去南植物研究 1980, 11(3 ); 276 284 Acta Botanica Yunnanica 云南栽培西洋参皂武的高压液相色谱定量分析 WA NEA ROH S Bd ( 中国科学院昆明植物研究所, 昆明 ) uz 日本涌永制药 CHO 中央研究所 ) 摘要采用 N-18O0DS 柱, 以 CHsCN : H,0(31 : 69 v/v) 中可入 50mM KH,PO, 和 CH,CN: H;O:H;PO,(20:80:0.5 v/v) 为流动相, 在 202 am 紫外吸收波长检测下, 测定了云南责 江引种栽培的西洋参中两一酸人参电起 (malonyl ginsenosidc) Rb1, Rb2, Rc, Ac] (ginsenoside) Rb1, Rb2, Rc, Rd, RoflRe, Rg1 等 10 种主要皂息的含量, 讨论了不同的 栽培年代 采收季节 地下部位以及商品等级中皂息售量的变化, 对该地区西洋参的生产提出了建议 XU URS, GaGHd Gd ASIR 近年植物配糖体的高效液相色谱 (HPLC) 分析有显著进展 Yamaguchi 和 Kasai 等用离子交换色谱法 1) 以及羟基础次厂 ( Hydraxyapatite, Cal,(PO,) (OH), 为填料的色谱柱分离了各种二藉和三背配糖体 > ), 最近 Yamaguchi 等用 ODS 柱或氨基键 合柱, 以含 KH,PO, 或日,PO, 的缓冲液为移动相 3), 周志华等用氨基键合柱以甲醇 - 乙月 - 乙二醇 - 醋酸铵为移动相 543 成功地分离了多种人参皂大, 为提起成分的定量分析提供了简易 快速可靠的方法 本文在上述工作的基础上, 用山口 (Yamaguchi ) 法对云南引种栽培西洋参 (Panax quinquefolium L,) 的 10 种主要找我成分进行了定量分析, 并比较了在同一裁培条件下, 各种人参皂戌随不同种植年代 采收季节 地下部位以及不同商品等级的变化, 对该地区西洋参的生产提出了建议 仪器试剂及样品来源 ; e 高压液相色谱仪 TRIROTAR- 下 ( 日本 ), 紫外检测器 SPD-2A.( 日本岛津 ), 尖 4&HE0.16 Aufs, 波长 202 nm; 色谱柱,ulfron N-18( 5 um) $4.6x150 mm, (Chromato Packings Center, 日本京都 ), EWAN: CH,CN, KH,PO,, HPO, 分析 dii 1988-08-221] fi
3 期杨崇仁等, 云南栽培西洋参皂起的高压液相色谱定量分析 277 AA EAK: ANDE 全部实验材料均采自云南省丽江县拉美容的引种栽培美国西 ien 258. A R: R? malonyl ginsenoside Rb1i(1) B glc(2 一 1)glc(6)Ma glc(6 一 1)glc malonylginsenoside Rb2(2) B glc( 2 1)glc( 6) Ma glc( 6 一 1)ara(p) malonyl ginsenoside Re (3) B glc(2 一 1)glc(6)Ma glc(6 一 1)ara(f) ginscnoside Rb1(4) B glc( 2 1)glc glc( 6 1)»glc ginsenoside Rb2(5) B glc( 2 1)glc glc(6 1 )ara(p) ginsenoside Rce (6) B glc( 2 1)glc glc(6 1)ara(f) ginsenoside Rd (7) B glc( 2 1)glc glc ginsenoside Re (8) C glc( 2 1)rha glc ginsenoside Rg1(9) C glc. glc ginsenoside Ro (10) A glcu (2 一 1)glc glc glc, -D-glucopyranosyl ara (f); -L-arabinofuranosyl glcu, -D-glucuronic acid ara(p), -L-arabinopyranosyl rha; -L-rhamnopyranosy! Ma, malonyl 实验条件与方法 1,. 拒我的提取和制备 人恒重干燥的西洋参样品粉末, 用甲醇回流提取 3 次, 每次 2 小时, 甲醇提取液合并后于 50C 以下减压燕干, 真空干燥至恒重, 称取 1 8 HÀ 醇提取物, 用 50 mi 水溶解后, 通过大孔吸附树酯 Diaion HP-20 (HRERL) JANIE, W 30% 甲醇洗脱后继以 80% 甲醉洗脱, 至薄层层析及 Libcrmman 反应检查无所成, 洗脱汶减压燕干, 真空干燥至恒重, 即为总皂我 2, 标准品 称取丙二酸人参皂下 (malonyl genscnoside) Rb1 C1) 2.22 mg, Rb2 (2) 2.00 mg, Rc (3) 2.00 mg, AS'gm Cginsenoside) Rbl (4) 4.31 mg, Rb2 (5) 1.94 mg, Rc (6) 2.49 mg, Rd (7) 1.44 mg 和 Ro (10) 1.93 mg, ir 合溶于 10 ml MeOH 中, 另称取人参皂起 Re (8) 9.56 mg 和 Rgl (9) 9.72 mg RE 于 10 ml 甲醇中, 各标准品均由我们在人参属植物皂丰成分的系统研究中分离得到 3. 分析条件 FER AO C, WE 1.0 ml/min,, 紫外检测波长 202 nm, RÉRE 0.16 Aufs, WRA. S mm/min, ie, ulfron N-18. (5pm), $4.6x150 mm. 流动 相, 以 CHsCN ; H,O (31:69 v/v) 中加入浓度为 50 mm 的 KH,PO 为移动相分离思
2 云南植物研究 id 起 1 一 7 810, 另以 CHsCN : H,O : H,PO, (20:80:0.5 v/v ) 为流动相分离昌下 8 和 9, 标准品的分离情况如图 2 和图 3 所示 S + $ $ n y r : / 20 s 了 10 5 K' 6 4 g p o3 2 5 Š 3 F 1 o0 \ 10 25 50 15 100 KH 2P0, (mmo1/1) 图 1 KH2PO4 的浓度与拒起保留时间的相关性 Fig. 1 Correlations of KH:PO4 concentration and ratio(k/) of the saponins À ^ MÀ MÀ 0 10 20 30 min rra d rr e n i a Ü. Hg 293 3 4 m E Bis 皂武标准品色谱图 图 2 mad NS Fig. 2 The HPLC chromatogram of Panax Fig. 3 HPLC chromatogram of Panax saponins saponin standards. See table 1 for names of standards, See table 1 for names of the compounds the compounds Eluents; MeCN: H;0:H;PO,(20 : 80 : 0.5, Elucnts;/50 mm KH:PO4 in MeCN: He 0(31:69) (v/v) v/v)
3 期杨尝仁等, 云南栽培西洋参皂耻的高压液相色谱定量分析 279 4. 试样的测定 精密称取待测总皂丰样品 1.51 一 2.48 mg, 分别溶于 1 ml HB 中, 每次进样量 10 hl, 每进样三次即注入一次不同体积的标准样品, WE TRUM 高值, 在微处理机上用直线回归方程 (Load N-L-Mu) 程序处理, 与标准品数据对照, 得到各皂和成的浓度, 从而计算得含量 样品分离情况如图 4 和图 5 p 0 10 W ^ 30 40 min 0, 0 20 0 4n mih 人 "mi da MEH eg Fig. 4 Representative HPLC chromatogram of the extract of Panax quinquef olium Column 图 5 西洋参样品色谱图 Fig. 5 Representative HPLC chromatogram of the extract of Panax quinquefolium. Column conditions same as in Fig.? conditions same as in Fig. 3 5. 线性关系及精密度按以上分离条件, 取标准品混合物各 2.5 5 7.5 10 15 ul 分别进样多次, 测各皂臣峰高值, 用计算机处理表明, A RU EE ES [5s PORE TEE RE RE 低于 10 ug 的范围内呈通过原点的线性关系, 相关系数为 = 0.9990. 9999, BAT 的 恋异系数 cuv=3.97%, 其它皂起为 cuv=2.0% i 论 1. 关于分离条件我们曾用 Pentax 柱,Partisil OD5 柱, Zorbax ODS 柱及 UlfronN- 等色谱柱, 比较了各种流动相的分离效果, 结果以含水乙有睛为移动相在 Ulfron N-18(5 18 um) 色谱柱上分离效果较佳, 在溶剂中加适量的磷酸或磷酸盐可以调整各皂耻的保留时 He KH PO RIR SERRA HAKERI, KH:PO4 的浓度大于 50 mmb]
280 zx W 植物研究 11% 承的容量因子 K 值明显降低, 而在 KH,PO, 的浓度为 50_ mm 时各皂我能达到较好的分离 ( 图 1), 因而选择了 CHsCN : H,O (31:69 v/v) 中加入 50 mm KH,PO, 为移动相分离皂起 1 一 7 等七个人参二醉型皂我和齐墩果烷型所筷 10, 以 CH,-CN : H,O: HPO, (20:80:0.5 v/v) 缓冲溶液为移动相分离人参三醇型提起 8 和 9, 在 40 分钟内可达到满意的分离 ( 图 2 3 ) 2,. 不同种植年代皂我的含量 对种植 1 年至 5 年的西洋参分析结果表上明, 与进口的西洋参皂成组成是一致的, 且均以人参皂筷 Rbl (4) Re (8) 和丙二酸人参皂起 Rbi (1) 为主 此外, 四年生西洋参无论是甲醇提取物 总皂武含量 XX Wm ds 含量均明显高于 1 一 3 年生和 5 年生以及进口西洋参 (#1) ( 图 6) 其中 1 和 4 的含量分别达到 1.66 26 和 2.74%, 但人参三醇型皂筷 8 9 和齐墩果烷型皂息 10 的含量 ME 5 年生为低, 但单位面积产量却与 5 年生相近 ( 表 2 ) 显然, 无论从生物产量和质量而言, 云南丽江地区栽培的西洋参都是优质的, 且以种植 4 年为宜 PEA i 5 tyears D 2 4 6 8 10 12 month) 图 6 不同种植年代西洋参皂起的含量变化图 7 不同采收期西洋参皂起的含量变化 Fig.6 The variances of saponin contents of Fig. 7 The variances of saponin contents of P. P. quinquefolium with different ages. quinquefolium with different time of havest. S.A RERRGBE RUE XE AEUERS RESO RERUMS CA HR AUR X H, 4 月份采收的西洋参总气息和主要皂算的含量均高于其它月份, 其中 1 和 8 分别高达 1.38% 和 1.65% ( 图 7 ) GE 3) 然而 4 月份正值西洋参展叶生长期积车物质消耗量大, 平均单支干重最低, 生物产量不高 相对而言, 10 一 11 月份植株进入休眠期, 积车物质达到年中最高水平, 昌总皂疏和主要皂丰的含量略次于 4 月份, 但生物产量最
3 期 PLCS: SERRES- A ERA A E 281 高, 这一时期采收更有经济意义 (R14). 表 1 不同种植年代西洋参的皂武组成 Table 1 Comparison of saponin contents (94 of dry material) of P. quinque folium with different growth years (collected in October) growth/year saponin 1 2 3 4 5 1 0.31 0.11 0.80 1.66 0.68 2 0.06 0.07 0.08 0.12 0.10 3 0.13 0.16 0.15 0.26 0,15 4 0.51 0.90 1.49 2.14 1.69 5 0.06 0.07 0.08 0.20 0.11 6 0.21 0.23 0.25 0.40 0.23 1 0.16 0.21 0.29 0.88 0.42 8 0.72 1.24 1.02 1.32 1.107 9 0.19 0.23 0.15 0.20 0.42 10 0.12 0.20 0.22 0.30 0.32 total saponin 2.53 4.02 4.53 8.08 5.89 yield of crude saponin 3.35 4.14 5.33 8.21 6.36 yield of MeOH ext. 35.20 36.05 41.12 48.58 31.17 matarial (g) 8.48 22.18 20.31 1.41 31.01 YY X2 不同种植年代西洋参的平均生物产量 Table 2 The average bio-velocity of P. quinque folium with different growth yeers (collected in Oct., 1987) rr Ó plant number in fresh wt dry wt average dry wt fresh, dry every m? g/m? g/m? g/plant 1 year 140 98.4 26.6 0.19 3.101 1 2 years 86 318.3 106.6 1.24 3.5811 9 years 52 432.4 125.3 2.41 3.4511 4 years 34 193.6 236.9 6.97 3.351! 5 years 24 826.1 250.3 10.43 3.301 1 - 一 4. 不同地下部位并我含量的变化 对主根 根茎和侧根不同部位皂筷含量的分析表 Jj ( 表 5), 地下部分各部位的皂生组成是一致的, 皂起合量以主根为高, 其次为侧根, 根茎部分的皂息含量较低 主根中皂成 4 和 1 的含量分别达到 2.74% 和 1.66%, 而侧根则以皂耻 8 的含量最高, 达到 1.81%
is 云南植物研究 11% H 表 3 不同采收期西洋参的皂起组成 Table 3 Comparison of saponin contents (% of dry material) of the 3 years old P. quinquefolium with different time of harvest Saponin Feb. Ápr. Jun. Aug. Oct. Dec. 1 0.44 0.93 0.75 0.57 0.87 0,89 2 0.05 0,07 0.06 0.06 0.05 0.06 3 0.14 0.24 0,15 0,12 0.13 0,16 4 0.62 1,38 0.85 0.96 1,10 lelo 5 0.05 0.08 0.04 0.05 0.05 0.06 6 0.23 0.43 0.17 0.19 0.21 0.23 7 0.15 0,31 0.37 0.27 0,27 0,24 8 0.72 1,65 0.90 1,08 lell 1,14 9 0.26 0,52 0.53 0,55 0,35 0.37 10 0.17 0.30 0.42 0.22 0,17 0.17 total saponin 2.83 5.91 4.24 4.07 4.31 4.42 yield of crude saponin 3.17 6,42 4.33 4,86 4,81 4.71 yield of MeOH ext. 36.87 36.66 20.25 31.26 33.40 34.28 malerial (g) 8.41 7.82 15.74 30.77 29.04 40.00 lnc ''/! à MÓSLILSIULLEGLLLOLAUAmKÁdóááá]ÉáitCLLLLLLLLLO DP 表 4 不同采收期西洋参的平均生物产量 Table 4 The average bio-velocity of the 3 -year-old P. quinquefolium with different time of harvest RE Re RR REDE lengh of lengh of diameter of average wt of collected period phenologic period total roots main roots main roots dry plant cm cm cm g Fab. 26 rest period 11.4 4,1 0.6 0.48 Apr. 29 leafing period 12.9 5.2 0.6 0.45 Jun. 30 flowering period 13.0 5.8 0.7 1.32 Aug. 20 fruiting period 13.2 6.4 0.7 2.56 Oct. 23 rest period 13.8 6.8 0.82 3.51 Dec. 25 rest period 14.7 8.7 1.0 3.82
3 其 杨尝仁等, 云南栽培西洋参气武的高压液相色谱定量分析 283 表 5 不同地下部位西洋参的皂武组成 Table 5 Comparison of saponin contents(% of dry materia of 4 -year-old P. quinquefolium with different vnderground parts saponin main roots rhizomes laterial roots 1 1.66 0.96 0,98 2 0.12 0,13 0,12 3 0.26 0.16 0.42 l 4 2.74 0.73 1.26 5 0.20 0.02 0.07 6 0.40 0.04 0.62 7 0.88 0.31 0.59 8 1.32 0.82 1.81 9 0.20 0.08 0,21 10 0.30 0,48 0,11 total saponin 8.08 3.73 6.19 yield of crude saponin 8.21 6.47 9.23 yield of MeOH ext. 48.58 31.84 34.45 material (g) 7.41 47.50 142,93 X6 不同商品等级西洋参的皂武组成 Table 6 Comparison of saponin contents (96 of dry material) of P. quirquefolium with different commercial grades on the market saponin lst 2nd 3rd 4th 5th imp. 1 0,54 0.93 0.18 1.34 1.39 0.34 2 0.00 0.03 0.04 0.04 0.09 十 3 0.08 0.11 0.14 0.28 0.35 0.09 4 0.65 0.98 0.10 1.40 1.02 1.40 5 0.03 0.05 0.04 0.08 0.03 0.08 6 0.12 0.13 0.14 0.29 0.26 0.22 7 0.08 0,14 0.12 0.32 0.37 0,28 8 0.57 0.86 0.96 1,25 1,10 0.90 9 0.15 0.21 0.29" 0.36 0.31 0.31 10 0.12 0.19 0.14 0.27 0.16 0.14 total saponin 2.40 3.69 3.35 5.63 5.08 3.76 yield of crude saponin 2.93 4.21 3.90 6.42 6.31 4.78 yield of MeOH ext. 40.16 39.52 38.25 43.35 40.98 31.43 material (g) 25.88 31.67 24,32 24,55 23,63 11,18 [^ MEME CC RS Et
284 云南植物研究 11 卷 5. 不同商品等级皂丰含量的变化 市售的西洋参生药, 通常按支头的大小 粗壮程度等分为若干商品等级, 以一级品价格最昂 对六种不同商品等级西洋参的皂息含量进行比较分析 ( 表 6 ), 其中 4 级和 5 级的皂息含量均高于其它等级, 皂戌 1 的含量分别为 1.34% 和 1,.39%, 皂我 4 的含量分别为 1.40% 和 1.02%, 皂了起 8 的含量分别为 1.25% 和 1.10%, 而一级品的皂息含量反而最低 这可能是由于皂成主要是存在于西洋参根部的表皮层中, 而商品等级较低的西洋参木质化程度较少, 表面积比相对较大, 因此气孔的含量较高 根据这一实验结果, 在实际的经营中, 宜根据不同的商业要求, 有目的地培育和选择不同的商品等级, 以提高生物产量, 达到最佳经济效益 参考文献 0c N a 一 Yamaguchi H, Matsuura H, Kasai R. et al. Chem Pham Bull 1986; 34, 28 2859 Kasai R, Yamaguchi H, Tanaka O. J Chzromatog 1987; 407; 205 Yamaguchi H, Kasai R, Matsuura H. st al. Chem Pharm Bull 1989; (in press) 周志华 ; MME. 药学学报 1988; 28 (2): 137 HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHIC ANALYSIS OF SAPONINS OF PANAX QUINQUEFOLIUM CULTIVATED IN YUNNAN, CHINA Yang Chongren, Yao Rongcheng, Ruan Dechun, Chen Zonglian, Yamaguchi Hirayuki* (Laboratory of Phytochemistry, Kunming Institute of Botany, Academia Sinica, Kunming, China; *Central Research Laboratories, Wakuraga Pharmaceutical Co., Ltd., Hiroshima, Japan) Abstract Composition and contents of saponins of Panax quinquefolium cultivated in Yunnan, China, were analyzed by high-performance liquid cliromatography (HPLC)on an N-18 ODS-column using aqueous acetonitrile containing KH,- PO, or HPO, as the mobile phase, flow rate; 1ml/min, detection wave length 202 nm, chart speed; 2.5 mm/min. Contents of the major saponins including ginsenoside Rbl, Rb2, Rc, Rd, Re, Rgl, Ro and malonyl saponins (malonyl gensenoside Rb1, Rb2, and Rc) were markedly different according to the age, time of harvest, commercial grades, and the underground parts of the plant. Key words Panax quinquefolium, saponins; HPLC