复旦学报 医学版 年 月 -!//" -!! -!!!-! / - -/!" )!"-//! - %/ -/ /! -%/ ;") -)!"-/ -!//" -!! -!!! -" - / "--/!//" "! / -/!!!/ -/! %! /"! -%/ -""! "!" " ""/"" %-

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1 复旦学报 医学版 超声光散射断层成像 与乳腺癌血管生成病理学的相关性 王红磊 武 力 阙 燕 马大昌 吴多明 兰州大学第一医院乳腺科 兰州 摘要 目的 通过研究乳腺癌超声光散射断层成像 -!"! 综合诊断指数 " 以及 血管内皮生长因子 "-% 缺氧诱导因子!/- 在乳腺癌中的表达 探讨乳腺癌超声 与微血管密度 % 和 表达的关系 方法 采用超声 系统 研究 例乳腺良性病变 含典型良性病变 例 乳腺导管内乳头状瘤 例 乳腺导管上皮不典型增生 例 和 例乳腺癌 含乳腺导管原位癌 例 乳腺浸润性癌 例 测量超声 通过受试者工作特征曲线!") 曲线 确定乳腺癌的最佳诊断阈值 使用免疫组化法检测乳腺癌 标记的 % 和 的表达强度 分析乳腺癌 值 值以及 % 和 表达的关系 结果 经 ) 曲线分析得出 值的 ) 曲线下面积 ; 为 确定 值 作为乳腺癌的最佳诊断阈值 乳腺典型良性疾病 乳腺导管内乳头状瘤 乳腺上皮不典型增生 乳腺导管原位癌 乳腺浸润性癌的 值分别为 乳腺典型良性病变 乳腺浸润性癌与其他各组之间的差异有统计学意义 乳腺导管内乳头状瘤 乳腺上皮不典型增生 乳腺导管原位癌三者之间的差异无统计学意义 值与 值呈正相关 % 表达阴性 阳性 强阳性乳腺癌的 值之间的差异有统计学意义 结论 与乳腺癌 % 和 表达密切相关 可以间接反映血管生成活性和组织缺氧对乳腺癌的诊断 病情判断具有重要指导意义 关键词 超声光散射成像系统 综合诊断指数 微血管密度 血管内皮生长因子 % 缺氧诱导因子 乳腺癌 中图分类号 )) 文献标志码 "!"% "%""%! " %, " " ")!-"%-""!!"/ " --!"!"!; / "-%! / // -! /"!"%

2 复旦学报 医学版 年 月 -!//" -!! -!!!-! / - -/!" )!"-//! - %/ -/ /! -%/ ;") -)!"-/ -!//" -!! -!!! -" - / "--/!//" "! / -/!!!/ -/! %! /"! -%/ -""! "!" " ""/"" %-!"! "! " "- %! /-/ 在肿瘤的发生 发展过程中 肿瘤血管生成起着至关重要的作用 微血管密度 作为检测肿瘤血管生成的金指标能够直接反映血管的生成活性 血管内皮生长因子 "-% 是迄今所发现的促血管生成因子中作用最强的 也是肿瘤血管生成的关键性因素 肿瘤快速增长 耗氧增多可导致 高血 低氧 缺氧诱导因子!/- 在缺氧条件下 % 基因表达上调中发挥 关键作用 超声光散射断层成像系统 -!"! "! 是一种功能成像系统 可反映乳腺肿块的形态信息和代谢状态 并得出综合诊断指数 " 达到对乳腺病变的鉴别诊断 该系统在原理上可测量局部组织血红蛋白总量 血氧饱和度等参数 间接反映局部血管的生成活性 但关于乳腺癌 值与 以及 % 表达相关性的研究尚未见报道 本文旨在总结和分析兰州大学第一医院乳腺科近两年的临床数据 研究超声光散射 值在乳腺病变中的特点及其与肿瘤血管生 成病理学基础的关系 资料和方法 临床资料 本文涉及的数据来源于 年 月至 年 月间在兰州大学第一医院乳腺科住院的 例患者 所有患者都经过超声光散射系统的检查 并经过病理检查 乳腺典型良性病变 例 导管内乳头状瘤 例 乳腺导管上皮不典型增生 例 乳腺导管原位癌 例 乳腺浸润性癌 例 试剂和方法 北京中山公司 % 超敏 ( 试剂盒 显色试剂盒 福州迈新公司 ( 型超声光散射乳腺成像系统 河北新奥博为技术有限公司 首先通过超声图像引导定位肿瘤位置 行患侧乳房的光学数据采集 然后在肿瘤所对应的健康乳房区域采集健侧乳房的数据 通过对测量结果重建计算 生成组织血液功能三维断层图像 并对组织内肿瘤区域的血红蛋白总量进行定量计算 超声检测到的肿物空间信息经过系统自动数字化处理

3 王红磊 等 超声光散射断层成像 与乳腺癌血管生成病理学的相关性 定量显示肿物空间结构信息数值 系统将肿物光学信息与超声信息相结合 得出 免疫组化 法 按照 ( 法常规实验步骤 抗原修复均为微波热修复 一抗 % 确定 值 作为乳腺癌的最佳诊断阈值 灵敏度 特异度 阳性预测值 阴性预测值 准确率 图 置于 < 孵育 % 置于 < 过夜 抗体均为兔抗人单抗 超声光散射结果评判标准 用所有乳腺病变的 做受试者工作特征曲线!") 曲线 选择, 指数 敏感度 特异度 最大时 值作为诊断阈值 在光散射图像中 用彩色编码不同的吸收强度 颜色越偏向红色表示光子吸收越多 组织血红蛋白总量越高 颜色越偏向蓝色表示血光子吸收越少 组织总血红蛋白总量越低 免疫组化结果判定 % 表达于细胞质中 以细胞核和 或细胞质出现明显的棕黄色颗粒为阳性染色 先按染色强度打分 无色 分 浅黄色 分 棕黄色 分 棕褐色 分 再按阳性细胞所占百分比打分 阳性细胞数 为 分 为 分 为 分 为 分 为 分 染色强度与阳性细胞百分比的乘积 分为强阳性 分为阳性 分为阴性 阳性判断及 计数 主要表达于肿瘤间质的血管内皮细胞膜上 采用 法来判断阳性结果 以与肿瘤细胞和结缔组织成分明显有别的任何一个染成棕色的内皮细胞或细胞丛作为一个血管相 在低倍镜下 寻找肿瘤内血管高密度区! 后在高倍镜下 计数 个血管高密度区的微血管数 其平均值代表 统计学分析 使用 ( 统计软件分析 数据 表示 计量资料采用单因素方差和两独立样本 检验 计数资料的统计用 检验 分析直线相关 回归方程分析 值和 值之间的关系 ) 曲线分析 值的最佳诊断阈值以及曲线下面积 检验水准为 为差异有统计学意义 结 果 超声光散射断层成像 7 值 分析 通过 ) 曲线可得出 值的 ) 曲线下面积 图 乳腺肿块 7 值 曲线 7"! " "!!- / ) -/ - B"" -" 超声光散射检查在乳腺良性疾病 癌前病变和乳腺癌中的表现 在乳腺典型良性病变光散射图中几乎未见光吸收 在导管内乳头状瘤和上皮不典型增生光散射图中可见中等量的光吸收 在乳腺导管原位癌光散射图中可见较强的光吸收 在浸润性癌光散射图中可见明显的光吸收 图 值在乳腺典型良性病变 乳腺浸润性癌与其他各组之间的差别有统计学意义 在乳腺导管内乳头状瘤 乳腺上皮不典型增生 乳腺导管原位癌三者之间的差别无统计学意义 表 表 乳腺典型良性疾病 癌前病变 浸润性乳腺癌的 7 值比较!7"!%"!!""%!!!//"!!!!! " / /"!!!!!!! "!!!"

4 复旦学报!医学版"!!"! 年 ) 月 %! "! " 图 N! 乳腺典型良性病变%癌前病变%浸润性乳腺癌超声光散射图 > ) /H= (), 4 ) ( "( ;, (, "% 4 "( " --- ( ), (, N!PK98 7; (4 7(! 6, %G E G %9< "%94K "% "9 %O?JP E %!!KO?J ; 4%!< = O?J ; 6, % % " 9 < "%94 K "9 %O?J G %<,ON)< 9"% E G %<,ON!<!< /O?J; 6, % " 6 < "%94 K "9 % O?J 9"% E G %<,ON)(< (< OO?J ; 6, %" %9 ( 4< "%94 K "9 %O?J 9"% E G %<,ON("< )(< 7O?J ; 6, %G %( (" %9< K "9 %O?J, E % G % %!%<,ON!< (%<!O?J; 6, % "%94 4% %( ( G" %9< "%94 K "9 %O?J, E % G % %!%<,ON 4% (%<!<!!PM@D 标 记 的 GeP 在 乳 腺 癌 中 的 表 达 及 与 =PU值的关系!/O " )在处于增殖状态的肿瘤组织血 状态较准确的指标乳腺癌的 [O 均值为 %< % / < 经相关分析可得,ON值与 [O 值呈直线相关 %相关系数% "< (!?"< " " "直线回归方! 程为 图" Q ( ),"Q C! "Q ) 9 表达较弱或不表达! 图" 它是目前衡量内皮细胞增殖

5 王红磊 等 超声光散射断层成像 与乳腺癌血管生成病理学的相关性 图 7 值与 /A 值的散点图及拟和直线 图 (, 在乳腺癌血管内皮细胞上的表达 8(( (,""""!8(( A69<7 在乳腺癌组织中的表达及其与 7 值 /A 值的关系 % 表达于细胞质中 主要表达于乳腺癌细胞核和 或细胞质中 % 表达阴性 阳性 强阳性的 值和 值 "7/A 之间的差异有统计学意义 表达阴性 阳性 强阳性的 值和 值之间的差异有统计学意义 表 图 乳腺癌 A69 表达和 <7 表达的关系 乳腺癌组织中 % 和 表达呈正相关 表 图,<7 及 A69 在乳腺癌细胞中的表达 8((,<7A69!"8(( -/%! -/ 表 乳腺癌 7 值 /A 值与 A69<7 表达的关系!"!7/A"A69<7! %!! %%"! %%"! %%"! % %"! %"! %%"! "! "! "! "! "! "!

6 复旦学报 医学版 年 月 表 乳腺癌 A69 表达和 <7 表达的关系!"!A69<7!! %! 讨 论 超声光散射断层成像系统 ( 是以 氧合血红蛋白与脱氧血红蛋白在近红外光区域内不同程度的吸收特性 为理论基础设计而成 该系统充分利用激光对血液的高敏感性以及超声波的高空间分辨率 量化肿瘤的功能特征与形态特征 并将肿物光学信息与超声信息相结合 得出 达到对乳腺癌的鉴别诊断 本研究通过对 值的 ) 曲线分析表明其灵敏度 特异度 阳性预测值 阴性 预测值以及准确率均较高 等在美国进行的临床研究显示该技术诊断乳腺癌的灵敏度高达 特异度 国内学者游珊珊等 李越 等的研究也显示该技术对乳腺癌诊断具有较高的准确率 世纪末 乳腺癌多阶段发生模式 的提出指出了正常乳腺上皮细胞向恶性转化经历了增生到非典型增生到原位癌再到浸润性癌的渐变过程 在发展成为浸润性癌之前 非典型增生和原位癌可能很长时间处于相对稳定状态 被称为乳腺癌的癌前病变 它包括一部分不伴或伴有非典型增生的乳腺增生性疾病 导管内乳头状瘤 硬化性腺病 导管原位癌和小叶原位癌等 本研究通过对乳腺典型良性病变 导管内乳头状瘤 乳腺导管上皮不典型增生 乳腺导管原位癌 乳腺浸润性癌的研究发现 乳腺典型良性病变的 值明显小于其余各组 乳腺导管内乳头状瘤 乳腺上皮不典型增生 乳腺导管原位癌的 值呈增高趋势 但三者之间的差异无统计学意义 乳腺浸润性癌的 值明显高于其余各组 近年研究发现 血管生成与乳腺良性疾病恶变倾向 恶性肿瘤的发生 发展 转移和预后均有密切的关系 刘胜春等在血管生成与乳腺非典型增生的实验中发现 从正常乳腺 单纯上皮增生 轻度非典型增生 中重度非典 型增生到乳腺癌 各组血管生成数量逐渐增多 李 颖嘉等的研究结果显示 血管生成异常可能是乳腺癌发生过程中的早期事件 % 及其受体 ) 的表达异常可能是从乳腺普通性增生到上皮不典型增生再到乳腺癌这一癌性转化过程中血管生成异常的主要始动因素 本研究结果显示 乳腺病变 值随着典型良性病变 癌前病变 乳腺导管原位癌 乳腺浸润性癌的发展呈增大趋势 说明血管生成在乳腺病变由良性向恶性发展的过程中起着重要的作用 在浸润性乳腺癌中 值有明显上升 可能是由于肿瘤进入血管生成期后 肿瘤细胞分泌了大量的血管生成因子 从而促进了肿瘤血管生成 乳腺癌的早期诊断对其治疗及预后有重要意义 目前对于乳腺病变诊断的难点在于如何早期发现乳腺癌以及乳腺癌前病变 通过钼靶 超声等常规检查很难达到此目的 系统异于钼靶及彩色多普勒超声 它能够根据肿物内部毛细血管及血红蛋白含量的变化反映肿瘤血管生成活性 对乳腺癌进行早期诊断和筛查 本研究结果显示 值为 左右时乳腺癌前病变和早期癌较集中 如果对于该数值范围内的乳腺病变及时治疗 有可能及时发现乳腺早期癌和癌前病变 对临床诊断及治疗具有很重要的意义 在肿瘤的发生 发展和变化过程中 其生理特征变化要早于肿瘤解剖特征的变化 而病理 分子生物学变化与生理特征变化密切相关 血管生成是恶性肿瘤生长和转移的重要基础 肿瘤血管生成的数量是通过测定其 而被评估 与肿瘤的生长 转移及预后有密切关系 肿瘤中血管的定量被认为是一种重要而独立的预后指标 本研究显示 乳腺癌 值与 值之间呈正相关 美国学者 等 和国内姚小留等 的研究也显示乳腺癌超声光散射测量结果与 密切相关 % 是迄今所发现的促血管生成因子中作用最强的 其具有促进内皮细胞分裂 增殖和提高微血管通透性的重要功能 能直接参与血管增生 与肿瘤的生长 浸润和转移有着密切关系 本研究显示 乳腺癌 % 表达与 值和 值有密切关系 值和 值随着 % 表达增强而增大 说明了 % 可促进乳腺癌血管的生成 同时 从 值与 和 % 表达的关系来看 超声光散射 值可间接反映乳腺癌血管生成活性

7 王红磊 等 超声光散射断层成像 与乳腺癌血管生成病理学的相关性 肿瘤的异常增殖和过度生长会使瘤体内出现缺氧现象 是介导细胞对缺氧微环境进行适应性反应的转导调控因子 其表达活性对维持肿瘤细胞的能量代谢 细胞增殖 新生血管生成具有重要作 用 由 和 两个亚单位构成 其中 被认为是特异氧调节亚单位 决定了 的活性 目前认为 在缺氧诱导的 % 基因表达上调中发挥关键作用 可通过调控编码基因 % 转录起始点上游区域的缺氧反应元件! )% 诱导 % 对缺氧的反应促进血管生成 由此可见 在实体肿瘤生长和血管生成过程中发挥重要作用 本研究显示 值和 值随着 表达增强而增大 和 % 表达呈正相关 说明肿瘤组织缺氧与血管生成密切相关 此外 还能激活促红细胞生成素基因的表达 使红细胞生成增加 提高携氧能力 使缺氧的组织细胞保持氧稳态及耐受低氧状态 超声光散射系统可以通过对乳腺病变组织内部氧合血红蛋白 脱氧血红蛋白浓度及血氧饱和度的测定 反映乳腺肿块组织内氧含量和血液含量 值与 表达的密切关系推测可能与 促进 % 的产生 导致肿瘤血管生成增多以及 激活促红细胞生成素基因导致血红蛋白含量增高有关 综上所述 超声光散射诊断系统是基于肿瘤的发生 发展与肿瘤血管生成密切相关并结合了光散射和超声检查的优点而设计的一种功能成像技术 本研究通过对乳腺癌超声光散射 值和 值 % 和 表达关系的研究 阐述了超声光散射诊断乳腺癌的病理 分子生物学依据 通过 值的测定可间接反映肿瘤的血管生成活性和肿瘤组织氧含量状况 对于乳腺癌的诊断以及术前预测乳腺癌的病情发展趋势和治疗方案的选择有一定 的指导意义 参 考 文 献! ( ) "" / (, % " "/!- "!"" 游珊珊 朱庆莉 张瞡 等 超声光散射成像诊断乳腺病变 中国医学影像技术 李越 赵颖 张斌 等 超声光散射乳腺成像诊断乳腺癌的临床价值 中华乳腺病杂志 刘胜春 吴凯南 厉红元 血管生成在乳腺非典型增生变过程中的作用 中国肿瘤临床 李颖嘉 孙学刚 文戈 乳腺癌及癌前病变血管生成相关分子的表达及意义 中国组织化学与细胞化学杂志 ; " (;"! "! ; " " "/ / " / ( 姚小留 张炽敏 李嘉 等 乳腺肿块超声光散射成像与微血管密度测定的相关性研究 中国超声医学杂志 ; -!"!!"!!, ) ",",!! " - " -!-/-//"-! ""!!" " ;,!! - "-"!"/ -!/- / 收稿日期 编辑 王蔚

材料 方法

材料 方法 生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人

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