标题

核 农 学 报 ２０１６ ３０ ５ ０９２０ ０９２５ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ９２０ 文章编号 １０００ ８５５１ ２０１６ ０５ ０９２０ ０６ 羊栖菜活性组份多糖的体外抗氧化能力比较 丁浩淼１ ２ 李伟强１ 汪财生 1 顾筱筱１ 谢 琰１ 钱国英１ 王忠华１ １ 浙江万里学院生物与环境学院 浙江 宁波 ３１５１００ ２ 浙江海洋高效健康养殖协同创新中心 浙江 宁波 ３１５２１１ 摘 要 为探索羊栖菜中分离的各组份多糖体外抗氧化活性 将 ＤＥＡＥ ５２ 分离纯化得到的羊栖菜多糖 活性组份进行红外光谱扫描确认 并评价 ＤＰＰＨ ＯＨ Ｏ２ 自由基的清除能力 还原力和抗脂质过氧化 力 结果表明 去蛋白多糖经 ＤＥＡＥ ５２ 分离纯化 ０ ２ Ｍ ＮａＣｌ 溶液梯度洗脱得到 ３ 个主要多糖组份 其中红光谱扫描发现 ＳＦＰＳⅠ ０ ５ Ｍ ＮａＣｌ ＳＦＰＳⅡ ０ ７５ Ｍ ＮａＣｌ ＳＦＰＳⅢ １ ０ Ｍ ＮａＣｌ 均具有糖类特 征吸收峰 ３ 个组份均表现出较强的抗氧化活性 其中 ＳＦＰＳ Ⅲ抗氧化活性最高 ＤＰＰＨ 的 ＩＣ５０ 为 ０ ４９９ μｇ ＯＨ 的 ＩＣ５０ 为 ０ ４８ μｇ Ｏ２ 的 ＩＣ５０ 为 １１２ １３ μｇ 还原力最强 抗脂质过氧化能力显著优于对照品 ＢＨＴ 研究结果为羊栖菜活性多糖作为天然抗氧化剂及功能性食品开发提供了理论基础 关键词 羊栖菜 多糖 ＤＥＡＥ ５２ 分离纯化 抗氧化能力 ＤＯＩ １０ １１８６９ ｊ ｉｓｓｎ １００ ８５５１ ２０１６ ０５ ０９２０ 羊栖菜 Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ 俗名海大麦 海茜菜 等 为褐藻门马尾藻科植物 生长于我国浙江 福建 广 东浅海域等地 １ 本草纲目 草部水草类海草条中 记载 该藻有软坚散结 利水泄热等药效 在民间常用 于治疗瘿瘤 瘰疬 睾丸肿痛 痰软水肿等 有研究表 明多糖是羊栖菜主要的活性组份之一 具有调节机体 免疫功能 抗肿瘤 抗氧化 抗凝血 降血脂 降血糖和 １ 材料与方法 １ １ 材料与设备 羊栖菜 Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｓｉｆｏｒｍｅ 购于浙江省温州市 洞头县浙江良泰水产有限公司 ５ ６ 月份新鲜藻体 中低压 全 波 长 层 析 系 统 广 州 睿 伯 科 技 有 限 公 近年多糖的抗肿瘤 司 ＵＶ ２６００ 紫外可见光分光光度计 北京普析通 研究显示海藻多糖表现出的强抗氧化性与其含硫基团 德国布鲁克 ＨＨ ６ 中数显恒温水浴锅 国华电器 促进机体生长发育等作用 ２ ４ 免疫等抗氧化活性研究较多 特别是海藻多糖 大量 有关 ５ 羊栖菜多糖是一种含有硫酸基团的褐藻多 糖 具有清除活性氧自由基及抑制脂质过氧化能力 但 羊栖菜多糖组成复杂 粘性较大 极性相近 分子量分 布较宽 ６ 给其分离纯化带来困难 导致羊栖菜多糖 抗氧化活性组份尚不明确 且鲜有文献报道羊栖菜多 用仪器责任有限公司 Ｖｅｒｔｅｘ ７０ 傅立叶红外光谱仪 有限公司 ＲＥ Ｓ２Ａ 旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器 厂 ＤＥＡＥ ５２ 阴离子交换纤维素 Ｓｉｇｍａ ＵＳＡ １ １ 二苯基 ２ 三硝基苯肼 ＤＰＰＨ Ｓｉｇｍａ ＵＳＡ ２ ６ 二叔丁基 ４ 甲基苯酚 ＢＨＴ Ｓｉｇｍａ ＵＳＡ 其余 试剂均为分析纯 糖分离组份的抗氧化活性 本研究以 ＤＥＡＥ ５２ 离子 １ ２ 方法 份 应用红外光谱扫描确认硫酸基团 并评价各个组份 ７ 采用循环超声提取 真空冷冻干燥法制成粗多 交换层析 ＮａＣｌ 溶液梯度洗脱分离羊栖菜粗多糖组 １ ２ １ 羊栖 菜 粗 多 糖 的 制 备 制 备 方 法 参 考 文 献 的体外抗氧化活性 以获取活性高的多糖组份 为羊栖 糖粉末产品 ＳＦＰＳ 备用 菜活性多糖的功能性药品与保健品开发提供依据 １ ２ ２ ＤＥＡＥ ５２ 纯化分离活性多糖 取粗多糖粉 末加入蒸馏水中 配成一定浓度的多糖溶液 利用蛋白 收稿日期 ２０１５ ０９ ０９ 接受日期 ２０１６ ０１ １０ 基金项目 宁波市科技创新团队项目 ２０１２Ｂ８２０１６ 浙江省重中之重学科 现代微生物技术与应用 项目 ＺＳ２０１３００７ 作者简介 丁浩淼 男 主要从事海洋天然产物开发研究 Ｅ ｍａｉｌ １８３６８４０６６４１ １６３ ｃｏｍ 通讯作者 汪财生 男 高级试验师 主要从事功能性食品开发研究 Ｅ ｍａｉｌ ｗａｎｇｃａｉｓｈｅｎｇ ｚｗｕ ｅｄｕ ｃｎ

5 期 羊 栖 菜 活 性 组 份 多 糖 的 体 外 抗 氧 化 能 力 比 较 921 质 在 有 机 溶 剂 中 变 性 的 特 点, 将 多 糖 溶 液 与 Sevage 试 剂 ( 氯 仿 正 丁 醇 = 4 1,v / v) 混 合, 振 荡 25 min,5 000 r min 1 离 心, 重 复 脱 蛋 白 3 次, 取 上 层 清 液, 旋 转 真 空 蒸 发 浓 缩 至 一 定 体 积, 真 空 冷 冻 干 燥 后 得 到 去 蛋 白 粗 多 糖 粉 末 (SFPS S), 密 封 保 存 备 用 将 上 述 去 蛋 白 粗 多 糖 配 制 成 5% 的 多 糖 水 溶 液, 过 2 0 cm 25 cm 的 DEAE 52 阴 离 子 交 换 纤 维 素 的 层 析 柱, 依 次 用 0 25 0 5 0 75 1 0 2 0 M NaCl 的 PBS(pH 值 7 4) 溶 液 梯 度 等 度 洗 脱, 将 0 5 0 75 1 0 M NaCl 洗 脱 的 组 份 命 名 为 SFPSⅠ SFPSⅡ SFPSⅢ, [8] 参 考 陈 彦 等 的 方 法 分 步 收 集 OD 215 下 洗 脱 峰, 重 复 纯 化 步 骤, 合 并 同 组 份 收 集 液 于 3 5 KD Pall Minimate 切 向 流 超 滤 膜 浓 缩, 透 析 脱 盐, 真 空 冷 冻 干 燥 得 各 组 份 产 品 1 2 3 多 糖 蛋 白 质 含 量 测 定 羊 栖 菜 多 糖 含 量 参 考 [9] 王 扬 等 的 方 法, 采 用 硫 酸 苯 酚 法 检 测 蛋 白 质 含 [10] 量 检 测 参 考 钱 国 英 的 方 法, 采 用 考 马 斯 亮 蓝 法 检 测 1 2 4 红 外 光 谱 分 析 分 别 称 取 1 2 2 所 得 各 组 份 多 糖 (SFPSⅠ SFPSⅡ SFPSⅢ) 试 样 10 mg, 置 于 玛 瑙 研 钵 中, 加 入 KBr, 充 分 混 合 均 匀, 压 片, 在 Vertex 70 傅 立 叶 红 外 光 谱 仪 上 扫 描 红 外 光 谱 1 2 5 体 外 抗 氧 化 活 性 1 2 5 1 还 原 力 测 定 参 考 文 献 [11 13] 测 定 将 各 组 份 多 糖 配 制 成 浓 度 为 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 mg ml 1 溶 液, 量 取 0 5 ml, 加 0 2 mol L 1 ph 值 6 6 的 磷 酸 盐 (PBS) 缓 冲 液 和 1% 的 K 3 Fe(CN) 6 溶 液 各 1 25 ml, 混 匀, 将 混 合 液 50 C 保 温 20 min 后, 加 10% 的 三 氯 乙 酸 溶 液 2 5 ml, 混 匀,1 500 r min 1 离 心 10 min 取 上 清 液 2 5 ml, 加 2 5 ml 蒸 馏 水 及 0 1% 的 FeCl 3 1mL, 混 匀,10 min 后 检 测 OD 700 值, 进 行 还 原 能 力 评 价, 并 以 标 准 品 Vc 作 抗 氧 化 能 力 评 价 对 照 1 2 5 2 DPPH 清 除 自 由 基 测 定 参 考 文 献 [14 15] 将 各 组 份 多 糖 配 制 成 浓 度 为 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 mg ml 1 的 溶 液, 用 分 光 光 度 法 测 定 DPPH 溶 液 的 特 征 紫 红 色 团 的 吸 收 蜂, 加 抗 氧 化 剂 后 OD 514 吸 收 的 下 降 量 表 示 其 对 DPPH 自 由 基 消 除 能 力,IC 50 为 被 测 量 拮 抗 剂 的 半 抑 制 量 清 除 率 P 按 下 式 计 算 P = [A 0 (A i A j )] / A 0 100% 式 中 A 0 为 2 ml DPPH 溶 液 + 2 ml 溶 剂 的 吸 光 度,A i 为 2 ml DPPH 溶 液 + 2 ml 羊 栖 菜 多 糖 溶 液 的 吸 光 度,A j 为 2 ml 羊 栖 菜 多 糖 溶 液 + 2 ml 溶 剂 的 吸 光 度 1 2 5 3 羟 基 自 由 基 的 测 定 参 考 文 献 [16 17] 略 作 调 整, 采 用 固 定 反 应 时 间 法 在 相 同 体 积 的 反 应 体 系 (1mL 8 8mmol L 1 H 2 O 2 + 1 ml 9mmol L 1 Fe SO 4 + 1mL 9mmol L 1 水 杨 酸 乙 醇 溶 液 ) 中 加 入 浓 度 为 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 mg ml 1 组 份 多 糖 溶 液, 以 蒸 馏 水 为 参 比, 与 试 剂 空 白 液 比 较 ( 以 蒸 馏 水 代 替 水 杨 酸 溶 液 和 样 品 ), 在 OD 510 处 测 量 各 浓 度 下 的 吸 光 度 A x, 测 定 被 测 物 对 羟 基 自 由 基 的 清 除 作 用 其 清 除 率 计 算 公 式 为 : 清 除 率 = (A 0 A x ) / A 0 100% 式 中,A 0 为 空 白 对 照 组 的 吸 光 度,A x 为 加 入 样 品 后 的 吸 光 度 1 2 5 4 超 氧 阴 离 子 清 除 试 验 参 考 文 献 [18 20] 方 法 并 略 作 调 整, 取 浓 度 为 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 mg ml 1 组 份 多 糖 溶 液 1mL, 各 加 入 4 5mL 0 1mol L 1 Tirs HCl 缓 冲 溶 液 ( ph 值 8 2) 和 1mL 20mmol L 1 EDTA 溶 液 与 2 4mL 超 纯 水 混 匀, 静 置 10min 后, 加 入 100uL 9mmol L 1 邻 苯 三 酚 溶 液, 涡 旋 混 匀, 避 光 静 置 60min, 加 入 50uL 浓 盐 酸 后 在 波 长 为 325nm 下 检 测 OD 值 1 2 5 5 脂 质 抗 氧 化 试 验 参 考 文 献 [21 22] 报 道 的 方 法 略 作 调 整, 用 亚 油 酸 加 速 氧 化 的 方 法 测 定 组 份 多 糖 产 品 的 抗 脂 质 过 氧 化 功 能 在 具 塞 试 管 中 分 别 加 入 浓 度 为 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 mg ml 1 组 份 多 糖 溶 液 0 2 ml, 再 加 入 1mL 2 5% 的 亚 油 酸 和 0 8 ml 0 05mol L 1 的 PBS 缓 冲 溶 液 (ph 值 7), 空 白 对 照 组 用 0 2mL 无 水 甲 醇 代 替, 置 于 45 C 恒 温 培 养 箱 中, 每 隔 24h 取 0 05 ml 45 C 恒 温 培 养 溶 液, 加 4 85mL 75% 甲 醇 和 0 05mL 30% 硫 氰 酸 铵, 再 加 入 0 05mL 3 5% HCl 配 制 的 0 02mol L 1 的 FeCl 2 溶 液, 反 应 3min 后, 用 紫 外 分 光 光 度 计 在 波 长 500nm 下 测 定 OD 值, 通 过 亚 油 酸 过 氧 化 物 生 成 量 来 评 价 脂 质 抗 氧 化 能 力, 试 验 以 标 准 品 BHT 做 对 照 1 2 6 数 据 处 理 采 用 SPSS 17 0 处 理 数 据, 所 有 试 验 数 据 均 为 3 次 重 复 试 验 的 平 均 值 2 结 果 与 分 析 2 1 DEAE 52 阴 离 子 交 换 纤 维 素 分 离 活 性 多 糖 羊 栖 菜 粗 多 糖 去 蛋 白 后, 再 采 用 DEAE 52 分 离 纯 化, 经 分 离 获 得 6 个 组 份 由 图 1 可 知, 0 25 M NaCl 洗 脱 组 份 峰 形 乱, 多 糖 检 测 浓 度 低,0 5 M NaCl (SFPSⅠ) 的 洗 脱 组 份 相 对 含 量 最 大, 且 试 验 重 复 性 稳 定,0 75 M NaCl(SFPSⅡ) 次 之,1 0 M NaCl(SFPS Ⅲ) 相 对 较 小, 而 2 0 M 收 集 组 份 在 不 同 样 品 中 分 离 得 不

922 核 农 学 报 30 卷 稳 定, 时 有 时 无 通 过 反 复 试 验 收 集 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 3 个 组 份 洗 脱 液, 分 别 于 3 5 KD 膜 透 析 浓 缩 脱 盐 后, 真 空 冷 冻 干 燥 后 得 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 粉 末 产 品, 经 检 测 均 无 蛋 白 含 量, 多 糖 纯 度 均 达 95% 以 上 2 2 红 外 光 谱 分 析 由 图 2 可 知, 检 测 的 样 品 在 3 000 ~ 2 800 cm 1 处 有 糖 类 特 征 振 动 吸 收 峰, 在 波 数 3 437 cm 1 处 有 强 O H 伸 缩 振 动 特 征 吸 收 峰, 且 存 在 分 子 内 或 分 子 间 氢 键 ;2 933 cm 1 是 C H 的 伸 缩 振 动 吸 收 峰,1 633 cm 1 可 能 是 酰 胺 基 中 的 C = O 伸 缩 振 动,754 6 cm 1 842 cm 1 处 是 α 吡 喃 环 的 特 征 吸 收 1 090 ~ 1 260 cm 1 处 是 C O C 和 C OH 的 振 动 峰 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 在 1 250 cm 1 处 的 峰 增 强, 可 能 是 由 于 硫 酸 根 S = O 的 对 称 伸 缩 振 动 综 上 所 述,3 个 组 份 的 产 品 均 具 有 糖 类 特 征 结 构 2 3 多 糖 体 外 抗 氧 化 活 性 评 价 2 3 1 还 原 能 力 DPPH 自 由 基 清 除 能 力 样 品 的 还 原 能 力 与 抗 氧 化 活 性 之 间 相 关 性 显 著 [11] 本 试 验 将 样 品 多 糖 和 Vc 配 制 成 浓 度 为 100 μg ml 1 溶 液 进 行 还 原 力 试 验, 在 OD 700 下 测 定, 吸 光 值 越 高 说 明 样 品 还 原 能 力 越 强 图 3 表 明 各 组 份 多 糖 均 具 有 一 定 还 原 作 用,SFPSⅢ 的 还 原 能 力 显 著 高 于 V C ( P < 0 05),SFPS Ⅱ 的 还 原 能 力 与 V C 相 当 由 于 粗 多 糖 中 含 有 微 量 的 活 性 蛋 白, 故 粗 多 糖 较 去 蛋 白 多 糖 和 SFPSⅠ 组 份 多 糖 的 还 原 能 力 略 强 去 蛋 白 粗 多 糖 经 DEAE 52 纯 化 后, 得 到 纯 净 的 SFPSⅡ Ⅲ 组 份 多 糖, 还 原 能 力 表 现 显 著 增 强 由 图 4 可 知, 纯 化 后 的 各 组 份 多 糖 的 DPPH 清 除 活 性 显 著 高 于 粗 多 糖 去 蛋 白 多 糖 及 V C, 且 随 着 活 性 多 糖 组 份 纯 度 的 增 加, 清 除 DPPH 自 由 基 能 力 逐 渐 增 强 其 中 SFPS Ⅲ DPPH 自 由 基 清 除 能 力 最 强,DPPH 清 除 的 IC 50 为 0 499μg, 显 著 高 于 V C (P < 0 05), 且 是 V C 的 30 倍 2 3 2 OH O 2 自 由 基 清 除 能 力 由 图 5 可 知, 各 组 份 多 糖 均 表 现 出 较 强 的 OH 自 由 基 的 清 除 效 果, 其 中 纯 化 的 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 组 份 约 为 样 品 V C 的 200 多 倍, 其 OH 清 除 的 IC 50 分 别 为 1 48,1 24 和 0 48 μg, 结 果 表 明 经 DEAE 52 纯 化 分 离 的 组 份 多 糖 具 有 很 强 的 OH 自 由 基 清 除 能 力 羊 栖 菜 多 糖 各 级 组 份 均 有 一 定 的 超 氧 阴 离 子 自 由 基 清 除 能 力, 去 蛋 白 多 糖 SFPSⅠ Ⅲ 的 O 2 自 由 基 清 除 效 果 与 粗 多 糖 和 100 μg ml 1 V C 相 当, 但 SFPS Ⅱ 清 除 率 显 著 优 于 粗 多 糖 及 对 照 品 V C ( P < 0 05), 其 IC 50 为 72 76 μg( 图 6) 图 2 羊 栖 菜 多 糖 红 外 光 谱 扫 描 图 Fig. 2 IR spectrum of Sargassum fusiforme polysaccharide 图 3 羊 栖 菜 分 离 组 份 多 糖 还 原 能 力 Fig. 3 Reducing power of polysaccharide from Sargassum fusiforme 图 1 羊 栖 菜 多 糖 经 DEAE 52 柱 层 析 图 Fig. 1 DEAE 52 chromatography of Sargassum fusiforme polysaccharide 图 4 羊 栖 菜 分 离 组 份 多 糖 DPPH 自 由 基 的 清 除 能 力 Fig. 4 Scavenging activities of polysaccharide from Sargassum fusiforme on DPPH

5 期 羊 栖 菜 活 性 组 份 多 糖 的 体 外 抗 氧 化 能 力 比 较 923 Fig. 5 图 5 羊 栖 菜 分 离 组 份 多 糖 OH 的 清 除 能 力 Scavenging activities of polysaccharide from Sargassum fusiforme on OH 图 6 羊 栖 菜 分 离 组 份 多 糖 O 2 自 由 基 清 除 能 力 Fig. 6 Scavenging activities of polysaccharide from Sargassum fusiforme on O 2 2 3 3 抗 脂 质 过 氧 化 功 能 亚 油 酸 在 45 条 件 下 保 温 24 h 后, 过 氧 化 作 用 十 分 显 著, 加 入 羊 栖 菜 多 糖 BHT 后, 其 过 氧 化 作 用 能 明 显 受 到 抑 制, 测 得 的 OD 500 值 均 比 空 白 组 低 图 7 表 明 在 较 短 时 间 内 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 粗 多 糖 样 品 便 可 发 挥 抗 脂 质 过 氧 化 作 用, 约 为 对 照 品 BHT 的 26 倍, 而 去 蛋 白 多 糖 比 粗 多 糖 抑 制 能 力 弱, 可 能 去 除 的 某 些 蛋 白 也 有 一 定 的 抗 过 氧 化 作 用 图 7 Fig. 7 羊 栖 菜 组 份 多 糖 对 脂 质 过 氧 化 的 抑 制 能 力 Restraint activities of polysaccharide from Sargassum fusiforme and BHT on lipid peroxidation 3 讨 论 红 外 色 谱 是 研 究 多 糖 结 构 的 重 要 手 段 之 一, 可 用 于 探 讨 多 糖 作 用 机 理, 为 了 解 其 功 能 与 结 构 间 的 关 系 奠 定 基 础 本 试 验 通 过 红 外 色 谱 图 判 定 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 3 个 组 份 均 有 多 糖 特 征, 均 含 有 一 定 的 硫 酸 基 团, 并 且 首 次 确 定 3 种 多 糖 为 α 构 型 的 吡 喃 糖 生 命 体 中 的 自 由 基 是 与 生 俱 来 的, 且 生 命 体 本 身 具 有 平 衡 自 由 基 或 清 除 多 余 自 由 基 的 能 力 但 在 某 些 情 况 下, 物 理 因 素 如 辐 射 或 外 源 性 化 学 物 质 直 接 或 间 接 诱 导 产 生 的 过 量 活 性 氧 自 由 基 得 不 到 及 时 清 除, 或 在 病 理 状 态 下 内 源 性 自 由 基 的 产 生 和 清 除 失 去 正 常 平 衡, 会 导 致 对 机 体 的 各 种 损 伤 研 究 表 明, 从 天 然 产 物 中 分 离 得 到 的 多 糖 类 化 合 物 具 有 清 除 自 由 基, 抑 制 脂 质 过 氧 化, 抑 制 亚 油 酸 氧 化, 清 除 多 种 活 性 氧 等 抗 氧 化 作 用 [23 25] 本 试 验 结 果 表 明, 羊 栖 菜 组 份 多 糖 在 清 除 DPPH O 2 OH 自 由 基 体 系 中 均 表 现 出 较 好 的 效 果, 且 具 有 对 脂 质 抗 氧 化 能 力 此 外,SFPSⅢ 还 原 能 力 表 现 较 强, 也 表 明 羊 栖 菜 组 份 具 有 强 的 总 抗 氧 化 能 力, 这 与 前 人 的 研 究 结 果 相 似 [23 25] [26] 羊 栖 菜 组 份 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 与 蒋 剑 平 等 研 究 的 白 花 蛇 舌 草 多 糖 相 比,SFPSⅠ 的 还 原 能 力 是 白 花 蛇 舌 草 多 糖 的 2 倍,SFPSⅡ 是 其 10 倍,SFPSⅢ 的 还 原 能 力 则 更 高 ;SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 清 除 DPPH 自 由 基 能 力 也 明 显 高 于 白 花 蛇 舌 草 多 糖, 说 明 经 过 纯 化 后 的 SFPS 多 糖 体 外 抗 氧 化 能 力 高 于 白 花 蛇 舌 草 粗 多 糖, 可 见 中 等 分 子 量 多 糖 对 羟 基 自 由 基 的 清 除 作 用 最 好, 小 分 子 量 多 糖 次 之, 而 大 分 子 量 多 糖 相 对 较 差 在 清 除 羟 自 由 基 ( OH) 超 氧 负 离 子 自 由 基 (O 2 ) 体 系 中, 与 张 娜 [27] 等 研 究 的 关 白 附 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 相 比, 本 研 究 中 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 清 除 羟 自 由 基 ( OH) 的 能 力 是 关 白 附 多 糖 的 800 倍 左 右, 但 是 关 白 附 多 糖 清 除 超 氧 负 离 子 自 由 基 (O 2 ) 能 力 是 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 的 700 倍 左 右, 这 可 能 与 多 糖 的 提 取 方 式 有 关, 超 声 波 强 度 对 多 糖 分 子 结 构 具 有 一 定 的 影 响 在 清 除 脂 质 自 由 基 体 系 中, 与 [28] 汪 财 生 等 研 究 羊 栖 菜 岩 藻 黄 质 色 素 相 比,SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 脂 质 抗 氧 化 的 能 力 是 岩 藻 黄 质 2 倍 4 倍 和 8 倍, 多 糖 与 黄 酮 类 物 质 对 氮 中 心 自 由 基 清 除 活 性 的 差 异, 可 能 是 自 由 基 的 种 类 结 构 活 泼 性 及 作 用 机 制 等 [29] 不 尽 相 同 而 引 起 的 相 对 于 朱 良 等 研 究 的 繁 枝 蜈 蚣 藻 多 糖 抗 氧 化 活 性,SFPS Ⅰ Ⅱ Ⅲ 清 除 羟 自 由 基 ( OH) 的 能 力 是 繁 枝 蜈 蚣 藻 多 糖 的 5 倍, 各 组 份 多 糖 和 繁 枝 蜈 蚣 藻 多 糖 对 超 氧 负 离 子 自 由 基 (O 2 ) 的 清 除 [30] 能 力 相 差 不 大 与 杨 君 等 研 究 裂 片 石 莼 硫 酸 酯 化 多 糖 活 性 相 比,SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ 清 除 羟 自 由 基 ( OH) 超 氧 负 离 子 自 由 基 (O 2 ) 的 能 力 均 明 显 高 于 裂 片 石 莼 硫 酸 酯 化 多 糖 羊 栖 菜 活 性 多 糖 抗 氧 化 能 力 优 于 其 他 活 性 多 糖, 可 能 与 其 提 取 的 方 式 提 取 的 纯 度 以 及 其 结

924 核 农 学 报 30 卷 构 所 含 有 硫 酸 基 团 有 关 本 试 验 发 现, 分 离 纯 化 出 的 SFPSⅠ Ⅱ Ⅲ3 种 多 糖 抗 氧 化 活 性 显 著 于 SFPS SFPS S, 说 明 经 过 DEAE 52 阴 离 子 交 换 纤 维 柱, 提 高 了 SFPS Ⅰ Ⅱ Ⅲ 的 纯 度, 使 SFPS Ⅰ Ⅱ Ⅲ 活 性 高 于 SFPS SFPS S 但 多 糖 结 构 上 连 接 方 式 需 借 助 于 核 磁 共 振 GC MC 等 手 段 进 一 步 分 析, 多 糖 结 构 的 硫 酸 基 团 敲 除 后 对 多 糖 抗 氧 化 活 性 产 生 的 影 响 还 有 待 进 一 步 研 究 4 结 论 通 过 循 环 超 声 波 提 取 羊 栖 菜 粗 多 糖, 去 蛋 白 后 应 用 DEAE 52 分 离 纯 化 得 到 活 性 多 糖 主 要 组 份 SFPS Ⅰ Ⅱ Ⅲ,3 组 份 均 含 有 硫 酸 基 O SO 3, 具 有 糖 类 特 征 吸 收 峰, 均 为 α 构 型 的 吡 喃 糖 此 外,3 个 组 份 均 表 现 出 较 强 的 抗 氧 化 活 性, 其 中 SFPS Ⅲ 的 DPPH 与 OH 自 由 基 清 除 还 原 能 力 抗 脂 质 过 氧 化 能 力 最 好, SFPSⅠ 最 弱, 而 SFPSⅡ 的 O 2 自 由 基 清 除 能 力 最 佳, SFPSⅠ 与 SFPS Ⅲ 相 当 因 此, 羊 栖 菜 组 份 多 糖 具 有 清 除 多 种 活 性 氧 的 抗 氧 化 作 用, 可 有 效 地 清 除 自 由 基, 抗 脂 质 过 氧 化, 保 护 机 体 内 氧 化 抗 氧 化 平 衡 状 态, 本 试 验 为 进 一 步 开 展 羊 栖 菜 组 份 多 糖 体 内 抗 氧 化 活 性 及 作 用 机 制 研 究 提 供 了 科 学 依 据 参 考 文 献 : [ 1 ] 季 宇 彬. 海 洋 湖 沼 药 物 药 理 与 应 用 [M]. 哈 尔 滨 : 黑 龙 江 科 学 技 术 出 版 社, 2003: 1 [ 2 ] Xie X J, Wang X L, Lin L D, He L W, Gu W H, Gao S, Yan X F, Pan G H,Wu M J, Wang G C. Effects of hypo and hypersalinity on photosynthetic performance of Sargassum fusiforme ( Fucales, Heterokontophyta)[ J]. Photosynthetica,2015,53: 1 9 [ 3 ] Elena E P, Lin X D, Karen D. Sargassum fusiforme fraction is a potent and specific inhibitor of HIV 1 fusion and reverse transceiptase[ J]. Virology Journal, 2008, 5(2):8 [ 4 ] Ji Y B, Ji C F, Wang C. Study on S180 tumor mice erythrocyte membrance function of Sargassum Fusiform polysaccharide [ C] / / Springer Verlag Berlin Heidelberg. 7th Asian Pacific Conference on Medical and Biological Engineering. Berlin: Springer Berlin Heidelberg, 2008: 531 533 [ 5 ] 刘 秋 凤, 吴 成 业. 硫 酸 酯 多 糖 的 生 物 活 性 及 其 提 取 方 法 [ J]. 福 建 水 产, 2012, 34(3): 240 244 [ 6 ] 邵 平, 陈 蒙, 裴 亚 萍, 孙 培 龙. 径 向 流 色 谱 分 离 纯 化 海 藻 多 糖 及 其 抗 氧 化 活 性 比 较 分 析 [ J]. 核 农 学 报, 2013, 27 (5): 635 640 [ 7 ] 丁 浩 淼, 李 轶 亢, 汪 财 生, 谢 琰, 钱 国 英. 循 环 超 声 提 取 羊 栖 菜 多 糖 的 工 艺 优 化 [J]. 药 物 生 物 技 术, 2015, 22(2): 146 150 [ 8 ] 陈 彦, 谢 继 锋, 金 先 菊, 路 国 伟. 海 藻 多 糖 的 分 离 纯 化 和 组 成 分 析 [J]. 安 徽 农 业 科 学, 2003,31 (5):710 717 [ 9 ] 王 扬, 王 海 洪, 徐 大 伦. 羊 栖 菜 多 糖 的 提 取 及 分 离 [ J]. 宁 波 大 学 学 报, 2002, 15(1):53 55 [10] 钱 国 英. 生 物 化 学 试 验 技 术 与 实 施 教 程 [M]. 杭 州 : 浙 江 大 学 出 版 社, 2010:316 317 [11] 张 福 娣, 游 纪 萍, 陈 新 香, 祁 建 民. 扶 桑 花 色 素 的 抗 氧 化 作 用 研 究 [J]. 中 国 食 品 学 报, 2010,10(6): 72 76 [12] 罗 建 平, 徐 学 玲, 潘 利 华, 崔 源. 菠 萝 皮 渣 多 糖 的 提 取 与 体 外 抗 氧 化 活 性 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2009, 30(18): 172 175 [13] 邵 平, 刘 佳, 王 欧 丽, 孙 培 龙. 铜 藻 多 糖 微 波 辅 提 工 艺 优 化 及 其 抗 氧 化 活 性 研 究 [J]. 核 农 学 报, 2014, 28(6):1062 1069 [14] Larrauri J A, Sanchez Moreno C, Saura Calixto F. Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels [ J]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,1998,46(7):2694 2697 [15] Yokozawa T, Dong E, Natagawa T, Kashiwagi H, Nakagawa H, Takeuchi S, Chung Y. In vitro and in vivo studies on the radical scavenging activity of tea [ J ]. Journal of Agricultural & Food Chemistry,1998,46 (6):2143 2150 [16] 张 胜 帮, 麻 卫 锋, 于 萍. 羊 栖 菜 多 糖 提 取 分 离 及 其 清 除 自 由 基 的 活 性 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2009, 30(18): 192 195 [17] 薛 丁 萍, 魏 玉 西, 刘 淇, 刘 蕾. 浒 苔 多 糖 对 羟 自 由 基 的 清 除 作 用 研 究 [J]. 海 洋 科 学, 2010, 34(1): 44 47 [18] 丁 丽 君, 周 国 栋, 韩 山. 莲 子 水 溶 性 糖 的 提 取 及 其 对 自 由 基 清 除 能 力 的 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2002,23(8):252 254 [19] 高 翔, 武 佳 业, 张 直 峰, 闫 桂 琴. 翅 果 油 树 不 同 部 位 多 糖 含 量 及 抗 氧 化 活 性 比 较 [J]. 植 物 研 究, 2011, 31(3): 363 366 [20] 卞 云 云, 李 萍. 蒙 古 黄 芪 中 黄 酮 类 成 分 抗 超 氧 阴 离 子 活 性 研 究 及 构 效 关 系 分 析 [J]. 中 国 药 学 杂 志, 2008, 2(4):257 258 [21] 邓 胜 国, 邓 泽 元, 黄 丽. 荷 叶 黄 酮 体 外 抗 氧 化 活 性 的 研 究 [J]. 食 品 科 技,2006,(7): 274 276 [22] 刘 光 宪, 冯 健 雄, 王 辉, 祝 水 兰, 周 巾 英, 付 晓 记. 不 同 纯 化 方 法 对 花 生 多 糖 抗 氧 化 活 性 的 影 响 [ J]. 食 品 与 机 械, 2014,30 (1): 189 191 [23] Kishk Y F M, Al Sayed H M A. Free radical scavenging and antioxidative activities of some polysaccha rides in emulsions [ J]. LWT Food Science and Technology,2007,40(2): 270 277 [24] Lin H Y, Chou C C. Antioxidative activities of watersoluble disaccharide chitosan derivatives[ J]. Food Research International, 2004, 37(9): 883 889 [25] 俞 慧 红, 竺 巧 玲, 戴 飞. 多 糖 抗 氧 化 作 用 的 研 究 现 状 [J]. 食 品 研 究 与 开 发, 2008, 29(3): 172 175 [26] 蒋 剑 平, 徐 敏, 卢 烨 琳, 林 圣 云. 白 花 蛇 草 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 研 究 [J]. 中 华 中 医 药 学 刊, 2012, 30(5): 1076 1078 [27] 张 娜, 职 润, 郭 憬 憬, 王 迪, 梁 启 明, 逯 家 辉. 关 白 附 多 糖 的 提 取 及 其 抗 氧 化 性 研 究 [J]. 食 品 工 业 科 技, 2007, 28(1): 169 170 [28] 汪 财 生, 王 璐, 刘 丽 平, 李 彩 燕, 钱 国 英, 杨 义 右. 羊 栖 菜 岩 藻 黄 质 色 素 的 抗 氧 化 性 研 究 [ J]. 食 品 工 业 科 技, 2012, 23 (33): 125 128 [29] 朱 良, 张 杰 平, 王 一 飞. 繁 枝 蜈 蚣 藻 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2008, 29(3): 454 456 [30] 杨 君, 黄 芳 芳, 秦 敏 朴, 邵 平, 孙 培 龙. 裂 片 石 莼 硫 酸 酯 化 多 糖 制 备 及 抗 氧 化 活 性 的 研 究 [J]. 食 品 工 业, 2014, 35(11): 33 37

Journal of Nuclear Agricultural Sciences 2016,30(5):0920 ~ 0925 925 Comparison on Antioxidant Capacity of Polysaccharide Fraction From Sargassum fusiforme in vitro DING Haomiao 1,2 LI Weiqiang 1 WANG Caisheng 1 GU Xiaoxiao 1 XIE Yan 1 QIAN Guoying 1 WANG Zhonghua 1 ( 1 College of Biological and Environmental Sciences, Zhejiang Wanli University, Ningbo,Zhejiang 315100; 2 Collaborative Innovation Center for Zhejiang Marine High efficiency and Healthy Aquaculture, Ningbo,Zhejiang 315211) Abstract:The study aims to explore the antioxidant capacity of polysaccharide fraction from Sargassum fusiforme in vitro. Polysaccharide fractions with biological activity from Sargassum fusiforme were separated by DEAE 52, and the components polysaccharide were scanned by infrared spectral. The purified polysaccharides were evaluated on their antioxidant activities including DPPH assay, superoxide radical assay, hydroxyl assay, lipid peroxidation and reducing capacity assay. Gradient elution of 0 to 2M NaCl chromatography applied to non protein polysaccharides led to 3 major constituents, of which compounds SFPSⅠ(eluted by 0 5M NaCl) SFPSⅡ(eluted by 0 75M NaCl) SFPSⅢ(eluted by 1 0M NaCl) showed sugar characteristic absorption peaks in infrared spectrum and strong anti oxidation activity. SFPS Ⅲ had the best anti oxidation activity with DPPH IC 50 0 499μg, OH IC 50 0 48μg, O 2 IC 50 112 13μg respectively, strong reducibility, and its ability to resist lipid peroxidation outperformed reference substance BHT. The study laid theoretical foundation for the development of Sargassun Fusiforme Polysaccharides in natural antioxidants and functional foods. Keywords:Sargassun fusiforme, polysaccharides, DEAE 52, separation and purification, antioxidant capacity