N-3-[3-( 二甲酰胺 )2- 丙烯基 ] 苯基 -N- 乙基 - 乙酰胺残留溶剂质量的研究 张京 *, 程霞, 杨永娥江苏恩华药业股份有限公司, 江苏徐州 (220000) E-mail: zhangjing770880@126.com 摘要 : 目的建立扎来普隆起始物料 N-3-[3-( 二甲酰胺 )2- 丙烯基 ] 苯基 -N- 乙基 - 乙酰胺中残留量的测定方法 方法采用毛细管气相色谱法, 氢火焰离子化检测器 (FID) 和电子捕获检测器 (ECD), 以 N,N 二甲基甲酰胺 (DMF) 为溶剂, 毛细管柱 DB-624(30 m 0.32 mm 1.8 µm); 柱温 40 维持 2 min, 以 3 /min 的速率升温至 65, 再以 30 /min 的速率升温至 230 维持 7 min; 载气 : 高纯氮气, 柱速度 1.9 ml/min; 氢气 :35 ml/min; 进样口温度 150 ; 检测口温度 260 ; 空气 350 ml/min; 尾吹 25 ml/min 结论本法 : 灵敏 专属 准确 关键词 : 毛细管气相色谱法 ; 乙酰胺 ; 残留溶剂 前言 : 目前治疗失眠的药物可分为两大类, 即苯二氮卓类和非苯二氮卓类 苯二氮卓类催眠药 主要通过抑制大脑边缘系统的功能而导致睡眠作用, 大脑边缘系统是情绪活动伴同记忆有 密切联系的部位, 由于苯二氮卓类对该部位的 ω 受体均有一定亲和力, 极易引起记忆力和 情绪障碍, 故此类药物的主要副作用 ( 特别是在高剂量和长期用药时 ) 是后遗作用 反跳性失 眠 顺行性遗忘 耐受性及药物依赖性 低剂量的苯二氮卓类药物的滥用性相对较低, 但长期服用仍可产生耐受性及戒断综合征 另外, 由于苯二氮卓类药物的呼吸抑制作用, 它们尤其不适用于睡眠性呼吸暂停及慢性阻塞性肺病 (COPD) 患者 由此可见, 为治疗失眠, 需要进一步开发疗效好 副作用小的催眠药 扎来普隆为新的非苯二氮卓类催眠药, 第一个吡唑嘧啶类催眠药, 与传统的苯二氮卓类药物相比, 具有以下优点 :ω1- 受体选择性强, 药动学性质好, 安全性好等特点 N-3-[3-( 二甲酰胺 )2- 丙烯基 ] 苯基 -N- 乙基 - 乙酰胺是扎来普隆合成过程中的一个重要原料, 其在制备工艺中可能残留正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷 中国药典 2005 年版 [1,2] 规定对药物中的正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷残留量检查 本文采用毛细管气相色谱法, 氢火焰离子化检测器 (FID) 和电子捕获检测器 (ECD), 以 N,N 二甲基甲酰胺 (DMF) 为溶剂, 弹性石英毛细管柱 DB-624(30 m 0.32 mm 1.8µm) 做正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷的残留量检查的方法学考察, 结果表明, 该法灵敏 专属 准确, 毒性小, 完全可以符合 2005 年版中国药典测定正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷残留溶剂的要求 1 仪器与试药 1.1 仪器 6890N 气相色谱仪 ( 安捷伦公司 ) 配电子捕获检测器 (ECD);7890 气相色谱仪 ( 安捷伦公司 ) 配氢火焰离子化检测器 (FID) 和 G1888 顶空 ; 1.2 试药 N-[3(3- 二甲基 -1- 羰基 )-2- 丙烯苯基 ]-N- 乙酰胺 ( 批号 20090701,20090702,20090702) 由江苏恩华药业股份有限公司提供 ; 正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷, DMF 等有机溶 - 1 -
剂均为色谱纯 2 色谱条件 2.1 正己烷, 四氢呋喃的测定 : 柱温 40 维持 2 min, 以 3 /min 的速率升温至 65, 再以 30 /min 的速率升温至 230 维持 7 min; 载气 : 高纯氮气, 柱速度 1.926 ml/min; 进样口温度 150 ; 分流比 :1: 1; 检测器 :FID 温度 260 ; 氢气 :35 ml/min; 空气 350 ml/min; 尾吹 25 ml/min 顶空条件 : 炉温 :70 ( 平衡时间 20 min); 定量环温度 :75 ; 传输带温度 :85 2.2 二氯甲烷, 溴乙烷的测定 : 柱温 40 维持 2 min, 以 3 /min 的速率升温至 65, 再以 30 /min 的速率升温至 230 维持 7 min; 载气 : 高纯氮气, 柱速度 1.9 ml/min; 进样口温度 150 ; 分流比 :10:1; 检测器 :ECD 温度 260 ; 尾吹 60 ml/min 3 方法与结果 3.1 线性试验 3.1.1 正己烷线性曲线的制备及结果 : 分别配制浓度 9.28 µg/ml,10.45 µg/ml,11.60 µg/ml,12.76 µg/ml,13.92 µg/ml 溶液进样, 以测得正己烷的峰面积对正己烷浓度作回归, 得到的回归方程为 y=100.33x -9.1396 r=0.9985( 见图一正己烷线性试验线性图 ) 正己烷线性试验图与数据 1500 1400 1300 y = 100.33x - 9.1396 R 2 = 0.9985 1200 1100 1000 900 800 8 9 10 11 12 13 14 15 图一正己烷线性试验线性图 3.1.2THF 线性曲线的制备及结果 : 分别配制浓度 23.00 µg/ml,25.90 µg/ml, 28.8 0 µg/ml,31.00 µg/ml,34.60 µg/ml 溶液进样, 以测得 THF 的峰面积对 THF 浓度作回归, 得到的回归方程为 y=9.1032x+44.574 r=0.9966( 见图二四氢呋喃线性试验线性图 ) - 2 -
THF 线性试验图与数据 380 360 340 320 300 280 260 240 220 y = 9.1032x + 44.574 R 2 = 0.9966 200 20 25 30 35 40 图二四氢呋喃试验线性图 3.1.3 二氯甲烷线性曲线的制备及结果 : 分别配制浓度 19.20µg/mL,21.60 µg/ml,24.00µg/ml,26.40 µg/ml,28.80 µg/ml 溶液进样, 以测得二氯甲烷的峰面积对二氯甲烷浓度作回归, 得到的回归方程为 y=31.558x+57.568 r=0.999( 见图三二氯甲烷线性试验线性图 ) 1000 950 900 850 800 750 700 650 600 二氯甲烷线性图与数据 y = 31.558x + 57.568 R 2 = 0.999 18 20 22 24 26 28 30 图三二氯甲烷线性试验线性图 3.1.4 溴乙烷线性曲线的制备及结果 : 分别配制浓度 32.00µg/mL,36.00 µg/ml,40.00µg/ml,44.00 µg/ml,48.00 µg/ml 溶液进样, 以测得溴乙烷的峰面积对溴乙烷浓度作回归, 得到的回归方程为 y=12.61x+21.158 r=0.999( 见图四溴乙烷线性试验线性图 ) - 3 -
溴乙烷线性图和数据 650 600 y = 12.61x + 21.158 R 2 = 0.999 550 500 450 400 30 35 40 45 50 图四溴乙烷线性试验线性图 3.3 检出限检出限在上述色谱条件下, 测得的正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷最低检出限分别为 0.023 µg(s/n=3.4),0.32 µg(s/n=3.1),0.20 µg(s/n=3.7),0.27 µg(s/n=3.1) 3.4 回收率精密度与回收率对该方法的精密度和回收率测试进测试, 加样正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷回收率分别为 100.81%,RSD 为 0.85%(n=9);99.96%,RSD 为 0.96%(n=9) ; 99.63%,RSD 为 0.95%(n=9) ;100.27%,RSD 为 0.27%(n=9) 3.5 样品测定测定结果 ( 见表一和表二 ) 表一 样品中正己烷, 四氢呋喃有机残留溶剂测定结果 批号 正己烷 四氢呋喃 20090701 未检出 未检出 20090702 未检出 未检出 20090703 未检出 未检出 表二 样品中溴乙烷, 二氯甲烷有机残留溶剂测定结果 批号 溴乙烷 二氯甲烷 20090701 未检出 未检出 20090702 未检出 未检出 20090703 未检出 未检出 4 讨论 为保证样品中残留溶剂完全释放, 必须选择合适的溶剂完全溶解待测样品 [3] 根据 ICH [4] 关于药品中溶剂残留量的指导原则及文献 [5], 本文选择 DMF 为溶剂, 结果令人满意 该实验适用于其他不溶于水而溶于 DMF 的原料药中残留正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴 - 4 -
乙烷的检查, 前提是原料药在生产过程中曾用过正己烷, 四氢呋喃, 二氯甲烷, 溴乙烷溶剂合成或精制 参考文献 [1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 ( 二部 )[S]. 2000:336 [2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 ( 二部附录 )[S]. 2000:64 [3] 任霞, 徐小平, 廖丽云, 等. 毛细管气相色谱法测定头孢噻利和普卢利沙星中 7 种有机溶剂残留量 [J]. 中国抗生素杂志,2004,29(6):354 [4] 李眉, 马玉楠. 简介 ICH 关于药品中溶剂残留量的指导原则 [J]. 药学进展,1998,22(3):119 [5] 姚倩, 李章万, 张强, 等. 大口径毛细管气相色谱法检查药物中残留溶剂的方法研究 [J]. 色谱, 2001,19(2):141 N-3-[3 -(dimethyl amide)2 - propenyl] phenyl-n-ethyl - acetamide Quality of Residual Solvents Zhangjing*,chengxia,yangyonge Jiangsu NHW Pharmaceutical Co.,LTD. Jiangsu Xuzhou(220000) bstract Objective To establish a method to determine the residues N-3-[3-(dimethyl amide)2-propenyl] -phenyl-n-ethyl-acetamide in zaleplon starting materials. Methods Capillary gas chromatography was used by capillary column DB-624 (30 m 0.32 mm 1.8 µm),hydrogen flame ionization detector (FID) and electron capture detector (ECD), N, N-dimethyl formamide (DMF) as solvent. The oven temperature was beginning from 40. fter maintaining 2min, the temperature was programmatically increased to 65 at the rate of 3 per min, and then to 230 at the rate of 30 per min and maintain for 7 min. The carried gas was high purity nitrogen with the column rate of 1.9ml/min and hydrogen with the rate of 35 ml/min.the injection port temperature was 150 and the detection port temperature was 260. air 350ml/min; tail wind :25 ml/min. Conclution The method is sensitive, proprietary and accurate. Key words: Capillary gas chromatography; cetamide; Residual solvents - 5 -