ToRCH IgG/IgM 抗体检测试剂研发 www.meridianlifescience.com
ToRCH 概述 ToRCH 是一组可以导致严重的先天性缺陷甚至胎儿死亡的感染性疾病的英文首字母缩写 迈迪安生命科学公司 (Meridian Life Science,Inc.) 已经开发出一系列完整的试剂, 适用于多种形式的 TORCH 检测, 包括 IgG 和 IgM 抗体检测, 抗 IgM 快速测定和免疫荧光 (IFA). ToRCH 检测包括检查母婴对于五种病原体的慢性感染的抗体的水平 : 弓形虫病, 其他感染, 风疹, 巨细胞病毒和单纯疱疹病毒 其他感染 通常包括梅毒 / 乙肝 / 柯萨奇病毒 /EB 病毒 / 水痘 - 带状疱疹病毒和人类细小病毒 lgm 与 lgg 血清学时间曲线对比 这些感染性疾病都与产妇感染引起胎儿死亡的先天性异常有关 尽管这些微生物通常只造成被感染的母体无症状或轻度感染症状, 但它们却可以对胎儿造成严重的后果 如果孕妇在怀孕前三个月感染并且是初次感染, 其造成先天性遗传疾病的危险性则远远高于二次或重新感染 巨细胞病毒是造成胎儿先天畸形的最常见的传染病, 并具有高度传染性 母亲的原发感染传染率 (10%) 相对于母亲的继发感染率 (1%) 要高得多 因此在怀孕早期鉴别这些感染就显得极为重要 对于大多数 ToRCH 病原体, 初步筛查是检测该病原体的抗体 市场上现有的测定方法包括检测 IgG 抗体,IgM 抗体, 或者两者兼有 在多数情况下,IgG 抗体阳性而 IgM 抗体阴性表示感染发生在过去, 而 IgM 抗体阳性而 IgG 抗体阴性则表示近期感染 然而, 对于弓形虫和巨细胞病毒感染,IgG 的检测结果被发现对于识别原发性感染也是有帮助的 有些个体可以在重复感染后产生 IgM 抗体, 所以 IgM 阳性并不一定代表原发的感染 此外也已经证实, 在原发性感染最初几个月内产生的 IgG 抗体相对于感染数月或数年之后所产生的 IgG 抗体对抗原具有较低的亲和力, 因此, 通过检测低亲和力的 IgG 抗体可以特异性的鉴定高风险的母亲所患的原发感染 总之, 为了保护 TORCH 病原体感染胎儿, 进行孕早期筛查早期诊断是关键 大多数 TORCH 感染的母亲无症状, 但如果不及时治疗可导致严重的新生儿出生缺陷或者胎儿死亡 2 ToRCH 原料 - IgG 和 IgM 检测方法研发
迈迪安公司提供的各种 ToRCH 抗原及抗体 抗原 / 抗体 弓形虫抗 - 人 IgM 8200 天然抗原 R01573 重组抗原 p30 (SAG1), 大肠杆菌 R01581 重组抗原 p35 (GRA8), 大肠杆菌 C01523M 抗弓形虫 SAG1 蛋白 (p30) 单抗 C01588M 抗弓形虫蛋白 (38kDa) 单抗 C01589M 抗弓形虫蛋白 (38kDa) 单抗 风疹病毒 6075 天然抗原,III 级纯化, 最高纯度 6076/6123 天然抗原,IV 级纯化, 最高纯度 9600 天然抗原, 最高纯度 R01491 重组抗原,E1 镶嵌, 大肠杆菌 EV9525 纯化单抗 EV9526 纯化单抗 巨细胞病毒 7511 天然抗原高度纯化用于开发 IgM 试剂 7600 天然抗原高度纯化用于开发 IgG/IgM 试剂 EV9268 天然抗原 II 级纯化 EV7509 天然抗原高度纯化 gb R18102 重组抗原 gb, 大肠杆菌 R01561 重组抗原 pp52 (UL44), 大肠杆菌 R01562 重组抗原 pp65 (UL83), 大肠杆菌 R01563 重组抗原 pp150 (UL32), 大肠杆菌 R01567 重组抗原 pp38 (UL80a), 大肠杆菌 R18103 重组抗原 pp28 (UL99), 大肠杆菌 C86314M 抗早期抗原 (65kDa 蛋白 ) 单抗 C8A022M 抗早期抗原, pp72 单抗 试剂开发原材料 Anti-human IgM Z01235M 单抗 W01258G 山羊 (µ 链 ) W01259G 山羊 (µ 链 ), 与 IgA 和 IgG 轻度交叉反应 抗 - 人 IgG IgG 吸收剂 ( 适用于 IgM 测定 ) 固相封闭液 单抗 (Fc), 与 IgA, IgM 或 IgE 无交叉反应 L15406G 山羊抗人 IgG (Fc) 8120 IgM 稀释液 J82001B J82310B J82300B J16403D 订购方式 ELISA 封闭液横向免疫层析含阻断剂的 Tris 缓冲液横向免疫层析含阻断剂的 PBS 缓冲液包被稳定剂和阻断剂缓冲液 Director of China Business Development: 张亮, 医学博士, 博士亚太地区总监 US Cell: +1 312.405.3022 China Cell: 18810208056 Email: liang.zhang@meridianlifescience.com 一型单纯疱疹病毒 7305 天然抗原 VTI520 重组糖蛋白 G1 抗原 ( 酿酒酵母菌表达 ) C05014MA 抗核衣壳蛋白 (155kDa) 单抗 C66150M 抗糖蛋白 G1 单抗 Meridian Life Science, Inc. 5171 Wilfong Rd. / Memphis, TN 38134 www.meridianlifescience.com ISO 9001:2008 Certified Company 二型单纯疱疹病毒 7705 天然抗原 VTI530 重组糖蛋白 G2 抗原 ( 酿酒酵母菌表达 ) C65019M 抗糖蛋白 D 单抗 www.meridianlifescience.com 3
常用 ToRCH 检测技术 捕获法检测 ToRCH IgG & IgM ToRCH 血清学试验是检测这类传染病 ( 弓形虫, 风疹, 巨细胞病毒和单纯疱疹病毒 ) 的 IgM 和 IgG 抗体 IgM 抗体是人类接触细菌, 病毒或毒素后免疫系统所最先产生的抗体, 它在出现后 2-3 周内消失 随之而产生的 IgG 抗体则可长期甚至终生存在于体内 迈迪安公司的 ToRCH 抗原适合开发各种 IgG 和 IgM 检测试剂 它们可以广泛地应用于各种免疫测定平台, 包括酶联免疫吸附, 床边快诊, 化学发光, 快速诊断, 和各种基于微粒的技术等等 间接法 底物 可被检测物质 试验基本原理 1. 固相 ( 测定板, 微粒等 ) 之上包被抗原 2. 加入封闭剂缓冲液封闭剩余的结合位点 患者标本中的 IgG 或 IgM 抗体 抗原 二抗 ToRCH 抗 -IgM 快速诊断 阻断剂 酶 3. 加入样品, 患者样本中的 IgG 或 IgM 抗体与抗原结合 4. 通过直接或间接的方法检测 接法检测 : 使用标记的二抗进行检测 二抗具有特异性的抗人 IgG 或 IgM 的特性 快速的抗 IgM 测定对于在疾病的早期表现出的 IgM 抗体的的检测特别敏感 这些测定方法原理是患者的的样本中的特异的 IgM 抗体为固相上包被的抗 IgM 抗体所捕获 通过加入过量可溶性抗原使得特异性 IgM 抗体 - 抗原结合, 并且不因为同型免疫球蛋白存在而受到竞争性干扰 最后, 加入针对该抗原的标记的特异检测抗体 该方法测定的灵敏度通常是高度依赖于所使用的抗原的纯度 IgM 抗体酶联免疫吸附捕获法可以减少类风湿因子的干扰 可被检测物质 从病人标本中俘获的 IgM 底物 酶 抗 -ToRCH 抗原的抗体 ToRCH 抗原 可被检测物质 试验基本原理 1. 固相包被抗 - 人 IgM 抗体 ( 单抗或多抗 ) 并加入封闭剂缓冲液封闭剩余的结合位点 2. 固相包被抗 - 人 IgM 抗体 ( 单抗或多抗 ) 并加入封闭剂缓冲液封闭剩余的结合位点 3. 加入过量的抗原 ( 如风疹病毒, 弓形虫 ), 抗体 - 抗原 - 抗体形成复合物 4. 通过直接或间接的方法检测 抗人 IgM 抗体 直接法检测直接法检测 : 使用标记的抗原直接与抗体结合 间接法检测间接法检测 : 使用标记的二抗进行检测 推荐 : Cat# Z01235M Cat# W01258G Cat# W01259G 4 ToRCH 原料 - IgG 和 IgM 检测方法研发
怎样提高实验灵敏度 使用固相阻断剂缓冲液 固相阻断剂缓冲液可以用于阻止非特异性结合, 降低本底干扰, 稳定包被蛋白, 从而有效提高免疫分析灵敏度 固相阻断剂主要是通过占据没有被包被的空间表位以防其他非特异性的蛋白或生物分子结合, 从而达到阻断效果 推荐使用的材料 : J82100B ELISA 的阻断剂缓冲液 J82300B 横向免疫层析含阻断剂的 PBS 缓冲液 J82310B 横向免疫层析含阻断剂的 Tris 缓冲液 J16430D 包被稳定剂和阻断剂缓冲液 使用 IgG 吸附剂去除 IgG 抗体和类风湿因子的干扰 由于病人样本中含有 IgG 抗体, 致使 IgM 抗体检测的灵敏度和特异性受到影响 样本中的 IgG 抗体主要通过两种机制对 IgM 抗体检测造成干扰, 导致错误的检测结果 : 通过竞争特异性 IgM 的结合位点 通过与类风湿因子 (RF) 形成的免疫复合物竞争特异性 IgM 的结合位点 通过山羊抗人 IgG 抗体预处理病人样本可以有加入效地除去 IgG 和 RF-IgM 复合体的干扰 推荐使用的材料 : L15406G 山羊抗人 IgG FC (GAHG) 加入病人样本前进行稀释 推荐稀释比例为 1:10, 用 PBS 进行稀释 按照 1:10 的比例加入病人样本中, 孵育 5-30 分钟 8120 IgM 稀释液取一个单独的反应管, 病人血清样本与 IgM 稀释液按照 1:21 或者更高稀释比例 ( 混合均匀 ) 进行稀释 稀释步骤必须与其他试验步骤一致进行规范化处理 怎样使用阻断剂缓冲液和山羊抗人 IgG 抗体 通用试验程序 步骤 1 优化微孔板 / 硝酸纤维素膜捕获 ( 包被 ) 抗原条件 A. 微孔板包被抗原 : 用碱性缓冲体系, 如磷酸盐缓冲液 (ph 7.4) 或碳酸盐缓冲液 (ph 9.4) 将抗原稀释为 2-10 μg/ml 工作浓度 ; B. 将加入工作浓度抗原后的微孔板在 4-37 C 孵育几个小时, 或者过夜 ; C. 去除包被缓冲液, 洗板, 这样抗原就被固定在微孔板上了 步骤 2 添加阻断剂缓冲液 A. 直接在微孔, 印迹膜或硝酸纤维素膜加入阻断剂溶液 ( 根据实验的设计 ) 使用浓度为 1X 或者进一步稀释 ELISA 阻断剂缓冲液 : Cat# J82100B 横向免疫层析阻断剂缓冲液 : Cat# J82300B 包被稳定剂和阻断剂缓冲液 : Cat# J16430D B. 室温孵育 30 分钟 -2 小时 C. 根据实验要求继续进行后续试验操作 步骤 3 将病人血清样本中加入 GAHG 进行预处理 A. 按照 1:10 比例用 PBS 稀释 GAH IgG B. 将稀释后的 GAH IgG 按照 1:10 比例加入到病人样本中, 并混匀 C. 孵育 3-5 分钟后进行检验 含有 IgG 和 IgM 抗体的病人血清样本 病人样本 山羊抗人 IgG 步骤 4 将病人样本复合物加入到反应孔中 A. 病人样本与捕获 ( 包被 ) 抗原进行孵育 B. 进行洗涤步骤, 去除没有结合的试剂 抗原被包被在微孔板上, 如果病人样本中含有 IgM 抗体, 那么该抗体就会与抗原进行反应 板上包被抗原 病人的血清样本和 GAH IgG 预处理后先加入微孔 GAHG 与病人样本中 IgG 形成复合物 步骤 5 通过直接法或间接法进行检测 www.meridianlifescience.com 5
商业产品试剂及推荐产品 弓形虫 IgM 检测 IgM 抗体捕获夹心法 " LIAISON CMIA MEIA CLIA CLIA ELFA 微粒 固相配合 小鼠抗人 IgM, 抗弓形虫及 P30 重组抗原 F(ab )2 片断小鼠抗人 IgM, 抗 P30 和天然抗原单抗小鼠抗人 IgM, 抗弓形虫和 P30 单抗小鼠抗人 IgM, 抗 P30 和天然抗原单抗羊抗人 IgM, 抗 P30 和天然抗原单抗 间接, MUB 直接, MUB Z01235M, C01523M and R01573 Z01235M, C01523M and 8200 Z01235M, C01523M and 8200 Z01235M, C01523M and 8200 W01259G, C01523M and 8200 弓形虫 IgG 检测 Avidity AVIDA Centaur 2000 LIAISON LIAISON Avidity Avidity CMIA CMIA 两种检测方法 : 含有和没有封闭剂以祛除低亲和力抗体 30 和 P35(GRA8) 重组抗原, 抗 - 人 IgG 30 和 P35(GRA8) 重组抗原, 抗 - 人 IgG CLIA 天然 p30 抗原 8200 CLIA 部分纯化的抗原, 小鼠抗人 IgG 8200 R01573, R01581 and R01573, R01581 and CLIA 天然抗原, 抗 - 人 IgG 8200 and CLIA 两种检测方法 : 含有和没有 6 摩尔浓度的尿素以祛除低亲和力抗体 天然抗原, 抗 - 人 IgG 8200 and ELFA 固相配合天然抗原直接, MUB 8200 ELFA 两种检测方法 ( 对照和检测 ): 含有和没有分离洗涤步骤以祛除低亲和力抗体 固相配合 天然抗原 (RH 沙宾株 ), 抗 - 人 IgG 8200 and ELFA: CLIA: CMIA: MUB: CL: MEIA: ECLIA: 酶联荧光法化学发光法微粒子化学发光免疫分析 Methyl-umbellifery 化学发光微粒子酶免疫电化学发光免疫分析 6 ToRCH 原料 - IgG 和 IgM 检测方法研发
风疹病毒 IgM 检测 i2000sr CMIA 罗氏 ELECSYS CLIA IgM- 俘获夹心法磁微粒 2000 AVIDA Centaur XP 病毒裂解物 (HPV77 株 ) 和小鼠抗 - 人 IgM 单克隆抗体 重组风疹病毒样颗粒和风疹病毒特异性抗体 6076/6123 or 9600 R01491 and EV9525 or EV9526 CLIA IgM- 俘获夹心法聚苯乙烯珠病毒裂解物 (HPV77 株 ) 6076/6123 or 9600 CLIA IgM- 俘获夹心法 风疹病毒裂解物和风疹病毒特异性抗体 6076/6123 or 9600 and EV9525 or EV9526 风疹病毒 IgG 检测 i200sr CMIA 部分纯化的裂解物 (HPV77 株 ), 小鼠抗人 IgG 6075 and AxSYM MEIA 纯化的裂解物及小鼠抗人 IgG 间接, MUB 6075 and AVIDA Centaur XP 2000 贝克曼 ACCESS 2 CLIA 简易 部分纯化的裂解物 (HPV77 株 ), 小鼠抗人 IgG CLIA 简易裂解物 6075 EIA 裂解物 6075 罗氏 ELECSYS CLIA, G- 捕获方法双抗原夹心磁微粒 Ortho VITROS Eci ELFA, 免疫夹心法 CLIA 高度复杂 固相配合 Plastic wells 重组 E1 抗原, 风疹病毒样颗粒和风疹病毒特异抗体病毒裂解物 (MR383 株 ), 抗人 IgG 病毒裂解物 (MR383 株 ), 抗人 IgG 间接, MUB 间接, 发光 6075 and R01491 and EV9525 or EV9526 6075 and 6075 and 巨细胞病毒 IgM 检测 CMIA AxSYM MEIA 微粒 2000 CLIA 3 步法, IgM- 俘获夹心法 罗氏 ELECSYS ECLIA IgM- 俘获夹心法 ELFA IgM- 俘获夹心法 固相配合 病毒裂解物 (AD169 株 ), 重组抗原 pp150 和 pp52, 抗人 IgM 重组抗原 pp150, pp52,pp38 和抗人 IgM 纯化抗原 (AD169 株 ), 羊抗人 IgG, 羊抗 - 人 IgM 重组抗原 pp150, pp52 和抗人 IgM 病毒裂解物 (AD169 株 ), 小鼠抗人 IgM 间接, MUB 间接, MUB R01561, R01563 and W01259G R01561, R01562, R01563, R01567 and W01259G W01259G and L15406G R01561, R01563 and Z01235M Z01235M www.meridianlifescience.com 7
商业产品试剂及推荐产品 巨细胞病毒 IgG 检测 I2000SR Avidity CMIA 病毒裂解物 7600 or 7511 CMIA, 两种检测方法 : 含有和没有液态 CMV 抗原以中和高亲和力的 CMV 抗体 病毒裂解物, 抗人 IgG AxSYM MEIA 微粒 病毒裂解物 间接, MUB 7600 or 7511 2000 CLIA 纯化抗原 7600 or 7511 罗氏 ELECSYS ECLIA, 一步双夹心法 罗氏 ELECSYS Avidity Avidity ECLIA, 两种检测方法 : 含有和没有分离液以祛除低亲和力抗体 重组抗原 pp150, pp52,pp28,pp38 重组抗原 pp150, pp52,pp28,pp38 ELFA 两步夹心法固相配合病毒裂解物, 抗人 IgG 直接, MUB ELFA 两种检测方法 : 含有和没有 6 摩尔浓度的尿素以祛除低亲和力抗体 固相配合病毒裂解物, 抗人 IgG 直接, MUB R01561, R01563, R01567, R18103 R01561, R01563, R01567, R18103 单纯疱疹病毒 1 型和 2 型 IgG/IgM 检测 LIAISON HSV-1 Type Specific LIAISON HSV-2 Type Specific Focus PLEXUS HerpesSelect 1 and 2 lgg Biorad BIOPLEX 2200 HSV-1 & HSV-2 IgG 罗氏 ELECSYS HSV-1 lgg Immunlite 2000 Herpes 1/2 lgg CLIA, 两步法 CLIA, 两步法 EIA 三步复流 磁微粒 磁微粒 微粒 EIA 三步复流羧基包被染色珠 ECLIA, 两步双抗原夹心法 CLIA 重组抗原 HSV-1 gg 1, 小鼠抗人 IgG 重组抗原 HSV-1 gg 2, 小鼠抗人 IgG 重组抗原 HSV-1 gg 1,HSV-2 gg2, 羊抗人 IgG 重组 GG1, 从 gg2 序列 ( 专利 ) 派生的 p8c:bsa 合成多肽和鼠抗人的 lgg, 鼠抗人 FXlll 重组 HSV-1 和 HSV-1 病毒裂解物 HSV-1 (MacIntyre 株 ) 和 HSV-2 (G 株 ) 裂解物, 抗人 IgG 间接, 荧光 直接, 荧光 VT1520, VT1530, VT1520, VT1530 and L15406G VT1520, VT1530 and VT1520 and 7305 7305, 7705 and 8 Meridian Life Science, Inc. 5171 Wilfong Road Memphis, TN 38134 901.382.8716 800.327.6299 April 2015