期 赵恒波等 纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响 证明 在以苜蓿草或大麦为主的羔羊日粮中加入纤维素酶对采食量和日增重没有显著影响 针对国内外有关酶制剂在反刍家畜上应用效果不一致的现状 本研究选择羔羊为试验动物 以纤维素复合酶为外源性添加酶 进行了系列试验 结果表明 添加纤维素复合酶制剂不同程度地

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1 畜牧兽医学报 纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响 赵恒波 罗海玲 朱 虹 徐永锋 刘 凯 张小红 中国农业大学动物科技学院 北京 动物营养学国家重点实验室 北京 摘 要 为了探明纤维素复合酶提高羔羊饲料消化率的消化道组织学基础 选择刚出生且体重相近的波尔山羊公羔 只 日龄开始自由采食优质苜蓿干草 日龄断奶 分为和 添加 酶制剂 分别在 和 月龄每组各选体重相近的 只羔羊屠宰 结果表明 瘤胃乳头长度 宽度和单位面积瘤胃乳头表面积随月龄增加而增加 而单位面积乳头数随着月龄的增加而减少 酶制剂提高 月龄羔羊瘤胃乳头长度 宽度 和单位面积瘤胃乳头表面积 减少单位面积乳头数 显著提高 月龄十二指肠肠绒毛的长度 在 月龄 酶制剂有增加小肠隐窝深度和黏膜厚度的趋势 但未达到显著水平 关键词 羔羊 纤维素酶 消化道组织结构中图分类号 文献标识码 文章编号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在畜牧生产中 纤维素复合酶最早应用于非反刍动物 用来补充动物内源酶的不足 激活内源酶的分泌 在反刍动物中应用较晚 且使用效果报道不 一 " 等报道 日粮中添加纤维素复合酶可提高牛的增重效果和消化能力 改善牛的生产能力 而在高粱日粮中添加 产奶量并没有增加 在羊的日 粮中添加纤维素复合酶可提高羊毛产量 增加羔羊 :* 及 的采食量 增加总挥发性脂肪酸的浓度 促进氮平衡 同时有利于断奶羔羊健全瘤胃微生物区系和发酵 增加羔羊的日增重 肥育羊的饲料转化效率 促进肥育羊的生长 并通过改善饲料的消 化性提高饲料转化效率 但是 #&" 等 收稿日期 基金项目 国家 项目 教育部 新世纪优秀人才资助计划! 作者简介 赵恒波 男 辽宁沈阳人 硕士生 主要从事动物营养与饲料科学研究 通讯作者 罗海玲!"# $%&##'%&#& %'" '

2 期 赵恒波等 纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响 证明 在以苜蓿草或大麦为主的羔羊日粮中加入纤维素酶对采食量和日增重没有显著影响 针对国内外有关酶制剂在反刍家畜上应用效果不一致的现状 本研究选择羔羊为试验动物 以纤维素复合酶为外源性添加酶 进行了系列试验 结果表明 添加纤维素复合酶制剂不同程度地提高了日粮中各种养分的表观消化率 这种促进作用也受到羔羊生长发育阶段的影响 但二者的互作效应不显著 酶制剂显著提高了羔羊 和 月龄日粮的 : 消化率 从而提高了日 粮的饲用价值 国内外目前在家畜上关于纤维素复合酶的研究多集中在增重 饲料转化效率 消化率等方面 如纤维素酶对瘤胃影响的研究主要是关于对营养物质消化率 瘤胃内微生物数量 种类的影响 对小肠的研究主要集中在营养物质消化吸收率及相关酶活性 而其对于羔羊消化道组织结构学发育的影响研究甚少 本研究就纤维素复合酶提高羔羊饲料消化率的消化道组织结构基础进行研究 以期探明在羔羊日粮中添加纤维素复合酶对山羊早期消化道发育情况的影响 从组织学上为生产实践中纤维素复合酶的应用提供一定理论依据 材料和方法 试验动物和饲养管理 选择北京高特波尔山羊种羊场经同期发情和人工受精技术配种刚出生的健康无病 体重相近的波尔山羊公羔 只作为试验动物 试验全期采用常规饲养管理 自由饮水 定时哺乳 每天清扫羊舍 舍内自然通风 日龄羔羊开始接触优质苜蓿干草 自由采食 日龄开始饲喂精料和全株玉米青贮饲料 定量采食 日龄断奶 精料配方及营养成分见表 表 精料配方及营养成分 /"/$! + $ ' $+$)! $ $$ '$$! 饲料成分 比例 营养成分 含量 " &" ""% " '&" " 玉米 9 : 9 豆粕 2+"% $"%# : 9 麸皮 "% + % 9 干啤酒糟 : 2+ "" %& : 9 磷酸氢钙 %) * 9 : 9 石粉,&$"" 9 % 9 食盐 %# 9 添加剂 & & " 合计!%# 试验设计 按随机分组试验设计 试验分为 不添加酶制剂 和 添加酶制剂 酶的添加量为 纤维素复合酶 格林酶 由中农博特生物技术有限公司提供 主要成分为纤维素酶 木聚糖酶和果胶酶 每组 只 从 日龄饲养到 月龄 样品的采集 制备与测定 采样 羔羊 和 月龄时 分别从两组中选取体重相近的羔羊各 只 禁食 后屠宰 迅速取出消化道 采用双结扎法取十二指肠前段 约 $ 以及瘤胃背囊后侧的瘤胃壁样品 $ 和 $ 放入 的甲醛溶液中固定 用于组织切片的制作及相关测定 组织切片的制备 常规法制备切片 取材 固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 切片 染色 封固 观察 测定方法 组织切片作常规 ) 染色 利用 *! 病理图像分析系统 版本 观察 测定瘤胃乳头的长度 宽度 单位面积瘤胃乳头数和单位面积瘤胃壁乳头表面积 十二指肠绒毛长度 隐窝深度和黏膜厚度 每个样品至少记录 个数据 单位面积瘤胃壁乳头表面积 $$ $ 乳头的长度 宽度 乳头数量 $ 统计分析 应用 进行数据统计分析和方差分析 结果以平均数 < 标准差表示 以 为差异

3 畜 牧 兽 医 学 报 卷 显著 以 为差异极显著 结 果 纤维素复合酶制剂对羔羊瘤胃乳头发育的影 响 羔羊在不同时期瘤胃乳头发育的结果见表 与图 项目 "$ 表 纤维素复合酶对羔羊不同时期瘤胃乳头发育的影响 / " /! "# $%#& ' $!)& $&! ""+ 0 "& $ $+' # 月龄 $ 月龄 $ 月龄 $! "% $" #! "% $" #! "% $" 乳头长度 %&#%#" $$ 9 <9 9<9 9 <9 6 9<9 9 <9 : 9<9 乳头宽度 %&#%&$$ 9 <9 9<9 9 <9 6 9 <9 6 9 <9 6 9<9 6 单位面积乳头数量 %&#% '$+" " $ 9<9 9< 9 9<9 6 9<9 9< 9 : 9< 9 : 表面积 ' 0% "% "% $$ $ 9 <9 9<9 6 9 <9 9< 9 : 9<9 9 < 9 同一行中角标小写字母相同者表示差异不显著 小写字母不相同者表示差异显著 大写字母不相同者表示差异极显著 下表同 %$" %& %##" "'"&$"% % $%##" "$"% %$"#" "% 0 &&0& % &0" ""+" "" # %"% $"! " %$"% +"# 9 乳头宽度 %&#%&,9 乳头长度 %&#%#" 图 瘤胃乳头组织结构! ""'!))!!)& $ "

4 !!$ 期!$*/ 赵恒波等$纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响!! 表 " 可知!添加酶制剂促进了瘤胃乳头的发育! 提高 '& & 月龄羔羊的瘤胃乳头长度" #$ #$!#!单 位面积瘤胃乳头表面积" # $ #$!#!乳 头 宽 度" #$*#!减少单位面积乳头数" # $ #$!#' 但 " $$ 月龄时!添加酶制剂 除 极 显 著 提 高 单 位 面 积 瘤 胃 乳 头表面积外" # $ #$!#!对 其 他 指 标 影 响 不 显 著" $$ #$*#' 瘤胃乳头的长度&宽度和单位!! 由表"也可以看出! 面积瘤胃乳头的表面积随月龄的增加而增加!而单位 面积的乳头数则随着月龄的增加而减少" # $ #$!#' #$!#影响了瘤胃!! 月龄和纤维素酶极显著" # $ 乳头长度& 单位面积瘤胃乳头数和表面积!同时两因素 对于乳头长度和数量影响存在互作效应" # $ #$ *#'!! 酶制剂显著提 高 单 位 面 积 乳 头 表 面 积!但 在 各 月龄阶段表现程度不同!与 相 比! "& '& &月龄 分别提高了 '% #() & "" #&) 和!* #&) '! F!! 纤维素复合酶 制 剂 对 羔 羊 十 二 指 肠 组 织 形 态 结构的影响!! 羔羊在不同月龄十二指肠组织形态结构的结果 见表 ' 和图 "' 表 $! 纤维素复合酶对羔羊十二指肠组织形态结构的影响 G2,$!G>,, + +, / ++ 2 / -,6 9/6C/C,68 8/ =>/ / 9, 6I C 9 8,? 项目 I 6M " 月龄 " 6:< :< O : O 6< 绒毛长度 a8 9M <=,"6 '$&W $"`"/W /% 隐窝深度 b > M M?R,"6 绒毛长度,深度 a8 9M <=,?R 黏膜厚度 Y9> :9M> :?R,"6 ' 月龄 ' 6:< C C :< O : & 月龄 & 6:< O 6< C :< O : '!(W!"`"W %/ O 6< '!,W $%`!!W ', '$(W /`!"W,( "(!W *$`/W!/ '!'W!"`"W %/ /,W */`'W /&- /!W /(`&W $!- %/W **`/W "&-C!$$W **`!,W $"TC!$(W,"`!W /!C>!"'W "/`"W *,> 'W %%`$W **- &W '!`$W ',- 'W "&`$W ',C 'W!,`$W &*C "W %&`$W ",T> "W *,`$W $*T? &!*W!&`",W %$ &",W ((`!'W (, '(&W *(`'(W /" &$/W ""`!%W,' '((W!'`(W && &$"W /&`"$W "$ adw绒毛长度" a8 9M <= #% bxw隐窝深度" b > M M?R #%YXW黏膜厚度"Y9> :9M> :?R # 图!! 十二指肠组织结构 J&" 0!!</ =>/ / 9,/ +C/C,68 J&"?K?

5 畜 牧 兽 医 学 报 卷 从图 和表 可以看出 随着月龄的增长 肠隐窝深度增加 使绒毛长度 隐窝深度的比值变小 而黏膜厚度在各月龄间变化不大 表中数据显示 在 和 月龄 酶制剂均提高了肠绒毛的长度 并且在 月龄时达到显著水平 在 月龄 酶制剂有增大小肠隐窝深度和黏膜厚度的趋势 但未达到显著水平 讨 论 纤维素复合酶制剂对羔羊瘤胃乳头发育的影响 羊以采食粗饲料为主 瘤胃是其非常重要的消化器官 它不但是所采食饲料的储藏库 同时也可以通过机械性 化学性和微生物消化实现对粗饲料的消化 羊消化系统的发育始于胚胎的早期 出生后需经过一定时间的发育才能逐渐形成完善的消化系统 瘤胃的生理发育可以分为两个方面 瘤胃容量的增加和瘤胃黏膜的发育 瘤胃黏膜在家畜出生前就开始分化 并在其表面形成许多大小不等 圆锥状或舌状乳头 在出生时乳头的分化还没有完成 瘤胃乳头是其黏膜上皮的小突起 与吸收功能有关 该突起可增加瘤胃壁吸收挥发性脂肪酸的表面积 一个瘤胃壁上约有 万个瘤胃乳头 使黏膜表面积扩大 倍 因此乳头黏膜的表面积是评价瘤胃及其 黏膜代谢水平的重要标准 瘤胃的正常发育是一个有序的过程 其形态结构的发育及消化酶的分泌与活性受到家畜种类 年龄和体重 受环境的影响 日粮组成 神经内分泌及其他因素 包括消化道部位 外源酶制剂等 的影响 其中 日粮组成及营养物质成分可影响瘤胃乳头长度 宽度以及瘤胃壁厚度 饲料对瘤胃生理的刺激作 用可能表现为瘤胃重量和肌肉组织的发育 反刍动物开始进食固体饲料可以促进前胃的生长发育 但是物理容积的增大并不能促进瘤胃绒毛的发育 只有瘤胃发酵才能刺激和保证瘤胃上皮的正常发育 有研究表明 瘤胃乳头发育是挥发性脂肪酸 特别是丁酸和丙酸 刺激的结果,% " 和 "" 研究了短链脂肪酸对羔羊瘤胃上皮形态发育的影响 与灌注缓冲液相比 灌注短链脂肪酸可以增加瘤胃乳头的高度 研究结果证明 = 可刺激瘤胃上皮的代谢 促进瘤胃结构的发育和吸收活 性," $"&" 等研究表明瘤胃的发育在很大程度上受年龄以及微生物发酵产物丁酸盐的影响 本研究前期结果证明酶制剂显著提高了日粮消化率 特别是 : 的消化 促进了瘤胃体外发酵 提高了瘤胃中挥发性脂肪酸的产生量 本试验揭示纤维素酶促进瘤胃乳头的发育 提高了单位面积瘤胃乳头表面积 这一结果正好与前期的试验结果吻合 即在日粮中添加纤维素酶提高了挥发性脂肪酸的量 挥发性脂肪酸产量的提高促进了瘤胃乳头的发育 从而增强了瘤胃对营养物质的吸收能力 纤维素复合酶制剂对羔羊十二指肠组织形态结构的影响 哺乳动物的肠道发育变化在幼儿时期经历两个阶段 一是从母体子宫产出后 依靠初乳和母乳提供营养的阶段 此时的发育特点是出生后短期内快速的组织生长及功能的成熟 以适应从胎盘营养到胃肠道营养的转变 二是由母乳转变为固体食物阶段 此阶段肠道上皮的发育 以及消化和吸收功能受饲料的影响很大 这两个阶段肠道的整体形状 细微 结构以及细胞分化等都存在着剧烈变化 小肠表面积的增加 主要是由胰腺和小肠内酶产物的增加刺激的 小肠营养物质的运输也对其起 了一定的作用 试验表明 家禽小肠重量 小肠直径以及绒毛长度都是在饲喂饲料以后才增加 的 饲料限制 肠道菌群平衡状态 饲料纤维含量以及生长和生产需要的改变都会影响到绒毛的发 育 小肠管壁有环形皱襞 黏膜上有许多绒毛 肠黏膜表面通过皱襞 绒毛 微绒毛来大幅度地扩大吸收面积 绒毛根部的上皮下陷至固有层 形成管状的肠腺 其开口位于绒毛根部之间 绒毛和肠腺与小肠的消化与吸收功能密切相关 肠绒毛是营养吸收的主要部位 肠绒毛柱状上皮细胞的微绒毛可使吸收面积增大数百倍 因此 其长度的大小也就意味着小肠对营养物质吸收情况的好坏 绒毛变短会使小肠对营养物质的消化吸收能力降低 本试验中 酶制剂提高了 月龄肠绒毛的长度 可能是纤维素复合酶制剂不同程度地提高了日粮中各种养分的表观消化率 致使肠内营养物质增加 促进了绒毛的发育 但是 月龄绒毛的长度有所下降 可能因为本试验中羔羊在 天断奶 饲料由母乳向固体饲料的转变使日粮组成 饲喂频率都发生了变化 导致了绒毛的发育暂时受到影 响 在 月龄时绒毛发育良好 这与 &%" 等和 %% % 等的研究结果一致 小肠腺是绒毛基部的上皮内陷至固有层内形成

6 期 赵恒波等 纤维素复合酶对羔羊消化道组织结构的影响 的管状结构 又称肠隐窝 隐窝底部的上皮细胞不断进行有丝分裂 完成有丝分裂的细胞在其他细胞的推动下逐渐从隐窝向绒毛移行 最后到达小肠绒毛顶端并脱落 脱落的肠道上皮细胞进入肠腔并随粪便排出体外 通过不断分裂和脱落 使小肠上皮处于动态平衡 因此 隐窝深度变浅 数值变小 说 明小肠上皮更新的速度过程减慢 本研究发现 酶制剂有提高隐窝深度和提高小肠黏膜厚度的趋势 也即证明酶制剂有提高小肠上皮更新速度的趋势 小 结 饲料中添加纤维素酶有助于促进瘤胃乳头的发育 显著提高乳头的长度 宽度 单位面积瘤胃乳头表面积 尤其对 月龄羔羊的作用效果最为显著 酶制剂对瘤胃乳头发育的促进作用是提高粗饲料消化率的组织学基础 饲料中添加纤维素酶显著提高 月龄羔羊肠绒毛的长度 也有提高隐窝深度和提高小肠黏膜厚度的趋势 致谢 特别感谢中国农业大学动物医学院佘锐萍教授在制片和图片分析中给予的帮助和指导 参考文献 " ))'+" &$% 0" 0" 2$" "% "$""%$ 0#%& 0 '$%& #% &% & "&&%& 2:%& 2& &> & '" %#"" % : 0" 0"?"' 0&+#2 & " 2$" '$& %#0" $"% &% & "&+&#& 2 0%#0%#0%% 2" % %20" #%$+ '%# 0&$%#& ""!& &) ) >" " 0 %&#%$+ " 2$% & "% $"0"&0" "0% " :& "&+&#& 2 % " 0$%" & '# ' %#&"" #&"! % 06%") :9 0" 0% ' 0%%%"?"' " 2$"& "&+&#& 2 00"" % " 0$%"% %%%& 0#%$+ % % &% '%# 0&$%#&"" 赵恒波 复合酶制剂对羔羊早期生长发育的影响及作用机理初探 : 北京 中国农业大学 高艳霞 王加启 新生犊牛消化功能的发育及影响因素 中国奶牛 6 #""! " " "# $" 0 '$" %&#%& % #"0"&0" " &" 6 =" )%& ) %" > %" %" & " &'"%#'$" 0" $%0 %# " 0# & "$%# 020"" '$ & 0 & "+'# :%& 2&!%$% " )&#&% : %+, 0" 0 % & '&" % &" "% %$& %# " "# $" 0" $%& " %#0:%& 2& 张元庆 杨安平 犊牛断奶前后的瘤胃发育小肠生长以及代谢活性 当代畜禽养殖业,% " ""6 9 0" 0#% &#"0% 2% & & 0' & " "# $" 0" '$" "&"#&'$&"% %# "" 9:%& 2&""," $"&"! ">)"&& :" "# $"%% %#2 &0% '$"&'" %$#& " ' " '%# 0:%& 2&"" 黄卫东 沈 峰 新生动物肠道的生长发育及乳源性生长因子的影响 兽药与饲料添加剂 &% (6" % %$ ("0( % " "# $" 0" & "& " %%$"" 2$" & +&#" & %0 "% & 6 & '# 2& & % / 2 / % #2% %#%$2# #2 & & " %&"& %#% 0 ' "2 '# "#"%& %# % $6& "$ 2 & # - &( 2/ #% : % %" & $ #2%0' & 0" $%#&"& " &"% 2 %#& %& & '#2& - &( 2/ #% : :" "# $" 0" $%# &"& " &"% 2%#& %& & +"0"% %0 "% & 6 '#2& %! :& "&%%+ & 0 % +2 % " & 0 #%" " '" & % %# " "# $"' &%"# ) " > : )& "$& %#%" & " 0 #%&% " &"%" %+ &%0 " 0""" && )& "$& 2 %% %! "2%$% )96& % & %# $"& 0" $%#&"& " " '$%?&$%#$&#" % &%## 0 %+& "$ 2 & # 沈霞芬 9 家畜组织学与胚胎学 9 北京 中国农业出版社 成令忠 9 组织学 9 北京 人民卫生出版社

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