实用检验医师杂志 2015 年 9 月第 7 卷第 3 期 Chinese Journal of Clinical Pathologist, September 2015,Vol.7, No the prognosis evaluation and clinical therapy. K

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1 164 实用检验医师杂志 2015 年 9 月第 7 卷第 3 期 Chinese Journal of Clinical Pathologist, September 2015,Vol.7, No.3 anti-tgab 和 anti-tpoab 抗体亲和力检测在 HT 患者甲状腺功能判断中的临床意义 临床研究 傅金瑞 作者单位 : 天津市, 天津市宝坻区人民医院检验科 摘要 目的探讨抗甲状腺球蛋白抗体 (anti-thyroglobulin antibody, anti-tgab) 和抗甲状腺过氧化物酶抗体 (anti-thyroid peroxidase antibody, anti-tpoab) 的亲和力检测在桥本甲状腺炎 (hashimoto's thyroiditis, HT) 患者甲状腺功能判断中的临床价值 方法收集 2013 年 2 月至 2014 年 8 月期间于我院就诊的 52 例 HT 患者, 按照甲状腺功能检测结果分为甲状腺功能异常组 33 例, 甲状腺功能正常组 19 例 采用 ELISA 法 anti-tgab anti-tpoab 定量检测试剂盒, 以尿素作变性剂, 计算 anti-tgab anti- TPOAb 的相对亲和力指数 (relative avidity index, RAI), 并分析这两种自身抗体的 RAI 与 HT 患者甲状腺功能的相关性 结果甲状腺功能异常组 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 检测结果均高于正常组, 且差异均有统计学意义 (t = 3.720, t= 2.840, P= 00, P= 07) anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 用于判断 HT 患者甲状腺功能正常与否的 cutoff 值分别为 39 35, 受试者工作特征曲线下面积分别为 , 灵敏度分别为 84.8% 81.6%, 特异性分别为 63.2% 64.1% 在甲状腺功能异常组, 两种抗体同为高 RAI 的占 54.5%(18 / 33), 而在甲状腺功能正常组仅为 15.8%(3 / 19), 两组间比较差异有统计学意义 (χ 2 = 7.520,P= 07); 在甲状腺功能异常组, 两种抗体同为低 RAI 的占 6.1%(2 / 33), 而在甲状腺功能正常组达 47.4%(9 / 19), 两组间比较差异有统计学意义 (χ 2 = ,P= 00); 仅一种抗体 RAI 增高的情形在甲状腺功能异常组中占 39.4%(13 / 33), 在甲状腺功能正常组占 36.8%(7 / 19), 两组间差异无统计学意义 (χ 2 = 30,P= 68) 结论 anti-tgab 和 anti-tpoab 的抗体 RAI 检测可用于判断 HT 患者甲状腺功能, 从而有利于对该病的预后判断以及临床治疗 关键词 桥本甲状腺炎 ; 酶联免疫吸附试验 ; 相对亲和力指数 ; 抗甲状腺球蛋白抗体 ; 抗甲状腺过氧化物酶抗体 doi: / j.issn The clinical significance of avidity of anti-tgab and anti-tpoab detection in thyroid function judg- ment of hashimoto's thyroiditis patients FU Jin-rui. Department of Clinical Laboratory, Baodi People's Hospital of Tianjin, Baodi , China Abstract Objective To investigate the clinical value of anti-thyroglobulin antibody (anti-tgab) and anti-thyroid peroxidase antibody (anti-tpoab) avidity detection for the thyroid function judgment in the patients with hashimoto's thyroiditis(ht). Methods 52 cases patients with HT from February 2013 to August 2014 in our hospital were collected, and they were divided into thyroid dysfunction group (33 cases) and euthyroidism group (19 cases). Using urea as denaturant, the relative avidity index (RAI) of anti-tgab and anti-tpoab were obtained by quantitative ELISA. The relationship between RAI and the thyroid function were analyzed. Results The RAI of anti-tgab and anti-tpoab in thyroid dysfunction group were all higher than that of euthyroidism group, and the differences all had statistical significance (t= 3.720, t= 2.840, P= 00, P= 07). The cutoff value in evaluating thyroid function of RAI of anti-tgab and anti-tpoab were 39 and 35, area under receiver operating characteristic curve were and 0.730, sensitivity were 84.8% and 81.6%, specificity were 63.2% and 64.1%, respectively. The higher RAI of both two antibodies which were dominant in thyroid dysfunction group was 54.5% (18 / 33), in euthyroidism group was 15.8% (3 / 19), and the difference had statistical significance (χ 2 = 7.520, P= 07). The lower RAI of both two antibodies which were dominant in thyroid dysfunction group was 6.1%(2 / 33), in euthyroidism group was 47.4 % (9 / 19), and the difference had statistical significance (χ 2 = , P= 00). The higher RAI of only one kind antibody which was dominant in thyroid dysfunction group was 39.4% (13 / 33), in euthyroidism group was 36.8 % (7 / 19), and the difference had no statistical significance (χ 2 = 30, P= 68). Conclusion The RAI of anti- TGAb and anti-tpoab are associated with the thyroid function of HT patients, which can provide suggestion for

2 实用检验医师杂志 2015 年 9 月第 7 卷第 3 期 Chinese Journal of Clinical Pathologist, September 2015,Vol.7, No the prognosis evaluation and clinical therapy. Key words Hashimoto's thyroiditis; Enzyme-linked immunosorbent assay; Relative avidity index; Anti-thyroglobulin antibody; Anti-thyroperoxidase antibody 目前国外有关自身抗体的亲和力高低与相关自身免疫性疾病发生 发展及转归等关系的研究已有 [1] 报道 如 Fialová 等发现与年龄 性别等方面相对应的疑似神经系统疾病患者对比, 多发性硬化症患者脑脊液中抗神经细丝低分子量亚基抗体以及抗 tau 蛋白抗体的亲和力显著增高, 提示自身抗体亲和力的检测有助于自身免疫性疾病的诊断 又如 [2] Cucnik 等研究了自身抗体抗 β2 糖蛋白 I(anti-β2 glucoprotein I, anti-β2gpi) 的亲和力高低与抗心磷脂综合征 (antiphospholipid syndrome, APS) 以及系统性红斑狼疮 (systemic lupus erythematosus, SLE) 临床表现之间的关系, 发现在 SLE 组, 低亲和力 antiβ2gpi 占多数 ; 而高亲和力 anti-β2gpi 在 APS 组占优势, 同时该研究结果显示, 具有高亲和力 antiβ2gpi 的患者多表现为血管栓塞 上述研究均说明某些自身抗体亲和力的高低与相关自身免疫性疾病的发生 发展及临床表现等方面存在着某种关联 本文研究对抗甲状腺球蛋白抗体 (anti-thyroglobulin antibody, anti-tgab) 和抗甲状腺过氧化物酶抗体 (anti-thyroid peroxidase antibody, anti-tpoab) 亲和力与桥本甲状腺炎 (hashimoto's thyroiditis, HT) 患者甲状腺功能的相关性作初步探讨, 现报告如下 1 资料与方法 1.1 临床资料选取 2013 年 2 月至 2014 年 8 月间在我院就诊且 anti-tgab 和 anti-tpoab 检测均为阳性, 并据临床表现 体征 甲状腺彩超 实验室检查及组织病理学检查确诊的 HT 患者 52 例, 其中男 6 例, 女 46 例, 年龄 17~64 岁, 平均年龄 (38.8±16.3) 岁, 其中甲状腺功能异常 ( 减退 ) 患者 33 例, 甲状腺功能正常患者 19 例 甲状腺功能异常 ( 减低 ) 判断标准 : 促甲状腺激素升高 (> 4.2 mu / L), 伴有游离 T 4 减低 (< 10.3 pmol / L) 或正常 所有患者均除外心血管 肝 肾 肺等疾病 1.2 标本采集抽取患者空腹肘静脉血 5 ml, 以 1200 g 离心 10 min 分离血清, 置 -80 保存备用 1.3 方法 anti -TGAb anti -TPOAb 定量检测采用 ELISA 法定量检测试剂盒检测 anti -TGAb anti - TPOAb 水平, 两种抗体检测试剂盒均由德国 OR- GENTEC 公司提供 anti-tgab 和 anti-tpoab 亲和力检测 采 用尿素对患者血清样本处理后, 如果患者样本吸光 度值较处理前显著降低, 则表明存在低亲和力抗体, 通过以下公式计算其相对亲和力指数 (relative avidity index, RAI) RAI= 经尿素处理样本的浓度值 100 / 未经尿素处理 [3] 样本的浓度值 1.4 统计学处理 采用 SPSS 16.0 统计软件对数据 进行统计学分析 计量资料采用 x±s 表示, 两组间计 量资料的比较采用 t 检验, 两组间率的比较采用 χ 2 检验 通过绘制受试者工作特征 (receiver operating characteristic, ROC) 曲线评价 anti-tgab 和 anti- TPOAb 判断 HT 患者甲状腺功能正常与否的诊断价 值, 以 P< 5 为差异有统计学意义 2 结果 2.1 HT 患者甲状腺功能正常 异常两组间 anti- TGAb 和 anti-tpoab 的 RAI 结果比较 甲状腺功 能异常组 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 检测结 果均高于正常组, 且差异均有统计学意义 (t= 3.720, t= 2.840, P= 00, P= 07), 见表 1 图 1 表 1 HT 患者甲状腺功能正常 异常两组间 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 结果比较 (x±s) 组别 例数 anti-tgab RAI anti-tpoab RAI 甲状腺功能正常 HT 组 ± ±17.27 甲状腺功能异常 HT 组 33 67± ±18.06 t 值 P 值 anti -TGAb 和 anti -TPOAb 的 RAI 用于判断 HT 患者甲状腺功能正常与否的诊断价值评价 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 用于判断 HT 患者 甲状腺功能正常与否的 cutoff 值分别为 39 和 35, ROC 曲线下面积分别为 和 0.730, 灵敏度分别 为 84.8% 和 81.6%, 特异性分别为 63.2% 和 64.1%, 其诊断性能评价指标见表 2, 两种抗体 RAI 用于判 断 HT 患者甲状腺功能状况的 ROC 曲线见图 HT 患者甲状腺功能异常组 正常组间 anti- TGAb 和 anti-tpoab 的 RAI 异常率比较 在甲状

3 实用检验医师杂志 2015 年 9 月第 7 卷第 3 期 Chinese Journal of Clinical Pathologist, September 2015,Vol.7, No 腺 功 能 异 常 HT 组 两 种 抗 体 同 为 高 RAI 的 占 在 甲 状 腺 功 能 正 常 HT 组 仅 为 灵敏度 两组间异常率比较 差异具有统计学 意义 χ P 07 在甲状腺功能异常 HT 组 两种抗体同为低 RAI 的占 在甲状 腺功能正常 HT 组达 两组间异常率 比 较 差 异 具 有 统 计 学 意 义 χ P 00 仅一种抗体 RAI 增高的情形在甲状腺功能异常 HT 组 占 在 甲 状 腺 功 能 正 常 HT 组 占 两组间异常率比较 差异无统计学意 图2 义 χ2 30 P 68 见表 3 RAI 90 正常组 异常组 正常组 1-特异性 anti-tgab 的 RAI 用于 判断甲状腺功能正常与否的 ROC 曲线 异常组 80 灵敏度 anti-tgab 图1 anti-tpoab 图3 HT 患者甲状腺功能正常 讨论 表2 阳性预测值 阴性预测值 特异性 anti-tgab 84.8 anti-tpoab 81.6 表3 甲状腺功能 anti-tpoab 的 RAI 用于 判断甲状腺功能正常与否的 ROC 曲线 自身免疫性疾病 而且是一种有明确遗传倾向的器 官特异性自身免疫性疾病 发病过程中甲状腺结构 被大量淋巴细胞 浆细胞浸润 滤泡萎缩 结缔组织 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 用于判断 HT 患者甲状腺功能正常与否的诊断价值评价指标 灵敏度 组别 床最常见的甲状腺炎症 目前多数学者认为 HT 是 HT 是一种以自身甲状腺组织为抗原的慢性炎 症 性 自 身 免 疫 性 疾 病 1912 年 日 本 九 州 大 学 Hashimoto 首先在德国医学杂志上报道了 4 例 为临 RAI 1-特异性 异常两组间 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 结果比较 3 阳性拟然比 阴性拟然比 Youden 指数 cutoff 值 曲线下面积 HT 患者甲状腺功能异常组 正常组间 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 异常率比较 n 例数 高 anti-tgab RAI 低 anti-tgab RAI 高 anti-tgab RAI 低 anti-tpoab RAI 高 anti-tpoab RAI 低 anti-tpoab RAI 高 anti-tpoab RAI 低 anti-tgab RAI χ2 值 P值 正常 HT 组 甲状腺功能 异常 HT 组

4 实用检验医师杂志 2015 年 9 月第 7 卷第 3 期 Chinese Journal of Clinical Pathologist, September 2015,Vol.7, No 增生, 最终大多数病例伴有甲状腺功能减退 本病多见于中年女性, 起病隐匿, 发展缓慢, 病程较长, 主要表现为甲状腺肿大, 体积约为正常甲状腺的 2~3 倍, 表面光滑, 质地坚韧有弹性如橡皮, 明显结节则少见, 无压痛, 与四周无黏连, 可随吞咽运动活动 多数为弥漫性, 少数可为局限性, 部分以颜面 四肢肿胀感起病 本病发展缓慢, 有时甲状腺肿在几年内似无明显变化, 初期时甲状腺功能正常, 病程中有时也可出现甲亢, 继而功能正常, 甲减, 再正常, 其过程类似于亚急性甲状腺炎 ; 部分患者表现为假性甲亢, 即可以有明显甲亢的症状, 但甲状腺功能检查结果却不支持甲亢, 而 anti-tgab 和 anti-tpoab 检测结果为阳性 ; 还有表现为突眼型的, 甲状腺功能可正常 亢 [4] 进或减退 研究发现甲状腺功能减退 HT 患者的 anti-tgab 和 anti-tpoab 水平显著高于甲状腺功 [5] 能正常 HT 患者 近年研究发现, 人群中使用碘化盐后结节性甲状腺肿发病率降低, 但自身免疫性甲状腺炎发病率增加 3 倍, 过量的碘补充一方面增加了酪氨酸的碘化, 导致抗体的产生增加 ; 另一方面过量碘可诱导细胞内黏附分子 -1 的表达, 促使单核细胞浸润, 而细胞内黏附分子 -1 在早期的炎性细胞引起的炎症反应中起着非常重要的作用, 可以通过一系列的作用产生大量的活性氧物质, 从而引起甲状腺腺体的破坏 在多种自身免疫性甲状腺疾病中都可检测到 anti-tgab 和 anti-tpoab 的升高,HT 患者尤为突出, 其 anti-tgab 和 anti-tpoab 水平为 Graves 病患者抗体水平的 4 倍以上, 阳性率分别高达 84.3% 和 86.3% 在 HT 患者中, 两种抗体尤其是 anti-tpoab 阳性时, 预示有发生自身免疫性甲状腺 [6] 疾病的危险 亲和力检测技术最初是由 Hedman 等 [7] 建立 的, 是基于抗原抗体之间的氢键在尿素作用下解离 的原理而进行检测的 该技术建立以来沿用两种方 法 : 一种最简单的方法是 OD 值法, 样本不经稀释, 直接以 OD 值计算 RAI 值 主要缺点是不能解决 RAI 值因受特异性 IgG 浓度高低的影响而出现的明显变异问题, 高浓度血清其 RAI 值偏高, 而低浓度血清其 RAI 值又偏低 另一种是较为准确的由 Jenum 等 [8] 建立的终点滴度法, 即将样本血清稀释, 使其所含特异性 IgG 的 OD 值处于临界值附近, 在 此条件下进行该特异性 IgG 的亲和力测定 缺点是 需要进行繁琐的样本血清的稀释 在此基础上 Prince 等 [3] 发现利用定量检测的 ELISA 法, 以尿素 作用前后特异性 IgG 浓度的比值作为 RAI 值, 能够 较好地克服上述两种方法的缺点 因此本实验采用这一目前较为准确而又简便的方法 目前国内外检测 IgG 亲和力指数多用于判别诸如巨细胞病毒 风疹病毒 EB 病毒 肺炎支原体等的 [9-11] 原发性感染亦或既往感染 国外有关自身抗体 IgG 亲和力与疾病关系的研究已见报道 本文研究所用 anti-tgab 试剂盒灵敏度为 10 IU / ml,anti- TPOAb 试剂盒灵敏度 5 IU / ml 若某一 RAI 较低 ( 如低至 10%) 的样本 anti-tgab 浓度低于 100 IU / ml 或 anti-tpoab 浓度低于 50 IU / ml 时则可能会因敏感度原因导致 RAI 的检测结果偏高 本文研究所收集的样本血清, 其两种抗体均为阳性 (anti- TGAb 最低浓度 212 IU / ml,anti-tpoab 最低浓度 133 IU / ml), 因此能够避免这种检测误差的出现 本文研究为国内首次证实 anti-tgab 和 anti- TPOAb 亲和力对于判断 HT 患者甲状腺功能正常与否有一定的临床价值 本文研究结果显示, 甲状腺功能异常 HT 组 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 检测结果均高于甲状腺功能异常 HT 组, 且差异均有统计学意义 (P 均 < 5), 提示 anti-tgab 和 anti- TPOAb 的 RAI 检测结果可用于判断 HT 患者甲状腺功能正常与否 且本文研究结果进一步证实,anti- TGAb 和 anti-tpoab 的 RAI 用于判断甲状腺功能正常与否的灵敏度分别为 84.8% 81.6%, 阳性预测值分别为 9% 9%,ROC 曲线下面积分别为 , 提示 anti-tgab 和 anti-tpoab 的 RAI 对甲状腺功能正常与否有较好的诊断价值 本文研究结果还显示在甲状腺功能异常组, 两种抗体均以高 RAI 占优势, 两种抗体同为高 RAI 的占 54.5% (18 / 33), 而在甲状腺功能正常组仅占 15.8% (3 / 19), 且两组间差异有统计学意义 (P< 5), 提示高亲和力 anti-tgab 和 anti-tpoab 的存在对 HT 的发生 发展过程起着重要的促进作用 由于本文研究所收集的病例资料有待丰富, 尚不能判断 HT 临床表现和病情与其中哪一种抗体亲和力相关性更加显著 因此, 在后续试验中, 应继续增大样本容量, 尤其是对患者两种抗体亲和力动态变化的跟踪观察, 将会更加客观地揭示出其亲和力高低与 HT 发生 发展及转归之间的内在联系, 从而更好地为临床诊断 治疗等提供准确的参考依据 4 参考文献 1 Fialová L, varcová J, Bartos A, et al. Avidity of anti-neurocytoskeletal antibodies in cerebrospinal fluid and serum. Folia Microbiol (Praha),2012,57:

5 168 实用检验医师杂志 2015 年 9 月第 7 卷第 3 期 Chinese Journal of Clinical Pathologist, September 2015,Vol.7, No.3 7 Hedman K, Seppala I. Recent rubella virus infection indicated by a 2 Cucnik S, Kveder T, Krizaj I, et al. High avidity anti-beta 2-glycoprotein I antibodies in patients with antiphospholipid syndrome. Ann Rheum Dis,2004,63: Prince HE, Wilson M. Simplified assay for measuring Toxoplasma gondii immunoglobulin G avidity. Clin Diagn Lab Immunol,2001,8: Thomas T, Sreedharan S, Khadilkar UN, et al. Clinical, biochemical & cytomorphologic study on Hashimoto's thyroiditis. Indian J Med Res,2014,140: Burek CL, Rose NR. Autoimmune thyroiditis and ROS. Autoimmun Rev,2008,7: 连小兰, 白耀, 孙梅励, 等. 血清抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺过氧化物酶抗体测定的临床诊断意义. 中国医学科学院学报, 2004,26: low avidity of specific IgG. J Clin Immunol,1988,8: Jenum PA, Stray-Pedersen B, Gundersen AG. Improved diagnosis of primary Toxoplasma gondii infection in early pregnancy by determination of antitoxoplasma immunoglobulin G avidity. J Clin Microbiol, 1997,35: 牛向兰, 侯林浦, 李欣, 等. 测定巨细胞病毒特异性抗体亲和指数的诊断价值. 中国生育健康杂志,2008,19: 程道胜, 梁惠强, 李时英. 风疹病毒特异性 IgG 抗体亲和力测定的临床意义. 现代检验医学杂志,2007,22: Vilibic-Cavlek T, Ljubin-Sternak S, Vojnovic G, et al. The role of IgG avidity in diagnosis of cytomegalovirus infection in newborns and infants. Coll Antropol,2012,36: ( 收稿日期 : ) ( 本文编辑 : 张志成 ) 消 息 中国医师协会检验医师分会网站信息 中国医师协会检验医师分会于 2004 年底创建中国医师协会检验医师分会网站, 至今已在互联网上推出 11 年了, 欢迎广大医务工作者浏览网站 本网站目前属于非营利性网站, 建立的宗旨是加强检验与临床之间的合作, 为检验医师与临床医师提供一个交流的平台, 推动检验医师国际间的交流, 促进国内行业的发展, 服务于广大医务工作者和患者 本网站的中文实名为 : 中国医师协会检验医师分会英文域名为 : 消 息 致谢 实用检验医师杂志 编辑部全体工作人员衷心感谢以下编委/ 专家对本刊出版的大力支持! ( 姓名以拼音为序 ) 陈建魁陈小岩段荣冯笑梅郭微媛胡成进孔鹏洲李会强李健开梁国威刘勇穆红曲芬宋秀宇孙文勇陶庆春王金良王丽萍魏殿军伍严安张贺平张会英张时民张鹏张展

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