助 剂 改 善 其 止 血 效 果 1 实 验 1.1 原 料 和 试 剂 家 蚕 蛹 经 过 提 取 蛹 油 蛋 白 质 后 剩 余 的 残 渣 ( 主 要 成 分 为 蛹 皮 ), 烘 干 除 杂 粉 碎 后 待 用 ; 壳 聚 糖 ( 成 都 市 科 龙 化 工 试 剂 厂 ), 脱 乙 酰

研 究 与 技 术 蚕 蛹 壳 聚 糖 复 合 止 血 材 料 的 制 备 及 凝 血 性 能 初 探 陈 超, 单 其 艳, 杨 铭, 蓝 广 芊, 吴 大 洋 ( 西 南 大 学 纺 织 服 装 学 院, 重 庆 400716) 摘 要 : 探 讨 以 蚕 蛹 壳 聚 糖 (CS) 和 明 胶 (GEL) 为 主 要 原 料 制 备 复 合 止 血 材 料 的 工 艺 及 凝 血 效 果 首 先 从 蚕 蛹 中 提 取 出 壳 聚 糖, 与 明 胶 共 混 溶 解 后 添 加 助 剂, 通 过 冷 冻 真 空 干 燥 法 制 备 海 绵 状 复 合 止 血 材 料, 然 后 采 用 凝 血 指 数 BCI 进 行 体 外 凝 血 测 试, 研 究 其 制 备 工 艺 参 数 对 凝 血 效 果 的 影 响 实 验 表 明, 最 佳 工 艺 参 数 为 :-40 下 预 冻 1 h, 共 混 溶 液 质 量 浓 度 为 30 g/l,m CS m GEL =5 5 0.01 % 的 戊 二 醛 0.5 % 的 氯 化 钙 能 有 效 提 高 的 凝 血 效 果 凝 血 指 数 BCI 相 对 于 医 用 纱 布 和 明 胶 止 血 海 绵 分 别 降 低 了 63.52 % 和 34.85 %, 凝 血 效 果 得 到 显 著 提 高 关 键 词 : 蚕 蛹 ; 壳 聚 糖 ; 明 胶 ; 海 绵 ; 凝 血 指 数 ; 止 血 材 料 中 图 分 类 号 :TS149 文 献 标 志 码 :A 文 章 编 号 :1001-7003(2011)06-0012-05 Preparation and clotting property of a silkworm pupa-derived chitosan composite haemostatic material CHEN Chao, SHAN Qi-yan, YANG Ming, LAN Guang-qian, WU Da-yang (College of Textile & Garment, Southwest University, Chongqing 400716, China) Abstract: This paper discussed the technology and clotting effect of composite haemostatic material, which was made from gelatin and chitosan. The chitosan was derived from silkworm pupa. Mixed with gelatin and some additives, the chitosan became sponge by means of freeze drying. Then, extracorporeal blood coagulation test was conducted using clotting index BCI and the effect of processing technology on clotting effect was studied. Experiment results showed that the optimal technological parameters were determined as follows: pre frozen 1h at -40, blending solution mass concentration of 30 g/l, m CS m GE=5 5, and the haemostatic property can be improved by adding 0.01 % calcium chloride and 0.5 % glutaraldehyde. Its haemostatic property was better than hospital gauze and gelatin sponge with the BCI reduced by 63.52% and 34.85%. Key Words: Silkworm pupa; Chitosan; Gelatin; Sponge; Blood clotting index; Haemostatic material 壳 聚 糖 (CS) 是 由 甲 壳 素 经 过 浓 碱 水 解 脱 乙 酰 基 后 生 成 的 产 物, 它 是 自 然 界 中 唯 一 带 正 电 荷 的 碱 性 多 糖, [1] 生 物 相 容 性 好, 无 毒 副 作 用 经 国 内 外 学 者 研 究 证 实, 壳 聚 糖 具 有 很 强 的 止 血 功 能 它 能 与 红 细 胞 表 面 交 联 而 使 红 细 胞 产 生 黏 附, 或 在 血 液 中 发 生 某 种 再 聚 合 [2] 反 应, 引 起 红 细 胞 聚 集, 从 而 达 到 止 血 的 目 的 明 胶 (GEL) 的 主 要 成 分 是 胶 原 少 量 的 蛋 白 多 糖 及 某 些 有 机 成 分 胶 原 具 有 很 强 的 生 物 活 性 及 生 物 功 能, 能 参 收 稿 日 期 :2011-01-18; 修 回 日 期 :2011-03-08 基 金 项 目 : 重 庆 市 科 技 攻 关 计 划 项 目 (CSTC,2008AB1005) 作 者 简 介 : 陈 超 (1987- ), 男, 硕 士 研 究 生, 研 究 方 向 为 新 型 资 源 纤 维 的 开 发 与 应 用 通 讯 作 者 : 吴 大 洋, 教 授, 博 导,wdy1484@swu.edu.cn 与 细 胞 的 迁 移 分 化 和 增 殖, 使 骨 腱 软 骨 和 皮 肤 [3] 具 有 一 定 的 机 械 强 度 明 胶 形 成 海 绵 后 的 多 孔 结 构 可 吸 收 重 于 自 身 45 倍 的 血 液 而 激 活 血 小 板, 促 进 凝 血 [4] 块 形 成, 达 到 止 血 的 目 的 壳 聚 糖 降 解 时 间 较 长, 而 明 胶 可 以 缩 短 其 降 解 时 间, 壳 聚 糖 则 弥 补 了 明 胶 抗 潮 湿 性 差 易 变 形 易 破 碎 等 弱 点, 两 者 都 具 有 良 好 的 凝 血 性 能, 选 择 两 者 复 合, 可 利 用 各 自 优 点, 相 辅 [5] 相 成 目 前, 有 文 献 报 道 了 将 壳 聚 糖 溶 液 冻 干 制 备 高 孔 隙 率 膜 的 方 法, 也 有 一 些 壳 聚 糖 / 胶 原 止 血 海 绵 膜 或 敷 料 的 研 制 方 法 本 研 究 使 用 从 蚕 丝 业 副 产 物 蚕 蛹 中 提 取 的 壳 聚 糖, 与 明 胶 共 混, 利 用 各 自 优 点, 从 而 形 成 具 有 独 特 的 多 孔 结 构 的 海 绵 状 材 料, 并 添 加 多 种 12

助 剂 改 善 其 止 血 效 果 1 实 验 1.1 原 料 和 试 剂 家 蚕 蛹 经 过 提 取 蛹 油 蛋 白 质 后 剩 余 的 残 渣 ( 主 要 成 分 为 蛹 皮 ), 烘 干 除 杂 粉 碎 后 待 用 ; 壳 聚 糖 ( 成 都 市 科 龙 化 工 试 剂 厂 ), 脱 乙 酰 度 大 于 等 于 85.0 %; 明 胶 ( 上 海 化 学 试 剂 分 装 厂 ),CP 级 ; 吸 收 性 明 胶 海 绵 ( 南 京 金 陵 药 业 股 份 有 限 公 司 ); 新 鲜 兔 血 ( 自 养 家 兔 心 脏 抽 取 ); 抗 凝 血 剂 ( 自 制,3.8 % 柠 檬 酸 钠 溶 于 生 理 盐 水 中 ); 冰 醋 酸 甘 油 戊 二 醛 无 水 氯 化 钙 聚 乙 二 醇 多 聚 磷 酸 PPA, 均 为 AR 级 1.2 设 备 和 仪 器 FD-18 型 冷 冻 干 燥 机 ( 上 海 田 枫 实 业 有 限 公 司 ), ZKU-B120 型 超 低 温 冷 冻 储 存 箱 ( 中 科 生 命 科 技 股 份 有 限 公 司 ),DHG-9070A 电 热 恒 温 鼓 风 干 燥 箱 ( 上 海 齐 欣 科 学 仪 器 有 限 公 司 ),HH-8 型 数 显 恒 温 水 浴 锅 ( 常 州 国 华 电 器 有 限 公 司 ),85-2 型 恒 温 磁 力 搅 拌 器 ( 常 州 国 华 电 器 有 限 公 司 ) 1.3 方 法 1.3.1 蚕 蛹 壳 聚 糖 的 制 备 [6] 采 用 刘 伦 杰 研 究 的 工 艺 制 备 蚕 蛹 壳 聚 糖, 流 程 为 : 蚕 蛹 壳 预 处 理 脱 无 机 盐 碱 脱 蛋 白 水 洗 干 燥 脱 色 干 燥 甲 壳 素 脱 乙 酰 水 洗 过 滤 干 燥 壳 聚 糖, 制 得 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 粉 末 待 用 1.3.2 溶 液 的 配 制 1.3.2.1 不 同 质 量 浓 度 共 混 溶 液 的 配 制 为 了 研 究 不 同 质 量 浓 度 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 和 明 胶 共 混 溶 液 对 止 血 材 料 性 能 的 影 响, 对 共 混 溶 液 总 质 量 浓 度 进 行 单 因 子 实 验 将 蚕 蛹 壳 聚 糖 粉 末 和 明 胶 按 1 1 的 质 量 比 例 混 合, 取 不 同 质 量 的 共 混 粉 末 分 别 放 入 2 % 的 冰 醋 酸 水 溶 液 中,60 下 搅 拌 至 完 全 溶 解, 配 制 成 质 量 浓 度 为 10,20,30,40,50 g/l 的 共 混 溶 液, 分 别 用 代 码 a~e 表 示 1.3.2.2 不 同 m CS m GEL 比 例 共 混 溶 液 的 配 制 为 了 研 究 不 同 比 例 的 共 混 溶 液 对 止 血 材 料 性 能 的 影 响, 对 一 定 质 量 浓 度 下 不 同 的 m CS m GEL 比 例 进 行 单 因 子 实 验 将 蚕 蛹 壳 聚 糖 粉 末 和 明 胶 分 别 按 1 9 3 7 5 5 7 3 9 1 的 质 量 比 例 混 合, 按 质 量 浓 度 为 30 g/l 取 共 混 粉 末 分 别 放 入 2 % 的 冰 醋 酸 水 溶 液 中,60 下 搅 拌 至 完 全 溶 解, 得 到 不 同 m CS m GEL 比 例 的 共 混 溶 液, 分 别 用 代 码 f~j 表 示 1.3.2.3 助 剂 的 添 加 根 据 文 献 [7-9] 报 道, 戊 二 醛 甘 油 无 水 氯 化 第 48 卷 钙 聚 乙 二 醇 多 聚 磷 酸 PPA 均 具 有 增 强 止 血 材 料 止 血 效 果 的 潜 力 将 蚕 蛹 壳 聚 糖 粉 末 和 明 胶 按 1 1 的 质 量 比 例 混 合, 放 入 2 % 的 冰 醋 酸 水 溶 液 中,60 下 搅 拌 至 完 全 溶 解, 配 制 成 质 量 浓 度 为 30 g/l 的 共 混 溶 液 分 别 添 加 0.01 % 的 戊 二 醛 0.2 % 的 甘 油 0.5 % 的 氯 化 钙 水 溶 液 0.1 % 的 聚 乙 二 醇 0.2 % 的 多 聚 磷 酸 PPA 到 共 混 溶 液 中, 得 到 添 加 不 同 助 剂 的 共 混 溶 液, 用 代 码 k~o 表 示 1.3.3 海 绵 状 止 血 材 料 的 制 备 分 别 移 取 一 定 量 上 述 配 制 好 的 共 混 溶 液, 用 磁 力 搅 拌 器 在 室 温 下 进 行 30 min 的 搅 拌 发 泡, 发 泡 后 倒 入 铺 有 聚 乙 烯 膜 的 培 养 皿 中, 在 低 温 冰 箱 中 进 行 预 冻, 预 冻 完 成 后, 在 冷 冻 真 空 干 燥 机 中 进 行 30 h 的 干 燥, 即 制 得 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 用 紫 外 灯 照 射 灭 菌 30 min, 用 聚 乙 烯 袋 封 装, 常 温 下 保 存 在 不 同 预 冻 温 度 和 不 同 预 冻 时 间 的 单 因 子 实 验 中, 配 制 质 量 浓 度 30 g/l m CS m GEL=1 1 的 共 混 溶 液, 不 添 加 任 何 助 剂, 预 冻 温 度 分 别 为 :-20,-30,-40, -50,-60, 用 代 码 p~t 表 示 ; 预 冻 时 间 分 别 为 0.5,1,3,8,12 h, 用 代 码 u~y 表 示 1.3.4 单 因 素 实 验 设 计 为 了 更 清 晰 地 表 示 上 述 不 同 共 混 溶 液 比 例 及 处 理 方 法, 各 单 因 素 实 验 因 素 水 平 如 表 1 所 示 表 1 因 素 水 平 Tab.1 Factors level 代 码 质 量 浓 度 / m CS 预 冻 温 度 / 预 冻 时 间 / (g L -1 助 剂 ) m GEL h a 10 1 1 - -40 1 b 20 1 1 - -40 1 c 30 1 1 - -40 1 d 40 1 1 - -40 1 e 50 1 1 - -40 1 f 30 1 9 - -40 1 g 30 3 7 - -40 1 h 30 5 5 - -40 1 i 30 7 3 - -40 1 j 30 9 1 - -40 1 k 30 1 1 0.01 % 的 戊 二 醛 -40 1 l 30 1 1 0.2 % 的 甘 油 -40 1 m 30 1 1 0.5 % 的 氯 化 钙 水 溶 液 -40 1 n 30 1 1 0.1 % 的 聚 乙 二 醇 -40 1 o 30 1 1 0.2 % 多 聚 磷 酸 PPA -40 1 p 30 1 1 - -20 1 q 30 1 1 - -30 1 r 30 1 1 - -40 1 s 30 1 1 - -50 1 t 30 1 1 - -60 1 u 30 1 1 - -40 0.5 v 30 1 1 - -40 1 w 30 1 1 - -40 3 x 30 1 1 - -40 8 y 30 1 1 - -40 12 13

1.3.5 凝 血 测 试 根 据 Shih M F 等 [10] 的 研 究, 采 用 凝 血 指 数 BCI 进 行 凝 血 测 试 抽 取 家 兔 新 鲜 血 液 并 加 入 抗 凝 血 溶 剂 待 用 将 止 血 材 料 剪 成 0.5 cm 2 平 放 在 烧 杯 中, 放 入 水 浴 锅 37 下 恒 温 5 min, 将 0.1 ml 血 液 滴 加 到 样 品 上, 然 后 立 即 滴 加 0.02 ml 0.2 M 的 CaCl2 溶 液 开 始 凝 血 过 程,5 min 后 加 入 25 ml 去 离 子 水 37 恒 温 下 摇 摆 5 min, 随 后 取 出 溶 液 用 紫 外 分 光 光 度 计 在 波 长 为 415 nm 下 测 其 Abs 值 将 0.1 ml 血 液 用 去 离 子 水 稀 释 25 ml 后 的 Abs 值 假 定 为 100 作 参 考 值, 则 凝 血 指 数 为 : BCI=100 A /A 参 考, 凝 血 指 数 BCI 越 低, 凝 血 效 果 越 好 各 重 复 平 行 实 验 3 次, 实 验 数 据 以 均 数 (x) 表 示, 采 用 SPSS 软 件 包 19.0 版 本 对 数 据 做 单 因 素 ANOVA 方 差 分 析,P<0.05 表 示 各 组 试 验 结 果 差 异 有 统 计 学 意 义 2 结 果 与 讨 论 2.1 质 量 浓 度 对 凝 血 指 数 的 影 响 图 1 为 不 同 质 量 浓 度 的 共 混 溶 液 a~e 所 制 备 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 的 凝 血 指 数 均 值 的 柱 状 图 图 1 不 同 质 量 浓 度 的 凝 血 指 数 Fig.1 BCI of samples with different mass concentration 单 因 素 方 差 分 析 显 示, 不 同 质 量 浓 度 共 混 液 对 凝 血 指 数 的 影 响 具 有 显 著 差 异 (P<0.05) 从 图 1 中 可 以 看 出, 随 着 共 混 溶 液 质 量 浓 度 由 10 g/l 增 加 到 30 g/l, 凝 血 指 数 由 60.41 开 始 减 小, 在 30 g/l 处 达 到 最 低 值 39.04, 表 示 凝 血 效 果 最 好, 而 随 着 共 混 溶 液 质 量 浓 度 继 续 增 加, 凝 血 指 数 反 而 升 高 [11] 邹 海 燕 等 的 研 究 表 明, 的 表 观 密 度 受 冻 干 前 溶 液 质 量 浓 度 的 影 响, 可 以 通 过 调 整 冻 干 前 溶 液 的 质 量 浓 度 来 改 变 表 观 密 度 的 密 度 直 接 影 响 到 了 其 海 绵 结 构 靠 毛 细 作 用 迅 速 吸 附 血 小 板 聚 集 所 引 起 的 凝 血 作 用, 同 时 也 会 影 响 到 在 创 面 上 吸 收 伤 口 渗 液 的 功 能 溶 液 质 量 浓 度 过 低, 制 备 的 海 绵 结 构 疏 松, 随 着 质 量 浓 度 的 增 加, 海 绵 结 构 密 度 增 加 而 当 质 量 浓 度 继 续 增 加 时, 网 状 结 构 过 于 致 密, 硬 度 增 加 柔 韧 性 下 降, 吸 附 血 液 能 力 下 降, 导 致 凝 血 效 果 变 差 另 外, 在 实 际 创 面 止 血 中, 由 于 过 硬 而 不 能 较 好 地 黏 附 创 面, 也 会 导 致 材 料 止 血 效 果 变 差 2.2 混 合 比 例 对 凝 血 指 数 的 影 响 图 2 为 不 同 m CS m GEL 的 共 混 溶 液 f~j 所 制 备 的 复 合 止 血 材 料 凝 血 指 数 均 值 的 柱 状 图 图 2 不 同 m CS m GEL 比 例 的 凝 血 指 数 Fig.2 BCI of samples with different m CS m GEL ratio 单 因 素 方 差 分 析 显 示, 不 同 m CS m GEL 比 例 共 混 液 对 凝 血 指 数 的 影 响 具 有 显 著 差 异 (P<0.05) 从 图 2 可 以 看 出,m CS 比 例 较 小 时,BCI 值 较 高 为 67.09, 随 着 m CS 比 例 的 增 加, 的 凝 血 指 数 减 小, 当 m CS m GEL= 5 5 时, 凝 血 指 数 达 到 最 低 值 43.99, 之 后 随 着 m CS 比 例 继 续 增 大, 凝 血 指 数 反 而 略 有 升 高 当 明 胶 成 分 占 多 数 时, 由 于 单 纯 明 胶 海 绵 力 学 性 能 差 溶 解 速 度 太 快 等 缺 点 对 的 止 血 效 果 产 生 了 影 响, [12] 导 致 凝 血 指 数 较 高 随 着 壳 聚 糖 的 加 入, 凝 血 效 果 明 显 改 善,m CS m GEL=5 5 时, 凝 血 效 果 达 到 了 最 好 而 当 壳 聚 糖 继 续 增 加 时, 明 胶 网 络 结 构 网 孔 变 大, 孔 隙 间 [13] 由 壳 聚 糖 分 子 填 充, 导 致 结 构 致 密 这 使 得 样 品 不 能 与 血 液 充 分 接 触, 导 致 凝 血 指 数 不 降 反 升 2.3 各 种 助 剂 对 凝 血 指 数 的 影 响 图 3 为 添 加 了 各 种 助 剂 的 共 混 溶 液 所 制 备 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 凝 血 指 数 均 值 的 柱 状 图 ( 其 中 纱 布 明 胶 海 绵 和 对 照 c 作 为 对 照 组, 对 照 c 为 未 添 加 任 何 助 剂 的 自 制 止 血 材 料 ) 从 图 3 可 以 看 出, 未 添 加 任 何 助 剂 的 对 照 c 凝 血 指 数 小 于 纱 布 和 医 用 明 胶 海 绵, 且 不 同 助 剂 的 添 加 对 蚕 蛹 壳 聚 糖 止 血 海 绵 的 凝 血 指 数 产 生 了 不 同 的 影 响, 其 中 戊 二 醛 氯 化 钙 聚 多 磷 酸 的 添 加 对 凝 血 指 数 的 影 响 具 有 显 著 性 差 异 (P<0.05) 戊 二 醛 和 氯 化 钙 的 添 加 将 凝 血 指 数 分 别 减 小 到 了 28.70 和 19.85; 而 聚 多 磷 酸 的 添 加 反 而 使 凝 血 指 数 达 到 100.6, 即 导 致 14

完 全 没 有 凝 血 效 果 ; 甘 油 和 聚 乙 二 醇 的 添 加 对 凝 血 指 数 影 响 较 小 第 48 卷 响 也 并 不 显 著 从 外 观 形 态 来 看,-40 下 制 备 的 样 品 空 隙 分 布 相 对 其 他 温 度 下 更 为 均 匀 且 细 腻, 这 样 的 结 构 会 有 助 于 凝 血 过 程 中 血 小 板 的 堆 积 适 度 的 预 冻 温 度 有 助 于 明 胶 暴 露 出 较 多 的 疏 水 基 团, 且 与 壳 聚 糖 分 子 形 成 更 为 紧 密 有 序 的 网 状 结 构 从 节 能 低 耗 方 面 考 虑,1 h 为 比 较 理 想 的 预 冻 时 间 图 3 添 加 不 同 助 剂 所 制 备 的 凝 血 指 数 Fig.3 BCI of samples with different additive 壳 聚 糖 与 戊 二 醛 交 联 剂 反 应 后 能 形 成 一 种 网 状 结 构, 既 保 持 了 壳 聚 糖 对 于 某 些 金 属 离 子 良 好 的 吸 附 性 能, 又 克 服 了 其 在 酸 性 溶 液 中 因 溶 解 而 流 失 的 缺 点 [7], 可 能 是 这 些 性 能 增 强 了 的 凝 血 性 能 Ca + 能 激 活 因 子 参 与 凝 血 过 程, 参 与 人 体 纤 维 蛋 白 交 联 聚 合 等, 是 凝 血 的 辅 助 因 子, 壳 聚 糖 与 氯 化 钙 结 合 的 复 合 物 是 一 种 可 以 达 到 动 脉 止 血 目 的 且 安 全 有 效 的 止 血 剂 [8] 这 使 得 氯 化 钙 添 加 剂 对 凝 血 效 果 提 高 非 常 显 著 聚 乙 二 醇 与 甘 油 同 属 多 元 醇, 虽 然 它 们 的 添 加 对 凝 血 效 果 影 响 较 小, 但 高 质 量 浓 度 共 混 液 制 备 的 较 硬 且 脆 性 大, 在 较 低 温 度 下 预 冻 时 甚 至 会 造 成 开 裂, 而 甘 油 的 添 加 则 能 起 到 抗 冻 剂 的 作 用, 并 有 利 于 改 善 的 柔 韧 性, 以 满 足 实 际 止 血 应 用 的 需 要 多 磷 酸 盐 是 无 机 磷 酸 盐 中 的 一 种 线 性 高 分 子, 研 究 发 现 当 主 链 上 含 有 超 过 45 个 磷 酸 盐 单 位 以 上 的 聚 多 磷 酸 时, 具 有 加 速 血 液 凝 结 和 延 迟 纤 维 蛋 白 溶 解 的 性 能 [9] 本 实 验 中, 在 共 混 液 中 添 加 一 定 量 的 聚 多 磷 酸 后 发 现, 经 冷 冻 干 燥 后 松 散, 无 法 成 形, 且 在 凝 血 测 试 中 迅 速 溶 于 溶 液 中 而 导 致 无 法 凝 结 血 液, 故 聚 多 磷 酸 不 适 合 作 为 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 的 添 加 剂 2.4 预 冻 温 度 及 预 冻 时 间 图 4 和 图 5 为 在 不 同 预 冻 温 度 及 不 同 预 冻 时 间 下 制 备 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 凝 血 指 数 均 值 的 柱 状 图 ( 其 中 纱 布 和 明 胶 海 绵 作 为 对 照 组 ) 实 验 数 据 表 明, 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 其 平 均 凝 血 效 果 明 显 好 于 目 前 广 泛 使 用 的 止 血 纱 布 和 医 用 止 血 明 胶 海 绵, 平 均 凝 血 指 数 分 别 降 低 了 63.52 % 和 34.85 % 从 图 4 可 以 看 出, 不 同 预 冻 温 度 对 凝 血 指 数 的 影 响 较 小, 总 体 呈 平 稳 趋 势 从 图 5 可 以 看 出, 预 冻 时 间 为 0.5 h 时, 溶 液 无 法 凝 固 成 形, 故 该 条 件 排 除 讨 论,1 h 之 后 预 冻 时 间 的 长 短 对 凝 血 指 数 的 影 图 4 不 同 预 冻 温 度 所 制 备 的 凝 血 指 数 Fig.4 BCI of samples prepared with different pre-freezing temperature 图 5 不 同 预 冻 时 间 所 制 备 的 凝 血 指 数 Fig.5 BCI of samples prepared with different pre-freezing time 3 结 论 1) 将 从 蚕 蛹 中 提 取 出 的 壳 聚 糖 粉 末 与 明 胶 共 混 溶 解 并 添 加 适 当 助 剂 后, 通 过 冷 冻 真 空 干 燥 法 能 够 制 备 出 海 绵 状 蚕 蛹 壳 聚 糖 复 合 止 血 材 料 2) 此 方 法 制 备 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 具 有 优 良 的 凝 血 效 果, 体 外 凝 血 测 试 中 凝 血 指 数 BCI 相 对 医 用 纱 布 和 明 胶 止 血 海 绵 分 别 降 低 了 63.52 % 和 34.85 %, 凝 血 效 果 明 显 好 于 目 前 广 泛 使 用 的 医 用 止 血 材 料 3) 共 混 溶 液 质 量 浓 度 CS 和 GEL 混 合 比 例 助 剂 的 添 加 预 冻 温 度 和 预 冻 时 间 是 影 响 止 血 海 绵 结 构 形 态 及 凝 血 效 果 的 重 要 因 素 其 最 佳 工 艺 参 数 为 : 共 混 溶 液 质 量 浓 度 为 30 g/l,m CS m GEL=5 5, 预 冻 温 度 -40, 预 冻 时 间 1 h 0.01 % 的 戊 二 醛 0.5 % 的 氯 化 钙 水 溶 15

液 能 有 效 提 高 的 凝 血 效 果 ;0.2 % 的 甘 油 0.1 % 的 聚 乙 二 醇 对 凝 血 效 果 影 响 并 不 显 著 ;0.2 % 多 聚 磷 酸 PPA 会 导 致 无 法 成 形, 故 不 适 合 作 为 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 的 添 加 剂 本 试 验 中 采 用 体 外 凝 血 测 试 方 法 对 制 备 的 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 进 行 了 凝 血 效 果 的 测 试 和 探 讨, 未 来 的 研 究 一 方 面 是 要 通 过 对 助 剂 用 量 的 研 究 进 一 步 提 高 的 凝 血 效 果, 另 一 方 面 是 要 通 过 相 关 体 内 测 试 对 蚕 蛹 壳 聚 糖 海 绵 状 复 合 止 血 材 料 的 活 体 止 血 效 果 进 行 研 究 参 考 文 献 : [1]GU R, SUN W, ZHOU H, et al. The performance of a flylarva shell-derived chitosan sponge as an absorbable surgical hemostatic agent[j].biomaterials, 2010, 31 (6): 1270-1277. [2] 宋 炳 生, 钟 晓 峰. 甲 壳 质 和 壳 聚 糖 治 疗 外 伤 的 进 展 [J]. 中 国 生 化 药 物 杂 志,2003,24(4):213-214. [3]MAO J S, LIU H F, YIN Y J, et al. The properties of chitosangelatin membranes and scaffolds modified with hyaluronic acid by different methods[j].biomaterials, 2003, 24 (9): 1621-1629. [4] 钱 君 律, 朱 融 融, 黄 进, 等. 纳 米 级 壳 聚 糖 /DNA 的 制 备 和 性 能 研 究 [J]. 生 物 工 程 学 报,2007,23(4):741-745. [5] 何 兰 珍, 刘 毅, 杨 丹. 壳 聚 糖 - 明 胶 海 绵 状 伤 口 敷 料 的 制 备 及 性 能 研 究 [J]. 药 物 生 物 技 术,2006(1):45-48. [6] 刘 伦 杰, 吴 大 洋. 蚕 蛹 壳 聚 糖 的 制 备 及 应 用 研 究 进 展 [J]. 蚕 业 科 学,2010,36(2):295-299. [7] 刘 传 刚, 高 林. 添 加 剂 改 性 壳 聚 糖 膜 性 能 的 研 究 进 展 [J]. 化 工 中 间 体,2008(8):64-67. [8]HOEKSTRA A, STRUSZCZYK H, KIVEKAS O. Percutaneous microcrystalline chitosan application for sealing arterial puncture sites[j]. Biomaterials, 1998, 19 (16): 1467-1471. [9]ONG S Y, WU J, MOOCHHALA S M, et al. Development of a chitosan-based wound dressing with improved hemostatic and antimicrobial properties[j]. Biomaterials, 2008, 29(32): 4323-4332. [10]SHIH M F, SHAU M D, CHANG M Y, et al. Platelet adsorption and hemolytic properties of liquid crystal/ composite polymers[j].international Journal of Pharmaceutics, 2006, 327 (1-2): 117-125. [11] 邹 海 燕, 叶 春 婷, 彭 燕 豪, 等.bFGF 胶 原 海 绵 的 理 化 性 质 检 测 [J]. 广 东 药 学 院 学 报,2003(1):53-54. [12] 梁 佩 红, 叶 春 婷, 李 斯 明, 等. 复 合 Ι 型 胶 原 海 绵 创 伤 止 血 的 动 物 实 验 研 究 [J]. 创 伤 外 科 杂 志,2002(5): 274-275. [13] 肖 高, 施 亦 东, 陈 衍 夏. 胶 原 蛋 白 的 提 取 及 其 对 纺 织 材 料 的 改 性 研 究 [J]. 丝 绸,2010(2):5-9. 上 接 第 6 页 3) 采 用 媒 染 法 进 行 甜 菜 红 色 素 染 蚕 丝, 上 染 率 明 显 提 高, 但 染 后 织 物 色 光 和 鲜 艳 程 度 有 不 同 程 度 的 变 化 ; 采 用 Al2(SO4)3 预 媒 法 染 色 既 可 提 高 上 染 率, 又 可 减 少 色 光 变 化 4) 甜 菜 红 色 素 对 蚕 丝 织 物 的 染 色, 直 接 染 色 后, 各 项 色 牢 度 一 般 ; 壳 聚 糖 处 理 后 对 染 色 牢 度 无 影 响 ; 预 媒 法 染 色 对 各 色 牢 度 指 标 都 有 不 同 程 度 的 提 高 [2] 高 彦 祥, 刘 璇. 甜 菜 红 色 素 研 究 进 展 [J]. 中 国 食 品 添 加 剂,2006(1):65-70. [3] 武 成 荣, 刘 松 青. 甜 菜 红 提 取 工 艺 及 理 化 性 质 [J]. 中 国 食 品 添 加 剂,1998(4):4-6. [4] 卢 秉 福, 耿 贵, 周 艳 丽. 甜 菜 红 色 素 的 加 工 与 利 用 [J]. 中 国 甜 菜 糖 业,2008(1):40-42. [5] 黄 惠 莉, 林 文 銮. 壳 聚 糖 在 染 色 增 深 方 面 的 应 用 [J]. 上 海 纺 织 科 技,2004,32(5):44-45. 参 考 文 献 : [1] 陈 克 宁. 甜 菜 红 用 于 羊 毛 染 色 的 研 究 [J]. 染 料 与 染 色, 2006,43(1):21-24. 16