前言 全能泵是一款低压混合泵, 能够提供 800 bar 的操作压力 集成式多功能阀具有便捷的功能, 如自动冲洗 切换附加混合器进出方向以及过滤器反冲 为了证明 1260 Infinity II 全能泵的卓越性能, 本文选择了几种不同严苛要求的应用 将 1260 Infinity II 全能泵获得的

技术概述 全能泵 低压混合泵高准确度和高精度的新标杆 800 700 600 500 400 300 200 100 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 作者 Melanie Metzlaff 和 Patric Hörth 安捷伦科技有限公司 摘要 全能泵能够为使用 4.6 mm 色谱柱运行的常规应用提供最高灵活性, 或在 2.1 和 3.0 mm 内径色谱柱上快速运行时展示出丝毫无损的精度与准确度 本技术概述展示了 1260 Infinity II 全能泵的出色性能 在苛刻的条件下对其保留时间精度进行评估, 并与 进行比较 另外, 通过运行阶梯评估两种泵的组分准确度 延迟体积和流速准确度

前言 全能泵是一款低压混合泵, 能够提供 800 bar 的操作压力 集成式多功能阀具有便捷的功能, 如自动冲洗 切换附加混合器进出方向以及过滤器反冲 为了证明 1260 Infinity II 全能泵的卓越性能, 本文选择了几种不同严苛要求的应用 将 1260 Infinity II 全能泵获得的结果与 获得的结果进行比较 实验部分 仪器实验中使用下列模块 : 全能泵 (G7104C) (G7112B) Multisampler (G7167A), 配备集成式样品冷却装置 ( 选件 #100) MCT (G7116A) 二极管阵列检测器 WR (G7115A), 配置标准流通池 : 光程 10 mm, 池体积 13 µl 软件 Agilent OpenLAB CDS 2.2 (M8413A) 化学品所有试剂纯度均为液相色谱级 新制超纯水产自配置 0.22 µm 膜式终端过滤器 (Millipak) 的 Milli-Q Integral 水纯化系统 乙腈和丙酮购自 Merck (Darmstadt, Germany) 三氟乙酸 (TFA) 和甲酸 (FA) 购自 Sigma-Aldrich (Steinheim, Germany) 方法 表 1. 阶梯洗脱的色谱条件 参数色谱柱 限流毛细管 A) 0.3% 丙酮水溶液 B) 水 20 至 45 分钟内, 以 1% 阶梯步长将 A 从 100% 降至 94% 45 至 55 分钟内, 以 2% 阶梯步长将 A 从 94% 降至 90% 55 至 80 分钟内, 以 10% 阶梯步长将 A 从 90% 降至 51% 80 至 90 分钟内, 以 1% 阶梯步长将 A 从 51% 降至 49% 90.01 至 110 分钟内, 以 10% 阶梯步长将 A 从 40% 降至 10% 110.01 至 135 分钟内, 以 2% 阶梯步长将 A 从 6% 降至 0% 停止时间 140 分钟流速 1 ml/min 柱温 30 C 273/4 nm, 参比波长 360/100 nm,10 Hz 表 2. 平缓运行的色谱条件 化合物 参数 多酚类混合物 : 儿茶素 咖啡酸 表儿茶素 表没食子儿茶素 ( 均购自 Sigma-Aldrich) 色谱柱 Agilent ZORBAX StableBond C18,2.1 50 mm, 1.8 µm( 部件号 857700-902) A) 0.1% 甲酸的水溶液 B) 0.1% 甲酸的乙腈溶液 0 min 时 B 为 6% 8 min 时 B 为 12% 停止时间 8 分钟 后运行时间 3 分钟 流速 0.6 ml/min 进样量 2 µl, 进样针清洗 3 s(60% 乙腈的水溶液 ) 样品温度 10 C 柱温 30 C 280/4 nm, 参比波长 360/50 nm,40 Hz 表 3. 较低有机相比例运行的色谱条件 化合物 参数 磺胺类药物 : 磺胺 磺胺噻唑 磺胺甲嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺二甲嘧啶 ( 均购自 Sigma-Aldrich) 色谱柱 Agilent ZORBAX StableBond C18,2.1 50 mm, 1.8 µm( 部件号 857700-902) A) 0.1% 三氟乙酸的水溶液 B) 0.1% 三氟乙酸的乙腈溶液 0 min 时 B 为 1% 6 min 时 B 为 25% 停止时间 8 分钟 后运行时间 3 分钟 流速 0.6 ml/min 进样量 2 µl, 进样针清洗 3 s(60% 乙腈的水溶液 ) 样品温度 10 C 柱温 45 C 254/4 nm, 参比波长 360/80 nm,20 Hz 2

结果与讨论 实验 1: 阶梯阶梯 ( 包括 A 中的示踪物 ) 用于测定系统延迟体积 组分准确度 混合噪音和流速准确度 使用准确度流量计 (FAM) 评估流速准确度 在相同条件下, 将阶梯应用于配备与不配备 Jet Weaver 混合器的 1260 Infinity II 全能泵以及 1260 Infinity II 上 图 1 所示为三种阶梯洗脱运行结果的叠加谱图, 由 100% A( 水 + 示踪物 ) 变化至 0% A( 水 + 示踪物 ), 阶梯步长为 1% 2% 10% 两种泵在全范围均表现出卓越的性能 即使 B 在较低浓度下以 1% 的步长变化时, 也能实现完美分离 结果清楚表明, 即使 B 在 1% 至 5% 的严苛变化范围内, 1260 Infinity II 全能泵的性能仍与 1260 Infinity II 相当 表 4. 较高有机相比例运行的色谱条件 参数 化合物 苏丹红混合物 : 苏丹 I 苏丹 II 苏丹 III 苏丹 IV( 均购自 Sigma-Aldrich) 色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18,3.0 50 mm, 1.8 µm( 部件号 959941-302) A) 水 B) 95% 乙腈的水溶液 0 min 时 B 为 90% 4 min 时 B 为 100% 停止时间 4 分钟 后运行时间 2 分钟 流速 1 ml/min 进样量 1 µl, 进样针清洗 3 s( 乙腈 ) 样品温度 10 C 柱温 40 C 490/20 nm, 无参比,20 Hz 表 5. 快速运行的色谱条件 参数 化合物 安捷伦 RRLC 校验样品 ( 部件号 5188-6529) 色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18,3.0 50 mm, 1.8 µm( 部件号 959941-302) A) 水 B) 乙腈 0 min 时 B 为 30% 1 min 时 B 为 100% 停止时间 2 分钟 后运行时间 1 分钟 流速 2 ml/min 进样量 1 µl, 进样针清洗 3 s(60% 乙腈的水溶液 ) 样品温度 10 C 柱温 60 C 254/4 nm, 参比波长 360/60 nm,80 Hz 归一化响应 600 全能泵, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器 全能泵, 不配备混合器 500 400 300 归一化响应 585 200 580 575 100 570 0 565 20 25 30 35 40 45 min 100 20 40 60 80 100 120 min 图 1. 在 全能泵 ( 配备与不配备混合器 ) 和 上运行示踪物由 100% 降至 0% 的阶梯 3

根据阶梯计算两种泵的组分准确度 图 2 所示为 1260 Infinity II 全能泵 ( 配备与不配备 380 µl Jet Weaver 混合器 ) 以及 1260 Infinity II 的组分准确度 1260 Infinity II 和 1260 Infinity II 全能泵的组分准确度指标规定分别为 ±0.35% 和 ±0.4% 两种泵的组分准确度均在规定范围内 使其能够获得更稳定的紫外信号 本实验结果清楚展示了 Jet Weaver 混合器的高效混合功能和尽可能保持低延迟体积的智能设计提供的出色性能 向液相色谱堆栈配置中安装 FAM, 来监测阶梯过程中的实际流速 1260 Infinity II 全能泵的真实流速 (0.998 ml/min) 略低于程序设定的 1 ml/min 流速 1260 Infinity II 的真实流速略高, 为 1.003 ml/min 然而两种泵的运行效果都十分优异, 均在 ±1% 的指标范围内 表 7 总结了系统延迟体积 混合噪音和流速准确度 未配备 Jet Weaver 混合器的 1260 Infinity II 全能泵具有最低的延迟体积, 约为 310 µl, 这与预期相同 将 380 µl Jet Weaver 混合器切换至流路, 仅使延迟体积增加到 460 µl 1260 Infinity II 的延迟体积计算结果为 610 µl 所有泵的延迟体积计算都已包括毛细管 限流毛细管和检测器流通池的体积 在这些测量中,1260 Infinity II Multisampler 均不属于流路部分 在全范围内对每一阶梯的混合噪音进行计算 表 7 比较了三个阶梯的混合噪音, 即示踪物为 95% 49% 和 4% 时 1260 Infinity II 全能泵和 1260 Infinity II 具有相似的结果 然而, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器的 1260 Infinity II 全能泵在混合噪音方面获得了最佳结果 配备附加混合器后,1260 Infinity II 全能泵的延迟体积仅略有增加, 但混合性能的改善 组分准确度 (%) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 全能泵, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器 全能泵, 不配备混合器 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 B 设定 (%) +0.35% 0.35% 图 2. 全能泵 ( 配备与不配备混合器 ) 以及 的组分准确度 表 7. 阶梯结果 全能泵, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器 全能泵 延迟体积约 460 µl 约 310 µl 约 610 µl 95% A 时的混合噪音 0.015% 0.048% 0.023% 49% A 时的混合噪音 0.024% 0.040% 0.045% 4% A 时的混合噪音 0.013% 0.034% 0.012% 平均流速 (ml/min) 0.998 0.998 1.003 平均流速差 (%) 0.164 0.155 0.270 4

实验 2: 平缓的保留时间精度为测定平缓条件下的保留时间精度, 对 4 种多酚类化合物的混合物进行了分析 在 8 分钟内由 6% B 升至 12% B, 表示 B 每分钟变化 0.75% 图 3 所示为两幅色谱图的叠加图, 分别为 1260 Infinity II 全能泵 ( 配备附加混合器 ) 和 1260 Infinity II 采集到的结果 四种化合物在两种泵上的保留时间精度 ( 表 8) 相近 本实验表明,1260 Infinity II 全能泵即使在平缓条件下也具有较高的混合精度, 同等条件下, 的性能稍优 实验 3: 有机相比例较低时的保留时间精度对 5 种磺胺类药物的混合物进行分析, 运行使有机相由 1% 升至 25%( 图 4) 这种较低的有机相比例范围对于很有优势 而 1260 Infinity II 全能泵能够在 0 至 100% 的混合范围内运行 为了评估两种泵在低有机相比例下的性能, 计算 8 次连续运行的保留时间精度 ( 表 9) 两种泵在保留时间精度方面都显示出卓越的性能 而且对于磺胺和磺胺噻唑两个早洗脱化合物,1260 Infinity II 全能泵的性能要优于 1260 Infinity II 表 8. 多酚类化合物分析结果的保留时间精度 使用 8 次连续运行结果计算 全能泵 图 3. 采用平缓分析多酚类化合物 洗脱顺序 : 儿茶素 咖啡酸 表儿茶素 表没食子儿茶素 Agilent 1260 Infinity 全能泵 儿茶素 咖啡酸 表儿茶素 表没食子儿茶素 平均 RT (min) 2.019 2.372 3.979 4.426 标准偏差 RT 0.0018 0.0015 0.0042 0.0036 RSD RT 0.087 0.061 0.106 0.081 平均 RT (min) 2.348 2.710 4.927 5.491 标准偏差 RT 0.0035 0.0023 0.0032 0.0033 RSD RT 0.151 0.085 0.066 0.060 实验 4: 有机相比例较高时的保留时间 全能泵 图 4. 在较低有机相比例下分析磺胺类药物 洗脱顺序 : 磺胺 磺胺噻唑 磺胺甲嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺二甲嘧啶 5

精度在本次实验中, 采用 90% 至 100% 的有机相范围对苏丹红 1 2 3 4 进行分析 ( 图 5 和表 10) 结果显示,1260 Infinity II 全能泵非常适用于此类应用, 性能优于 1260 Infinity II 实验 5: 快速运行的保留时间精度 表 9. 磺胺类药物分析结果的保留时间精度 Agilent 1260 Infinity 全能泵 磺胺 磺胺噻唑 磺胺甲嘧啶 磺胺氯哒嗪 磺胺二甲嘧啶 平均 RT (min) 0.505 2.926 3.607 3.935 4.586 标准偏差 RT 0.0005 0.0009 0.0012 0.0013 0.0005 RSD RT 0.092 0.032 0.033 0.033 0.010 平均 RT (min) 0.499 3.468 4.331 4.671 5.355 标准偏差 RT 0.0009 0.0044 0.0022 0.0022 0.0024 RSD RT 0.174 0.127 0.050 0.047 0.045 全能泵 图 5. 在较高有机相比例下分析苏丹红类化合物 洗脱顺序 : 苏丹红 1 苏丹红 2 苏丹红 3 苏丹红 4 表 10. 苏丹红化合物分析结果的保留时间精度 使用 8 次连续运行结果计算 Agilent 1260 Infinity 全能泵 苏丹 I 苏丹 II 苏丹 III 苏丹 IV 平均 RT (min) 0.643 1.085 1.497 2.656 标准偏差 RT 0.0004 0.0008 0.0007 0.0014 RSD RT 0.055 0.070 0.047 0.053 平均 RT (min) 0.630 1.058 1.468 2.640 标准偏差 RT 0.0009 0.0018 0.0027 0.0044 RSD RT 0.147 0.173 0.187 0.166 6

为缩短运行时间, 应用 2 ml/min 的高流速 时间设置为 1 分钟, 有机相比例由 30% 升至 100%( 图 6) 对 1260 Infinity II 的标准配置和低延迟体积配置进行测试 低延迟体积配置将阻尼器和混合器旁路设置 1260 Infinity II 全能泵采用有混合器与无混合器的配置 所有系统配置的压力约为 540 bar 低延迟体积配置的 1260 Infinity II 具有最短的运行时间, 其次是采用标准配置的 1260 Infinity II 全能泵, 低延迟体积配置, 标准配置 全能泵, 标准配置 全能泵, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器 为展示快速运行色谱的保留时间精度 ( 表 11), 选择了 3 个代表峰 即使在如此严苛的条件下, 两种泵及其相应配置泵均显示出极佳的保留时间精度,%RSD 均小于 0.09% 在附加实验中, 将流速由 2 ml/min 升至 2.6 ml/min, 系统压力约为 750 bar 由于 1260 Infinity II 全能泵的操作压力高达 800 bar, 而 1260 Infinity II 的操作压力限为 600 bar, 本次试验中仅使用了标准配置的 1260 Infinity II 全能泵 流速提升至 2.6 ml/min 后, 运行时 图 6. 使用高流速分析 RRLC 校检样品 表 11. RRLC 校检样品分析结果的保留时间精度 选择 3 个代表峰 使用 8 次连续运行结果计算 全能泵 标准配置 峰 3 峰 6 峰 8 平均 0.697 0.977 1.166 标准偏差 0.0004 0.0005 0.0005 RSD 0.051 0.047 0.040 全能泵, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器 平均 0.766 1.135 1.341 标准偏差 0.0005 0.0004 0.0000 RSD 0.060 0.031 0.003 标准配置 平均 0.813 1.112 1.290 标准偏差 0.0005 0.0005 0.0006 RSD 0.066 0.048 0.050, 低延迟体积配置 平均 0.614 0.850 1.023 标准偏差 0.0005 0.0006 0.0005 RSD 0.084 0.074 0.047 7

间由 1 分钟缩短至 0.77 分钟 ( 图 7) 所有峰都在 1 分钟内洗脱, 具有出色的保留时间精度, 低于 0.15% RSD 的性能指标 1260 Infinity II 全能泵上最后一个洗脱的化合物 (0.967 min) 的洗脱时间早于采用低延迟体积配置的 1260 Infinity II 在 2 ml/min 流速下的洗脱时间 (1.095 min) 结论 全能泵适用于各种极具挑战性的液相色谱应用, 在保留时间精度方面具有出色的性能 1260 Infinity II 全能泵和 在应用阶梯时均表现出卓越的组分精度和混合噪音性能 对两种泵实时流速的测量与监测结果表明, 流速准确度均低于 0.3% 10 2 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0 0.1 1 2 3 4 5 化合物 平均 RT (min) RSD RT (%) 1. 乙酰苯胺 0.171 0.103 2. 苯乙酮 0.351 0.071 3. 苯丙酮 0.546 0.037 4. 丁酰苯 0.668 0.021 5. 苯戊酮 0.710 0.019 6. 苯己酮 0.763 0.025 7. 苯庚酮 0.842 0.025 8. 苯辛酮 0.909 0.024 9. 二苯甲酮 0.967 0.024 6 7 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 图 7. 采用 2.6 ml/min 的流速, 以 750 bar 反压运行 8 次的重叠色谱图 8 9 1260 Infinity II 全能泵系统的延迟体积约为 310 µl, 配备 380 µl Jet Weaver 混合器后为 460 µl 1260 Infinity II 的系统延迟体积高达 610 µl 本技术概述表明两种泵都具有卓越的性能 此外, 对于通常有分析优势的严苛应用,1260 Infinity II 全能泵能够提供极佳的分析结果 查找当地的安捷伦客户中心 : www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线 : 800-820-3278,400-820-3278( 手机用户 ) 联系我们 : LSCA-China_800@agilent.com 在线询价 : www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 本文中的信息 说明和指标如有变更, 恕不另行通知 安捷伦科技 ( 中国 ) 有限公司,2018 2018 年 3 月 1 日, 中国出版 5991-9031ZHCN