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1 ! "#$%&'&& 专题报道 #( 及 )*+,' 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义 张开玲 ' 张文伟 臧传善 葛瑞锋 邱杰 孙彦 ' 潍坊医学院临床医学院 山东潍坊 -'. 青岛大学附属医院 山东青岛 --/ 摘要 目的 探讨细胞角蛋白 '01 半乳糖凝集素 0 #( 间皮瘤抗原 ' 0)*+, ' 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义 方法 采用免疫组织化学方法检测 - 例甲状腺良恶性病变 甲状腺乳头状癌 例 癌旁甲状腺组织 例 结节性甲状腺肿 例 中 1' #( 和 )*+,' 的表达 结果 1' 在甲状腺乳头状癌组织 癌旁甲状腺组织及结节性甲状腺肿组织中表达的阳性率分别为./.23/ 和./0/ #( 表达的阳性率分别为.0/./0/ 和 //0/)*+, 的表达的阳性率分别为.0// 和./0/ 三种抗体在甲状腺乳头状癌和癌旁甲状腺组织 结节性甲状腺肿组织的阳性表达率差异均具有统计学意义 0 4.''.56' ' 456' 结论 1' #( 和 )*+,' 在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织和良性病变组织 三种标志物联合检测将进一步提高甲状腺乳头状癌的诊断准确性 主题词 1' #()*+,' 甲状腺肿瘤 乳头状癌 免疫组织化学中图分类号 7-' 文献标识码 8 文章编号 '-'9':'9-9- ;'''.!!'-'9'/:/'/*//,!!! 1' ; )*+,' %; 5% # )8 1$ ' )8 < = 8! ( ' -'/.!" # $%&!'# --/// "> #(??!($( (!!! #%( ( ' 31' #(3 ; )*+,' % (%; ## + (;!!!! 1' ; )*+,' / #!! (%; % ## ; #!;$ ;# ( (%; (!! ; / #!! ; $( = ; ( #( ; >%!(#!(% 7!(!!(? ( 1'!! % (%; ## ##! (%; (!!! ; ; $( =!./23/.23'/ ; './23/! #(? %!(? (! ; )*+,'!! =.23/./23///23/ ;.23/ /23/ /./2 3'/! #(? %!(?!! (! (! ( (! % (%; ##(%; ## ;# ( (!!! ; ; $( =!$#(% ; ( 3 4.''.56///' ///' 4/56///'! #(? % #!!! (! 1' ; )*+,' % (%; ##!$#(% $ ( (! ##! (!!! ; > $!! 1' #()*+,'(%;!!% ##! (#!(% 甲状腺癌是一种常见的内分泌恶性肿瘤 近年 ' 来 我国甲状腺癌的发病率呈逐年上升趋势 在发 通讯作者 邱杰 副主任医师 硕士生导师 博士 青岛大学附属医院耳鼻喉科 山东省青岛市江苏路 '- 号 --///, =@ ( ///A%# 收稿日期 /'-9'9/ 修回日期 /'9/'9/ - 达国家 甲状腺癌占所有恶性肿瘤的 '2 而甲状腺乳头状癌 % (%; #5 又为甲 状腺恶性肿瘤的主要类型 大部分甲状腺乳头状癌 通过形态学结构如纤维血管轴心 乳头水肿 纤维化的间质 钙化和空泡状核 核沟与核内包涵体等

2 特征可以准确诊断 但在实际工作中经常会遇到不典型的病例 如有些良性病变 结节性甲状腺肿等常伴有乳头状增生或毛玻璃样核变 由于甲状腺乳头状癌的病因不明确 加上近几年来分子生物学的发展较为迅速 因此对甲状腺乳头状癌相关分子的 研究成为本领域的热点 甲状腺乳头状癌特异性肿瘤标志物的确立 以及可靠 可行的检测手段的建立 对临床提高确诊率 改善甲状腺乳头状癌的治疗 具有重要意义 本研究采用免疫组化 法检测!" 及 #$%&' 在甲状腺乳头状癌和甲状腺良性病变中的表达情况 通过比较表达的差异性 旨在探讨上述标志物在甲状腺乳头状癌中的诊断与鉴别诊断的意义 资料与方法 一般资料选取 年 月至 年 月就诊于青岛大学附属医院耳鼻喉科 经手术切除的甲状腺组织共 例 其中甲状腺乳头状癌 例 男性 例 女性 例 年龄 岁 平均年龄 岁 岁 例 岁 例 ' 的 例 (' 的 例 伴淋巴结转移 例 不伴淋巴结转移 例 ) 期 例 ) 期 例 癌旁甲状腺组织取自上述甲状腺乳头状癌离癌缘 *' 处肉眼观察无异常 后经病理学检测未发现癌细胞共 例 结节性甲状腺肿组织 例 其中男性 例 女性 例 年龄 岁 平均年龄 + 岁 其中 岁 例 岁 例 免疫组化试剂鼠抗人 单克隆抗体 鼠抗人 #$%&' 单克隆抗体 兔抗人!" 多克隆抗体,-. 修复液 二氨基联苯胺,.! 显色剂及配套 / 试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司 用 0!1 缓冲溶液代替一抗作阴性对照 实验方法所有标本均经 中性福尔马林溶液固定 常规组织处理 石蜡包埋 厚连续切片 常规 染色 采用 / 法进行 #$%&' 和!" 免疫标记 具体操作步骤按试剂说明书进 行 抗原修复采用高压锅高温修复,.! 显色 苏木素对比染色 中性树胶封片 镜下观察 用 0!1 缓冲溶液代替一抗作阴性对照 用已知阳性切片作为参考来对照实验切片染色情况 判断标准切片结果有两位病理科医生采用双盲法独立阅片观察 个有代表性的高倍视野 记数 个细胞 对免疫组化染色中细胞内出现棕黄色颗粒进行半定量评估 两者结果不一致时 经商讨达成一致 #$%&' 阳性信号均为细胞质内出现棕黄色颗粒!"% 阳性信号主要为细胞膜内出现棕黄色颗粒 也有少数可见腺腔边缘着色 根据着色 强度和染色细胞百分比综合判断结果 按照着色强度计分 按阳性细胞着色特征 基本不着色记为 分 着色淡 淡黄色 记为 分 着色适中 棕黄色 记为 分 着色深 棕褐色 记为 分 依据染色细胞百分比计分 按视野内阳性细胞所占总细胞数的比例 为阴性 记为 分 为 分 为 分 为 分 ( 为 分 将上述两项计分结果相乘 分为阴性 分为弱阳性 ) 分为中等阳性 ))( 分记为强阳性 ))) )))) 记为阳性 统计学处理采用 软件建立数据库 计数资料采用 检验进行分析 0+ 为差异有统计学意义 敏感性 真阳性 2 真阳性 ) 假阴性 特异性 真阴性 2 真阴性 ) 假阳性 准确度 真阳性 ) 真阴性 2 所有阳性 ) 所有阴性 结果 的表达情况 阳性信号为细胞质内出现棕黄色颗粒 例甲状腺乳头状癌标本中 例呈阳性表达 阳性率为 + 其中 例为弱阳性表达 例为阳性表达 例为强阳性表达 3456& $ 例癌旁甲状腺组织中 例呈阳性表达 阳性率为 +7 其中 例为弱阳性表达 例为阳性表达 3456& 8 例为强阳性表达 例结节性甲状腺肿中阳性表达的例数为 例 阳性表达率仅为 + 其中 例为弱阳性表达 例为阳性表达 3456&' 在甲

3 ! "#$%&'&& 状腺乳头状癌中阳性率高于癌旁甲状腺组和结节性甲状腺组 差异有统计学意义 ''(' 见 )* ' +', 诊断甲状腺乳头状癌的敏感性为, 特异性为 准确度为 -. 见 )* / #0 的表达情况 / #0 阳性信号为细胞质内出现棕黄色颗粒 例甲状腺乳头状癌标本中 例呈阳性表达 阳性率为, 其中 ' 例为弱阳性表达 1 例为阳性表达 例为强阳性表达 $ 例癌旁甲状腺组织中 例呈阳性表达 阳性表达率为. 其中 例均为弱阳性表达 $ * 例结节性甲状腺肿组织中 例呈阳性表达 阳性率为. 其中 例为弱阳性表达 ' 例为阳性表达 阴性表达见 $ #/ #0 在甲状腺乳头状癌中阳性率显著高于癌旁甲状腺组和结节性甲状腺组 差异有统计学意义 1111(' 见 )* ' / #0 诊断甲状腺乳头状癌的敏感性为, 特异性为, 准确度为,'. 见 )* ' 的表达情况 ' 阳性信号为细胞膜内出现棕黄色颗粒 例甲状腺乳头状癌标本中 例呈阳性表达 阳性率为, 其中 ' 例为弱阳性表达 ' 例为阳性表达 例为强阳性表达 $ 例癌旁甲状腺组织均为阴性表达 $ * 例结节性甲状腺肿仅 ' 例为弱阳性表达 阳性表达率为. 阴性表达见 $ #' 在甲状腺乳头状癌中阳性率显著高于癌旁甲状腺组和结节性甲状腺组 差异有统计学意义 --(' 见 )* ' ' 诊断甲状腺乳头状癌的敏感性为, 特异性为,- 准确度为,1. 见 )* 甲状腺乳头状癌中 +',/ #0' 表达与临床病理特征的关系有 例甲状腺乳头状癌中 +',/ #0 和 ' 同时呈阳性表达 甲状腺乳头状癌中有颈部淋巴结转移者的 / #0 阳性表达率高于无淋巴结转移 差异有统计学意义 1/ #0 2% 0%3 ## *)%3 0!! 37# 0 0 ##84556 #3 $0 4556! " #$%! &""! '&!! 2% 0%3 ## *)%3 0!! 37# 0 0 ##84556 #3 $0 496 '! " ()*+!! &""! '&!! 1

4 '5"/!6/" /"!"!! "*.3 8 -"!.3 * % '+ & (&,-..!!1#$ & '! / (& 5 '"!"!" '"!" #$%& '"!" '5"/!6/" !!" "! $) /($$( & $$$( 0!1#$ & '! '!" *: ;"!""!/ ;5 "" "!/, / !" #$%& 表达与患者性别 年龄 肿瘤直径及 8% 分期等均无关 '1+ 和 #$%& 表达与甲状腺乳头状癌患者的性别 年龄 肿物直径 颈淋巴结转移及 8% 分期均无明显相关性 差异均无统计学意义 2' 1+0 见!"#$ % & '! $$$ (& ( $$)!" #$%& '"!" ' '"!" ' '"!" ' % ( ( ( ( ( )* + + +,-./0 + (( (( 1 ( + "*!!*2 * /*56!" *!!" ( ( (+ ( ""! ( (

5 ! "#$%&'&& 讨论 甲状腺乳头状癌 作为甲状腺癌中最常见的类型 其主要特征是含有乳头状结构 特征性的细胞核 其临床特征常不明显 结节性甲状腺肿伴乳头状增生 慢性淋巴细胞性甲状腺炎伴乳头状增生等疾病均可出现形态多样的乳头样结构 诊断过程中仅仅依靠形态学具有一定困难 此时免疫组织化学 可作为有效的补充 故很多学者都在尝试通过几种有价值的抗体联合检测 以提高甲状腺乳头状癌 诊断的准确性 其中 (') * #+ 和,-./' 抗体的同时表达作为甲状腺乳头状癌诊断标准 在鉴别甲状腺良恶性病变时的准确性最高 (') 是最常见的细胞角蛋白类型之一 近年来 有学者认为 (') 阳性表达并非恶性肿瘤的特异性染色 在一些良性结节和癌周正常组织也可以 ) 出现阳性表达 本研究选取 01 例甲状腺病变组织进行 (') 的免疫组织化学染色 结果显示 (') 在 例 中阳性率为 ) 且多为强阳性 而在对照组 例癌旁甲状腺组织中阳性率为 且多为弱阳性 在 例结节性甲状腺肿中阳性率为 ' 提示单独使用 () 对于鉴别良恶性结节并不是一个很好的指标 但有学者认为当 () 呈广泛阳性表达时应该倾向于恶性诊断 因为良性病变中 () 多呈弱阳性表达 而 () 在大多数甲状 1 腺癌呈中强阳性表达 本研究结果也支持这一观点 认为 () 强阳性有助于 的判断 本实验 () 较 * #+,-./ 特异性低 但敏感性较高 * #+ 是一种内源性凝集素 广泛表达于上皮细胞和免疫细胞 存在于细胞质 细胞核或细胞外 其在调节细胞生长 免疫调节 黏附 凋亡和炎症 反应等过程中发挥重要作用. 等采用酶联免疫吸附试验测量甲状腺癌和良性肿瘤血清中 * #+ 的水平 发现 * #+ 在甲状腺癌中的水平明显高于良性肿瘤 提示 * #+ 是甲状腺癌与良性病变潜在的血清生物标志物 近期研究发现 * #+ 过度表达与多种恶性肿瘤的发生发展以及转移密切相关 曾有报道 * #+ 在鉴别甲状腺良恶性病变时其敏感性和特异性分别为 )) ) 本研究 中 * #+ 阳性表达率 ) 明显高于良性病变组织 说明 * #+ 在 的发生发展中可能扮演着重要的角色 可以用作 与良性病变的鉴别诊断 本组 * #+ 诊断 的敏感性为 ) 特异性为 )11 准确度为 )1,-./ 为酸性氨基酸多聚糖蛋白 是间皮细胞表面微绒毛的一种抗原成分 文献中早有报道其在甲状腺癌中呈阳性表达 在 中的表达更高 很多文献建议将其用于甲状腺良恶性肿瘤的鉴别诊 断中 古丽那尔 阿布拉江等研究发现 在甲状腺乳头癌患者中普遍存在,-./ 阳性表达 而 0 在甲状腺良性病变中的阳性表达极低! 等的研究结果发现,-./ 在甲状腺恶性肿瘤中的表达率为 良性病变中为 0 本研究与大部分文献报道相符,-./ 在 中的阳性表达率为 ) 在良性病变中仅 例呈弱阳性表达 其余均为阴性 良恶性组间差异明显 且其诊断 的敏感性 特异度和准确度均较高 可作为 诊断和鉴别诊断的依据 * #+(),-./ 在甲状腺乳头状癌 和乳头状增生中的诊断是最有价值的组合 本研究也可以看出这三种抗体在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于良性病变组织 与 的发生 发展密切相关 但与甲状腺乳头状癌的性别 年龄 肿物大小 颈淋巴结转移及临床分期均无明显相关性 考虑可能与样本量小及多数肿瘤分期较早 且伴有淋巴结转移的临床病例数较少有关 虽然某一抗体在良性病变中也有一些阳性表达 但多为局灶的弱 0 阳性 陈帅等等采用串联法联合检测三种分子标记 *() 与,-./ 特异度可达 '11 灵敏 ' 度为 0 准确率 2# 等的研究也证实多个抗体的联合应用能够提高抗体在鉴别诊断中的有效性 本研究显示 组 ('),-./' 和 * #+ 有 例同时呈阳性表达 特异性高达 '113 因此联合检测这三种抗体 能进一步提高 的诊断准确性 比使用单一指标更具有诊断价值 此外对于甲状腺乳头状癌与良性病变的鉴别诊断有重要参考意义 参考文献 4'5 6$,67 $ :;!! *6 '' +% ;;% ## + 00

6 ! "" #$%& $!"' " ("' )*!+,-./0.&# 方海飞 沈美萍 徐银峰 & 甲状腺乳头状癌 1 表达与肿瘤转移的关系 #$%& 南京医科大学学报.20.3% #% " $" 4 4 "'3 1+! "''"!+ ("!( " ''('"! + ""'+ ('("' "! #$%3 1 $!"'!"' 5!! # 高键 高明 于洋 等 3 甲状腺乳头状癌滤泡亚型临床病理特征分析 #$%3 中华普通外科杂志 % #% 8" 89" ::" 4 "'3 ;! "!+ ( ("!( " +!" ('("'("' "! ""'+ " '!"!!* #$%3"(! "!( " '(, # 王维娜 赵春兰 梁月勉 等 3 原发性甲状腺黏液癌一例临床病理特征分析并文献复习 #$%3 肿瘤研究与临床, % #% : " 5 $ "'31! " ('("' ("( + ". +! "''"!+ ("!( "#$%& $!"' ('+6.60 &# 刘福学 夏青生 邱杰 等 & + 和. 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义 #$%& 肿瘤学杂志 6.6 0& % #.% 9" 4<=" $ ; "'& 1! " ('("' ("( "'" <>6 +! "''"!+ ("!( " #$%& $!"' (' &# 张彦惠 鲍建昌 邱法鹏 等 &( <>6 在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义 #$%& 肿瘤学杂志 &% #% 5 $& 1 *"'?:@67<=A6 " +! "''"!+ ("!( "& #$%& ;!"(("' ("' $!"'6B 7073# 陈帅 任建强 3?:@67<=A6 在甲状腺乳头状癌诊断中的应用价值 #$%3 实用医学杂志 6B7073% #% : :+ 419" <4 "'3 1 (!!'" ( (.1; " ('("'("!"! "''"!+ +! ("!( " #$%3 $!"' 8C ("' )*!+6.0B3 # 郦秀芳 吕艳婷 张海勇 等 3.1; 联合检测与甲状腺乳头状癌临床病理的相关性 #$%3 温州医科大学学报 6.0B3 % #B% " ;5!!!"?; '*!" "(! "'3 ) ' 6(+D!" 67 " "'( " " +! "'"(+ #$%3 <"' #7% " <" 5=9" $ "'3 1! " " '(" *"' +! #$%3 $!"' " ("' )*! # 肖红 段绍斌 张建勇 等 3 甲状腺癌组织中 "'(@67 的表达及应用价值 #$%3 新疆医科大学学报 % 1!DC <@@C <4!"D' 9 "'3"'(!!!! " "" "''"!+ +! ("!( "#$%3A(! ;"'B #66% "DD 1"+'! 55""*"C?3 5! "!D! "''"!+ +! ("(! #$%3 '"!+' <" (D 5! 663 ;"!D 4$@"D 5<@ "'3 "( *"' "'( 6(+D!" 67 '('"! (+D!"(+(' 6 "!"' " +! '#$%3 5(60B3 (!='"?=!"?5"'" "'3> ( ("' "!D! " "''"!+ +! ("!( "1!!' ( " 6 " (. #$%3;"' ;!"( 67.B.0.73 :"! " A( < "'3< 6! +"'C!"'"!! +! '"#$%3<"' #6.% '"!?=:$5" 8: "'3 1! " #6B% " <=A6 " "'" +! ' #$%3$!"' " ("' )*! # 古丽那尔 阿布拉江 桑伟 刘霞 等 和 <=A6 在甲状腺良恶性结节中的表达及其意义 #$%3 新疆医科大学学报 % ;!"" :;''"" 5<" 4 "'3 "'(!(6(6 6 " (+D!"67 (!+ '!!"' " +!!#$%3 ;"'.6B62B0.3 : $3 1! +! "''"!+ ' #$%3 $!"' <"! ("' )*! B3# 李楠 杜金荣 3 <=A6@67"'@ 在甲状腺乳头状病变中的表达 #$%3 哈尔滨医科大学学报 B3% ;"*( >>( 1<"*'D" "'3 (!+! +!!""'((D67 " 6!"' " +!! #$%3?; >566.2B073

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