5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 701 [11] 依据 ZHENG 等的方法, 利用高效液相色谱仪测定水解蛋白的分子量 ( 色谱仪 Agilent 1200, 色谱柱 TSKG2000, 波长 220nm) 选用碳酸酐酶 (MW 29000) 细胞色素 C(MW12400)

Size: px

Start display at page:

Download "5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 701 [11] 依据 ZHENG 等的方法, 利用高效液相色谱仪测定水解蛋白的分子量 ( 色谱仪 Agilent 1200, 色谱柱 TSKG2000, 波长 220nm) 选用碳酸酐酶 (MW 29000) 细胞色素 C(MW12400)"

瑜宋
5 years ago
Views:

1 文章编号 : (2016) DOI: /jsou 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 1, ,2 张圆琴, 张越, 卫育良, 徐后国, 郑珂珂, 梁萌青 (1. 南京农业大学无锡渔业学院, 江苏无锡 ;2. 中国水产科学研究院黄海水产研究所, 山东青岛 ; 3. 美国威斯康辛大学麦迪逊分校食品科学学院, 麦迪逊 53706) 摘要 : 通过摄食生长实验来研究高植物蛋白饲料中添加牛磺酸及水解鱼蛋白对大菱鲆脂肪累积的影响实验对照组 (C) 含有 30% 的鱼粉, 高植物蛋白饲料 + 牛磺酸处理组 (HT) 使用植物蛋白替代对照组的一半鱼粉后添加 0.8% 牛磺酸, 高植物蛋白饲料 + 牛磺酸 + 水解鱼蛋白处理组 (HTH) 在 HT 饲料的基础上继续使用水解鱼蛋白替代 7% 的饲料鱼粉室内流水系统养殖, 每组 4 个重复与对照组或 HT 组相比,HTH 组显著降低了鱼体的中性脂和肝体比与对照组相比,HT 及 HTH 组均显著升高了鱼体水分含量, 降低了肝脏总脂和中性脂含量与对照组相比, 肌肉总脂及极性脂仅在 HTH 组显著降低 HTH 组的血清甘油三酯和胆固醇含量显著低于对照组组织脂肪酸分析显示,HT 及 HTH 组有降低长链多不饱和脂肪酸含量, 升高 C18 2n 6,C18 3n 6 及 C18 3n 3 含量的趋势综上, 在高植物蛋白饲料中添加牛磺酸可以有效降低鱼体肝脏脂肪含量, 而在此基础上继续使用水解鱼蛋白具有更好的脂肪调节效果, 能够降低鱼体肌肉肝脏及血清中的中性脂肪及总脂肪含量关键词 : 大菱鲆 ; 高植物蛋白饲料 ; 牛磺酸 ; 水解鱼蛋白 ; 脂肪累积中图分类号 :Q493.5 文献标志码 :A 目前的水产养殖业中, 鱼体脂肪的过度沉积已成为影响其可持续发展的一个重要因素, 而营养途径是调控养殖鱼类脂肪沉积的根本途径鱼蛋白水解物在水产饲料中不但具有诱食促生长及免疫调节等作用 [1-3], 近几年的研究还发现, 水解鱼蛋白具有较好的降低脂肪沉积的作用 [4-5], 这为通过营养途径调控养殖鱼类脂肪沉积提供了新的思路牛磺酸是水解鱼蛋白富含的小分子物质之一, 相关研究已表明牛磺酸在动物脂类代谢中起着重要作用, 是水解鱼蛋白中起脂类代谢调节作用的主要功能物质之一 [2,6] 近年来, 国内外学者对大西洋鲑 (Salmo salar) [7] 牙鲆 (aralichthysolivaceus) [8-9] 欧洲黑鲈 (Dentex dentex) [10] 等鱼类的研究表明, 饲料中 ( 尤其是在高植物蛋白饲料中 ) 添加牛磺酸可以降低鱼体的脂肪含量, 主要通过络合胆汁酸刺激胆汁酸的分泌来调节脂肪代谢本研究以大菱鲆为研究对象, 通过摄食生长实验来研究在高植物蛋白饲料中添加牛磺酸或者同时使用牛磺酸和水解鱼蛋白对鱼体脂肪累积的影响 1 材料与方法 1.1 水解鱼蛋白的制备本实验鱼水解蛋白的用鱼为太平洋狭鳕 (Theragrachalcogramma, 太平洋恩利食品有限公 [11] 司 ), 鱼水解蛋白的制备参考 ZHENG 等的方法, 选用两种蛋白酶即碱性蛋白酶和风味蛋白酶进行双酶水解, 经离心得到粗滤酶解液将所得酶解液用 elicon2 超滤膜堆装置 (1000u) 超滤, 超滤得到的低分子 FH, 使用旋转蒸发仪 (BUCHI) 浓缩得到浓缩液, 然后冷冻干燥后保存备用收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金 ( , ) 作者简介 : 张圆琴 (1992 ), 女, 硕士研究生, 研究方向为水产动物营养与饲料 E mail: @qq.com 通信作者 : 梁萌青,E mail:liangmq@ysfri.ac.cn

2 5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 701 [11] 依据 ZHENG 等的方法, 利用高效液相色谱仪测定水解蛋白的分子量 ( 色谱仪 Agilent 1200, 色谱柱 TSKG2000, 波长 220nm) 选用碳酸酐酶 (MW 29000) 细胞色素 C(MW12400) 抑肽酶 (MW ) 人血管紧张素 Ⅱ (MW ) 谷胱甘肽 (MW ) 乙氨酸乙氨酸乙氨酸 (MW189) 和甘氨酸 (MW75.07) 为标准品作标准曲线, 测得低分子水解鱼蛋白的分子量分布为 :5000~10000u,0.2%;2000~5000u, 1.14%;1000~2000u,5.21%;500~1000u, 21.34%;200~500 u,56.64%;100~200 u, 3.66%;<100u,11.82% 1.2 实验饲料本实验以鱼粉植物蛋白 ( 豆粕玉米蛋白粉谷朊粉 ) 为蛋白源, 以鱼油为脂肪源, 制作成 3 种等氮等能的饲料 ( 表 1) 以含 30% 鱼粉的基础饲料为对照组, 简称 C 通过使用豆粕玉米蛋白粉和谷朊粉来替代基础饲料中 15% 的鱼粉 ( 约 10% 鱼粉蛋白 ), 并添加 0.8% 的牛磺酸制成第一种实验饲料, 即高植物蛋白饲料中添加牛磺酸, 简称饲料 HT(highplantproteindietwithtaurine) 以饲料 HT 为基础, 继续添加低分子水解鱼蛋白来替代 HT 饲料 7% 鱼粉 ( 约 5% 鱼粉蛋白 ), 得到第二种实验饲料, 简称 HTH(highplantprotein dietwithtaurineandfishproteinhydrolysate) 所有原料粉碎过 80 目筛, 按照饲料配方 ( 表 1) 将原料混合, 制成粒径 3mm 的饲料, 放于 55 烘箱中 12h 烘干, 然后保存于 -20 冰箱备用 1.3 实验过程实验用鱼选用初始体质量为 (4.16±0.01)g 的大菱鲆幼鱼, 由烟台开发区天源水产有限公司提供实验开始前, 先将鱼苗在实验系统内暂养两周使其适应养殖环境养殖实验在室内流水 ( 海水, 流速为 5L/min) 养殖系统内进行, 养殖容器为水体体积为 120L 的玻璃钢桶, 养殖用水为深井海水, 室内自然采光, 连续充气, 水温 (14± 0.5), 溶氧高于 7mg/L, 盐度 30±0.5,pH 7.5~8.0 生长实验开始时, 停食 24h, 选择大小均匀体格健壮且体表无病的大菱鲆幼鱼, 称重后随机分配在 12 个玻璃钢桶内 (3 个处理组, 每组 4 个重复 ), 每桶 25 尾鱼, 每天用实验饲料饱食投喂两次 (6:30 和 16:30), 养殖周期为 12 周表 1 饲料配方与化学组成 Tab.1 Formulationandchemicalcomposition oftheexperimentaldiets % 原料 /% ingredient 饲料处理 dietarytreatments 鱼粉 1 fishmeal 豆粕 1 soybeanmeal 玉米蛋白粉 cornprotein 谷朊粉 wheatgluten 低分子水解鱼蛋白 fishproteinhydrolysate 小麦粉 wheatmeal 鱼油 fishoil 卵磷脂 lecithin 维生素混合物 2 vitaminpremix 矿物质混合物 3 mineralpremix 氯化胆碱 cholinechloride 磷酸二氢钙 Ca(H 2 O 4 ) 维生素 CvitaminC L 赖氨酸 L lysine D/L 蛋氨酸 D/L methionine L 精氨酸 L arginine 牛磺酸 taurine 总和 total 成分分析 proximatecomposition 牛磺酸 taurine 粗蛋白 crudeprotein 粗脂肪 crudelipid 注 :1. 鱼粉和豆粕购自青岛七好生物科技有限公司 ; 鱼粉含 69% 粗蛋白,8% 粗脂肪 ; 豆粕含 50% 粗蛋白,1% 粗脂肪 2. 维生素混合物 (mgorg/kgdiet): 维生素 B 1 25mg; 维生素 B 2,45mg; 维生素 B 6,20mg; 维生素 B 12,0.1mg; 维生素 K 3,10mg; 肌醇,800mg; 泛酸,60mg; 烟酸,200mg; 叶酸,20mg; 生物素, 1.2mg; 维生素 A,32mg; 维生素 D 3,5mg; 维生素 E,120mg; 次粉,13.67g 3. 矿物质混合物 (mgorg/kgdiet):mgso 4 7H 2 O,1200mg;CuSO 4 5H 2 O,10mg;ZnSO 4 H 2 O,50mg; FeSO 4 H 2 O,80 mg;mnso 4 H 2 O,45 mg;cocl 2 6H 2 O (1%),50mg;NaSeSO 3 5H 2 O (1%),20mg;Ca(IO 3 ) 2 6H 2 O(1%),60mg; 沸石粉,13.485g Note:1.Fishmealandsoybeanmealwerepurchasedfrom Qingdao GreatSevenBio TechCo.,Ltd..Fishmealcontained69% crude proteinand8% crudelipid,andsoybeanmealcontained50% crude proteinand1% crudelipid.2.vitaminpremix(mgorg/kgdiet): thiamin25mg;riboflavin,45mg;pyridoxinehcl,20mg;vitamin B 12,0.1mg;vitaminK 3,10mg;inositol,800mg;pantothenic acid,60mg;niacin,200mg;folicacid,20mg;biotin,1.2mg; retinolacetate,32mg;cholecalciferol,5mg;alpha tocopherol,120 mg;wheatmiddling,13.67g.3.mineralpremix(mgorg/kgdiet): MgSO 4 7H 2 O,1200mg;CuSO 4 5H 2 O,10mg;ZnSO 4 H 2 O, 50mg;FeSO 4 H 2 O,80mg;MnSO 4 H 2 O,45mg;CoCl 2 6H 2 O(1%),50mg;NaSeSO 3 5H 2 O(1%),20mg;Ca(IO 3 ) 2 6H 2 O(1%),60mg;zoelite,13.485g.

3 702 上海海洋大学学报 25 卷 1.4 样品采集及检测分析实验结束时, 停食 24h, 每桶随机取 3 尾鱼, 保存于 -20 用于鱼体脂肪及水分分析 ; 每桶另外随机取 3 尾鱼, 用 27 号针和 1mL 注射器, 从尾部尾静脉取血, 血液放入消过毒的离心管后, 盖上盖子, 室温凝结 2h 后 4 凝结 4~6h;836 g,4 离心 10min, 将血清吸出,-80 保存备用取完血后, 取肌肉肝脏及内脏用于脂肪及脂肪酸成分分析, 样品保存于 -80 备用饲料和鱼体样品在 105 烘干至恒重, 通过失重法测定水分含量鱼体肌肉及内脏脂肪含量使用索氏抽提法测定 ; 肝脏脂肪含量采用氯仿甲醇法测定中性脂和极性脂的测定亦采用氯仿甲醇法 [ 用 V( 氯仿 ) V( 甲醇 )=2 1 的混合液萃取,1.6% 的 CaCl 2 溶液分层, 氮气吹干, 每份样品 2 个平行 ] 使用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定血清中甘油三酯胆固醇高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇的含量鱼体组织的脂肪酸含量测定方法参考 MOURENTE [12] 等气相色谱法 (GS,H6890,USA) 并稍作改进 1.5 数据计算与统计肥满度肝脏指数及内脏指数的计算公式如下 : C F =W/L (1) H SI (%)=W L /W 100 (2) V SI (%)=W V /W 100 (3) 式中 :C F 为肥满度 ;H SI 为肝体比 ;V SI 为脏体比 ;W 为鱼体湿质量 (g);l 为体长 (cm);w L 为肝脏湿质量 (g);w V 为内脏湿质量 (g) 用 SSS16.0 统计软件对实验各处理的数据进行单因素方差分析 (ANOVA), 当不同处理之间存在显著差异 (<0.05) 时, 采用 Tukey 法进行均值间多重比较, 所有数值用平均值 ± 标准误表示 2 结果 2.1 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆脂肪含量的影响对大菱鲆鱼体脂肪含量及形体指标的影响由表 2 可见, 鱼体脂肪含量及鱼体极性脂含量在对照组 (C) HT 组及 HTH 组都没有显著性差异但是, 与对照组相比,HTH 组显著降低了鱼体中性脂含量 (<0.01) 与对照组相比,HT 组及 HTH 组都显著升高了鱼体水分含量, 但是鱼体水分含量在 HT 组及 HTH 组间没有显著性差异 HT 组肝体比显著高于 HTH 处理组 (< 0.05) 而肝体比在对照组与 HT 组之间以及对照组与 HTH 组之间均没有显著性差异 (> 0.05) 表 2 高植物蛋白饲料中添加牛磺酸及水解鱼蛋白对大菱鲆鱼体脂肪含量及形体指标的影响 (n=4) 指标 parameters Tab.2 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsonthelipidcontentandphysicalindicesofturbot(n=4) 鱼体脂肪 /(% 干重 )whole bodylipid 16.52± ± ± 鱼体中性脂 /(% 干重 )neutrallipid 16.23±0.92 a 14.84±0.45 ab 13.46±0.30 b 鱼体极性脂 /(% 干重 )polarlipid 2.73± ± ± 鱼体水分 /%whole bodymoisture 74.59±0.26 b 75.90±0.38 a 76.37±0.26 a 肥满度 conditionfactor 1.85± ± ± 肝体比 hepatosomaticindex 2.25±0.16 ab 2.52±0.20 a 1.80±0.05 b 脏体比 viscerosomaticindex 5.65± ± ± 注 : 同一行中标注相同上标字母的数据间无显著性差异 (>0.05) 表 3-10 同此 Note:Valuesinthesamecolumnwiththesamesuperscriptsarenotsignificantlydiferent(>0.05).Thesameinfig 对大菱鲆肝脏脂肪含量的影响与对照组相比,HT 组及 HTH 处理组显著降低了肝脏脂肪含量及中性脂含量 (<0.01), 见表 3 但是, 极性脂在各处理组间没有显著性差异 (>0.05)

4 5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 703 表 3 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆肝脏脂肪含量的影响 (n=4,% 湿重 ) 指标 parameters Tab.3 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsontheliverlipidcompositionsofturbot(n=4,%wetweight) 肝脏脂肪 liverlipid 10.02±0.24 a 8.53±0.20 b 7.59±0.43 b 肝脏中性脂 liverneutrallipid 7.97±0.15 a 6.69±0.48 b 5.76±0.43 b 肝脏极性脂 liverpolarlipid 2.05± ± ± 对大菱鲆肌肉脂肪含量的影响 HTH 处理组的肌肉脂肪含量显著低于对照组及 HT 组 (<0.05), 见表 4, 但 HT 组及对照组之间没有显著性差异 (>0.05) HTH 处理组的肌肉极性脂肪含量显著低于对照组 (< 0.05), 但 HT 组及对照组之间以及 HT 组与 HTH 组之间均没有显著性差异 (>0.05) 肌肉中性脂含量在各处理组间没有显著性差异 (>0.05) 表 4 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆肌肉脂肪含量的影响 (n=4,% 干重 ) 指标 parameters Tab.4 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsonthemusclelipidcompositionsofturbot(n=4,%dryweight) 肌肉脂肪 musclelipid 9.99±0.22 a 10.14±0.26 a 8.83±0.31 b 肌肉中性脂 muscleneutrallipid 5.36± ± ± 肌肉极性脂 musclepolarlipid 4.63±0.45 a 4.25±0.50 ab 2.78±0.18 b 对大菱鲆内脏脂肪含量的影响高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物的添加对大菱鲆内脏脂肪含量中性脂含量及极性脂含量均没有产生显著性影响 (>0.05), 见表 5 表 5 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆内脏脂肪含量的影响 (n=4,% 湿重 ) 指标 parameters Tab.5 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsonthegutlipidcompositionsofturbot(n=4,%wetweight) 内脏脂肪 gutlipid 16.05± ± ± 内脏中性脂 gutneutrallipid 10.53± ± ± 内脏极性脂 gutpolarlipid 5.52± ± ± 对大菱鲆血清脂肪含量的影响 HTH 组血清甘油三酯的含量显著低于对照组及 HT 组 (<0.01, 表 6), 但是血清甘油三酯在对照组及 HT 组间没有显著性差异 ( > 0.05) 血清胆固醇及血清低密度脂蛋白胆固醇受饲料处理影响的趋势与血清甘油三酯类似, 但血清高密度脂蛋白胆固醇在各饲料处理间没有显著性差异 (>0.05) 2.2 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆脂肪酸组成的影响对大菱鲆鱼体脂肪酸组成的影响对鱼体全鱼脂肪酸组成来说,HTH 组 C18 3n 6 含量显著高于对照组及 HT 组 (< 0.01), 见表 7, 而 HT 组的 C20 1n 9 含量显著低于其他两组 (<0.01) C20 4n 6 含量在对照组 HT 组 HTH 组依次显著降低 (<0.01) C22 6n-3 含量在 HTH 组显著低于 HT 组及对照组 (<0.01) 对照组的 n 3/n 6 脂肪酸比例

5 704 上海海洋大学学报 25 卷显著高于 HT 组及 HTH 组表 6 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆血清脂肪含量的影响 (n=4) Tab.6 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsontheserum lipidcompositionsofturbot(n=4) mmol/l 指标 parameters 血清甘油三酯 Serumtriglyceride 4.06±0.34 a 3.68±0.49 a 1.42±0.35 b 血清胆固醇 Serumcholesterol 3.75±0.45 a 3.92±0.23 a 2.50±0.21 b 血清 HDL CSerumHDL C 1.41± ± ± 血清 LDL CSerumLDL C 2.34±0.23 a 2.11±0.23 a 1.30±0.10 b 注 :HDL C. 高密度脂蛋白胆固醇 ;LDL C. 低密度脂蛋白胆固醇 Note:HDL C.Highdensitylipoproteincholesterol;3LDL C.Lowdensitylipoproteincholesterol. 表 7 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆全鱼脂肪酸组成的影响 (n=4,% 总脂肪酸 ) 脂肪酸 fatyacid Tab.7 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsonthewholebodyfatyacidprofilesofturbot(n=4,%totalfatyacids) C ± ± ± C ± ± ± C ± ± ± SFA 29.37± ± ± C18 1n ± ± ± C20 1n ±0.03 a 2.70±0.01 b 2.85±0.02 a MUFA 22.82± ± ± C18 2n ± ± ± C18 3n ±0.05 b 1.79±0.03 ab 2.19±0.14 a C20 4n ±0.07 a 7.41±0.11 b 7.03±0.03 c n ± ± ± C18 3n ± ± ± C20 5n ± ± ± C22 5n ± ± ± C22 6n ±0.17 a 11.83±0.17 a 11.11±0.06 b n ± ± ± n 3/ n ±0.01 a 0.67±0.03 b 0.68±0.01 b n 3LC UFA 16.08± ± ± 注 :SFA. 饱和脂肪酸 ;MUFA. 单不饱和脂肪酸 ; n 6.n 6 系列不饱和脂肪酸 ; n 3.n 3 系列不饱和脂肪酸表 8-10 同此 Note:SFA.saturatedfatyacid;MUFA.monounsaturatedfatyacid; n 6.n 6unsaturatedfatyacid; n 3.n 3unsaturatedfatyacid.The sameinfig 对大菱鲆肝脏脂肪酸组成的影响对肝脏脂肪酸来说, 对照组 C18 1n 7 C20 1n 9 C22 5n 3 含量及 n 3/n 6 值显著高于 HT 组及 HTH 组 (<0.05), 见表 8, 而其 C18 2n 6 C18 3n 3 及 n 6 系列脂肪酸含量则显著低于 HT 组及 HTH 组 HTH 组的 C22 6n 3 及 n 3 系列长链多不饱和脂肪酸含量显著低于对照组 (<0.05), 但 HTH 与 HT 组之间及 HT 组与对照组之间没有显著性差异 (>0.05) 对大菱鲆肌肉脂肪酸组成的影响对肌肉脂肪酸来说,HTH 组 C14 0 C16 0 饱和脂肪酸含量及 C18 3n 6 含量显著高于对照组及 HT 组, 而其 n 3 脂肪酸含量及 n 3 长链多不饱和脂肪酸含量显著低于对照组及 HT 组 (< 0.05), 见表 9 肌肉 C18 2n 6 及 C20 4n 6 含量在对照组 HT 组及 HTH 组依次显著升高 (< 0.01) 肌肉 C20 1n 9 含量及 n 3/n 6 脂肪酸比例在 HTH 组显著低于对照组, 而 n 6 系列脂肪酸含量则显著高于对照组对照组 C20 5n 3 含

6 5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 705 量显著高于其他两个处理组表 8 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆肝脏脂肪酸组成的影响 (n=4,% 总脂肪酸 ) Tab.8 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsontheliverfatyacidprofilesofturbot(n=4,%totalfatyacids) 脂肪酸 fatyacid C ± ± ± C ± ± ± C ± ± ± SFA 20.41± ± ± C16 1n ± ± ± C18 1n ± ± ± C18 1n ±0.09 a 3.63±0.01 b 3.59±0.14 b C20 1n ±0.28 a 1.31±0.03 b 1.42±0.15 ab MUFA 36.49± ± ± C18 2n ±1.19 b 22.60±0.86 a 21.80±1.26 a C20 4n ± ± ± n ±1.27 b 23.46±1.00 a 22.60±1.24 a C18 3n ±0.15 b 2.08±0.02 a 2.07±0.16 ab C20 5n ± ± ± C22 5n ±0.08 a 1.94±0.18 b 1.81±0.10 b C22 6n ±0.40 a 8.40±0.55 ab 7.34±0.30 b n ± ± ± n 3/ n ±0.04 a 0.79±0.07 b 0.73±0.04 b n 3LC UFA 18.04±0.91 a 16.38±0.94 ab 14.33±0.14 b 表 9 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆肌肉脂肪酸组成的影响 (n=4,% 总脂肪酸 ) Tab.9 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsonthemusclefatyacidprofilesofturbot(n=4,%totalfatyacids) 脂肪酸 fatyacid C ±0.22 b 2.36±0.16 b 3.66±0.22 a C ±0.19 b 19.70±0.19 b 23.38±0.49 a C ± ± ± SFA 26.87±0.46 b 25.87±0.14 b 31.12±0.67 a C18 1n ± ± ± C20 1n ±0.06 a 2.32±0.09 ab 2.10±0.09 b MUFA 22.38± ± ± C18 2n ±0.42 c 14.55±0.37 b 16.68±0.22 a C18 3n ±0.05 b 1.88±0.06 ab 2.03±0.02 a C20 4n ±0.05 a 7.24±0.07 b 6.14±0.09 c n ±0.49 b 23.67±0.41 ab 24.85±0.28 a C18 3n ± ± ± C20 5n ± ± ± C22 5n ±0.09 a 2.31±0.11 b 1.84±0.16 b C22 6n ± ± ± n ±1.07 a 21.67±1.14 a 16.18±0.60 b n 3/ n ±0.07 a 0.92±0.06 ab 0.65±0.02 b n 3LC UFA 20.88±1.15 a 20.72±1.25 a 15.05±0.58 b 对大菱鲆肠道脂肪酸组成的影响对肠道脂肪酸来说,C14 0 在 HT 组显著低于对照组 (<0.05), 见表 10 HTH 组的肠道 C18 2n 6 含量显著高于对照组及 HT 组 (< 0.01), 但其 C18 3n 6 及 C20 1n 9 含量仅显著高于 HT 组 (<0.05) HT 组的 C18 3n 3 含量显著低于对照组及 HTH 组 (<0.05) C22 5n 3 在对照组 HT 组及 HTH 组依次显著降低 (<

7 706 上海海洋大学学报 25 卷 0.01), 而 C22 6n 3 n 3 系列脂肪酸及 n 3 长链多不饱和脂肪酸含量则在 HT 组显著高于对照组及 HTH 组 (<0.01) HTH 组的 n 6 系列脂肪酸含量显著高于对照组 (<0.05) HT 组的 n 3/n 6 脂肪酸比例显著高于 HTH 组表 10 高植物蛋白饲料中牛磺酸及鱼蛋白水解物对大菱鲆肠道脂肪酸组成的影响 (n=4,% 总脂肪酸 ) Tab.10 Efectsoftaurineandfishproteinhydrolysateinhighplantprotein dietsontheintestinefatyacidprofilesofturbot(n=4,%totalfatyacids) 脂肪酸 fatyacid C( 对照组 ) HT HTH C ±0.24 a 1.54±0.21 b 2.19±0.11 ab C ± ± ± C ± ± ± SFA 25.54± ± ± C18 1n ± ± ± C20 1n ±0.16 ab 2.07±0.20 b 2.76±0.07 a MUFA 22.97± ± ± C18 2n ±0.41 b 12.60±0.81 b 14.91±0.20 a C18 3n ±0.05 ab 1.32±0.08 b 1.67±0.09 a C20 4n ± ± ± n ±0.73 b 19.39±0.89 ab 21.76±0.27 a C18 3n ±0.09 a 0.42±0.05 b 0.78±0.07 a C20 5n ± ± ± C22 5n ±0.08 a 1.52±0.01 b 1.22±0.07 c C22 6n ±0.78 b 20.72±1.31 a 15.43±0.63 b n ±0.62 b 24.30±1.22 a 19.33±0.53 b n 3/ n ±0.06 ab 1.26±0.12 a 0.89±0.03 b n 3LC UFA 19.97±0.65 b 23.87±1.27 a 18.54±0.59 b 讨论目前关于水产饲料中降脂剂的研究还非常有限, 仅在肉碱谷氨酰胺及中草药等方面零星开展, 仍缺乏系统而有序的研究本实验研究结果表明, 通过在高植物蛋白饲料中添加牛磺酸对大菱鲆肝脏脂肪产生了调节作用, 有效降低了肝脏脂肪含量这表明, 在当前实验条件下, 使用高植物蛋白饲料 + 牛磺酸的方式降低鱼体肝脏含量是可行的, 这为通过饲料途径降低肝脏脂肪过度累积, 维护肝脏健康提供了新的思路牛磺酸调节鱼体脂肪代谢的作用在其他鱼上也得到 [5] 过验证 ESE 等对大西洋鲑的研究发现, 在高植物蛋白含量的饲料中添加 1g/kg 牛磺酸能够显著降低鱼体的脂肪蛋白比例, 这主要跟机体 [8-9] 脂肪的显著降低有关 KIM 等在牙鲆上的研究发现饲料中的牛磺酸能够络合胆汁酸, 从而刺激胆汁酸的分泌, 而胆汁酸的分泌增加会通过 G 蛋白胆汁酸受体 TGR5 环腺苷酸 cam 甲状腺激活酶 D2 途径增加脂肪酸的氧化和能量消耗 [13-17], 从而调节脂肪代谢 CHATZIFOTIS [10] 等在欧洲黑鲈上的研究也发现饲料中添加 2 g/kg 的牛磺酸能够显著提高胆汁酸盐激活的脂肪酶的活性另外, 还有一些实验间接地证明了牛磺酸调 [18] 节脂肪代谢的作用 ESE 等在大西洋鲑上的另一项研究则表明, 当给大西洋鲑投喂蛋氨酸缺乏的饲料时, 因为蛋氨酸代谢的终产物是牛磺酸, 因此导致了鱼体肝脏中牛磺酸含量锐减, 而甘油三酯含量上升, 这从侧面印证了牛磺酸同鱼体脂肪代谢间的关系蛋氨酸降低脂肪生成酶 [19] 及甘油三酯含量的作用在 DIAS 等关于欧洲黑鲈上的实验中也得到了证明然而, 该领域也有一些研究得到了不同的结论, 如 GAYLORD 等研究表明, 调节虹鳟脂肪代谢及内脏脂肪含量的是蛋氨酸, 但是跟牛磺酸没有关系 [21] 在哺乳动物大鼠中, 投喂低含量的牛磺酸和甘氨酸时, 也观察到了增多的腹部脂肪 [4] 虽然本实验的研究结果较为直接地证明了牛磺酸降低鱼体脂肪累积的效果, 但是, 该领域还需要更多的研究来

8 5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 707 继续阐明, 尤其是对相关机理机制的研究本实验中, 虽然高植物蛋白饲料中添加牛磺酸起到了一定的降低脂肪沉积的作用, 但是, 在高植物蛋白饲料中同时使用牛磺酸和水解鱼蛋白的脂肪调节作用更为明显, 不但降低了肝脏脂肪, 而且对全鱼中性脂肪肌肉脂肪及血清脂肪都起到了有效的降低作用因为牛磺酸是水解鱼蛋白中的有效成分之一, 因此, 该实验结果表明, 水解鱼蛋白中起到降低脂肪沉积作用的不仅仅是牛磺酸, 还有其他的有效物质如前段所述, 水解鱼蛋白中含量丰富的蛋氨酸可能就是其中一种 [18-20] 另外, 水解鱼蛋白中含有的其他一些小分子物质如甜菜碱胆碱肉毒碱和肌酸也可能对脂肪代谢产生调节, 降低脂肪含量 [21-23] 鱼蛋白水解物中的这些小分子物质对脂肪沉积的影响主要通过影响鱼体内脂肪的合成鱼蛋白水解物中的小分子含氮化合物首先影响动物体内牛磺酸和 S 腺苷蛋氨酸的合成, 而这些小分子物质可能是通过补充动物体内用于甲基化同型半胱氨酸的 S 腺苷蛋氨酸消耗, 从而可以使更多的 S 腺苷蛋氨酸用于其他的代谢途径, 例如聚氨的合成 [24-25] 聚氨的合成需要消耗乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A, 而乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 作为脂肪的前体物质, 导致脂肪合成减少本实验中在高植物蛋白饲料中同时使用牛磺酸和水解鱼蛋白还显著降低了血清总胆固醇含量及血清低密度脂蛋白胆固醇的含量牛磺酸对胆固醇代谢的作用在大菱鲆上的另一项实 [26] 验中已经得到验证 YUN 等发现与单纯添加 1.0% 胆固醇的饲料处理组相比, 添加 1.0% 胆固醇 +1.0% 牛磺酸的处理组, 其血浆总胆固醇游离胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇都显著降低, 其胆固醇合成代谢关键酶 3 羟基 3 甲基戊二酰辅酶 A 还原酶 (HMG CoA) 的 mrna 表达量也显著降低但是, 本实验中, 大菱鲆的内脏脂肪含量并未受到饲料处理的显著影响, 这主要是因为在大菱鲆中内脏并不是脂肪蓄积的主要部位综合鱼体肝脏肌肉及肠道脂肪酸组成来看, 高植物蛋白饲料中单独使用牛磺酸或者同时添加牛磺酸和水解鱼蛋白有降低长链多不饱和脂肪酸含量, 升高饱和脂肪酸及亚麻酸亚油酸含量的趋势这可能与高植物蛋白饲料的使用有关, 也可能是因为牛磺酸及水解鱼蛋白中的其他小分子物质促进了鱼体对长链脂肪酸的利用综上, 本实验结果表明, 在高植物蛋白饲料中添加牛磺酸可以调节脂肪代谢, 降低大菱鲆幼鱼肝脏脂肪累积, 但是在添加牛磺酸的基础上继续使用水解鱼蛋白替代鱼粉后, 其降低鱼体及组织脂肪累积的效果更佳, 能够有效降低鱼体肝脏肌肉及血清中的脂肪含量, 这也说明水解鱼蛋白中调节脂肪代谢的物质不止牛磺酸一种参考文献 : [1] CAHUCL,INFANTEJLZ,QUAZUGUEL,etal.rotein hydrolysatevs.fishmealincompounddietsfor10 dayold seabasdicentrarchuslabrax larvae[j]. Aquaculture, 1999,171(1/2): [2] AKSNESA,HOEB,H STMARK,etal.Inclusionof sizefractionatedfishhydrolysateinhighplantproteindietsfor Atlanticcod,Gadusmorhua[J].Aquaculture,2006,261 (3): [3] KOTZAMANISY,GISBERTE,GATESOUEFJ,etal. Efectsofdiferentdietarylevelsoffishproteinhydrolysates ongrowth,digestiveenzymes,gutmicrobiota,andresistance togvibrioanguilarumgineuropeanseabas(dicentrarchus labrax)larvae[j].comparativebiochemistryandhysiology arta:molecular&integrativehysiology,2007,147(1): [4] LIASET B,MADSEN L, HAO Q,etal.Fish protein hydrolysateelevatesplasmabileacidsandreducesvisceral adiposetisuemasinrats[j].biochimicaetbiophysica Acta(BBA) MolecularandCelBiologyofLipids,2009, 1791(4): [5] ESEM,RUOHONENK,EL MOWAFIA.Hydrolysedfish proteinconcentrate(fc)reducesvisceramasinatlantic salmon(salmosalar) fedplant protein baseddiets[j]. AquacultureNutrition,2012,18(6): [6] HUXTABLE R J. hysiologicalactionsoftaurine[j]. hysiologicalreviews,1992,72(1): [7] ESEM,RUOHONENK,EL MOWAFIA.Efectoftaurine supplementationonthemetabolismandbodylipid to protein ratioin juvenile Atlantic salmon (Salmo salar)[j]. AquacultureResearch,2012,43(3): [8] KIM SK,MATSUNARIH,NOMURAK,etal.Efectof dietarytaurineandlipidcontentsonconjugatedbileacid compositionand growth performanceofjuvenilejapanese flounderaralichthysolivaceus[j]. Fisheries Science, 2008,74(4): [9] KIM SK,MATSUNARIH,TAKEUCHIT,etal.Efectof diferentdietarytaurinelevelsontheconjugatedbileacid compositionandgrowthperformanceofjuvenileandfingerling

9 708 上海海洋大学学报 25 卷 Japaneseflounderaralichthysolivaceus[J].Aquaculture, 2007,273(4): [10] CHATZIFOTISS,OLEMITOU I,DIVANACH,etal. Efect of dietary taurine supplementation on growth performanceandbilesaltactivatedlipaseactivityofcommon dentex, Dentex dentex, fed a fish meal/soy protein concentrate baseddiet[j].aquaculture,2008,275(1/4): [11] ZHENGK,LIANGM,YAOH,etal.Efectofdietaryfish proteinhydrolysateon growth, feed utilization and IGF I levelsofjapaneseflounder(aralichthysolivaceus)[j]. AquacultureNutrition,2012,18(3): [12] MOURENTEG,TOCHERDR,DIAZ SALVAGOE,etal. Studyofthen 3highlyunsaturatedfatyacidsrequirement andantioxidantstatusofdentexdentexlarvaeattheartemia feedingstage[j].aquaculture,1999,179(1/4): [13] CARULLI N, DE LEON M, ODDA M, etal. Chenodeoxycholicacidandursodeoxycholicacidefectsin endogenoushypertriglyceridemias.acontroleddouble blind trial[j].thejournalofclinicalharmacology,1981,21 (10): [14] IKEMOTOS,TAKAHASHIM,TSUNODAN,etal.Cholate inhibitshigh fatdiet inducedhyperglycemiaandobesitywith acyl CoAsynthetasemRNAdecrease[J].AmericanJournal ofhysiology Endocrinology and Metabolism, 1997, 273 (1):E37-E45. [15] KASTHR,NGUYENCM,SINALCJ,etal.FarnesoidX activatedreceptorinducesapolipoproteinc Itranscription:a molecularmechanismlinkingplasmatriglyceridelevelstobile acids[j]. MolecularEndocrinology, 2001, 15(10): [16] WATANABEM,HOUTENSM,WANGL,etal.Bileacids lowertriglyceridelevelsviaapathwayinvolvingfxr,sh, andsreb 1c[J].TheJournalofClinicalInvestigation, 2004,113(10): [17] WATANABEM,HOUTEN SM,MATAKIC,etal.Bile acidsinduceenergyexpenditurebypromotingintracelular thyroidhormoneactivation[j].nature,2006,439(7075): [18] ESE M,RATHORE R M,DU ZY,etal.Methionine limitationresultsinincreasedhepaticfasactivity,higher liver18:1 to18:0 faty acid ratio and hepatic TAG accumulationinatlanticsalmon,salmosalar[j].amino Acids,2010,39(2): [19] DIASJ,ALVAREZM J,ARZELJ,etal.Dietaryprotein sourceafectslipid metabolism in theeuropean seabas (Dicentrarchuslabrax)[J].ComparativeBiochemistryand hysiologyarta: Molecular& Integrative hysiology, 2005,142(1): [20] GAYLORD TG,BARROWSFT,TEAGUEA M,etal. Supplementationoftaurineandmethioninetoal plantprotein dietsfor rainbow trout (Oncorhynchus mykis)[j]. Aquaculture,2007,269(1/4): [21] BROSNANJT,JACOBSRL,STEADLM,etal.Methylation demand:akeydeterminantofhomocysteinemetabolism[j]. ActaBiochimicaolonica,2004,51(2): [22] ARSLAN C.L carnitineanditsuseasafeedadditivein poultry feeding a review [J]. Revue de Médecine Vétérinaire,2006,157(3): [23] EGGAE.Mammalianpolyaminemetabolism andfunction [J].IUBMBLife,2009,61(9): [24] JAFARNEJADA,BATHAIESZ,NAKHJAVANIM,etal. EfectofspermineonlipidprofileandHDLfunctionalityin thestreptozotocin induced diabetic ratmodel[j]. Life Sciences,2008,82(5/6): [25] JELLJ,MERALIS,HENSEN,M L,etal.Geneticaly altered expresion of spermidine/spermine N1 acetyltransferaseafectsfatmetabolisminmiceviaacetyl CoA [J].JournalofBiologicalChemistry,2007,282(11): [26] YUN B,AIQ H,MAIK S,etal.Synergisticefectsof dietarycholesterolandtaurineongrowthperformanceand cholesterolmetabolism in juvenile turbot(scophthalmus maximusl.)fedhighplantproteindiets[j].aquaculture, 2012, :85-91.

10 5 期张圆琴, 等 : 大菱鲆鱼体脂肪累积调节方法研究 709 A study on the regulation of lipid accumulation in juvenile turbot (ScophthalmusmaximusL.) ZHANGYuanqin 1,2,ZHANGYue 3,WEIYuliang 2,XUHouguo 2,ZHENGKeke 2,LIANGMengqing 1,2 (1.WuxiFisheriesColege,NanjingAgriculturalUniversity,Wuxi ,Jiangsu,China;2.YelowSeaFisheriesResearch Institute,ChineseAcademyofFisherySciences,Qingdao ,Shandong,China;3.DepartmentofFoodScience,University ofwisconsin Madison,Madison 53706,USA) Abstract:A12 weekfeedingtrialwasconductedtoinvestigatetheefectsofhighplantproteindietswith taurineandfishproteinhydrolysateonthelipidaccumulationofjuvenileturbot(initialbodyweight4.16± 0.01g).Threeexperimentaldietswereformulated.Thecontroldiet(C)contained30% fishmeal.afterhalf ofthefishmealinthecontroldietwasreplacedbyplantproteinsources,0.8% taurinewasaddedto formulatetheseconddiet(ht).7% fishmealindiethtwasfurtherreplacedwithfishproteinhydrolysateto formulatethethirddiet(hth).thefeedingtrailwasconductedinindoorflowingseawatersystem.each dietwasasignedtoquadruplicategroupsof25fish.theresultsshowedthatcomparedtogroupscandht, grouphthsignificantlyreducedthewhole bodyneutrallipidcontentandthehepatosmaticindex.compared tothecontrolgroup,groupshtandhth significantlyincreasedthewhole bodymoisturecontent,but significantlyreducedtheneutralandtotallipidcontentinliver.comparedtothecontrolgroup,thepolarand totallipidwassignificantlyreducedonlyingrouphth.nosignificantdiferencewasobservedingutlipid contentsamongdietarytreatments.thecontentsoftriglycerideandcholesterolinserumofgrouphthwere significantlylowercomparedtothecontrolgroup.groupshtandhth tendtoreducetheconcentrationof longchainpolyunsaturatedfatyacids,butincreasetheconcentrationsofc18 2n 6,C18 3n 6andC18 3n 3.Theseresultssuggested thathigh plantprotein dietssupplemented with taurine reduced the lipid accumulationinturbotliver,andfurtheruseoffishproteinhydrolysatereducedtheneutralandtotallipid contentinwholebody,liver,muscle,andserumofjuvenileturbot. Keywords:turbot;highplantproteindiets;taurine;fishproteinhydrolysate;lipidaccumulation

中草药

中草药致谢李沛赵继敏郑智敏江亚楠等病理生理学教研室老师在实验中给予的指导和帮助狄建彬顾振纶赵笑东钱培刚蒋小岗郭次仪中草药中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 8 期 10 年 8 月 1324 LDL C 非常明显升高 (