有 机 化 学 DI: 10.6023/cjoc1108081 Chinese Journal of rganic Chemistry 新 型 一 枝 蒿 酮 酸 异 噁 唑 衍 生 物 的 合 成 及 其 抗 A, B 型 流 感 病 毒 活 性 研 究 赵 江 瑜 a,b 阿 吉 艾 克 拜 尔 艾 萨 *,a ( a 中 国 科 学 院 新 疆 理 化 技 术 研 究 所 干 旱 区 植 物 资 源 化 学 重 点 实 验 室 乌 鲁 木 齐 830011) ( b 中 国 科 学 院 研 究 生 院 北 京 100039) 摘 要 为 了 提 高 一 枝 蒿 酮 酸 的 生 物 活 性, 以 一 枝 蒿 酮 酸 和 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 为 原 料, 在 偶 合 试 剂 DCC, HBt/ DMAP 的 作 用 下, 合 成 了 6 个 未 见 文 献 报 道 的 含 异 噁 唑 的 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 衍 生 物 3a~3f. 所 合 成 的 化 合 物 均 经 过 IR, MR, 13 C MR, ESI-MS 等 分 析 方 法 表 征 及 初 步 体 外 抗 A (H32, H11) 型 和 B 型 流 感 病 毒 活 性 研 究. 初 步 实 验 结 果 表 明 : 化 合 物 3c 同 时 具 有 抗 A (H32) 型 和 B 型 流 感 病 毒 活 性, 化 合 物 3c 和 3e 表 现 出 比 母 体 化 合 物 强 的 抗 B 型 流 感 病 毒 活 性. 关 键 词 一 枝 蒿 酮 酸 ; 异 噁 唑 衍 生 物 ; 流 感 病 毒 ; 活 性 研 究 Synthesis of ovel Isoxazole Contained Rupestonic Acid Derivatives and in vitro Inhibitory Activity against Influenza Viruses A and B Zhao, Jiangyu a,b Aisa, Haji Akber*,a ( a Key Laboratory of Chemistry of Plant Resources in Arid Region, Xinjiang Technical Institute of Physics and Chemistry, Chinese Academy of Sciences, Urumqi 830011) ( b Graduate School of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039) Abstract To improve biological activity of rupestonic acid, six rupestonic acid amide derivatives containing isoxazole were synthesized in the presence of DCC, HBt/DMAP using the rupestonic acid and 3-aryl-5-isoxazole-methylamine as the starting materials. The synthesized compounds 3a~3f were confirmed by the methods of MR, 13 C MR, IR, ESI-MS techniques and preliminarily assayed in vitro against influenza viruses A and B. The results showed that compound 3c showed better activity against both influenza viruses A (H32) and B, and compounds 3c and 3e had the higher inhibition against influenza B virus than the parent compound 1. Keywords rupestonic acid; isoxazole derivative; influenza virus; inhibitory activity 流 感 是 流 行 性 感 冒 的 简 称, 是 由 流 感 病 毒 引 起 的 急 性 呼 吸 道 疾 病, 是 一 种 造 成 人 类 及 动 物 患 流 行 性 感 冒 的 单 链 RA 病 毒, 具 有 流 行 面 广 传 染 性 强 发 病 率 高 等 特 点, 在 儿 童 老 人 和 高 危 人 群 中 的 死 亡 率 较 高. 仅 20 世 纪 就 有 5 次 大 规 模 的 流 感 疫 情 爆 发, 最 大 规 模 的 一 次 流 感 大 流 行 发 生 在 1918~1919 年, 共 造 成 2100~ 4000 万 人 死 亡, 超 过 第 一 次 世 界 大 战 的 死 亡 人 数. 据 不 完 全 统 计, 北 半 球 每 年 约 有 1 亿 人 感 染 流 感, 500 万 次 就 诊, 30 万 次 住 院, 1 万 人 死 于 流 感, 每 年 经 济 损 失 超 过 100 亿 美 元. 目 前 应 对 流 感 病 毒 的 主 要 方 式 是 疫 苗 和 药 物 治 疗. 过 去 几 十 年 的 应 用 充 分 证 明 了 接 种 流 感 疫 苗 对 保 护 健 康 起 到 很 大 作 用, 疫 苗 对 健 康 成 年 人 的 保 护 率 高 达 80%~90%, 但 是 对 老 年 人 和 婴 儿 的 保 护 作 用 很 小, 而 且 疫 苗 预 防 的 有 效 性 是 建 立 在 疫 苗 的 病 毒 株 与 正 在 流 行 的 流 感 病 毒 株 相 似 的 基 础 上 的 [1], 因 而 疫 苗 的 作 用 就 非 常 有 限 ; 而 seltamivir( 中 文 名 : 达 菲 ) 作 为 第 一 个 口 服 有 效 的 流 感 病 毒 神 经 氨 酸 酶 (A) 抑 制 剂, 在 治 疗 H51 禽 流 感 和 H11 甲 型 流 感 病 毒 过 程 中 发 挥 着 非 常 重 要 的 作 用 [2,3] [4], 但 是 最 近 Mai 等 研 究 发 现 禽 流 感 病 毒 H51 对 达 菲 产 生 了 一 定 的 耐 药 性. 因 此 研 究 新 的 预 防 和 治 疗 流 感 病 毒 的 有 效 药 物, 尤 其 是 从 天 然 产 物 中 发 现 * E-mail: haji@ms.xjb.ac.cn Received August 8, 2011; revised September 14, 2011; accepted ovember 1, 2011. Project supported by the High-tech Research and Development Program of Xinjiang (o. 200910105), the ational atural Science Foundation of China (o. 20872174) and the China ational Science Fund for Distinguished Young Scholars (o. 30925045). 新 疆 自 治 区 高 技 术 研 究 发 展 计 划 (o. 200910105) 国 家 自 然 科 学 基 金 (o. 20872174) 和 国 家 杰 出 青 年 基 金 科 学 (o. 30925045) 资 助 项 目. Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~337 2012 Chinese Chemical Society & SIC, CAS http://sioc-journal.cn/ 333
有 机 化 学 新 的 抗 病 毒 先 导 化 合 物 显 得 尤 为 重 要. 新 疆 一 枝 蒿 (Artemisia rupestris L.) 在 民 间 用 药 历 史 悠 久, 具 有 抗 炎 抗 过 敏 [5~7] 增 强 免 疫 力 解 蛇 毒 [8] 保 肝 等 活 性. 目 前 已 有 以 新 疆 一 枝 蒿 为 主 要 成 分 的 复 方 制 剂 复 方 一 枝 蒿 颗 粒 用 于 临 床. 一 枝 蒿 酮 酸 (Rupestonic acid, 1) [9] 是 从 新 疆 一 枝 蒿 中 分 离 出 的 一 种 多 官 能 团 的 单 体 倍 半 萜 类 化 合 物 [10], 在 新 疆 一 枝 蒿 中 [11~13] 的 含 量 高 达 1% 左 右. 雍 建 平 等 率 先 对 其 进 行 结 构 改 造, 合 成 了 70 多 个 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 和 酯 类 衍 生 物, 并 对 它 们 进 行 了 初 步 的 体 外 抗 流 感 病 毒 和 单 纯 的 I, II 型 疱 疹 病 毒 活 性 测 试. 结 果 发 现 4- 叔 丁 基 苯 基 一 枝 蒿 酮 酸 对 叔 丁 基 苯 酯 对 甲 型 流 感 病 毒 具 有 明 显 的 抑 制 活 性 (IC 50 =0.5 μmol L -1 ). 在 以 上 工 作 的 基 础 上, 为 了 提 高 一 枝 蒿 酮 酸 的 生 物 活 性, 我 们 继 续 对 一 枝 蒿 酮 酸 进 行 修 饰, 以 期 发 现 活 性 高 副 作 用 低 的 新 型 抗 流 感 病 毒 先 导 化 合 物. 本 研 究 中, 我 们 首 次 以 一 枝 蒿 酮 酸 和 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 为 原 料, 在 偶 合 试 剂 DCC, HBt/DMAP 的 作 用 下, 合 成 了 6 个 未 见 文 献 报 道 的 一 枝 蒿 酮 酸 异 噁 唑 酰 胺 类 衍 生 物 3a~3f. 通 过 IR, MR, 13 C MR, ESI-MS 对 所 合 成 的 目 标 化 合 物 进 行 了 结 构 表 征, 并 初 步 测 定 了 它 们 的 体 外 抗 A 型 (H32, H11) 和 B 型 流 感 病 毒 活 性. 合 成 路 线 见 Scheme 1. 1 结 果 与 讨 论 1.1 目 标 化 合 物 的 合 成 与 表 征 本 研 究 以 取 代 苯 甲 醛 为 起 始 原 料 经 过 一 系 列 反 应, 合 成 了 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 衍 生 物 2a~2f, 再 在 偶 合 试 剂 DCC, HBt/DMAP 的 作 用 下, 与 一 枝 蒿 酮 酸 (1) 反 应 得 到 了 6 个 新 型 的 含 异 噁 唑 的 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 类 衍 生 物 3a~3f. 并 通 过 IR, MR, 13 C MR, ESI-MS 等 分 析 方 法 对 所 合 成 的 化 合 物 进 行 了 表 征. 在 IR 谱 图 中, 所 有 的 化 合 物 在 3300 cm -1 出 现 了 酰 胺 H 键 的 吸 收 峰, 在 1690 cm -1 左 右 出 现 了 共 轭 双 键 的 羰 基 峰, 在 1650 cm -1 左 右 出 现 了 酰 胺 键 中 羰 基 的 吸 收 峰 ; 在 MR 谱 图 中, 在 δ 5.6 和 6.2 左 右 出 现 了 倍 半 萜 骨 架 中 端 烯 中 的 两 个 质 子 信 号 ; 在 ESI-MS 谱 图 中, 所 有 的 化 合 物 均 出 现 了 [M+1] + 峰 和 [M+a] + 峰. 1.2 体 外 抗 病 毒 活 性 研 究 对 所 合 成 的 含 异 噁 唑 的 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 类 衍 生 物 3a~3f 进 行 了 初 步 的 体 外 抗 流 感 病 毒 活 性 测 试. 活 性 数 据 见 表 1 和 表 2. 从 表 1 可 以 看 出, 化 合 物 3c 显 示 出 较 强 的 抗 A (H32) 型 流 感 病 毒 活 性, 其 IC 50 值 达 到 了 1.09 μmol L -1, 具 有 和 阳 性 对 照 药 seltamivir 相 当 的 IC 50 值 (1.1 μmol L -1 ). 化 合 物 3c 和 3e 对 B 型 流 感 病 毒 均 显 示 出 比 母 体 化 合 物 强 的 生 物 活 性, IC 50 值 分 别 为 3.25 和 9.5 μmol L -1. 活 性 测 试 结 果 表 明 : 在 一 枝 蒿 酮 酸 分 子 中 引 入 异 噁 唑 环 后, 和 母 体 化 合 物 相 比, 在 一 定 程 度 上 提 高 了 抗 流 感 病 毒 的 活 性, 但 同 时 化 合 物 本 身 的 毒 性 也 相 对 较 高 ; 当 苯 环 上 的 氢 原 子 被 电 负 性 大 的 氟 原 子 取 代 时, 其 抗 流 感 病 毒 活 性 和 母 体 化 合 物 一 枝 蒿 酮 酸 相 比, 活 性 增 强 而 且 毒 性 增 大 ; 但 对 于 电 负 性 和 体 积 适 中 的 氯 原 子 而 言, 其 抗 流 感 病 毒 活 性 与 含 氟 原 子 的 一 枝 蒿 酮 酸 衍 生 物 相 比, 活 性 减 弱 而 且 毒 性 减 小 ; 对 于 苯 环 上 不 同 位 置 被 供 电 子 基 团 甲 基 取 代 的 化 合 物 3d 和 3e, 活 性 与 甲 基 在 苯 环 上 的 位 置 有 着 紧 密 的 联 系, 当 甲 基 位 于 苯 环 的 邻 位 时, 其 活 性 相 比 于 甲 基 位 于 对 位 的 化 合 物 毒 性 减 弱 而 且 活 性 也 减 弱. 化 合 物 3c 可 作 为 抗 流 感 病 毒 的 先 导 化 合 物. 此 化 合 物 正 进 行 动 物 试 验. (1) CS R H 2 H, a 2 C 3 R (2) H (3) (CH 3 CH 2 ) 3 R CH CH 3 H/H 2 CH= H DCM, r.t. to reflux H CH 3 S 2 Cl (CH 3 CH 2 ) 3 R a 3 R Zn/H 4 Cl R Ms 3 CH 3 CH 2 H/H 2 H 2 2a~2f H CH 3 + 2a~2f CH DCC/DMAP HBt H CH 3 CH R 1 3a~3f 3a: R = H 3b: R = p-cl 3c: R = p-f 3d: R = o-ch 3 3e: R = p-ch 3 3f: R = p-ch 3 Scheme 1 334 http://sioc-journal.cn/ 2012 Chinese Chemical Society & SIC, CAS Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~337
Chinese Journal of rganic Chemistry Table 1 表 1 化 合 物 3a~3f 抑 制 A (H32 和 H11) 型 流 感 病 毒 活 性 测 试 结 果 The results of the rupestonic acid derivatives 3a~3f against influenza A (H32 and H11) viruses Against influenza H32 virus Against influenza H11 virus Compd. TC 50 /(μmol L -1 ) a IC 50 /(μmol L -1 ) b SI c IC 50 /(μmol L -1 ) b SI c 1 d 4653 25.77 180.6 >1344 e 3a 30.6 10.2 3.00 27.5 1.11 3b 107.9 >9.4 e >0.94 e 3c 22.7 1.09 20.83 >0.97 e 3d 768.0 >85.3 e 230.4 3.33 3e 66.22 >9.5 e >0.94 e 3f 6.8 >3.3 e >3.3 e Ribavirin 1278 3.88 329.4 1.92 665.6 seltamivir f 1260 1.11 1135.1 15.5 81.29 a 50% cytotoxic concentration; b 50% virus-inhibitory concentration, determined by CPE inhibition assay; c selectivity index (TC 50 /IC 50 ); d parent compound; e the SI can not be calculated, since the highest concentration tested was less than IC 50 ; f the positive drug, orally more active for anti-influenza virus in clinical to today. 表 2 化 合 物 3a~3f 抑 制 B 型 流 感 病 毒 活 性 测 试 结 果 Table 2 The results of the rupestonic acid derivatives 3a~3f against influenza B virus Against influenza B virus Compd. TC 50 /(μmol L -1 ) a IC 50 /(μmol L -1 ) b SI c 1 d >4032 >4032 e 3a 30.6 >10.2 e 3b 107.9 >9.4 e 3c 22.7 3.25 6.99 3d 768.0 >85.3 e 3e 66.22 9.5 6.98 3f 6.8 >3.3 e Ribavirin 1278 14.7 86.9 seltamivir f 1260 >500 e a 50% cytotoxic concentration; b 50% virus-inhibitory concentration, determined by CPE inhibition assay c ; selectivity index (TC 50 /IC 50 ); d parent compound; e the SI can not be calculated, since the highest concentration tested was less than the IC 50 ; f the positive drug, orally more active for anti-influenza virus in clinical to today. 2 实 验 部 分 2.1 仪 器 与 试 剂 X-4 数 字 显 示 显 微 熔 点 测 定 仪 ( 北 京 泰 克 仪 器 有 限 公 司 生 产 ); Varian Inova-400 核 磁 共 振 仪 ; Shimadzu FTIR-8400S 红 外 光 谱 仪 ( 日 本 岛 津 制 作 所 生 产 ); 质 谱 在 HP1100LC/MS(ESI 源 ) 上 测 定. 一 枝 蒿 酮 酸 [ 自 己 分 离 制 备, HPLC 纯 度 : 98%; 其 它 试 剂 均 为 市 售 的 分 析 纯, 在 使 用 前 未 进 一 步 纯 化, 四 氢 呋 喃 (THF) 使 用 前 进 行 严 格 的 无 水 处 理. 2.2 化 合 物 的 合 成 与 表 征 2.2.1 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 2a~2f 的 合 成 合 成 方 法 参 考 文 献 [14, 15]. 2.2.2 -[(3- 取 代 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 衍 生 物 3a~3f 合 成 的 一 般 过 程 将 0.125 g (0.50 mmol) 一 枝 蒿 酮 酸 和 0.11 g (0.55 mmo1),- 二 环 己 基 碳 二 酰 亚 胺 (DCC) 溶 解 于 8 ml 干 燥 的 四 氢 呋 喃 中, 室 温 搅 拌 10 min 后, 将 0.08 g (0.60 mmo1) 的 HBt 和 0.07 g (0.55 mmol) DMAP 溶 解 在 3 ml 干 燥 的 四 氢 呋 喃 中, 冰 浴 搅 拌 下 加 入 上 述 体 系 中, 搅 拌 30 min 后, 将 0.75 mmol 3- 取 代 苯 基 -5- 氨 甲 基 - 异 噁 唑 2a~2f 加 入 反 应 体 系 中, 冰 浴 搅 拌 30 min 后, 自 然 升 至 室 温 继 续 反 应, TLC 检 测 反 应 完 全 后, 滤 掉 沉 淀 DCU, 减 压 蒸 去 溶 剂, 残 渣 用 二 氯 甲 烷 溶 解, 依 次 用 5% 的 碳 酸 氢 钠 溶 液 5% 的 柠 檬 酸 溶 液 和 水 洗 涤, 无 水 硫 酸 钠 干 燥, 浓 缩 后 柱 色 谱 分 离, V( 石 油 醚 ) V( 乙 酸 乙 酯 )=5 1~2 1, 即 得 目 标 产 物 3a~3f [12,13]. -[(3- 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3a): 产 率 56%, 白 色 固 体. m.p. 150~152 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.4 Hz, 3H, CH 3 ), 1.63~1.66 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.82 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.05 (m, 1H), 2.11~2.12 (m, 1H), 2.43~2.54 (m, 1H), 2.56~ 2.60 (m, 1H), 2.84~2.89 (m, 1H), 2.92~2.98 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 4.67~4.68 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.63 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 7.27~7.77 (m, 5H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 169.2, 169.1, 162.9, 151.2, 151.0, 138.0, 130.4, 129.2, 128.9, 126.9, 116.2, 100.8, 46.0, 41.6, 38.8, 38.3, 36.7, 35.6, 35.5, 31.5, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3357 (H), 2930, 1674 (C=), 1619 (H C=), 1522, 1443, 1382, 1251, 1174, 944 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 405 ([M+1] +, 10), 427 ([M+a] +, 40). -[(3- 对 氯 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3b): 产 率 60%, 白 色 固 体. m.p. 168~170 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.62~1.68 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.83 (s, 3H, CH 3 ), 2.02~2.06 (m, 1H), 2.13~2.18 (m, 1H), 2.44~2.50 (m, 1H), 2.52~ 2.62 (m, 1H), 2.84~2.89 (m, 1H), 2.92~2.98 (m, 1H), 3.17 (s, 1H), 4.67~4.69 (m, 2H), 5.43 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 7.42~7.73 (m, 4H, PhH); Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~337 2012 Chinese Chemical Society & SIC, CAS http://sioc-journal.cn/ 335
有 机 化 学 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.3, 169.5, 169.1, 162.0, 151.2, 138.1, 136.5, 129.5, 128.2, 127.4, 116.3, 100.7, 46.1, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 34.1, 31.5, 25.8, 25.1, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3324 (H), 2927, 1688 (C=), 1623 (H C=), 1526, 1429, 1383, 1178, 1093, 921 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 439 ([M+1] +, 15), 461 ([M+a] +, 10). -[(3- 对 氟 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3c): 产 率 63%, 白 色 固 体. m.p. 174~176 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.4 Hz, 3H, CH 3 ), 1.63~1.68 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.82 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.05 (m, 1H), 2.13~2.16 (m, 1H), 2.48~2.52 (m, 1H), 2.56~ 2.61 (m, 1H), 2.85~2.89 (m, 1H), 2.92~2.95 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 4.66~4.68 (m, 2H), 5.42 (s, 1H), 5.64 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 7.14~7.78 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 169.2, 169.1, 165.3, 162.8, 151.2, 138.0, 128.9, 125.1, 116.4, 116.2, 100.6, 46.0, 41.6, 38.8, 38.3, 36.7, 35.6, 35.5, 31.5, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3349 (H), 2930, 1672 (C=), 1619 (H C=), 1525, 1434, 1384, 1231, 1153, 944 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 423 ([M+1] +, 15), 445 ([M+ a] +, 100). -[(3- 对 甲 氧 基 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3d): 产 率 68%, 白 色 固 体. m.p. 160~162 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.61~1.68 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.83 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.06 (m, 1H), 2.12~2.18 (m, 1H), 2.47~2.55 (m, 1H), 2.57~2.63 (m, 1H), 2.84~2.89 (m, 1H), 2.92~2.97 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.86 (s, 3H, CH 3 ), 4.66~4.67 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.60 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.48 (s, 1H), 6.96~7.72 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 174.3, 169.1, 168.9, 168.8, 162.5, 161.3, 151.3, 138.0, 128.4, 121.4, 116.2, 114.6, 100.5, 55.6, 46.1, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 31.5, 29.9, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3340 (H), 2924, 2853, 1691 (C=), 1616 (H C=), 1529, 1433, 1385, 1253, 1179, 913 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 435 ([M+1] +, 70), 457 ([M+ a] +, 100). -[(3- 邻 甲 氧 基 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3e): 产 率 52%, 白 色 固 体. m.p. 167~169 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.25 (s, 1H), 1.61~1.63 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.83 (s, 3H, CH 3 ), 2.01~2.05 (m, 1H), 2.11~2.12 (m, 1H), 2.13~ 2.18 (m, 1H), 2.51~2.56 (m, 1H), 2.59~2.63 (m, 1H), 2.89~2.95 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.88 (s, 3H, CH 3 ), 4.68~4.69 (m, 2H), 5.40 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 7.01~7.85 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.4, 169.1, 167.7, 160.6, 157.4, 151.3, 138.0, 131.6, 129.6, 121.1, 117.8, 116.0, 111.6, 104.2, 55.7, 54.0, 46.0, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 31.4, 29.5, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3329 (H), 2923, 1691 (C=), 1624 (H C=), 1527, 1470, 1359, 1250, 1181, 921 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 435 ([M+1] +, 30), 457 ([M+a] +, 100). -[(3- 对 甲 基 苯 基 - 异 噁 唑 -5- 基 )- 甲 基 ]- 一 枝 蒿 酮 酸 酰 胺 (3f): 产 率 70%, 白 色 固 体. m.p. 185~187 ; MR (400 MHz, CDCl 3 ) δ: 0.65 (d, J=6.8 Hz, 3H, CH 3 ), 1.62~1.67 (m, 4H, 2CH 2 ), 1.82 (s, 3H, CH 3 ), 1.91~1.92 (m, 1H), 2.01~2.06 (m, 1H), 2.13~2.17 (m, 1H), 2.40 (s, 3H, Ar-CH 3 ), 2.42~2.51 (m, 1H), 2.55~2.60 (m, 1H), 2.61~2.62 (m, 1H), 2.84~2.95 (m, 1H), 3.18 (s, 1H), 3.85 (s, 3H, CH 3 ), 4.66~4.68 (m, 2H), 5.41 (s, 1H), 5.61 (s, 1H), 6.47 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 7.24~7.67 (m, 4H, PhH); 13 C MR (100 MHz, CDCl 3 ) δ: 208.4, 174.3, 169.1, 168.9, 162.9, 151.3, 140.6, 138.1, 129.9, 126.9, 126.0, 116.2, 100.7, 46.1, 41.6, 38.9, 38.3, 36.8, 35.6, 35.5, 34.1, 31.5, 25.8, 25.1, 21.6, 12.3, 8.2; IR (KBr) ν: 3329 (H), 2926, 2855, 1690 (C=), 1624 (H C=), 1529, 1432, 1384, 1226, 1184, 915 cm -1 ; ESI-MS (70 ev) m/z (%): 419 ([M+1] +, 50), 441 ([M+a] +, 40). 2.3 抗 病 毒 活 性 测 试 2.3.1 测 试 样 品 溶 液 的 配 制 将 各 样 品 溶 于 适 量 的 DMS, 再 用 培 养 液 配 制 成 1000 μg/ml 的 初 始 浓 度, 然 后 用 培 养 液 做 3 倍 稀 释, 各 8 个 稀 释 度 ( 浓 度 依 次 为 250, 62.5, 15.6, 3.9, 1.0, 0.2, 0.06, 0.02 μg/ml). 2.3.2 抗 流 感 病 毒 活 性 测 试 将 狗 肾 (MDCK) 细 胞 接 种 于 96 孔 培 养 板, 置 于 5% C 2, 37 培 养 24 h, MDCK 细 胞 分 别 加 入 A 型 流 感 病 毒 (H32/ 江 西 东 湖 /312/2006, H11/ 广 东 罗 湖 219/2006) 1 10-3.3 (50 倍 TCID 50 ), B 型 流 感 病 毒 ( 济 防 97-13) 1 10-2 (10 倍 TCID 50 ), 37 吸 附 2 h 后 移 出 病 毒 液, 然 后 分 别 加 入 不 同 稀 释 度 的 药 物. 设 病 毒 对 照 细 胞 对 照 和 阳 性 药 对 照, 37 培 养 36 h, 观 察 结 果, 纪 录 细 胞 病 变 程 度 CPE, 用 Reed-Muench 法 分 别 计 算 各 样 品 半 数 中 毒 浓 度 (TC 50 ) 值 和 对 流 感 病 毒 半 数 抑 制 浓 度 (IC 50 ) 值, 实 验 结 果 见 表 1 和 表 2. 致 谢 活 性 筛 选 试 验 由 中 国 医 学 科 学 院 医 药 生 物 技 术 研 究 所 协 助 测 定, 在 此 对 他 们 的 帮 助 表 示 诚 挚 的 谢 意. 336 http://sioc-journal.cn/ 2012 Chinese Chemical Society & SIC, CAS Chin. J. rg. Chem. 2012, 32, 333~337
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