵敏度较高,CD56 与 TPO 特异度均较高, 四个联合应用时进一步提高了特异度 四者联合应用, 相互取长补短, 可以提高病理诊断的准确性 本实验研究为小样本研究, 实验对象中未能包括所有类型的甲状腺癌和甲状腺良性病变, 有待进一步研究探讨它们在 PTC 与其他类型甲状腺病变诊断与鉴别诊断中的作用 由于免疫组化方法存在假阳性与假阴性结果,PTC 的诊断仍需以形态学为基础, 在未找到一种特异性标记 PTC 而不标记正常甲状腺组织及其他甲状腺病变的免疫标志物之前, 联合多种免疫标志物检测是提高病理诊断准确性的有效方法 参考文献 [] 张同方, 万圣云, 丁洋, 等.Galectin 3 对骨髓间充质干细胞来源的内皮细胞增殖的影响. 中国普通外科杂志,

5 392 中国组织化学与细胞化学杂志第 24 卷 200,9(9):l 犤 2 犦 FinleyDJ 牞 AroraN 牞 ZhuB 牞 eta.molecularprofilingdistin guishespapilarycarcinomafrom benignthyroidnodules.j ClinEndocrinolMetab 牞 2004 牞 89 牗 7 牘牶 犤 3 犦 RosiED 牞 RafaeliM 牞 MuleA 牞 eta.simultaneousimmuno histochemicalexpresionofhbme andgaleetin 3diferen tiatespapilarycarcinomasfrom hypefunctioninglesionsof thethyroid.histopathology 牞 2006 牞 48 牗 7 牘牶 犤 4 犦 BeesleyMF 牞 MclarenKM.Cytokeratin9andgaleetin 3im munohistochemistryinthediferentialdiagnosisofsolitary thyroidnodules.histopathology 牞 2002 牞 4 牗 3 牘牶 犤 5 犦 CvejiéD 牞 SavinS 牞 PetroviéI 牞 eta.diferentialexpresionof galectin 3inpapilaryprojectionsofmalignantandnonma lignanthyperplasticthyroidlesions.actachiriugosl 牞 2003 牞 50 牗 3 牘牶 犤 6 犦 BalochZW 牞 AbrahamS 牞 RobertsS 牞 eta.diferentialexpres sionofcytokeratinsinfolicularvariantofpapilaryearcino ma 牶 animmunohistochemicalstudyanditsdiagnosticutility. HumPathol 牞 999 牞 30 牗 0 牘牶 66 7 犤 7 犦 CaseyMB 牞 LohscCM 牞 LloydRV.Distinctionbetweenpapil larythyroidhyperplasiaandpapilarythyroidcarcinomaby immunohistochemicalstainingforcytokeratin9 牞 galectin 3 牞 andhbme.endocrpathol 牞 2003 牞 4 牗 牘牶 犤 8 犦 CameronBR 牞 BereanKW.Cytokeratinsubtypesinthyroid tumours 牶 immunohistochemiealstudywithemphasisonthe folicularvariantofpapilary carcinoma.j Otolaryngol 牞 2003 牞 32 牗 5 牘牶 犤 9 犦 ErkilicS 牞 KocerNE.Theroleofeytokeratin9inthedifer entialdiagnosisoftruepapilarycarcinomaofthyroidand papilarycarcinoma likechangesingraves disease.endocr Pathol 牞 2005 牞 6 牗 牘牶 犤 0 犦 LamKY 牞 LuiM C 牞 LoCY.Cytokeratinexpresionprofiles inthyroidcarcinomas.eurjsurgoncol 牞 200 牞 27 牗 7 牘牶 犤 犦 HaasS 牞 GtitgemannI 牞 WolfM 牞 FischerH P.Intrahepatic clearcelcholangioeareinoma 牶 immunohistochemicalaspects inaveryraretypeofcholangioeareinoma.am JSurg Pathol 牞 2007 牞 3 牗 6 牘牶 [2] 黄悦, 黄文斌, 赵建华, 等.CD56 在甲状腺乳头状癌诊断中的价值. 诊断病理学杂志,200,7():4 6 犤 3 犦 SavinS 牞 CvejieD 牞 IsicT 牞 eta.thyroidperoxidaseimmuno histochemistryindiferentialdiagnosisofthyroidtumors. EndocrPathol 牞 2006 牞 7 牗 牘牶 犤 4 犦 SavinS 牞 CvejicD 牞 IsicT 牞 eta.thyroidperoxidaseandga lectin 3immunostainingindiferentiatedthyroidcarcinoma withclinicopathologiccorelation.hum Pathol 牞 2008 牞 39 牗 牘牶 犤 5 犦 DiCristofaroJ 牞 SilvyM 牞 LanteaumeA 牞 eta.expresionof tpomrnainthyroidtumors 牶 quantitativepcranalysisand corelationwithalterationsofret 牞 Braf 牞 rasandpax8genes. EndoerRelatCancer 牞 2006 牞 3 牗 2 牘牶 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 更正声明 本刊第 24 卷第 2 期第 774 页题为 顺铂对肿瘤细胞 DRAM LC3β 表达的影响 的第一作者简介应为 : 姚升, 男 (993 年 ) 苗族, 华中科技大学同济医学院第二临床学院临 床医学专业五年制 20 级本科生, 因排版失误, 错排成 : 姚生, 男 (993 年 ) 汉族, 华中科 技大学同济医学院医疗系五年制本科生, 特此更正, 并向广大读者致歉 中国组织化学与细胞化学杂志 编辑部 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿

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