6 期姚文祥, 等 : 低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长营养物质利用和消化酶活性的影响 881 粕等蛋白代替基础饲料 ( 含 20% 鱼粉 ) 中 5% 鱼粉, 单独或联合添加微囊氨基酸蛋白酶, 考察对虾体生长性能饲料利用和消化酶的影响, 为氨基酸和蛋白酶在对虾饲料中的合理应

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缨牛
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1 文章编号 : (2017) DOI: /jsou 低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长营养物质利用和消化酶活性的影响 ,2,3 姚文祥, 李小勤, 陈佳楠, 徐怀兵, 冷向军 (1. 水产科学国家级实验教学示范中心, 上海 ;2. 农业部鱼类营养与环境生态研究中心, 上海 ;3. 水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心, 上海 ) 摘要 : 试验旨在探究低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾 (Litopenaeusvannamei) 生长营养物质利用消化酶活性的影响试验设计 5 组等氮等能饲料 : 鱼粉含量 20% 的正对照组鱼粉含量 15% 的负对照组 ( 豆粕等蛋白替代鱼粉 ) 在负对照饲料中分别添加微囊赖氨酸 (500mg/kg) 蛋氨酸 (900mg/kg) ( 达到正对照饲料一致水平 ),175mg/kg 蛋白酶, 微囊赖氨酸蛋氨酸和 175mg/kg 蛋白酶, 饲喂初始体质量为 (2.96±0.02)g 的凡纳滨对虾 6 周结果表明 : 正对照组具有最大增重率和最低饲料系数, 而负对照组的增重率最低, 饲料系数最高 ; 在负对照饲料中补充氨基酸蛋白酶后, 有提高增重率和降低饲料系数趋势 (P> 0.05); 同时补充氨基酸和蛋白酶后, 虾体增重率提高 11.5%, 饲料系数降低 0.18(P<0.05), 显著提高了蛋白质沉积率干物质和粗蛋白消化率全虾水分粗蛋白粗脂肪粗灰分含量, 虾体粗脂肪沉积率和肝胰腺淀粉酶脂肪酶活性在各组均无显著差异 (P>0.05) 以上结果表明, 在含 15% 鱼粉的饲料中单独补充 900mg/ kg 微囊蛋氨酸 500mg/kg 微囊赖氨酸或 175mg/kg 蛋白酶, 对凡纳滨对虾生长的改善不显著, 联合添加微囊氨基酸和蛋白酶可显著提高虾体生长性能和营养物质利用率关键词 : 凡纳滨对虾 ; 微囊氨基酸 ; 蛋白酶 ; 生长 ; 营养物质利用 ; 消化酶活性中图分类号 :S963.1 文献标志码 :A 随着全球水产养殖规模和产量的增加, 鱼粉的供应不足已成为制约水产饲料工业发展的重要因素 [1], 降低鱼粉的使用量, 增加植物蛋白源的使用量, 是今后水产饲料发展的必然趋势然而, 植物蛋白中赖氨酸蛋氨酸等必需氨基酸缺乏和其较低的消化率, 是制约其大规模在水产饲料中使用的重要因素 [2] 因此, 可从补充必需氨基酸和添加酶制剂入手, 提高植物蛋白的营养价值 [3] TESHIMA 等发现, 饲料中添加晶体精氨酸盐酸盐对日本囊对虾 (Penaeusjaponicus) 的生长无显著改善作用, 在斑节对虾 (Penaeusmonodon) 和凡纳滨对虾上也有类似报道 [4] ; 饲料中添加微囊氨基酸, 较添加晶体氨基酸显著提高日本囊对虾的生长性能和饲料利用率 [5] 微囊氨基酸在水中的溶失率低 [4,6 7], 微囊氨基酸与蛋白态氨基酸的吸收较晶体氨基酸更为同步 [8 9], 故在对虾饲料中, 微囊氨基酸的作用效果优于晶体氨基酸在低鱼粉颗粒饲料中添加蛋白酶, 可提高异育银鲫对营养物质的消化率和沉积率, 改善鱼体生长性能 [10] 在虹鳟 (Oncorhynchus mykis) [11 12] 青鱼 (Mylopharyngodonpiceus) [13] 鲤 (Cyprinuscarpio) [14] 饲料中添加蛋白酶, 均改 [15] 善了鱼体生长性能 LI 等研究发现, 在低鱼粉凡纳滨对虾饲料中添加蛋白酶, 可显著改善对虾生长, 提高对虾肝胰腺蛋白酶活性尽管已有一些关于氨基酸蛋白酶在水产动物中应用的报道, 但将二者结合起来的研究尚未见报道本试验以凡纳滨对虾为研究对象, 以豆收稿日期 : 修回日期 : 基金项目 : 国际合作项目 (D ) 作者简介 : 姚文祥 (1992 ), 男, 硕士研究生, 研究方向为水产营养 E mail: @qq.com 通信作者 : 冷向军,E mail:xjleng@shou.edu.cn

2 6 期姚文祥, 等 : 低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长营养物质利用和消化酶活性的影响 881 粕等蛋白代替基础饲料 ( 含 20% 鱼粉 ) 中 5% 鱼粉, 单独或联合添加微囊氨基酸蛋白酶, 考察对虾体生长性能饲料利用和消化酶的影响, 为氨基酸和蛋白酶在对虾饲料中的合理应用提供依据, 以降低对虾饲料中的鱼粉水平 1 材料与方法 1.1 试验设计与试验饲料设计鱼粉含量 20% 的正对照组鱼粉含量 15% 的负对照组 ( 用豆粕等蛋白替代鱼粉 ) 在负对照饲料中分别添加微囊赖氨酸蛋氨酸 ( 简称氨基酸组 ), 使之达到与正对照一致的水平, 添加 175mg/kg 蛋白酶 ( 蛋白酶组 ), 及同时添加微囊赖氨酸蛋氨酸和 175mg/kg 蛋白酶 ( 氨基酸 + 蛋白酶组 ), 配制成 5 组等氮等能的饲料饲料原料粉碎后过 60 目筛, 按饲料配方 ( 表 1) 混合均匀, 各饲料中添加 500mg/kgY 2 O 3 作为外源指示剂用单螺杆挤压机制成直径为 1.2mm 的沉性颗粒饲料 ( 制粒温度为 85 ±5 ), 于 95 烘箱内后熟化 20min, 风干至水分含量低于 10%, 密封保存备用微囊赖氨酸蛋氨酸由广东海纳川药业股份有限公司提供, 有效含量分别为 50% 39% 蛋白酶商品名为 AG175, 由加拿大 JEFO 动物营养公司提供, 为细菌发酵产生的碱性丝氨酸蛋白酶, 具有较高的耐温性, 经制粒和后熟化后有 79.3% 和 67.5% 的保留率 [16] 1.2 试验虾及饲养管理凡纳滨对虾虾苗购自江苏南通某育苗基地, 在水泥池中进行前期暂养, 投喂商品饲料 ( 苏州通威特种饲料有限公司生产, 商品名 : 虾肝强, 规格 :20kg, 粗蛋白含量 40%) 正式试验前 24h 停止投饵, 挑选个体大小均匀的健康对虾 1000 尾 ( 初始体质量约为 2.96g), 随机分配到 20 口网箱 (1.0m 1.0m 1.2m), 每口网箱 50 尾, 试验共设置 5 个处理, 每个处理 4 个重复 ( 网箱 ) 养殖期间, 每日投喂量为虾体质量的 3% ~ 8%( 前期投喂高, 后期低 ), 分 4 次投喂 (6:00 12:00 17:00 和 23:00), 早晚投喂量占总量的 70% 根据对虾的进食情况和天气情况及时调整具体投喂量, 使各网箱投饲量基本一致, 并确保饲料在投喂后 2h 内被采食完 ; 昼夜充气, 采用虹吸法吸走池底残饵及粪便, 每周吸污一次, 吸污后换水 1/3 试验期间, 水温 22~30 盐度 0.5~1.0 溶氧 5.6mg/L,pH7.8~8.5, 氨氮 0.2mg/L, 亚硝酸盐 0.1mg/L 饲养试验共持续 42d 养殖试验于上海海洋大学滨海特种养殖场进行 1.3 粪便收集试验开始 3 周后, 每次投喂后 2h, 用镊子取食台上包膜完整的粪便于离心管中,-20 冰箱中保存, 待收集足量粪便样品后,105 干燥密封存放于 -20 冰箱中, 用于营养物质消化率分析 1.4 样品采集养殖试验开始时, 随机选取 60 尾对虾于 -20 冰箱中保存, 其中 10 尾虾合并为一个样本, 用于初始样体成分分析试验结束前 24h 停止投喂每个网箱随机挑选 4 尾虾, 保存于 -20 冰箱中, 用于全虾体成分分析 ; 每网箱另取 9 尾虾 (3 尾合为一个样本 ) 取其肝胰脏,-20 冻存, 测定相关消化酶活性 ; 每网箱再选取 10 尾虾, 用 1mL 注射器从围心腔中取血淋巴液,3000r/ min 离心 10min 后取上清液于 -80 保存备用, 以测定相关生化指标 1.5 测定指标与方法生长性能试验结束前 24h 停止投喂每个网箱进行称重并记录尾数, 计算存活率 (S R ) 增重率 (W GR ) 饲料系数 (F CR ) 蛋白质效率 (P ER ) 蛋白质沉积率 (P RR ) 和脂肪沉积率 (L RR ): S R (%)=N s /N e 100 (1) 式中 :N s 为虾收获尾数 ;N e 为虾投放尾数 W GR (%)=(F W -I W )/I W 100 (2) 式中 :F W 为末均质量 (g);i W 为初均质量 (g) F CR =F/(F W -I W ) (3) 式中 :F 为投喂量 P ER (%)=(F W -I W )/M (4) 式中 :M 为摄食蛋白量 P RR (%)=(F W W 2CP -I W W 1CP )/(F F CP ) 100 (5) 式中 :W 2CP 为末全虾粗蛋白含量 (%);W 1CP 为初全虾粗蛋白含量 (%);F 为投喂量 (g);f CP 为饲料粗蛋白含量 (%) L RR (%)=(F W W 2CL -I W W 1CL )/(F F CL ) 100 (6)

3 882 上海海洋大学学报 26 卷式中 :W 2CL 为末全虾粗脂肪含量 ;W 1CL 为初全虾粗脂肪含量 ;F CL 为饲料粗脂肪含量原料表 1 试验饲料组成和营养水平 ( 风干基础 ) Tab.1 Compositionandnutrientlevelsoftheexperimentaldiets(airdrybasis) % Ingredients 正对照 Positive control(pc) 负对照 Negative control(nc) 氨基酸组 Aminoacid diet(aa) 蛋白酶组 Protease diet(pr) 氨基酸 + 蛋白酶组 Aminoacid+ Protease(AA+Pr) 鱼粉 Fishmeal 花生粕 Peanutmeal 次粉 Wheatmiddlings 豆粕 Soybeanmeal 肉骨粉 Meatandbonemeal 鱿鱼膏 Squidvisceralmeal 啤酒酵母 Brewersdriedyeast 大豆磷脂 Soyabeanlecithin 鱼油 Fishoil 磷酸二氢钙 Ca(H 2 PO 4 ) 维生素预混料 Vitaminpremix 1) 矿物质预混料 Mineralpremix 2) 氯化胆碱 Cholinechloride(50%) 三氧化二钇 Y 2 O 膨润土 Bentonite 蛋白酶 Protease 微囊蛋氨酸 CoatedMethionine 微囊赖氨酸 CoatedLysine 合计 Total 营养水平 Proximateanalyses 粗蛋白 Crudeprotein 粗脂肪 Crudefat 水分 Moisture 赖氨酸 Lysine 3) 蛋氨酸 Methionine 计算总能 Calculatedgrosenergy/(kJ/g) 注 :1) 每千克维生素预混料含有 :V A IU,V D IU,V E 30g,V K 30g,V B1 5g,V B2 15g, 维生素 C 磷酸酯 140g(35% 可用 V C ), 烟酸 40g, 碳酸钙 25g, 维生素 B 6 8g,V B g, 维生素 H0.08g, 肌醇 150g;2) 每千克矿物质预混料含有 :Ca (H 2 PO 4 ) 2 600g,KCr(SO 4 ) g,CuCO g,FeC 6 H 5 O 7 10g,MgO30g,MnSO 4 3.5g,C 6 H 5 K 3 O 7 H 2 O220g,KI0.02g, K 2 SO 4 52g,NaCl74g,Na 2 SeO g,ZnCO 3 3.0g;3) 饲料赖氨酸蛋氨酸含量根据 2012 年第 23 版中国饲料成分及价值表计算得出 Note:1)Onekilogramofvitaminpremixcontained:vitaminA IU,vitaminD IU,tocopherolacetate30g,menadione10g, thiamine5.0g,riboflavin15g,vitamincphosphate140g(35% availablev C ),nicotinicacid40g,capantothenate25g,pyridoxine8g, vitaminb g,biotin0.08g,inositol150g;2)Onekilogramofmineralpremixcontained:Ca(H 2 PO 4 ) 2 600g,KCr(SO 4 ) g, CuCO g,FeC 6 H 5 O 7 10g,MgO30g,MnSO 4 3.5g,C 6 H 5 K 3 O 7.H 2 O220g,KI0.02g,K 2 SO 4 52g,NaCl74g,Na 2 SeO g, ZnCO 3 3.0g;3)ThecontentofLysineandMethionineofdietswerecalculatedbasedontheTablesoffeedcompositionandnutritivevaluesin China(2012,23rdedition) 饲料粪便全虾组成和钇元素含量对虾及饲料样品常规分析采用国际标准方法水分含量通过烘箱在 105 下烘干至恒重测定 ; 粗蛋白质含量采用自动凯氏定氮仪 (2300 Auto analyzer,fostecator,sweden) 测定 ; 粗脂肪含量采用氯仿甲醇法测定 ; 粗灰分含量是在 550 马福炉中灼烧 12h 后测得饲料和粪便中钇元素的分析采用等离子体原子发射光谱法 (ICP) (Vista MPX, Varian, Alo Alto, California, America) 在此基础上, 分别计算干物质和蛋白质表观消化率 (A DDM,A DCP ), 如下 : A DDM (%)=100 (1-D Y /F Y ) (7) 式中 :D Y 为饲料钇含量 (%);F Y 为粪便钇含量 (%) A DCP (%)=100 [1-(D Y F CP )/(F Y D CP )] (8) 式中 :F CP 为粪便粗蛋白含量 (%);D CP 为饲料粗蛋白含量 (%) 肝胰脏消化酶活性将肝胰脏样品从 -20 冰箱中取出,4 解

4 6 期姚文祥, 等 : 低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长营养物质利用和消化酶活性的影响 883 冻, 匀浆,3000r/min 离心 15min, 取上清测定消化酶活性蛋白酶活力的测定采用福林酚法蛋白酶单位定义 (U/mg):1mg 组织蛋白在 40 ph9.8 条件下,1min 水解酪素产生 1μg 酪氨酸定义为一个酶活力单位脂肪酶活力的测定采用南京建成试剂盒脂肪酶单位定义 (U/ g): 在 37 条件下, 每克组织蛋白在本反应体系中与底物反应 1min, 每消耗 1μmol 底物为一个酶活力单位淀粉酶活力的测定采用南京建成试剂盒淀粉酶单位定义 (U/g): 每克组织蛋白在 37 与底物作用 30min, 水解 10mg 淀粉定义为 1 个淀粉酶活力单位酶液蛋白质浓度采用考马斯亮兰法测定 ( 试剂购于南京建成生物研究所 ) 1.6 数据处理数据处理与分析采用 SPSS17.0 分析软件进行 ANOVA 单因子方差分析和 Duncan s 多重检验, 以 P<0.05 作为差异显著性判断标准 2 结果 2.1 生长性能由表 2 可见, 正对照组具有最高增重率和最低饲料系数, 而低鱼粉饲料 ( 负对照组 ) 增重率最低, 饲料系数最高 (P<0.05) 在低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸或蛋白酶后, 有提高增重率和降低饲料系数的趋势 (P>0.05), 且接近正对照组的水平 (P>0.05); 在低鱼粉饲料中同时添加微囊氨基酸和蛋白酶后, 较负对照组虾体增重率提高 11.5%, 饲料系数降低 0.18(P<0.05), 达到和正对照组一致的水平各试验组在养殖过程中的成活率均大于 95%, 且无显著差异 (P> 0.05) 表 2 饲料中添加氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长性能的影响 Tab.2 Efectsofcoatedaminoacidsandproteasesupplementationinlowfishmealdietson growthperformanceofwhiteshrimp 组别 Groups 初均质量 /gi W 末均质量 /gf W 增重率 /% W GR 饲料系数 F CR 成活率 /% S R 正对照 PC 2.96± ±0.69 a 446.8±18.6 a 1.36±0.06 a 99.0±1.1 负对照 NC 2.96± ±0.34 b 394.6±26.5 b 1.56±0.02 b 96.5±3.0 氨基酸组 AA 2.96± ±0.79 ab 413.3±16.8 ab 1.52±0.07 ab 98.5±1.9 蛋白酶组 Pr 2.96± ±0.36 ab 428.5±36.7 ab 1.50±0.13 ab 96.0±3.2 氨基酸 + 蛋白酶组 AA+Pr 2.96± ±0.31 a 440.4±18.7 a 1.38±0.06 a 98.5±1.9 注 : 同列数据具不同小写字母, 表示差异显著 (P<0.05) 表 4 5 同 Note:Inthesamecolumn,valueswithdiferentsuperscriptsmeansignificantlydiferent(P<0.05).Thesameintab 全虾成分由表 3 可见, 各试验组全虾水分粗蛋白粗脂肪粗灰分均无显著差异 (P>0.05) 表 3 饲料中添加氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾体组成的影响 Tab.3 Efectsofcoatedaminoacidsandproteasesupplementationinlowfishmealdietson whole bodycompositionofwhiteshrimp 组别 Groups 水分 /% Moisture 粗蛋白 /% Crudeprotein 粗脂肪 /% Crudelipid 粗灰分 /% Ash 正对照 PC 75.35± ± ± ±0.06 负对照 NC 75.01± ± ± ±0.20 氨基酸组 AA 74.25± ± ± ±0.08 蛋白酶组 Pr 75.88± ± ± ±0.09 氨基酸 + 蛋白酶组 AA+Pr 74.79± ± ± ± 营养物质利用率由表 4 可见, 低鱼粉组的蛋白质效率蛋白质沉积率干物质消化率和蛋白质消化率较正对照组显著降低 (P<0.05); 与低鱼粉组相比, 添加氨基酸, 有提高蛋白质沉积率和干物质消化率趋势 (P>0.05); 添加蛋白酶, 显著提高了蛋白质效率 (P<0.05), 有提高蛋白质沉积率干物质消化率和蛋白质消化率趋势 (P>0.05); 在低鱼粉饲

5 884 上海海洋大学学报 26 卷料中添加氨基酸 + 蛋白酶后, 蛋白质效率蛋白质沉积率干物质和蛋白质消化率均较低鱼粉组显著提高 (P<0.05), 并达到与正对照组基本一致的水平各组在脂肪沉积率上无显著差异 (P>0.05) 组别 Groups 表 4 饲料中添加氨基酸和蛋白酶对营养物质表观消化率的影响 Tab.4 Efectsofcoatedaminoacidsandproteasesupplementationinlowfish mealdietsonapparentdigestibilityofnutrientsofwhiteshrimp 蛋白质效率 /% PER 蛋白质沉积率 /%PRR 脂肪沉积率 /%LRR 干物质消化率 /%ADCD 蛋白质消化率 /%ADCP 正对照 PC 2.07±0.05 a 37.39±0.78 a 23.38± ±1.32 a 86.63±0.85 a 负对照 NC 1.89±0.12 b 34.24±1.56 b 22.89± ±1.23 b 84.12±0.90 b 氨基酸组 AA 1.94±0.04 ab 36.46±0.48 ab 20.92± ±1.09 b 83.73±0.79 b 蛋白酶组 Pr 2.05±0.06 a 36.52±0.13 ab 20.04± ±0.79 ab 84.64±0.59 ab 氨基酸 + 蛋白酶组 AA+Pr 2.05±0.05 a 37.72±1.64 a 23.71± ±1.14 a 85.93±0.68 a 2.4 肝胰腺消化酶活性由表 5 可见, 在低鱼粉饲料中添加蛋白酶, 或氨基酸 + 蛋白酶后, 肝胰腺蛋白酶活性较低鱼粉组显著升高 (P<0.05), 但单独添加氨基酸对肝胰腺蛋白酶活性无显著影响 (P>0.05) 各试验组在肝胰腺脂肪酶淀粉酶活性上无显著差异 (P>0.05) 表 5 饲料中添加氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾肝胰腺消化酶的影响 Tab.5 Efectsofcoatedaminoacidsandproteasesupplementationinlowfishmealdietson activitiesofdigestiveenzymesinhepatopancreasofwhiteshrimp 组别 Groups 蛋白酶 /(U/mg)Protease 脂肪酶 /(U/g)Lipase 淀粉酶 /(U/g)Amylase 正对照 PC 159.3±4.2 a 288.4± ±128.3 负对照 NC 122.0±10.6 b 325.2± ±144.4 氨基酸组 AA 126.4±13.2 b 268.5± ±34.6 蛋白酶组 Pr 150.6±17.8 a 292.4± ±49.9 氨基酸 + 蛋白酶组 AA+Pr 157.6±1.3 a 249.4± ± 讨论本试验中, 低鱼粉组 (15% 鱼粉 ) 的凡纳滨对虾增重率较正对照组 (20% 鱼粉 ) 下降 11.7%, 饲料系数升高 0.20(P<0.05, 表 2), 主要原因与豆粕等蛋白代替 5% 鱼粉后, 导致饲料蛋氨酸等必需氨基酸含量的下降 ( 表 1) 和营养物质消化率的下降 ( 表 4) 有关, 也可能与胆固醇等的下降有关 [16] 本试验从补充必需氨基酸和蛋白酶两个方面来改善低鱼粉饲料的利用性在对虾饲料中补充晶体氨基酸, 大多数研究认为对于生长和饲料利用没有显著改善 [3,5,17 18], 其主要原因是晶体氨基酸与蛋白态氨基酸吸收 [8,19] 不同步和晶体氨基酸在水中的溶失率较高 [4,6], 故在对虾饲料补充氨基酸, 通常采用微囊或包膜等缓释剂型 LIM [4] 在饲料中添加包膜 L 精氨酸饲养初始体质量 0.95g 的斑节对虾 8 周, 显著提高了增重率, 降低了饲料系数, 而添加晶体氨基酸对生长并未起到改善作用在日本囊对虾 [5] 凡纳滨对虾罗氏沼虾 (Macrobrachium rosenbergi) [20] 的研究中, 饲料中补充微囊氨基酸均显著提高了虾体生长性能本试验在低鱼粉饲料中补充微囊蛋氨酸赖氨酸后, 改善了虾体生长性能, 但未达到显著效果, 可能与饲料挤压生产过程对微囊材料的破坏和氨基酸的损失有关此外, 在补充了赖氨酸蛋氨酸后, 可能还存在其他限制性氨基酸, 影响了饲料效果的发挥 ; 本实验中, 氨基酸的添加, 并没有改善干物质蛋白质消化率 ( 表 4), 肝胰腺蛋白酶活性也没有提高 ( 表 5), 这意味着该组饲料的可消化养分含量依然低于正常鱼粉饲料 ( 正对照组 ), 故氨基酸组对虾体生产性能的改善不显著在水产饲料中添加蛋白酶, 大多数研究认为对于生长和营养物质利用均有显著改善 [1,21 22]

6 6 期姚文祥, 等 : 低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长营养物质利用和消化酶活性的影响 885 在饲料制作过程中, 蛋白酶能够对饲料蛋白起到一定水解作用 [21], 可弥补内源蛋白酶的不足, 降解难以消化的大分子蛋白, 降解饲料中的部分抗 [22] 营养因子和改善肠道组织结构 [23] [15] LI 等在低鱼粉饲料中添加 175mg/kg 蛋白酶饲喂凡纳滨对虾幼虾 (3.3g)56d, 提高增重率 11.3% 降低饲料系数 0.12(P<0.05), 肝胰腺蛋白酶活性也显著提高在罗非鱼 (Oreochromisspp.) [24] 虹鳟 [1] 异育银鲫 (Carasiusauratusgibelio) [10] 等的 [15] 研究中, 也有类似报道 LI 等在鱼粉含量为 3% 的罗非鱼颗粒饲料中添加蛋白酶, 显著提高了饲料干物质和粗蛋白消化率, 但在鱼粉含量 9% 的颗粒饲料中添加蛋白酶, 则对消化率无显著影响本试验在低鱼粉饲料中补充蛋白酶后, 在数值上提高了虾体增重率和饲料干物质粗蛋白表观消化率, 显著提高了肝胰腺蛋白酶活性, 达到和正对照组基本一致的水平 (P>0.05) 饲料酶制剂作用的发挥, 通常与饲料的原料组成和营养水平有关, 也与动物种类和生长阶段, 以及养殖环境等有关本试验中, 在低鱼粉饲料中的单独补充微囊氨基酸和蛋白酶, 虽在数值上改善了凡纳滨对虾生长性能, 但均未达显著水平将二者同时补充后, 凡纳滨对虾增重率提高 11.6%, 饲料系数降低 0.18(P<0.05), 虾体生长性能得到显著改 [10] 善石泽在低鱼粉颗粒饲料中补充微囊赖氨酸蛋氨酸的基础上添加 175mg/kg 蛋白酶饲喂初始体质量为 (35.0±0.2)g 的异育银鲫, 显著提高了营养物质利用率改善了鱼体生长性能酶制剂和氨基酸的合用, 既提高了营养物消化率, 也平衡了饲料氨基酸组成, 这是在增加植物蛋白用量, 降低鱼粉水平后, 值得推荐的一种营养策略在本研究条件下, 在鱼粉含量为 15% 的凡纳滨对虾饲料中单独补充 500mg/kg 微囊赖氨酸 900mg/kg 微囊蛋氨酸, 或 175mg/kg 蛋白酶, 对虾体生长性能和饲料利用无显著影响, 但同时补充 500mg/kg 微囊赖氨酸 900mg/kg 微囊蛋氨酸和 175mg/kg 蛋白酶, 可显著提高营养物质利用率, 改善凡纳滨对虾生长性能参考文献 : [1] DREW M D,RACZVJ,GAUTHIERR,etal.Efectof addingproteasetocoextruded flax: peaorcanola: pea productsonnutrientdigestibilityandgrowthperformanceon rainbowtrout(oncorhynchusmykis)[j].animalfeed ScienceandTechnology,2005,119(1/2): [2] HERN?NDEZ C,SARMIENTO PARDO J,GONZ?LEZ RODR?GUEZB,etal.Replacementoffishmealwithco extrudedwettunavisceraandcornmealindietsforwhite shrimp(litopenaeusvannameiboone)[j].aquaculture Research,2004,35(12): [3] TESHIMA S, ISHIKAWA M, SHAH ALAM M, etal. Supplementalefectsandmetabolicfateofcrystalinearginine injuvenileshrimpmarsupenaeusjaponicus[j].comparative Biochemistry and Physiology PartB: Biochemistry and MolecularBiology,2004,137(2): [4] LIM C.EfectofdietarypH onaminoacidutilizationby shrimp(penaeusvannamei)[j].aquaculture,1993,114 (3/4): [5] ALAM M S,TESHIMA S,KOSHIO S,etal.Efectsof supplementationofcoatedcrystalineaminoacidsongrowth performanceandbodycompositionofjuvenilekurumashrimp Marsupenaeusjaponicus[J].AquacultureNutrition,2004, 10(5): [6] YU ' FERA M,KOLKOVSKIS,FERN? NDEZ DIAZC, etal. Free amino acid leaching from a protein waled microencapsulateddietforfishlarvae[j]. Aquaculture, 2002,214(1/4): [7] L?PEZ ALVARADO J,LANGDON C J,TESHIMA SI, etal.efectsofcoatingand encapsulation ofcrystaline aminoacidsonleachinginlarvalfeeds[j].aquaculture, 1994,122(4): [8] R NNESTAD I,CONCEI?O LE,ARAG?O C,etal. Freeaminoacidsareabsorbedfasterandasimilatedmore eficientlythanproteinin postlarvalsenegalsole(solea senegalensis)[j].thejournalofnutrition,2000,130 (11): [9] COWEY C B,WALTON M J.Studiesontheuptakeof (14C)aminoacidsderivedfrombothdietary(14C)protein anddietary(14c) aminoacidsbyrainbow trout,salmo gairdneririchardson[j].journaloffishbiology,1988,33 (2): [10] 石泽. 蛋白酶有机酸对异育银鲫 (Carasiusauratus gibelio) 和建鲤 (Cyprinuscarpiovar.Jian) 生长营养物质利用率的影响 [D]. 上海 : 上海海洋大学,2016. SHIZ.Efectsofdietaryproteaseand organicacidson growth and nutrientutilization ofgibelcarp, Carasius auratusgibelioandjiancarp,cyprinuscarpiovar.jian[d]. Shanghai:ShanghaiOceanUniversity,2016. [11] DALSGAARDJ,VERLHACV,HJERMITSLEVNH,etal. Efects of exogenous enzymes on apparent nutrient digestibilityinrainbowtrout(oncorhynchusmykis)feddiets withhighinclusionofplant basedprotein[j].animalfeed ScienceandTechnology,2012,171(2/4):

7 886 上海海洋大学学报 26 卷 [12] DENSTADLIV,HILLESTAD M,VERLHAC V,etal. Enzymepretreatmentoffibrousingredientsforcarnivorous fish:efectsonnutrientutilisationandtechnicalfeedquality inrainbowtrout(oncurhynchusmykis)[j].aquaculture, 2011,319(3/4): [13] 陈建明, 叶金云, 许尧兴, 等. 饲料中添加中性蛋白酶对青鱼生长消化及鱼体组成的影响 [J]. 水生生物学报, 2009,33(4): CHENJM,YEJY,XUYX,etal.Efectofaddingneutral proteasetodietsongrowthperformance,digestion,andbody composition offingerling black carp (Mylopharyngodon piceus)[j].actahydrobiologicasinica,2009,33(4): [14] 刘鼎云, 冷向军, 卢永红, 等. 饲料中添加蛋白酶 Aquagrow 对鲤生长和蛋白质消化酶活性的影响 [J]. 淡水渔业,2007,37(5): LIUDY,LENG X J,LU Y H,etal.Efectsofadding protease(aquagrow)indietongrowthanddigestiveprotease activitiesofcommoncarp[j].freshwaterfisheries,2007, 37(5): [15] LIXQ,CHAIXQ,LIUDY,etal.Efectsoftemperature andfeedprocesingonproteaseactivityanddietaryprotease ongrowthsofwhiteshrimp, Litopenaeusvannamei, and tilapia,oreochromisniloticus O.aureus[J].Aquaculture Nutrition,2016,22(6): [16] 王鑫磊, 李航, 黄旭雄, 等. 饲料中胆固醇含量对淡水养殖凡纳滨对虾生长性能抗弧菌和抗亚硝态氮胁迫能力的影响 [J]. 动物营养学报,2016,28(8): WANGXL,LIH,HUANGXX,etal.Efectsofdietary cholesterolcontentongrowthperformance,vibrioandnitrite nitrogen stresresistantabilitiesoflitopenaeusvannamei Cultured in Freshwater[J]. ChineseJournalofAnimal Nutrition,2016,28(8): [17] LUO L,WANG J,PAN Q,etal.Apparentdigestibility coeficientofpoultryby productmeal(pbm)indietsof Penaeusmonodon (Fabricius) and Litopenaeusvannamei (Boone),andreplacementoffishmealwithPBM indietsof P.monodon[J].AquacultureResearch,2012,43(8): [18] BAUER W,PRENTICE HERNANDEZC,TESSER M B, etal.substitutionoffishmealwithmicrobialflocmealand soyproteinconcentrateindietsforthepacificwhiteshrimp Litopenaeusvannamei[J]. Aquaculture,2012, (1): [19] 麦康森. 放射性同位素标记法测定虾类饵料的消化率 [J]. 饲料研究,1988(8): MAIK S.Determinationofdigestibilityofshrimpdietby radioisotopemarker[j].feedresearch,1988(8): [20] 牛化欣. 微胶囊氨基酸制备及其在饲料加工和虾养殖中的效果研究 [D]. 无锡 : 江南大学,2011. NIUHX.Preparationofmicroencapsulatedaminoacidsand itsevaluationinfeedproceesingandshrimpculture[d]. Wuxi:JiangnanUniversity,2011. [21] 宋红利, 董晓慧, 谭北平, 等. 蛋白酶和有机酸盐对凡纳滨对虾生长性能免疫酶和消化酶的影响 [J]. 广东饲料, 2016,25(4): SONGHL,DONGXH,TANBP,etal.Efectsofdietary protease and organic acids on growth performence, immunoenzymeanddigestiveenzymeactivityofwhiteshrimp [J].GuangdongFeed,2016,25(4): [22] CAINEW R,VERSTEGENM W A,SAUERW C,etal. Efectofproteasetreatmentofsoybeanmealoncontentof totalsolublematerandcrudeproteinandlevelofsoybean trypsininhibitors[j].animalfeedscienceandtechnology, 1998,71(1/2): [23] 姚建国. 外源酶对家禽内源消化酶活性及饲料氨基酸消化率影响的研究 [D]. 南京 : 南京农业大学,2001. YAOJG.Influenceofexogenousenzymesonendogenous digestiveenzymeactivityandfeedaminoaciddigestibilityof poultry[d]. Nanjing: Nanjing AgriculturalUniversity, [24] LINSM,MAIKS,TANBP.Efectsofexogenousenzyme supplementationindietsongrowthandfeedutilizationin tilapia,oreochromisniloticusxo.aureus[j].aquaculture Research,2007,38(15):

8 6 期姚文祥, 等 : 低鱼粉饲料中添加微囊氨基酸和蛋白酶对凡纳滨对虾生长营养物质利用和消化酶活性的影响 887 Efectsofcoatedaminoacidsandproteasesupplementationinlowfishmeal dietsongrowth,nutrientutilizationanddigestiveenzymeactivitiesofwhite shrimp YAOWenxiang 1,LIXiaoqin 1,CHENJia nan 1,XUHuaibing 1,LENGXiangjun 1,2,3 (1.NationalDemonstrationCenterforExperimentalFisheriesScienceEducation,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai ,China;2.CentreforResearchonEnvironmentalEcologyandFishNutrition(CREEFN)oftheMinistryofAgriculture, ShanghaiOceanUniversity,Shanghai ,China;3.ShanghaiColaborativeInnovationforAquaticAnimalGeneticsand Breding,ShanghaiOceanUniversity,Shanghai ,China) Abstract:Thisexperimentwasconductedtoevaluatetheefectsofcoatedaminoacidsandexogenousprotease supplementationinlowfishmealdietongrowth,nutrientutilizationanddigestiveenzymeactivitiesofwhite shrimp(litopenaeusvannamei).ahighfishmealdiet(containing20% fishmeal)andalowfishmealdiet (containing15% fishmeal)weredesignedasthepositiveandnegativecontroldietsrespectively,andcoated lysine(500mg/kg),coatedmethionine(900mg/kg)(caa)and175mg/kgexogenousproteasewere supplementedinnegativedietsolelyorcombinedlytoform anotherthreeexperimentaldiets. Thefive isonitrogenousandisoenergeticdietswerefedtowhiteshrimpwithaninitialbodyweightof2.96gfor42 days.thepositivegroupshowedthehighestweightgain(wg)andthelowestfeedconversionratio(fcr), andthenegativegrouphadthelowestwgandthehighestfcramongalgroups.thesupplementationof coatedaminoacidsorproteasetendedtoimprovewr,anddecreasefcr(p>0.05)whencomparedtothe negativecontrol. Thecombined supplementation ofcoated aminoacidsand proteaseimproved WR by 11.5%,decreasedFCRby0.18(P<0.05),andsignificantlypromotedproteinretentionanddigestibilityof drymaterandcrudeprotein(p<0.05).therewerenosignificantdiferencesinmoisture,crudeprotein, crudelipidandashcontentsofwholebodyamonggroups(p>0.05),andalgroupsshowednosignificant diferencesinlipidretentionandactivitiesoflipaseandamylaseinhepatopancreas(p>0.05).theabove resultsshowedthatthesupplementationof500mg/kgcoatedlysine,900mg/kgcoatedmethionineor175 mg/kgproteaseinalowfishmealdiet(15% fishmeal)didnotsignificantlyinfluencethegrowth,butthe combinedsupplementationofcoatedaminoacidsandproteasesignificantlyimprovedthegrowthandnutrients utilizationofwhiteshrimp. Keywords:whiteshrimp;coatedaminoacids;protease;growthperformance;nutrientutilization;digestive enzymeactivities

522 42, (Procambarus clarkii), 7g, (24% 27% 30%), 3 (4% 7% 10%), 9, 4, ,, 2mm, 4 1.3, ( )g 432, 36 ( cm, ), 10 ( : =

522 42, (Procambarus clarkii), 7g, (24% 27% 30%), 3 (4% 7% 10%), 9, 4, ,, 2mm, 4 1.3, ( )g 432, 36 ( cm, ), 10 ( : = 42 4 Vol.42, No.4 2011 7 OCEANOLOGIA ET LIMNOLOGIA SINICA July, 2011 (Procambarus clarkii) * 1 1 2 1 1 1 1 (1. 210095; 2. 210017) 3 3, [ (7.03 0.05)g] 3 (24% 27% 30%) 3 (4% 7% 10%), 9, 4, 10, 8, (P>0.05),