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1 微 生 物 学 通 报 Microbiology China OCT 20, 2011, 38(10): by Institute of Microbiology, CAS 研 究 报 告 四 种 野 生 食 用 菌 粗 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 * 魏 磊 郑 朝 辉 侯 成 林 范 黎 ( 首 都 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 北 京 ) 摘 要 : 利 用 DPPH 自 由 基 清 除 法 羟 基 自 由 基 (OH ) 清 除 法 铁 离 子 鳌 合 能 力 及 测 定 还 原 能 力 等 方 法 对 鸡 油 菌 Cantharellus cibarius 变 绿 红 菇 Russula virescens 蜜 环 菌 Armillaria mellea 和 棕 灰 口 蘑 Tricholoma myomyces 等 4 种 食 用 菌 的 粗 多 糖 进 行 了 抗 氧 化 活 性 评 价 结 果 显 示, 4 种 真 菌 粗 多 糖 均 不 同 程 度 地 具 有 抗 氧 化 活 性 在 DPPH 自 由 基 清 除 试 验 中, 棕 灰 口 蘑 和 蜜 环 菌 表 现 出 很 强 的 活 性, 其 EC 50 值 分 别 为 1.35 g/l 1.53 g/l; 棕 灰 口 蘑 和 蜜 环 菌 对 羟 基 自 由 基 的 清 除 能 力 也 要 优 于 其 他 2 种 食 用 菌, 其 EC 50 值 分 别 为 0.65 g/l 0.78 g/l; 棕 灰 口 蘑 的 铁 离 子 螯 合 能 力 明 显 优 于 其 他 3 种 测 试 菌, 其 EC 50 值 为 1.69 g/l; 在 还 原 力 方 面 同 样 是 棕 灰 口 蘑 活 性 最 强, 蜜 环 菌 次 之, 其 EC 50 值 为 1.05 g/l 1.37 g/l 关 键 词 : 野 生 食 用 菌, 多 糖, 生 物 活 性, 自 由 基 Antioxidant activities of crude polysaccharides from four wild edible fungi WEI Lei ZHENG Zhao-Hui HOU Cheng-Lin FAN Li * (College of Life Sciences, Capital Normal University, Beijing , China) Abstract: The antioxidant activities in vitro of polysaccharides from Cantharellus cibarius, Russula virescens, Tricholoma myomyces and Armillaria mellea were evaluated by testing their DPPH radical scavenging activities, hydroxyl free radical scavenging activities, ferrous ion chelating ability and reducing activity. The results showed that the crude polysaccharides from T. myomyces and A. mellea had the most potent capacity for scavenging DPPH with EC 50 values reaching 1.35 g/l and 1.53 g/l, and they were superior to the other two fungi in the scavenging hydroxyl radical capacity, with EC 50 values reaching 0.65 g/l and 0.78 g/l, respectively. The polysaccharide from T. myomyces showed the most potent ferrous ion chelating ability with EC 50 values reaching 1.69 g/l. In respect to the potent capacity for reducing power, the polysaccharide from T. myomyces showed the most potent capacity with EC 50 values reaching 1.05 g/l, followed by that of A. mellea with EC 50 values reaching 1.37 g/l. 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (No ); 北 京 市 自 然 科 学 基 金 项 目 (No ) * 通 讯 作 者 :Tel: ; : [email protected] 收 稿 日 期 : ; 接 受 日 期 :

2 1534 微 生 物 学 通 报 2011, Vol.38, No.10 Keywords: Wild edible fungi, Polysaccharides, Bioactivity, Free radical 机 体 在 正 常 生 物 代 谢 过 程 中 会 产 生 超 氧 阴 离 子 (O 2 ) 过 氧 化 氢 (H 2 O 2 ) 羟 基 自 由 基 (OH ) 等 自 由 基, 对 脂 类 蛋 白 质 核 酸 造 成 损 害 [1], 引 发 机 体 衰 老 以 及 癌 症 动 脉 粥 样 硬 化 风 湿 性 关 节 炎 等 疾 病 [2] 研 究 发 现, 许 多 食 药 用 真 菌 都 具 有 各 种 生 理 活 性, 如 : 抗 癌 抗 氧 化 抗 炎 抗 菌 等 [3], 其 活 性 成 分 有 真 菌 多 糖 三 萜 类 化 合 物 腺 嘌 呤 核 苷 皂 甙 牛 磺 酸 甘 露 醇 多 肽 等 真 菌 多 糖 作 为 食 药 用 菌 产 生 的 最 重 要 的 生 物 活 性 成 分 之 一, 目 前 已 发 现 有 200 多 种, 是 分 子 生 物 学 医 学 食 品 科 学 等 热 门 领 域 研 究 的 一 类 新 兴 生 物 技 术 产 品 [4] 同 时, 其 中 抗 氧 化 活 性 可 能 与 菌 体 的 多 糖 含 量 有 密 切 关 系 [5 8] 本 实 验 选 取 的 4 种 真 菌 鸡 油 菌 Cantharellus cibarius Fr. 变 绿 红 菇 Russula virescens (Schaeff.) Fr. ( 俗 称 青 头 菌 ) 蜜 环 菌 Armillaria mellea (Vahl) P. Kumm. ( 俗 称 榛 蘑 ) 棕 灰 口 蘑 Tricholoma myomyces (Pers.) J. E. Lange ( 俗 称 青 蘑 ) 作 为 可 食 用 真 菌, 具 有 很 高 的 营 养 价 值 及 多 种 功 效 如 鸡 油 菌 含 丰 富 的 维 生 素 A β- 胡 萝 卜 素 和 角 黄 素 等 成 分 [9], 具 有 清 肝 明 目 利 肺 和 胃 益 肠 减 肥 美 容 和 抗 衰 老 等 功 效 [10], 为 全 球 六 大 著 名 菌 根 性 食 用 菌 之 一 ; 而 棕 灰 口 蘑 具 有 高 蛋 白 无 淀 粉 无 胆 固 醇 低 糖 低 脂 肪 以 及 维 生 素 氨 基 酸 矿 质 元 素 膳 食 纤 维 素 多 的 特 点 [11], 其 锌 含 量 高, 可 用 作 食 品 强 化 剂, 有 滋 阴 润 燥 补 虚 的 功 能, 适 用 于 瘦 弱 干 咳 食 欲 不 振 便 秘 等 病 症 [12] 并 且, 已 有 研 究 表 明 鸡 油 菌 多 糖 和 蜜 环 菌 多 糖 具 有 一 定 的 抗 氧 化 作 用 [7 8] 本 研 究 采 用 4 种 抗 氧 化 活 性 检 测 方 法 对 上 述 食 用 真 菌 粗 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 进 行 了 评 价, 旨 在 为 进 一 步 深 入 研 究 和 有 效 利 用 这 4 种 真 菌 积 累 数 据 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 野 生 的 鸡 油 菌 Cantharellus cibarius Fr. 变 绿 红 菇 Russula virescens (Schaeff.) Fr. 蜜 环 菌 Armillaria mellea (Vahl) P. Kumm. 棕 灰 口 蘑 Tricholoma myomyces (Pers.) J.E. Lange 子 实 体 均 购 自 云 南 当 地 农 贸 市 场, 由 首 都 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院 范 黎 老 师 鉴 定 1.2 试 剂 Ferrozine VC 均 购 自 Sigma 公 司 ; DPPH 自 由 基 VE EDTA 二 钠 盐 氯 化 亚 铁 碳 酸 钠 水 杨 酸 钠 硫 酸 亚 铁 过 氧 化 氢 乙 醇 甲 醇 等 购 自 北 京 化 工 厂 所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 1.3 仪 器 紫 外 分 光 光 度 计 (Lambda 35, PerkinElmer), 冷 冻 干 燥 仪 (Wizard 2.0, VirTis), 旋 转 蒸 发 仪 (Heizbad HB digit, Heidolph), 台 式 高 速 离 心 机 (Labway Science Rotina 35), 恒 温 水 浴 锅 (HW. SY21-K4 型, 北 京 长 风 仪 器 仪 表 公 司 ), 鼓 风 干 燥 箱 (ZRD-A7140 型, 上 海 智 城 分 析 仪 器 制 造 有 限 公 司 ), 循 环 水 式 多 用 真 空 泵 (SHB-B95 型, 河 南 巩 义 市 英 峪 予 华 仪 器 厂 ) 1.4 食 用 菌 粗 多 糖 提 取 将 供 试 4 种 真 菌 的 子 实 体 经 冷 冻 ( 45 C) 干 燥 后 粉 碎, 过 100 目 筛, 与 蒸 馏 水 按 固 液 比 1:15 (W/V) 的 比 例 混 匀, 于 95 C 回 流 提 取 2 h, 过 滤 滤 渣 同 上 重 复 提 取 1 次, 合 并 2 次 滤 液 滤 液 于 40 C 5 15 kpa 条 件 下 浓 缩, 得 水 提 浸 膏 用 4 倍 体 积 的 95% 乙 醇 沉 淀, 冻 干, 得 4 种 真 菌 的 粗 多 糖 粗 多 糖 得 率 = 粗 多 糖 重 量 / 原 材 料 重 量 100% 称 取 4 种 真 菌 的 粗 多 糖 各 0.2 g, 分 别 定 容 至 10 ml 蒸 馏 水 中, 得 到 母 液 (20 g/l), 4 C 保 存 备 用 种 食 用 菌 多 糖 抗 氧 化 活 性 的 测 定 DPPH 自 由 基 清 除 能 力 测 定 : DPPH 自 由 基 清 除 能 力 测 定 参 照 Blois 方 法 [13] 每 个 样 品 平 行 测 定 3 次, 取 其 平 均 值 以 VE 作 为 阳 性 对 照 各 真 菌 粗 多 糖 对 DPPH 自 由 基 的 清 除 率 根 据 下 面 公 式 计 算 : DPPH 自 由 基 清 除 率 (%)=[(A 0 A 1 )/A 0 ] 100 A 0 为 DPPH 溶 液 本 身 的 OD 值, A 1 为 加 有 样 品 或 者 阳 性 对 照 的 DPPH 溶 液 的 OD 值 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 测 定 : 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 测 定 参 照 Smirnff & Cumbes 方 法 [14] 每 个 样 品

3 魏 磊 等 : 四 种 野 生 食 用 菌 粗 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 1535 平 行 测 定 3 次, 取 其 平 均 值 以 蒸 馏 水 作 为 空 白 对 照, VC 作 为 阳 性 对 照 根 据 下 面 公 式 计 算 各 真 菌 粗 多 糖 对 羟 基 自 由 基 的 清 除 率 : 羟 基 自 由 基 清 除 率 (%)=[(A 0 A 1 )/A 0 ] 100 A 0 为 空 白 对 照 的 OD 值, A 1 为 加 有 样 品 或 者 阳 性 对 照 后 的 OD 值 铁 离 子 鳌 合 能 力 测 定 : 铁 离 子 (Fe 2+ ) 鳌 合 能 力 测 定 参 照 Decker & Welch 的 方 法 [15] 每 个 样 品 平 行 测 定 3 次, 取 其 平 均 值 以 蒸 馏 水 作 为 空 白 对 照, EDTA 二 钠 盐 作 为 阳 性 对 照 根 据 下 面 公 式 计 算 各 真 菌 粗 多 糖 的 铁 离 子 鳌 合 能 力 : 铁 离 子 鳌 合 能 力 (%)=[(A 0 A 1 )/A 0 ] 100 A 0 为 空 白 对 照 的 OD 值, A 1 为 加 有 样 品 或 者 阳 性 对 照 后 的 OD 值 还 原 能 力 测 定 : 还 原 能 力 ( 将 Fe 3+ 还 原 为 Fe 2+ ) 测 定 参 照 Yen & Chen 的 方 法 [16] OD 值 越 高, 说 明 反 应 物 的 还 原 性 越 强, 每 个 样 品 平 行 测 3 次, 取 其 平 均 值 用 VC 作 为 阳 性 对 照 EC 50 值 : EC 50 值 指 清 除 率 为 50% 时 所 需 样 品 的 浓 度, 是 评 价 真 菌 粗 多 糖 抗 氧 化 活 性 的 一 个 重 要 参 数 EC 50 值 越 低, 抗 氧 化 活 性 越 高 方 法 中 的 EC 50 值 分 别 指 当 DPPH 自 由 基 清 除 率 为 50% 时 样 品 的 浓 度 当 羟 基 自 由 基 清 除 率 为 50% 时 样 品 的 浓 度 当 铁 离 子 鳌 合 率 为 50% 时 样 品 的 浓 度, 以 及 还 原 能 力 实 验 中 700 nm 处 OD 值 为 0.5 时 样 品 的 浓 度 它 们 的 计 算 应 用 中 值 效 应 分 析 通 过 Calcusyn 软 件 完 成 1.6 统 计 分 析 实 验 数 据 采 用 单 向 方 差 分 析 法 进 行 检 验, 平 均 数 之 间 的 差 异 显 著 性 则 利 用 Duncan 多 重 比 较 法 进 行 判 断, 若 P<0.05, 则 认 为 差 异 显 著 2 结 果 与 分 析 2.1 多 糖 得 率 测 定 4 种 珍 稀 食 用 真 菌 粗 多 糖 得 率 的 测 定 结 果 ( 表 1) 表 明, 4 种 食 用 真 菌 的 粗 多 糖 得 率 由 高 到 低 依 次 为 : 棕 灰 口 蘑 鸡 油 菌 蜜 环 菌 变 绿 红 菇 供 试 样 品 Samples Table 1 表 1 供 试 4 种 野 生 食 用 真 菌 粗 多 糖 的 含 量 Extraction yield of the polysaccharides from four wild edible fungi 鸡 油 菌 Cantharellus cibarius 变 绿 红 菇 Russula virescens 蜜 环 菌 Armillaria mellea 棕 灰 口 蘑 Tricholoma myomyces 粗 多 糖 得 率 Extraction yield 13.48±0.24c 4.48±0.22a 5.00±0.18a 16.30±0.17b 注 : 每 个 值 均 被 表 示 为 平 均 数 ± 标 准 差 (n=3); 一 行 内 的 平 均 值 具 有 不 同 字 母 表 示 差 异 显 著 (P<0.05). Note: Each value is expressed as mean±standard deviation (n=3); Means with different letters within a row are significantly different (P<0.05). 2.2 DPPH 自 由 基 清 除 能 力 DPPH 自 由 基 被 广 泛 应 用 于 评 价 某 些 天 然 化 合 物 清 除 自 由 基 活 性 的 实 验 中 对 4 种 食 用 菌 粗 多 糖 的 DPPH 自 由 基 清 除 能 力 的 研 究 结 果 ( 图 1) 表 明, 4 种 食 用 菌 粗 多 糖 均 具 有 清 除 DPPH 自 由 基 的 活 性, 其 清 除 能 力 呈 现 出 剂 量 依 赖 性, 在 一 定 浓 度 范 围 内, 随 着 浓 度 的 增 加, 样 品 对 DPPH 的 清 除 率 也 随 之 增 加 在 浓 度 为 5 g/l 时, 棕 灰 口 蘑 的 清 除 率 就 达 到 了 89% 在 浓 度 为 20 g/l 时, 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 DPPH 自 由 基 清 除 能 力 都 达 到 了 90% 以 上 EC 50 值 ( 表 2) 也 显 示 上 述 类 似 的 结 果 棕 灰 口 蘑 粗 多 糖 的 EC 50 值 最 低 (1.35 g/l), 表 明 其 DPPH 自 由 基 清 除 能 力 最 好 ; 其 次 是 蜜 环 菌 粗 多 糖 和 变 绿 红 图 1 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 DPPH 自 由 基 清 除 活 性 Fig. 1 DPPH radical scavenging activities of four fungi polysaccharides

4 1536 微 生 物 学 通 报 2011, Vol.38, No.10 Table 2 表 2 供 试 食 用 菌 多 糖 的 自 由 基 清 除 和 铁 离 子 螯 合 以 及 还 原 能 力 的 EC 50 值 EC 50 values obtained in the different antioxidant activity assays (radicals scavenging, ferrous ion chelating and reducing power assays) of the polysaccharides from fungi 样 品 / 对 照 Samples/Positive controls 鸡 油 菌 Cantharellus cibarius 变 绿 红 菇 Russula virescens 棕 灰 口 蘑 Tricholoma myomyces 蜜 环 菌 Armillaria mellea DPPH 自 由 基 清 除 能 力 DPPH radicals (g/l) 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 Hydroxyl radicals (g/l) 铁 离 子 螯 合 能 力 Ferrous ions (g/l) 还 原 能 力 Reducing power (g/l) 3.64±0.157e 1.12±0.015d 3.22±0.034b 4.08±0.007c 2.43±0.045d 1.21±0.011e 3.79±0.084c 3.02±0.067b 1.35±0.020b 0.65±0.021b 1.69±0.048a 1.05±0.019a 1.53±0.072c 0.78±0.018c 3.41±0.079b 1.37±0.086a VE 0.19±0.032a ND ND ND EDTA ND ND <0.10 ND VC ND 0.23±0.020a ND <0.100 注 : EC 50 值 : 分 别 指 DPPH 清 除 率 为 50% 时 对 应 的 样 品 浓 度, 羟 基 自 由 基 清 除 率 为 50% 时 对 应 的 样 品 浓 度, 铁 离 子 螯 合 能 力 为 50% 时 对 应 的 样 品 浓 度, 还 原 能 力 试 验 中 700 nm 处 OD 值 为 0.5 时 对 应 的 样 品 的 浓 度 ; 每 个 值 均 被 表 示 为 平 均 数 ± 标 准 差 (n=3); 一 列 内 的 平 均 值 具 有 不 同 字 母 表 示 差 异 显 著 (P<0.05); ND: 未 进 行 实 验. Note: EC 50 value: the effective concentration at which DPPH radicals were scavenged by 50%, hydroxyl radicals were scavenged by 50%, ferrous ions were chelated by 50%, and OD were 0.5 at 700 nm; Each value is expressed as mean±standard deviation (n=3); Means with different letters within a column are significantly different (P<0.05); ND: Not done. 菇 粗 多 糖, EC 50 值 分 别 为 1.53 g/l 和 2.43 g/l; 鸡 油 菌 粗 多 糖 的 EC 50 值 最 高, 为 3.64 g/l, 其 DPPH 清 除 能 力 最 低 2.3 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 羟 基 自 由 基 是 已 知 活 性 最 强 的 活 性 氧 自 由 基, 可 严 重 损 害 生 物 体 内 相 邻 的 生 物 分 子 ( 如 DNA 蛋 白 质 ), 引 起 细 胞 损 伤 因 此, 清 除 羟 基 自 由 基 可 能 是 生 物 体 抵 御 疾 病 的 最 有 效 方 式 之 一 [17] 研 究 结 果 ( 图 2) 表 明, 各 样 品 对 羟 基 自 由 基 均 有 很 好 的 清 除 作 用 10 g/l 时, 清 除 率 达 到 最 高, 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 都 达 到 了 95% 以 上, 鸡 油 菌 更 是 达 到 了 99.60%, 与 作 为 阳 性 对 照 的 VC 相 当 浓 度 为 20 g/l 时, 除 了 变 绿 红 菇 粗 多 糖 本 身 样 品 颜 色 的 影 响 使 得 清 除 率 略 有 下 降 外, 其 他 样 品 的 清 除 率 基 本 没 有 发 生 变 化 EC 50 值 计 算 结 果 ( 表 2) 也 表 明, 鸡 油 菌 变 绿 红 菇 棕 灰 口 蘑 和 蜜 环 菌 的 粗 多 糖 对 羟 基 自 由 基 有 较 好 的 清 除 活 性, EC 50 值 分 别 为 和 0.78 g/l, 强 弱 顺 序 为 : 棕 灰 口 蘑 > 蜜 环 菌 > 鸡 油 菌 > 变 绿 红 菇 图 2 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 羟 基 自 由 基 清 除 活 性 Fig. 2 Hydroxyl radical scavenging activities of four fungi polysaccharides 2.4 铁 离 子 鳌 合 能 力 铁 离 子 在 生 物 体 系 内 能 够 通 过 Fenton 反 应 引 发 脂 质 过 氧 化, 并 导 致 羟 基 自 由 基 的 产 生 此 外, 普 遍 存 在 于 食 品 中 的 铁 离 子 也 通 常 被 认 为 是 强 有 效 的 促 氧 化 剂 [17] 因 此, 铁 离 子 鳌 合 能 力 就 成 为 评 估 各 种 植 物 及 真 菌 抗 氧 化 能 力 的 一 项 指 标 本 试 验 的 研 究

5 魏 磊 等 : 四 种 野 生 食 用 菌 粗 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 1537 结 果 ( 图 3) 表 明, 随 着 样 品 浓 度 的 增 加, 各 样 品 的 铁 离 子 鳌 合 能 力 也 随 之 增 加 在 浓 度 10 g/l 时, 4 种 食 用 菌 粗 多 糖 的 铁 离 子 鳌 合 能 力 大 小 依 次 为 : 棕 灰 口 蘑 变 绿 红 菇 鸡 油 菌 蜜 环 菌 而 浓 度 为 20 g/l 时, 蜜 环 菌 的 螯 合 能 力 跃 居 至 第 1 位 (99.76%), 其 次 为 棕 灰 口 蘑 (87.46%) 变 绿 红 菇 (77.71%) 和 鸡 油 菌 (73.70%) 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 铁 离 子 鳌 合 能 力 与 作 为 对 照 的 EDTA 有 一 定 的 差 距 图 4 Fig. 4 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 还 原 能 力 Reducing activity of four fungi polysaccharides (4.08 g/l), 与 图 4 反 映 的 结 果 完 全 一 致, 进 一 步 证 明 了 EC 50 值 是 评 价 真 菌 粗 多 糖 抗 氧 化 活 性 的 一 个 很 好 的 参 数 图 3 4 种 真 菌 多 糖 的 金 属 铁 离 子 螯 合 能 力 Fig. 3 Ferrous ion chelating ability of four fungi polysaccharides 4 种 食 用 菌 粗 多 糖 的 铁 离 子 鳌 合 能 力 的 EC 50 值 ( 表 2) 体 现 其 铁 离 子 鳌 合 力 大 小 的 顺 序 为 : 棕 灰 口 蘑 (1.69 g/l)> 鸡 油 菌 (3.22 g/l)> 蜜 环 菌 (3.41 g/l)> 变 绿 红 菇 (3.49 g/l) 2.5 还 原 能 力 还 原 能 力 是 衡 量 抗 氧 化 能 力 的 一 个 重 要 指 标, 也 是 抗 氧 化 机 理 之 一 抗 氧 化 剂 通 过 自 身 的 抗 氧 化 作 用 给 出 电 子 而 清 除 自 由 基, 还 原 力 越 强, 抗 氧 化 性 越 强 因 此, 可 通 过 测 定 还 原 力 来 说 明 其 抗 氧 化 活 性 的 大 小 [18] 对 4 种 真 菌 粗 多 糖 的 研 究 结 果 ( 图 4) 表 明, 4 种 真 菌 的 还 原 力 呈 现 剂 量 依 赖 性, 浓 度 越 大, 还 原 能 力 越 高 按 还 原 力 由 高 到 低 依 次 为 : 棕 灰 口 蘑 蜜 环 菌 变 绿 红 菇 鸡 油 菌 EC 50 值 计 算 结 果 ( 表 2) 也 表 明, 鸡 油 菌 变 绿 红 菇 棕 灰 口 蘑 和 蜜 环 菌 的 粗 多 糖 具 有 很 好 的 还 原 能 力, 还 原 能 力 的 强 弱 顺 序 为 : 棕 灰 口 蘑 (1.05 g/l)> 蜜 环 菌 (1.37 g/l)> 变 绿 红 菇 (3.02 g/l)> 鸡 油 菌 3 讨 论 多 糖 类 物 质 在 食 用 菌 中 普 遍 存 在, 食 用 菌 多 糖 作 为 保 健 食 品 和 药 品 已 经 逐 渐 为 人 们 所 认 识, 尤 其 在 生 物 活 性 方 面, 近 年 来 很 受 重 视 越 来 越 多 的 研 究 发 现, 许 多 食 用 菌 多 糖 具 有 清 除 自 由 基 提 高 抗 氧 化 酶 活 性 和 抑 制 脂 质 过 氧 化 的 活 性, 起 到 保 护 生 物 膜 和 延 缓 衰 老 的 作 用 [19] 有 关 真 菌 多 糖 清 除 DPPH 自 由 基 的 研 究 有 较 多 的 报 道 [20 21] 本 文 研 究 的 4 种 野 生 食 用 菌 粗 多 糖 清 除 DPPH 自 由 基 能 力 的 EC 50 值 ( 表 2) 均 远 远 低 于 野 蘑 菇 Agaricus arvensis Schaeff. 双 孢 蘑 菇 A. bisporus (J. E. Lange) Imbach 罗 马 尼 斯 蘑 菇 A. romagnesii Wass 林 地 蘑 菇 A. silvaticus Schaeff. 白 林 地 蘑 菇 A. silvicola (Vitt.) Sacc. [22] 和 松 杉 灵 芝 Ganoderma tsugae Murrill [23], 显 示 了 较 强 的 清 除 DPPH 自 由 基 活 性 金 顶 侧 耳 P. citrinopileatus Singer 毛 头 鬼 伞 Coprinus comatus (O. F. Müll.) Pers. 和 姬 菇 P. cornucopiae (Paulet) Rolland [24] 粗 多 糖 的 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 的 EC 50 值 均 高 于 本 文 研 究 的 4 种 食 用 菌, 表

6 1538 微 生 物 学 通 报 2011, Vol.38, No.10 明 这 4 种 食 用 真 菌 都 具 有 较 好 的 羟 基 自 由 基 清 除 能 力, 能 有 效 地 阻 止 羟 基 自 由 基 对 人 体 的 氧 化 损 伤 [7] 同 时, 进 一 步 证 实 了 罗 城 等 对 鸡 油 菌 粗 多 糖 的 羟 基 自 由 基 清 除 能 力 的 研 究 结 果 ( 其 EC 50 值 为 [8] 1.12 g/l, 与 本 文 的 结 果 一 致 ) 杨 立 红 等 采 用 氧 自 由 基 清 除 法 对 野 生 蜜 环 菌 ( 榛 蘑 ) 粗 多 糖 的 抗 氧 化 活 性 进 行 了 评 价, 试 验 结 果 表 明 蜜 环 菌 粗 多 糖 具 有 一 定 的 氧 自 由 基 清 除 作 用, 但 未 计 算 其 EC 50 值, 我 们 的 研 究 结 果 进 一 步 证 实 蜜 环 菌 具 有 较 强 的 清 除 自 由 基 能 力 在 铁 离 子 螯 合 能 力 方 面, 1 g/l 的 姬 松 茸 A. blazei Murrill 和 双 孢 菇 粗 粗 多 糖 的 铁 离 子 鳌 合 能 力 分 别 为 37.2% [25] 和 85% [26], 而 本 研 究 中 4 种 真 菌 粗 多 糖 在 相 同 浓 度 下 除 棕 灰 口 蘑 粗 多 糖 (38.5%) 略 高 于 姬 松 茸 外, 其 余 3 种 真 菌 都 要 小 于 姬 松 茸 和 双 孢 菇, 但 在 20 g/l 时, 4 种 食 用 菌 粗 多 糖 的 铁 离 子 螯 合 能 力 都 达 到 了 80% 以 上, 蜜 环 菌 粗 多 糖 更 是 接 近 100%, 显 示 出 了 良 好 的 铁 离 子 螯 合 能 力 姬 松 茸 双 孢 蘑 菇 和 树 舌 [Ganoderma applanatum (Pers.) Pat.] 等 3 种 食 用 菌 的 还 原 力, 在 样 品 浓 度 为 1 g/l 时, 与 本 文 4 种 食 用 菌 的 还 原 力 相 比 较, 其 还 原 力 顺 序 为, 双 孢 蘑 菇 (0.41A)> 棕 灰 口 蘑 (0.40A)> 树 舌 (0.38A)> 变 绿 红 菇 (0.32A)> 蜜 环 菌 (0.29A)> 鸡 油 菌 (0.19A)> 姬 松 茸 (0.12A) [25 27] 此 外, 许 多 食 用 菌 还 原 力 的 EC 50 值 也 多 有 报 道, 如 野 蘑 菇 双 孢 蘑 菇 罗 马 尼 斯 蘑 菇 林 地 蘑 菇 白 林 地 蘑 菇 等 [21], 本 文 研 究 的 4 种 野 生 食 用 菌 中, 棕 灰 口 蘑 和 蜜 环 菌 的 EC 50 值 均 小 于 上 述 食 用 菌, 变 绿 红 菇 的 EC 50 值 小 于 野 蘑 菇 双 孢 蘑 菇, 大 于 其 他 食 用 菌, [7] 而 鸡 油 菌 仅 小 于 野 蘑 菇 罗 城 等 也 指 出 鸡 油 菌 粗 多 糖 具 有 一 定 的 还 原 能 力, 但 未 计 算 其 EC 50 值 上 述 结 果 表 明 本 文 研 究 的 4 种 食 用 菌 具 有 较 好 的 还 原 力, 棕 灰 口 蘑 的 表 现 尤 其 出 色 综 上 可 知, 4 种 供 试 的 野 生 食 用 真 菌 子 实 体 的 粗 多 糖 都 具 有 较 明 显 的 抗 氧 化 活 性, 今 后 有 必 要 对 其 多 糖 进 行 进 一 步 的 分 离 纯 化, 获 取 其 中 的 有 效 活 性 物 质, 进 一 步 研 究 其 抗 氧 化 机 制, 为 食 药 用 真 菌 的 基 础 研 究 和 综 合 利 用 积 累 数 据 参 考 文 献 [1] Halliwell B, Murcia MA, Chirico S, et al. Free radicals and antioxidants in food an in vivo: what they do and how they work[j]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 1995, 35(1/2): [2] Lee J, Koo N, Min DB. Reactive oxygen species, aging, and antioxidative nutraceuticals[j]. Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 2004, 3(1): [3] Longvah T, Deosthale YG. Compositional and nutritional studies on edible wild mushroom from northeast India[J]. Food Chemistry, 1998, 63(3): [4] 杜 巍, 李 元 瑞, 袁 静. 食 药 用 菌 多 糖 生 物 活 性 与 结 构 的 关 系 [J]. 中 国 食 用 菌, 2001, 21(2): [5] 钟 耀 广, 林 楠, 王 淑 琴, 等. 香 菇 多 糖 的 抗 氧 化 性 能 与 抑 菌 作 用 研 究 [J]. 食 品 科 技, 2007(7): [6] Pramanik M, Chakraborty I. Structural analysis of a water-soluble glucan (Fr.I) of an edible mushroom, Pleurotus sajor-caju[j]. Carbohydrate Research, 2007, 342(17): [7] 罗 成, 周 达, 鲁 晓 翔. 鸡 油 菌 多 糖 的 提 取 及 其 抗 氧 化 研 究 [J]. 食 品 研 究 与 开 发, 2010, 31(7): [8] 杨 立 红, 黄 清 荣, 冯 培 勇, 等. 榛 蘑 多 糖 的 分 离 鉴 定 及 其 清 除 氧 自 由 基 作 用 研 究 [J]. 食 品 科 学, 2007, 28(1): [9] 田 霄 飞, 刘 培 贵, 邵 士 成. 鸡 油 菌 属 的 研 究 概 况 与 展 望 [J]. 微 生 物 学 通 报, 2009, 36(10): [10] 张 传 利, 杨 发 军, 桂 雪 梅, 等. 鸡 油 菌 研 究 概 况 与 展 望 [J]. 热 带 农 业 科 技, 2010, 33(3): [11] 宋 锡 全, 王 素 英. 黔 产 棕 灰 口 蘑 营 养 成 分 分 析 [J]. 贵 州 师 范 大 学 学 报 : 自 然 科 学 版, 2009, 27(2): 1 4. [12] 关 改 平, 何 永 锋. 凤 县 棕 灰 口 蘑 的 生 物 学 特 性 [J]. 中 国 食 用 菌, 1993(6): 26. [13] Blois MS. Antioxidant determinations by the use of a stable free radical[j]. Nature, 2002, 181(4617): [14] Smirnoff N, Cumbes QJ. Hydroxyl radical scavenging activity of compatible solutes[j]. Phytochemistry, 1989, 28(4): [15] Decker EA, Welch B. Role of ferritin as a lipid oxidation catalyst in muscle food[j]. J Agric Food Chem, 1990, 38(3): [16] Yen GC, Chen HY. Antioxidant activity of various tea extracts in relation to their antimutagenicity[j]. J Agric

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