484 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 27 卷 TregcelsshowedapositivecorelationwithFVE1(r=0.411,P=0.003)andPEF(r=0.441,P= 0.001)inasthmapatients.TheROCcurveanalysisshowed

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1 第 27 卷第 6 期 2017 年 11 月 江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.27 No.6 Nov.2017 哮喘患者外周血 CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg 细胞检测及其临床意义 于建秀 1, 钱雷 1, 陈国萍 2 2, 朱静和 ( 滨海县人民医院 1. 检验科,2. 呼吸内科, 江苏盐城 ) [ 摘要 ] 目的 : 通过检测哮喘患者外周血 CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg(CD8 + Treg) 细胞比例, 探讨其在哮喘发生发展过程中的作用 方法 : 选择哮喘患者 50 例, 其中轻中度哮喘 25 例, 重度哮喘 25 例, 并选择与患者年龄 性别匹配的 25 例健康者作为对照组 流式细胞仪分析 CD8 + Treg 细胞比例 ;RT PCR 检测外周血单个核细胞 Foxp3mRNA 的表达 ;Luminex200 检测血清 IL 33 IL 1β 和转化生长因子 β 1 (TGF β 1 ) 浓度 肺功能测试仪测定第 1 秒用力呼气容积 (FEV1) 呼气峰流速 (PEF) 结果: 重度哮喘组和轻中度哮喘组 CD8 + Treg 比例分别为 [2.32(1.24~ 3.63)%] 和 [4.13(2.05~5.41)%], 两组均低于对照组 [6.48(5.21~6.92)%], 且重度哮喘组降低更显著 (P< 0.05) 与对照组相比, 重度哮喘组及轻中度哮喘组血清 IL 33 浓度均明显升高, 且重度哮喘组升高更明显 (P< 0.05); 与对照组及轻中度哮喘组相比, 重度哮喘组 TGF β 1 和 IL 1β 明显升高 (P<0.05); 哮喘患者 CD8 + Treg 细胞比例与 FEV1(r=0.411,P=0.003) PEF(r=0.441,P=0.001) 呈正相关 ROC 曲线分析显示,CD8 + Treg 诊断哮喘具有较高的特异性和敏感性 结论 : 哮喘患者外周血 CD8 + Treg 细胞比例降低, 在疾病发生发展过程中发挥重要作用 [ 关键词 ] 哮喘 ;CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg; 第 1 秒用力呼气容积 ; 呼气峰流速 [ 中图分类号 ] R [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2017) DOI: /j.isn y [ 引用格式 ] 于建秀, 钱雷, 陈国萍, 等. 哮喘患者外周血 CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg 细胞检测及其临床意义 [J]. 江苏大学学报 ( 医学版 ),2017,27(6): ,517. ChangeandsignificanceofCD8 + CD25 + Foxp3 + Tregcelsin peripheralbloodofpatientswithasthma YUJian xiu 1,QIANLei 1,CHENGGuo ping 2,ZHUJing he 2 (1.DepartmentofLaboratoryMedicine;2.DepartmentofRespiratoryMedicine,BinhaiPeople shospital,yanchengjiangsu224500, China) [Abstract] Objective:TodetecttheexpresionofCD8 + CD25 + Foxp3 + regulatortcels(cd8 + Treg)inasthmapatients,andtoinvestigatetheroleofCD8 + Treginthepathogenesisofasthmapatients. Methods:Thestudyincluded50patientswithasthma,25patientswithmild to moderateasthma(ma), 25patientswithsevereasthma(SA)and25age matchedhealthycontrols.thepercentageofcd8 + Treg celswasdetectedbyflowcytometry.thefoxp3mrnaofperipheralbloodmononuclearcelwasdeter minedbyrt PCR.ThecytokinesofIL 33,IL 1βandtransforminggrowthfactor β 1 (TGF β 1 )werede tectedusingluminex200.forcedexpiratoryvolumein1second(fev1)andpeakexpiratoryflow(pef) weredetectedbypulmonaryfunctiontestingsystems.results:comparedwithhealthycontrols[6.48 ( )%],MApatients[4.13( )%]andSApatients[2.32( )%] hadlowerpercentagesofcd8 + Tregcels(P<0.05).Comparedtohealthycontrols,higherlevelsofIL 33werefoundinSAandMApatientsandmuchhigherinSApatients(P<0.05).Comparedtohealthy controlsandmagroup,sapatientsshowedhigherlevelsoftgf β 1 andil 1β.ThepercentageofCD8 + [ 基金项目 ] 盐城市医学科技发展项目 (YK ) [ 作者简介 ] 于建秀 (1984 ), 女, 主管技师, 硕士, 主要从事血管性疾病免疫学研究 ; 朱静和 ( 通讯作者 ),E mail: @qq.com

2 484 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 27 卷 TregcelsshowedapositivecorelationwithFVE1(r=0.411,P=0.003)andPEF(r=0.441,P= 0.001)inasthmapatients.TheROCcurveanalysisshowedtheCD8 + Treghadhighspecificityand sensitivityinthediagnosisofasthma.conclusion:thedecreasedcd8 + Tregsmightplayaroleinthe pathogenesisofasthma. [Keywords] asthma;cd8 + CD25 + Foxp3 + Treg;FEV1;peakexpiratoryflow 哮喘是一种全球性的社会健康问题, 以呼吸道黏膜的异常和红肿 喘息及呼吸急促为主要特征的慢性炎症性疾病, 严重影响患者的生活质量, 甚至危及生命 [1] Foxp3 + 调节性 T 细胞 (Treg) 是抑制炎症反应 维持免疫耐受的主要效应细胞, 可抑制其他免疫细胞的增生 活化和效应功能, 具有保持免疫内环境稳定的功能 [2-3] 较多研究表明 CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg(CD8 + Treg) 细胞参与哮喘的发生发展 [4-5], 但其在哮喘疾病过程中的作用尚不明确 本次研究通过检测哮喘患者外周血 CD8 + Treg 比例, 并分析其与肺功能参数的相关性, 探讨其在哮喘疾病过程中的作用 1 材料与方法 1.1 研究对象选取 2015 年 10 月至 2016 年 3 月在滨海县人民医院诊断为哮喘的患者共 50 例, 其中轻中度哮喘 25 例, 重度哮喘 25 例, 并选择 25 例年龄 性别匹配的健康者作为对照 哮喘诊断标准及分类参照支气管哮喘防治指南 (2013 年 ) [6] 排除标准: 心血管疾病 呼吸道感染 胸部或腹部疼痛及不能进行肺功能测定的患者 各组均无近期感染史 本研究通过医院伦理委员会批准, 受试者知情同意 各组年龄及性别差异均无统计学意义 (P>0.05) 见表 1 表 1 各组临床资料比较 n=25 临床资料 重度哮喘组 轻中度哮喘组 对照组 F/χ 2 值 P 值 年龄 ( 岁 ) 43.8± ± ± 性别 ( 女 / 男 ) 11/14 12/13 10/ BMI(kg/m 2 ) 21.1± ± ± 吸烟史 14/25 12/25 10/ 嗜酸性粒细胞 ( 10 9 /L) 1.24±0.15 a,b 0.52±0.14 a 0.24± <0.01 总 IgE(IU/mL) 298.5±7.4 a,b 173.6±5.9 a 84.6± < 仪器及试剂叶绿素蛋白偶联物 (PerCP cy5.5) 鼠抗人 CD8 单克隆抗体 (mab) 异硫氰酸荧光素 (FITC) 鼠抗人 CD3mAb 藻红蛋白 (PE) 鼠抗人 Foxp3mAb 别藻青蛋白 (APC) 鼠抗人 CD25mAb 及同型对照 红细胞裂解液均为美国 BD 公司产品 ;Ficol Hypaque 分离液购自上海恒信公司 ;cdna 反转录试剂盒为美国 Invitrogen 公司产品 用力肺活量 (FVC) 第 1 秒用力呼气容积 (FEV1) 呼气峰流速 (PEF) 采用德国康讯肺功能仪检测 ; 流式细胞仪 ( 美国 BD 公司 ) 血清总 IgE 采用罗氏化学发光仪及配套试剂检测, 嗜酸性粒细胞计数采用 Sysmex 血细胞计数仪及配套试剂检测 液态芯片分析系统 (Luminex 公司 ) 1.3 方法 流式细胞术检测哮喘患者外周血 CD8 + Treg 细胞比例取肝素抗凝静脉血 100μL, 加入 FITC CD3mAb PerCP cy5.5 CD8mAb APC CD25mAb 及同型对照各 10μL, 避光孵育 30min 红细胞裂解液裂解红细胞, 加 1mLPBS 洗涤,1500r/min 离心 5min, 弃上清液 每管加 500μL1 固定 / 破膜缓冲液涡旋约 3s, 避光孵育 40min,500μL1 破膜 / 清洗缓冲液洗涤,1500r/min 离心 5min, 弃上清液 1 破膜 / 清洗缓冲液 100μL 重悬细胞, 加 10μLPE Foxp3mAb, 避光孵育 40min 洗涤离心, 1500r/min 离心 5min, 弃上清液 加入 400μL PBS 重悬细胞, 流式细胞仪检测 CD8 + Treg 细胞比例 单个核细胞 RNA 提取及 RT PCR 检测 Foxp3mRNA 的表达采用 Ficol Hypaque 密度梯度离心法制备外周血单个核细胞 (PBMCs), 使用

3 第 6 期 于建秀, 等. 哮喘患者外周血 CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg 细胞检测及其临床意义 485 Trizol 试剂提取总 RNA,cDNA 反转录试剂盒合成 cdna,quantitectsybr GreenPCR 试剂盒进行扩增 引物序列设计如下,Foxp3 正义链 :5 CAGCA CATTCCCACACTTCC 3, 反义链 :5 GCGTGTGAAC CAGTGGTAGAT 3 ;β 肌动蛋白正义链 :5 TG GCACCCAGCACAATGAA 3, 反义链 :5 CTAAGT CATAGTCCGCCTAGAAGCA 3 热循环条件:95 1min,95 40 个循环 15s,60 1min 根据 2 -ΔΔCt 值计算样本中 Foxp3mRNA 相对表达水平 Luminex200 液相芯片检测血清各细胞因子浓度 2mL 外周血经 1500r/min 离心 5min, 收集血浆, 立即于 -80 储存 按试剂说明书检测 IL 1β IL 33 和 TGF β 1 浓度, 每个标本检测 2 次, 取均值 肺功能检测患者取坐位, 最大程度深吸气 ; 闭紧口嘴, 保证测试过程中不漏气 ; 用最大力气尽可能地呼出气体, 呼气需持续至没有气体可以被呼出 采用德国康讯肺功能测试系统检测 FVC FEV1 PEF 和 FEV1/FVC, 测量 3 次, 并选择最大值作为正式结果记录 1.4 统计学分析采用 Stata7.0 软件进行数据统计分析, 本研究全部为计量资料 偏态资料用 M(Q 25 ~Q 75 ) 表示,3 组数据比较选用 Kruskal Walis 检验 ; 正态分布的数据用均数 ± 标准差 ( x±s) 珋表示, 组间差异比较采用单因素方差分析 ;Spearman 相关分析法运算线性相关系数 P< 0.05 为差异具有统计学意义 2 结果 2.1 外周血 CD8 + Treg 细胞与 PBMCsFoxp3mRNA 表达与对照组相比, 重度哮喘组和轻中度哮喘组 CD8 + Treg 比例明显降低, 且重度哮喘组降低更显著 (P<0.05) 与对照组对比, 重度哮喘组及轻中度哮喘组 PBMCsFoxp3mRNA 表达水平均降低, 且重度哮喘组降低更明显 (P<0.05) 见表 2 表 2 外周血 CD8 + Treg 比例及 PBMCs Foxp3mRNA 水平比较 组别 CD8 + Treg(%) Foxp3mRNA 对照组 6.48(5.21~6.92) 2.02(1.36~4.64) 轻中度哮喘组 4.13(2.05~5.41) a 1.28(1.05~2.57) a 重度哮喘组 2.32(1.24~3.63) a,b 0.61(0.38~1.34) a,b H 值 P 值 <0.001 < CD8 + Treg 细胞与 PBMCsFoxp3mRNA 表达相关性 由图 1 可见, 哮喘患者 CD8 + Treg 比例与 Foxp3 mrna 表达水平呈正相关 (r=0.553,p<0.01) 图 1 哮喘患者 CD8 + Treg 比例与 PBMCsFoxp3mRNA 相关性 2.3 外周血细胞因子浓度比较与对照组相比, 重度哮喘组及轻中度哮喘组血清 IL 33 浓度均升高, 且重度哮喘组升高更明显 (P<0.05); 与对照组和轻中度哮喘组相比, 重度哮喘组 TGF β 1 和 IL 1β 明显升高, 差异有统计学意义 (P<0.05), 但健康对照组和轻中度哮喘组差异无统计学意义 (P>0.05) 见表 肺功能比较与对照组相比, 轻中度哮喘组及重度哮喘组 FEV1 FVC 及 FEV1/FVC 明显降低, 重度哮喘组降低更为明显 ( 均 P<0.05); 与对照组及轻中度哮喘组相比, 重度哮喘组患者组 PEF 明显降低, 差异有显著性意义 (P<0.05), 但轻中度哮喘组和健康对照组差异无统计学意义 (P>0.05) 见表 4 表 3 各组血清细胞因子浓度比较 组别 IL 33(pg/mL) IL 1β(pg/mL) TGF β 1 (μg/ml) 对照组 55.2(45.3~80.2) 16.6(13.7~20.9) 27.5(24.9~33.1) 轻中度哮喘组 63.3(51.2~79.6) a 16.2(13.4~20.8) 28.1(25.7~34.8) 重度哮喘组 75.1(52.9~86.4) a,b 20.5(16.1~25.4) a,b 39.6(26.3~43.5) a,b H 值 P 值 <0.01 <0.01 <0.01

4 486 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 27 卷 表 4 各组肺功能检测比较 组别 FEV1(L) FVC(L) FEV1/FVC(%) PEF(L/s) 对照组 4.12± ± ± ±7.01 轻中度哮喘组 3.67±0.32 a 3.86±0.24 a 68.03±5.62 a 79.34±4.57 重度哮喘组 2.25±0.44 a,b 2.73±0.51 a,b 51.32±4.20 a,b 56.46±6.35 a,b F 值 P 值 <0.01 <0.01 <0.01 < CD8 + Treg 细胞比例与肺功能参数相关性 Spearman 相关分析显示, 哮喘患者 CD8 + Treg 细胞比例与 FEV1(r=0.411,P=0.003) PEF(r= 0.441,P=0.001) 呈正相关 见图 2 CD25) 是天然 Tregs 的表型标志 叉头状蛋白转录因子 Foxp3 是 Treg 细胞关键转录因子 研究表明 CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg(CD4 + Treg) 细胞在哮喘患者外周血中比例降低, 免疫抑制能力减弱, 参与哮喘疾病的发生发展 [4] 图 3 CD8 + Treg 细胞诊断哮喘 ROC 曲线 图 2 哮喘患者 CD8 + Treg 细胞与 FEV1 和 PEF 相关性 2.6 CD8 + Treg 细胞比例与血清相关细胞因子的相关性哮喘患者 CD8 + Treg 细胞比例与血清 IL 33(r= ,P=0.001) IL 1β(r= ,P= 0.019) 及 TGF β 1 (r=-0.516,p=0.032) 浓度呈负相关 2.7 CD8 + Treg 细胞 ROC 曲线分析哮喘患者 CD8 + Treg 细胞诊断哮喘 ROC 曲线下面积为 0.923, 当截断值 =3.225 时, 敏感性为 0.875, 特异性为 见图 3 3 讨论哮喘是一种慢性炎症性疾病, 以气道高反应性 持续炎症及大量炎症细胞进入气道为主要特征 [7] Treg 细胞在维持免疫耐受及控制慢性炎症反应过程中发挥重要作用 IL 2 受体 α 亚基 (IL 2Rα, 最新研究表明,CD8 + Treg 与 CD4 + Treg 有相似的表型 功能和作用机制, 能够通过细胞表面高表达的膜结合型 TGF β 和细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4(CTLA 4) 介导的接触依赖性方式, 或者通过分泌 IL 10 TGF β 等细胞因子, 发挥非特异性免疫抑制功能 [8] 本研究发现, 与对照组相比, 哮喘患者外周血 CD8 + Treg 细胞显著减少 ; 与轻中度哮喘组相比, 重度哮喘组 CD8 + Treg 细胞降低更为显著 肺功能参数 FEV1 呼出量下降,FEV1/FVC 比值下降和 PEF 下降可反映患者气道阻塞情况, 在哮喘诊断及病情监测中发挥重要作用 本次研究发现哮喘患者 CD8 + Treg 细胞比例与 FEV1 PEF 呈正相关 上述结果表明 CD8 + Treg 细胞比例下降与疾病的严重程度有关 Foxp3 表达在 Tregs 细胞发育和抑制功能的发挥中起着关键作用 输注 CD4 + Foxp3 + T 细胞对自身免疫等疾病的治疗有显著疗效 [9] 本研究通过 RT PCR 检测哮喘患者 PBMCsFoxp3mRNA 转录水平发现, 与健康对照者相比, 重度哮喘组及轻中度哮喘组患者 PBMCsFoxp3mRNA 转录水平明显减少, 且重度哮喘组降低更显著, 与流式细胞术检测结果相一致

5 第 6 期 于建秀, 等. 哮喘患者外周血 CD8 + CD25 + Foxp3 + Treg 细胞检测及其临床意义 487 哮喘患者下呼吸道存在持续性气流受限 [10] 呼吸量测量和峰值流量监测广泛用于评估或监测肺部健康, 但对整个下呼吸道或个体变异的患者评估准确性较差 [11] 此局限性导致 30% ~54% 的哮喘病例误诊 [12-13], 一些轻微哮喘患者可能有 正常 肺功能指标 因此, 需寻找更好的方案来评估气流阻塞程度 气道受限的非侵入性标志, 如血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白水平及呼出气体一氧化氮用于评估气流阻塞, 也有一定的局限性 [14-15] 本次研究用 ROC 曲线评估 CD8 + Treg 诊断哮喘有较高的敏感性和特异性 因此,CD8 + Treg 可弥补肺功能参数的不足, 可作为哮喘诊断的一种新生物学标志物 由于 Treg 细胞在体外发挥重要的抑制炎症反应和免疫调节功能, 本次研究还检测了与哮喘疾病相关的血清促炎性细胞因子 IL 33 是 IL 1 家族的新成员, 是一种多功能蛋白, 表达于上皮细胞 内皮细胞和成纤维细胞等细胞核内 [16] [17] Hardman 等 在哮喘小鼠模型中发现 IL 33 可聚集 活化嗜酸粒细胞 嗜碱粒细胞 肥大细胞以及树突状细胞等, 促进这些细胞释放促炎细胞因子以及趋化因子 本研究发现, 与对照组相比, 哮喘患者外周血中 IL 33 水平显著升高, 且浓度与 CD8 + Treg 比例呈负相关 [18] Yasukawa 等研究发现 TGF β 1 参与哮喘患者气道重建, 通过抑制气道上皮细胞间充质转化发挥作用 TGF β 1 在调节气道免疫反应中, 可刺激炎性细胞聚集到气道中, 从而促进其他生长因子和炎性细胞因子的分泌 [19] 本研究发现, 与健康对照组及轻中度哮喘组相比, 重度哮喘组患者血清 TGF β 1 浓度显著升高 此外, 重度哮喘患者血清 IL 1β 浓度升高, 且与 CD8 + Treg 比例呈负相关 上述结果表明 CD8 + Treg 抑制功能下降与机体炎症反应上升有关 综上所述, 哮喘患者 CD8 + Treg 细胞比例减少及相应 Foxp3mRNA 转录水平降低, 且 CD8 + Treg 细胞比例与肺功能指标呈正相关,ROC 曲线显示 CD8 + Treg 细胞诊断哮喘有较高特异性和敏感性 CD8 + Treg 比例降低与机体促炎性细胞因子浓度上升呈负相关 因此, 调控 CD8 + Treg 细胞比例可能是治疗哮喘的新途径 但本研究有一定的局限性, CD8 + Treg 在病情评估 诊断及预后中的作用需进一步研究 [ 参考文献 ] [1] MofatMF,GutIG,DemenaisF,etal.Alarge scale, consortium basedgenomewideasociationstudyofasth ma[j].nengljmed,2010,363(13): [2] RahimzadehM,NorouzianM,ArabpourF,etal.Reg ulatoryt celsandpreeclampsia:anoverviewoflitera ture[j].expertrevclinimmunol,2016,12(2): [3] OhkuraN,KitagawaY,SakaguchiS.Developmentand maintenanceofregulatorytcels[j].immunity,2013, 38(3): [4] ChauhanA,SinghM,AgarwalA,etal.Corelationof TSLP,IL 33,andCD4 + CD25 + FOXP3 + Tregulatory (Treg)inpediatricasthma[J].JAsthma,2015,52 (9): [5] 施宇衡, 时国朝, 万欢英, 等. 支气管哮喘患者外周血 Th17 CD4 + CD25 + Treg 细胞表达特征 [J]. 中国免疫学杂志,2010,26(8): [6] 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组, 中华医学会全科医学分会. 中国支气管哮喘防治指南 ( 基层版 ) [J]. 中华结核和呼吸杂志,2013,36(5): [7] KudoM,IshigatsuboY,AokiI.Pathologyofasthma [J].FrontMicrobiol,2013,4:263. [8] HoriS.TheFoxp3interactome:anetworkperspective oft(reg)cels[j].natimmunol,2012,13(10): [9] SteinbornA,HaenschGM,MahnkeK,etal.Distinct subsetsofregulatorytcelsduringpregnancy:isthe imbalanceofthesesubsetsinvolvedinthepathogenesis ofpreeclampsia?[j].clinimmunol,2008,129(3): [10] Ramos Barb nd,para ArondoA.Inflammationand remodelingofthedistalairways:studiesinhumansand experimentalmodels[j].archbronconeumol,2011, 47(Suppl2):2-9. [11] ControliM,BousquetJ,FabbriLM,etal.Thesmal airwaysand distallung compartmentin asthma and COPD:atimeforreappraisal[J].Alergy,2010,65 (2): [12] FunstonW,HiggingsB.Improvingthemanagementof asthmain adultsin primarycare[j]. Practitioner, 2014,258(1776):15-19,2. [13] JoséBP,CamargosPA,CruzFilho?A,etal.Diagnos ticaccuracyofrespiratorydiseasesinprimaryhealthu nits[j].revasocmedbras(1992),2014,60(6): [14] YuHY,LiXY,CaiZF,etal.Eosinophilcationicpro teinmrnaexpresioninchildrenwithbronchialasthma [J].GenetMolRes,2015,14(4): ( 下转第 517 页 )

6 第 6 期 吴其顺, 等. 高通量血液透析联合序贯血液透析滤过的疗效观察 517 [13] VilarE,FryAC,WelstedD,etal.Long term out comesinonlinehemodiafiltrationandhigh fluxhemodi alysis:acomparativeanalysis[j].clinjamsocneph rol,2009,4(12): [14] PenneEL,vanderWeerdNC,vandenDorpelMA,et al. Short term efectsofonline hemodiafiltration on phosphatecontrol:aresultfrom therandomizedcon troledconvectivetransportstudy(contrast)[j]. AmJKidneyDis,2010,55(1): [15] Stef nsonbv,abramsonm,nilsonu,etal.hemo diafiltrationimprovesplasma25 hepcidinlevels:apro spective,randomized,blinded,cros overstudycompa ringhemodialysisandhemodiafiltration[j].nephron Extra,2012,2(1): [16] VaslakiL,MajorL,BertaK,etal.On linehaemodia filtrationversushaemodialysis:stablehematocritwith leserythropoietinandimprovementofotherrelevant bloodparameters[j].bloodpurif,2006,24(2): [17] OrasanRA,PatiuIM,AnghelD,etal.Variationof clinicalandlaboratoryfeaturesinchronicdialysispa tientstreatedwithhigh fluxhemodialysisafterswitching toonlinehemodiafiltration[j].inturolnephrol,2013, 45(5): [18] Pérez GarcíaR,AlbalateM,deSequeraP,etal.On linehaemodiafiltrationimprovesresponsetocalcifediol treatment[j].nefrologia,2012,32(4): [19] MoviliE,CameriniC,GaggiaP,etal.Efectofpost dilutionalon linehaemodiafiltrationonserum calcium, phosphateand parathyroid hormoneconcentrationsin uraemicpatients[j].nephroldialtransplant,2011, 26(12): [20] 王质刚. 血液净化学 [M].3 版. 北京 : 北京科学技术出版社,2010: [21] JadoulM.Dialysis relatedamyloidosis:importanceof biocompatibilityandage[j].nephroldialtransplant, 1998,13(Suppl7): [22] CheungAK,RoccoMV,YanG,etal.Serum β2mi croglobulinlevelspredictmortalityindialysispatients: resultsofthehemo study[j].jam SocNephrol, 2006,17(2): [23] OkunoS,IshimuraE,KohnoK,etal.Serum β2 mi croglobulinlevelsisasignificantpredictorofmortalityin maintenancehaemodialysispatients[j].nephroldial Transplant,2009,24(2): [24] LeypoldtJK.Solutefluxesindiferenttreatmentmodali ties[j].nephroldialtransplant,2000,15(suppl1): 3-9. [25] 林庆娟, 马秀琴, 张秀香, 等. 血液透析与血液透析结合不同频率血液滤过的疗效比较 [J]. 中国医药, 2013,8(3): [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 刘星星 ( 上接第 487 页 ) [15] RicciardoloFL,SorbeloV,BelezaFontanaR,etal. Exhalednitricoxideinrelationtoasthmacontrol:Areal lifesurvey[j].alergolimmunopathol(madr),2016, 44(3): [16] StampalijaT,ChaiworapongsaT,RomeroR,etal.Ma ternalplasmaconcentrationsofsst2andangiogenic/an ti angiogenicfactorsinpreeclampsia[j].jmaternfetal NeonatalMed,2013,26(14): [17] HardmanCS,PanovaV,McKenzieAN.IL 33citrine reportermicerevealthetemporalandspatialexpresion ofil 33duringalergiclunginflammation[J].EurJIm munol,2013,43(2): [18] YasukawaA,HosokiK,TodaM,etal.Eosinophils promoteepithelialtomesenchymaltransitionofbronchial epithelialcels[j].plosone,2013,8(5):e [19] NakaoA,MikeS,HatanoM,etal.Blockadeoftrans forminggrowthfactorβ/smadsignalingint celsby overexpresionofsmad7enhancesantigen inducedair wayinflammationandairwayreactivity[j].jexpmed, 2000,192(2): [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 刘星星

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