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1 灵敏的 多样化的 Western Blot 信号检测

2 凝胶成像 化学发光 / 荧光 细胞 / 组织培养核酸 / 蛋白提取电泳蛋白印记信号检测 图像分析

3 多样化的应用, 分子成像系统已成为最常用的生命科学检测设备 Fluorescence Chemiluminescent Blot 化学发光免疫印迹 Protein gels & stainfree 蛋白凝胶 / 免染 Colony plates 菌落 DNA/RNA 核酸凝胶 In-vivo Multiplexing animal imaging 小动物活体荧光多色荧光免疫印迹

4 清晰的检测图像对于生命科学研究非常重要 ECL Western Blot Chemiluminescence SYPRO Ruby UV fluorescence SYBR Safe Gel Blue epi-fluorescence ECL+ Western Blot Chemiluminescence GelGreen UV fluorescence Cy2, Cy3, Cy5 Spectral Multiplexing Coomassie Gel Trans visible light Petridish Trans visible light ECL Western Blot Chemiluminescence Luciferase Assay In-vivo Bioluminescence Nucleic Acid Staining UV fluorescence Alexa Fluor Spectral Multiplexing

5 只为完美成像 UVITEC 理念 成像系统的原理 化学发光成像 ( 化学反应自发光 ) 自发光 酶联样品 + 底物 ( 发光液 ) 制冷 CCD 相机 特点 : 化学反应自发光 信号较弱 时间较短

6 只为完美成像 UVITEC 理念 成像系统的原理 - 荧光成像 ( 光致发光 ) 激发光 发射光 检测信号 滤光片 CCD 相机 透射 / 落射光源 紫外 可见光 红外 偶联信号分子的样品 特点 : 光谱范围广 信号较强 持续时间长

7 化学发光系统灵敏度 深度制冷系统 大的镜头光圈光的直线距离变焦 VS. 定焦

8 为什么不同的成像设备的灵敏度差别很大?

9 THE ALLIANCE 优势 CCD 芯片是核心部件 CCD 尺寸是重要的指标 像素是指 CCD 能分别的最小感光元件, 一般来讲像素越多, 成像也就越清晰细腻 CCD 感光器件的面积越大, 每个像元面积越大, 捕获的光子越多, 感光性能越好, 信噪比越低

10 分辨率影响清晰度和定量准确性 相同尺寸的 CCD, 分辨率 ( 像素 ) 越高, 成像越清晰 光密度体积积分 : 高分辨率的 CCD 可提供准确的定量分析结果

11 12-bit 相机 4,096 (2 12 ) 灰度等级 低灰度值造成信号累积上限 相机 BITS & 灰度等级 16-bit 相机 65,536 (2 16 ) 灰度等级 更精确的定量分析基础

12 曝光时间和温度的影响 平时我们拍摄照片 曝光时间由短到长 由此可见, 曝光时间接收到的信号强 但是, 长时间的曝光, 会产生大量的热量, 从而产生噪音, 产生高背景, 影响对样品微弱信号的分辨 从而, 化学发光都需要一个高度制冷 CCD,CCD 的制冷温度从而成为了化学发光凝胶成像系统的重要参数之一

13 THE ALLIANCE 优势 曝光时间和温度的影响 曝光超过 5 秒 CCD 芯片发热热信号暗电流图像高背景 - 雪花 多级半导体制冷 CCD 芯片

14 制冷效果直接决定背景噪音水平 不好的制冷性能高背景噪音 深度制冷系统极低背景噪音

15 三级半导体可达到绝对 60 深度制冷, 极低的背景噪音 1 级半导体制冷低效率系统 2 级半导体制冷低效率系统 3 级半导体制冷高效率系统 4 级半导体制冷, 绝对 -71, Alliance 4.7 超灵敏化学发光系统

16 成像系统的镜头种类 定焦镜头 最小的光衰减, 化学发光系统必备 变焦镜头变焦环调节焦距, 光衰减和散射

17 定焦镜头的特点 对焦虚? 校准过的定焦镜头不存在此问题 有可能出现蛋白降解等问题 调节灰度 调节灰度

18 光圈的影响 光圈大小是化学发光成像系统的冠关键参数 其具体表现为 : 光圈越大, 透过的光子越多, 其灵敏度越高 光圈大小一定要与 CCD 像素匹配, 否则容易过度曝光

19 camera ALLIANCE IMAGING SYSTEM 样品越靠近镜头, 光越容易被收集 camera 9cm 25cm 样品增加 1cm 距离信号减弱 2% 多层样品台, 用于不同信号强度样品的检测 但视野大小会不同

20 ca me ra 影响化学发光成像系统性能的主要参数 20% 制冷温度 30% 光圈大小 // 自动固定镜头 20% 镜头与样品之间的距离 camer a 30% 相机的真实分辨率和 CCD 尺寸

21 获得完美成像的要素 曝光设置 灰度调节 GAMMA 调节 像素合并等 软件功能 有效像素 制冷效果 镜头性能 激发光源等配置 成像系统硬件性能 正确的实验设计 流程

22 荧光成像系统的应用 Multiplexing Multiplexing IR/NIR Fluorescence Multiplexing Fluorescent colonies Spectral fluorescence Bioluminescence In-vivo fluorescence

23 只为完美成像 UVITEC 理念 荧光免疫信号成像 激发光 发射光 检测信号 滤光片 CCD 相机 透射 / 落射光源 紫外 可见光 红外 偶联信号分子的样品 特点 : 光谱范围广 信号较强 持续时间长

24 荧光免疫印迹已经得到广泛应用 Multiplex with ease. See targets and loading controls on the same blot with multiplex detection using 685 nm and 785 nm dye 总蛋白内参归一化定量,PVDF 膜在 NIR/IR 下仅有极低的背景荧光 No strip! No re-probe EGF 刺激后 A431 细胞,ERK1 and ERK2 (p44/42 MAP kinases) 磷酸化情况, 一抗分别是兔抗 ERK 抗体和小鼠抗磷酸化 ERK 抗体, 二抗用抗兔的 IRDye800 标记的抗体 (green), 和抗鼠的 Alexa680 标记的抗体 (red) 叠加后为黄色, 黄色的深浅即代表了磷酸化水平的高低, 并且可以通过软件进行准确的量化分析 蛋白磷酸化

25 定量荧光 Western 的关键因素 : 强度均一的光激发 低丰度蛋白 : 高强度的光激发 激发光和发射光的光谱特异性, 避免串色

26 CHROMAPURE 多色荧光模块

27 CHROMA PURE 多色荧光技术当前最先进的荧光激发技术 ChromaPure 模块使用网状 LED 和激光光源 获得最明亮和均一的光激发 获得准确结果

28 UVITEC 优势 独家技术 网状 LED 阵列 经典 Chroma 设计 激发光滤 光片 Chroma 技术 Confocal Disc 共聚焦盘 独家技术 独家技术 全新款 Chromapure 设计 窄带通发 射滤光片

29 网状 LED 或激光 点式 LED

30 CHROMA PURE 技术 传统点状 -LED 系统常规效果 网状 LED 系统极佳效果 整个样品台获得均一 明亮的光激发

31 无激发光滤光片 Biopanel RGB LED 光源 : 均一的光激发 配有激发光滤光片 ChromapureRGB LED 光源 : 均一, 明亮的光激发

32 Confocal Disc 共聚焦增强系统 弱信号增强 NIR 680nm 及 IR 780nm 激发信号对比 ( 左 : 无 Confocal Disc 右 : 配置 Confocal Disc) egfp 488nm 激发信号对比 ( 左 : 无 Confocal Disc 右 : 配置 Confocal Disc) Alexa 647nm 激发信号对比 ( 左 : 无 Confocal Disc 右 : 配置 Confocal Disc)

33 多色荧光光源 点状 -LED BioPanel 较宽带通 网状 -LED 阵列窄带通 激光窄带通 标配 RGB ChromaPure RGB ChromaPure 近红外

34 UVITEC 全光谱激发光源选择 UV M 312nm UV L 365nm BLUE 420nm BLUE 460nm BLUE 470nm GREEN 520nm RED 650nm RED 690nm NIR 740nm IR 780nm 全光谱激发

35 窄带通滤光片选择 F-520 blue F-535 blue F-565 blue/green F-590 UV F-595 green F-655 red F-695 red F-710 near IR F-740 near IR F-760 NIR F-820 IR F-850 IR 多达 17 种以上窄带通滤光片 及多种常规滤光片

36 UVITEC 采用窄带通滤光片 窄带通 宽带通 X X 重叠 发射光谱

37 灵活的配置 : 全光谱激发 ChromaPure 模块可选择 1-3 个激发通道, 可配合 RGB Panel 及 EPI UV 光源使用 紫外到红外完整光谱覆盖 : epi-uv + RGB panels + NIR 和 IR Chromapure epi-uv 365nm RGB panels NIR 和 IR Chromapure 780nm 以上

38 UVI 凝胶成像系统能够支持目前市场上绝大多数公司的染料, 如 :invitrogen GE Life Science Thermo Pierce Sigma Millipore Promega 等 Cy dye Alexa Fluor Qdot DyLight

39 UVI Band 软件 高级图像分析软件

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46 Free Form 组织 器官及小动物信号图像分析

47 感谢您的关注

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