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粹余
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1 第三讲生物信息的传递 ( 上 ) 从 DNA 到 RNA

2 Crick 的中心法则 (central dogma) DNA 1957 年 transcription RNA translation Reverse transcription DNA RNA 1970 年 Protein Protein

3 From DNA to Protein DNA 序列是遗传信息的贮存者, 它通过自主复制得到永存, 并通过转录生成信使 RNA, 翻译生成蛋白质的过程来控制生命现象

4 基因表达包括转录 (transcription) 和翻译 (translation) 两个阶段转录是指拷贝出一条与 DNA 链序列完全相同 ( 除了 T U 之外 ) 的 RNA 单链的过程, 是基因表达的核心步骤翻译是指以新生的 mrna 为模板, 把核苷酸三联遗传密码子翻译成氨基酸序列合成多肽链的过程, 是基因表达的最终目的

5 Replication: synthesis of two DNA strands using both parental DNA strands as templates. Duplication of a DNA molecule 1 DNA molecule 2 DNA molecules Transcription: synthesis of one RNA molecule using one of the two DNA strands as a template.

6 Transcription vs. Replication Transcription is chemically and enzymatically very similar to DNA replication. 6

7 Some important differences: 1. RNA is made of ribonucleotides. 2. RNA polymerase catalyzes the reaction, which does not require a primer (de novo synthesis). 3. The RNA product does not remain basepaired to the template DNA strand. 4. Less accurate (error rate: 10-4 ). 7

8 RNA 的化学结构与 DNA 有略微差异

9 RNA 主要以单链形式存在于生物体内

10 RNA 分子能够形成分子内的碱基配对, 进而折叠成特殊的结构

11 Secondary structure of RNA hairpin bulge loop RNA chains fold back on themselves to form local regions of double helix.

12 A-,B-,Z- 型 DNA 三种结构比较 A B Z 外型粗短适中细长螺旋方向右手右手左手螺旋直径碱基直升 2.55nm 2.37nm 1.84nm 0.23nm 0.34nm 0.38nm 每圈碱基数碱基倾角大沟很窄很深很宽较深平坦小沟很宽浅窄深较窄很深

The double helical structure of RNA resembles the A-form structure of DNA The minor groove is wide and shallow, but offers little sequence-specific information.

13 The double helical structure of RNA resembles the A-form structure of DNA The minor groove is wide and shallow, but offers little sequence-specific information. The major groove is so narrow and deep that it is not very accessible to amino acid side chains from interacting proteins. Thus RNA structure is less well suited for sequencespecific interactions with proteins.

14 Pseudoknot Pseudoknots are complex structure resulted from base pairing of discontinuous RNA segments

15 G:U base pair Non-Watson-Crick G:U base pairs represent additional regular base pairing in RNA, which enriched the capacity for self-complementarity

16 Schematic illustration of transcription Transcription bubble The length of the bubble is ~12-14 bp, and the length of RNA-DNA hybrid within it is ~8-9 bp.

17 电镜下观察到的 rrna 转录许多 RNA 聚合酶分子同时转录两个相邻的基因.

18 细胞内产生的 RNA 种类细胞内总 RNA 编码 RNA 占总量的 2% 非编码 RNA 占总量的 98% 前 mrna(hnrna) 非编码 RNA 前 rrna 前 trna snrna snorna scrna tmrna 等 mrna rrna trna 所有生物仅真核生物仅细菌

19 Functions of RNAs Functions in protein synthesis a. mrna: as the intermediate between the gene and the proteinsynthesizing machinery. b. trna: as an adaptor between the codons in the mrna and amino acids. c. rrna: play a structural role, as in the case of the RNA components of the ribosome. As genetic material Serving as a template for its own replication in certain viruses RNA as catalysts (ribozyme) Some RNAs (including one of the structural RNAs of the ribosome) are enzymes that catalyze essential reactions in the cell. RNA is a regulatory molecule Small non-coding RNA which through sequence complementarily binds to, and interferes with the translation of certain mrnas.

20 DNA-mRNA-the encoded peptide (sense strand) (antisense strand) 编码链 (coding strand): 与 mrna 序列相同的那条 DNA 链, 或称有意义链 (sense strand). 模板链 (template strand): 根据碱基互补原则指导 mrna 合成的 DNA 链, 或称反义链 (antisense strand)

21 5 coding strand* positive strand Crick strand sense strand 3 GTAC 3 5 new RNA strand CATG GUAC 3 Watson strand negative strand template strand* 5 antisense strand

22 A transcription unit is a sequence of DNA transcribed into a single RNA, starting at the promoter and ending at the terminator.

23 Key terms related to transcription RNA polymerases are enzymes that synthesize RNA using a DNA template (formally described as DNA-dependent RNA polymerases). Promoter is a region of DNA where RNA polymerase binds to initiate transcription. Startpoint (Startsite) refers to the position on DNA corresponding to the first base incorporated into RNA. Terminator is a sequence of DNA that causes RNA polymerase to terminate transcription. Transcription unit is the distance between sites of initiation and termination by RNA polymerase.

24 Upstream identifies sequences proceeding in the opposite direction from expression; for example, the bacterial promoter is upstream of the transcription unit, the initiation codon is upstream of the coding region. Downstream identifies sequences proceeding farther in the direction of expression; for example, the coding region is downstream of the initiation codon. Primary transcript is the original unmodified RNA product corresponding to a transcription unit.

25 How does RNA polymerase find promoters on DNA? ( how do proteins distinguish their specific binding sites in DNA from other sequences?) How do regulatory proteins interact with RNA polymerase to activate or to repress specific steps in the initiation, elongation, or termination of transcription?

26 RNA 的转录 (Transcription)

27 RNA 合成的特点 1. RNA 是以 5 3 方向合成的, 它的序列是与 DNA 编码链 ( 意义链 ) 相同 2. RNA 的合成是以反义链 ( 模板链 ) 为模板 3. 同在 DNA 中一样, 形成磷酸二脂键 ( Phosphodiester bonds) 4. 必需的成分 : RNA polymerase, rntps, transcription factors, promoter & terminator/template

28 转录的基本过程 1 模板识别 (Template Recognition) 2 转录起始 (Initiation) 3 转录的延伸 (Elongation) 4 转录的终止 (Termination)

29 基因序列上的信号指示细菌 RNA 聚合酶起始和终止转录

30 模板识别 1 RNA 聚合酶与启动子 DNA 双链相互作用并与之相结合的过程 2 转录起始前, 启动子附近的 DNA 双链分开形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板 DNA 的碱基配对

31 转录起始转录起始就是 RNA 链上第一个核苷酸键的产生 1. 在起始位点合成 RNA 链 : 第一个核苷酸键的产生, 该位点被称为 position 转录起始后直到形成 9 个核苷酸短链是通过启动子阶段 3. 通过启动子的时间代表一个启动子的强弱 : 时间越短, 转录起始的频率也越高

32 一般情况下, 转录起始复合物可以进入两条不同的反应途径 : 合成并释放 2-9 个核苷酸的短 RNA 转录物, 即所谓的流产式起始 ; 一旦 RNA 聚合酶成功地合成 9 个以上核苷酸, 尽快释放 σ 亚基,RNA 聚合酶离开启动子区, 转录就进入正常的延伸阶段转录起始复合物通过上游启动子区并生成由核心酶 DNA 和新生 RNA 所组成的转录延伸复合物

33 Transcription initiation involves three defined steps 封闭复合物 (closed complex) 开放复合物 (open complex) 三元复合物 (ternary complex)

34 封闭复合物 (closed complex) The initial binding of polymerase to a promoter. DNA remains double stranded. The enzyme is bound to one face of the helix.

35 开放复合物 (open complex) The DNA strand separate over a distance of ~14 bp (-11 to +3 ) around the start site (+1 site) Transcription bubble forms 35

36 三元复合物 (ternary complex ) The enzyme escapes from the promoter The transition to the elongation phase Stable ternary complex =DNA +RNA + enzyme

37 RNA 合成的起始 RNA 聚合酶全酶 + 启动子 DNA 处于双链状态聚合酶全酶所结合的 DNA 序列中有一小段双链被解开 RNA 聚合酶 DNA 和新生 RNA

38 转录的延伸 RNA 聚合酶离开启动子, 沿 DNA 链移动并使新生 RNA 链不断伸长的过程就是转录的延伸共价地向生长 RNA 链的 3 端添加核糖核苷酸 RNA 聚合酶是以 5 3 方向来延长 RNA 链 RNA 聚合酶本身沿着反义链以 3 5 方向移动

大肠杆菌 RNA 聚合酶的活性一般为每秒 50-90 个核苷酸随着 RNA 聚合酶的移动,DNA

39 大肠杆菌 RNA 聚合酶的活性一般为每秒个核苷酸随着 RNA 聚合酶的移动,DNA 双螺旋持续解开, 暴露出新的单链 DNA 模板, 新生 RNA 链的 3 末端不断延伸, 在解链区形成 RNA-DNA 杂合物

40 转录的终止合成的终止 : 当 RNA 链延伸到转录终止位点时,RNA polymerase 和 RNA 链均从 DNA 模板上释放出来 Terminator: 通常含有自我互补区域 (selfcomplementary regions), 在 RNA 产物中可以形成 stem-loop 或 hairpin 结构

41 Two types of terminators in E. coli 不依赖于 ρ 因子的终止 intrinsic terminator ( 内在 ) 依赖于 ρ 因子的终止

42 Rho 非依赖型终止子的序列由两个序列原件组成 : 一段短的反向重复序列 ( 大约 20 个核苷酸 ); 其后是一段大约 8 个 A:T 碱基对的序列由它转录出 mrna 可形成茎环结构, 可阻止 RNA pol 的前进

43 不依赖于 ρ 因子的终止子 ( 内在终止子 ) Weakest base pairing: A:U make the dissociation easier

44 依赖于 ρ 因子的终止提纯的 RNA 聚合酶并不能识别特异性的转录终止信号, 而加入大肠杆菌 ρ 因子后该聚合酶就能在 DNA 模板上准确地终止转录只含有自我互补区域, 可形成茎环结构, 但在茎中的 G.C 含量少, 茎环易打开其终止需要 ρ 因子的参与 ρ 因子与 ssrna 的特定位点结合 (C 丰富,G 缺乏 ) ρ 通过催化 NTP 的水解促使新生 RNA 链从三元转录复合物中解离

45 ρ 因子 ρ 因子是一个相对分子质量为的六聚体蛋白其功能是作为 RNA pol 的一种辅助因子, 当其浓度为 RNA pol 浓度的 10% 时在体外可发挥最高的活性

46 ρ 因子参与的 RNA 合成终止模式穷追 (hot pursuit) 模型 ρ 结合到 RNA 链终止子上游的某一点 ρ 因子结合以后延着 RNA 向 3 端移动, 跟踪聚合酶 ρ 追上在终止位点暂停的 RNA 聚合酶终止 --- 三元复合物解体

47 常识数据转录生成 mrna 的速度大约是每分钟 2500 个核苷酸 (14 个密码子 / 秒 ), 与翻译速度 (15aa/ 秒 ) 基本相等, 但比 DNA 复制的速度要慢得多 (800bp / 秒 ) 基因开始表达 mrna 的间隔约为 2.5 分钟, 而再过半分钟就能在细胞内测到相应的蛋白质

48 RNA 聚合酶 (RNA polymerase) RNA 聚合酶是转录过程中最关键的酶 1. 主要以双链 DNA 为模板, 以 4 种核苷三磷酸作为活性前体 2. 需要 Mg 2+ /Mn 2+ 为辅助因子 3. 它不需要任何引物 4. 以 5 3 方向合成 RNA 链 5. 缺乏 3 5 外切酶活性 6. 是一个含有多个亚单位 (multi-subunit) 的酶

49 RNA 聚合酶需执行的功能 (1) 识别 DNA 双链上的起始子 ; (2) 使 DNA 变性在启动子处解旋成单链 ; (3) 通过阅读启动子序列,RNA pol 确定它自己的转录方向和模板链 (4) 最后当它达到终止子时, 通过识别停止转录

50 原核和真核生物的 RNA 聚合酶虽然都能催化 RNA 的合成, 但在其分子组成种类和生化特性上各有特色

51 原核生物 (E.coli) 的 RNA 聚合酶 2 alpha (α) subunit, 1 beta (β) subunit, 1 beta prime (β ) subunit, 1 omega (ω) subunit, 1 sigma (σ) subunit Core enzyme Holoenzyme 聚合酶全酶 155 KD 36.5 KD 11 KD 36.5 KD 70 KD 相对分子量 : 只与转录的起始有关 151 KD 参与转录延伸

52 原核生物 (E.coli) 的 RNA 聚合酶 E. coli 只有一个 DNA-directed RNA 聚合酶, 来合成所有类型的 RNA 是细胞中最大的酶之一由 5 种 subunits 组成聚合酶全酶 (holoenzyme), 包括 2 α, 1 β, 1β, 1 ω 以及 1 σ subunits 形状象一个圆筒状通道, 可以直接与 16 bp DNA 结合整个聚合酶可结合 60 bp DNA RNA 合成速率 : 40 nt / 秒, 37 o C

53 E. coli RNA polymerase :αsubunit 是核心酶中的两个相同的亚单位由 rpoa 基因编码与核心酶的组装有关参与 RNA 聚合酶和部分调节因子的相互作用

54 E. coli RNA polymerase :β &β subunit β 和 β 分别由 rpob 和 rpoc 基因编码由 β 和 β 亚基组成了聚合酶的催化中心它们在序列上与真核生物 RNA 聚合酶的两个大亚基有同源性 β 亚基能与模板 DNA 新生 RNA 链及核苷酸底物相结合 rpob 和 rpoc 基因的突变会影响转录所有的阶段

55 The β and β subunit of RNA polymerase have a channel for the DNA template.

56 E. coli RNA polymerase : σfactor 负责模板链的选择和转录的起始 : 与 σ 因子的结合使 RNA 聚合酶从核心酶转变为聚合酶全酶是启动子识别的关键的酶, 不仅增加聚合酶对启动子的亲和力 ( 提高 10 3 倍 ), 还可降低它对非专一位点的亲和力 ( 降低 10 4 倍 ), 使酶底复合物的半衰期小于 1s 在细胞中对 σ 因子量的需求少于聚合酶中其它亚单位

57 The conformational change in σ at open complex formation

58 真核生物的 RNA 聚合酶有 3 类 RNA 聚合酶 ; 结构比大肠杆菌 RNA 聚合酶复杂 ; 在细胞核中的位置不同 ; 负责转录的基因不同, 对 α- 鹅膏蕈碱的敏感性也不同真核生物 RNA 聚合酶一般有 8-14 个亚基所组成, 相对分子质量超过

59 真核细胞中三类 RNA 聚合酶特性比较酶细胞内定位转录产物相对活性对 α- 鹅膏蕈碱的敏感程度 RNA 聚合酶 I 核仁 rrna (28S,18S, 5.8S) 50%- 70% 不敏感 RNA 聚合酶 II 核质 hnrna*, snrna, mrna 20%- 40% 敏感 RNA 聚合酶 III 核质 trna 5SRNA 某些涉及 RNA 加工的 snrna 约 10% *hnrna: heterogeneous muclearrna, 核内不均一 RNA, RNA 的前体存在物种特异性

60 转录的抑制剂抑制剂利福霉素链霉溶菌素放射线素 D α- 鹅膏蕈靶酶细菌全酶细菌核心酶真核 PolⅠ 真核 PolⅡ 抑制作用和 β 亚基结合, 抑制起始和 β 亚基结合, 抑制起始和 DNA 结合, 阻止延伸和 RNA PolⅡ 结合 RNA 合成抑制剂主要分两类 : 1. 模板结合抑制剂 2. 聚合酶抑制剂

61 在动植物及昆虫的细胞中,RNA pol Ⅱ 的活性可被低浓度的 α- 鹅膏蕈碱所抑制但却不抑制 pol Ⅰ Pol Ⅲ 对 α- 鹅膏蕈的反应, 不同的生物有所差异在动物细胞中高浓度的 α- 鹅膏蕈可抑制转录, 在昆虫中不受抑制

62 真核生物 RNA 聚合酶的主要特征聚合酶中有两个相对分子质量超过的大亚基 ; 同种生物 3 类聚合酶有共享小亚基的倾向, 即有几个小亚基是其中 3 类或 2 类聚合酶所共有的

63 真核生物 RNA 聚合酶的亚基 RNA 聚合酶 I RPA 1 RPA 2 RPC 5 RPC 9 RPB 6 其它 9 个亚基 RNA 聚合酶 II RPB 1 ( ) RPB 2 ( ) RPB 3(α I ) RPB 11 (α II ) RP 6 (ω) 其它 7 个亚基 RNA 聚合酶 III RPC 1 RPC 2 RPC 5 RPC 9 RPB 6 其它 11 个亚基注 : 亚基按照分子量由大到小的顺序排列真核生物 RNA 聚合酶一般有 8-16 个亚基所组成, 相对分子质量超过

64 真核生物线粒体和叶绿体中存在不同的 RNA 聚合酶线粒体中 RNA 聚合酶 : 只有一条多肽链, 相对分子量小于 7 X 10 4, 是已知最小的 RNA 聚合酶之一 ; 与 T7 噬菌体 RNA 聚合酶有同源性叶绿体中 RNA 聚合酶 : 比较大 ; 结构上与细菌中的聚合酶相似, 由多个亚基组成, 部分亚基由叶绿体基因编码线粒体和叶绿体 RNA 聚合酶活性不受 α- 鹅膏蕈碱所抑制

65 prokaryotic Crab claw shape of RNAP eukaryotic The same color indicate the homologous of the two enzymes RPB2 RPB3 Active center cleft RPB11 RPB6 RPB1

66 酵母 RNA 聚合酶 II 晶体结构 By Roger Kornberg

67 模板 DNA 进入转录复合体的路径 There are various channels allowing DNA, RNA and ribonucleotides (rntps) into and out of the enzyme s active center cleft

68 RNA polymerase/transcription and DNA polymerase/replication Template Require primer Initiation elongation Exonuclease activity terminator RNA pol dsdna No promoter 40 nt/ sec No Synthesized RNA DNA pol dsdna Yes origin 900 bp/sec Yes Template DNA

69 前起始复合物 (preinitiation transcription complex, PIC) 真核生物 RNA 聚合酶不能直接识别基因的启动子区, 需要一些被称为转录调控因子的辅助蛋白质按特定顺序结合于启动子上,RNA 聚合酶才能与之相结合并形成复杂的前起始复合物 (PIC) 以保证有效地起始转录

70 真核生物 RNA 聚合酶 II 需形成转录起始复合物

71 Assembly of the pre-initiation complex in presence of mediator, nucleosome modifiers and remodelers, and transcriptional activators

72 Mediator consists of many subunits, some conserved from yeast to human. Only subunit Srb4 is essential for transcription of essentially all Pol II genes in vivo.

73 PNAS 2007 vol. 104 no

74 转录单元 (transcription unit) 转录起点是指与新生 RNA 链第一个核苷酸相对应 DNA 链上的碱基, 通常为嘌呤把起点 5 末端的序列称为上游 (upstream), 把其 3 末端的序列称为下游 (downstream)

75 转录起始位点 (Transcription start site) 在原核中 90% 为嘌呤,A 或 G; 位置固定 ; 通常在起始核苷酸的两侧为 C 和 T (i.e. CGT or CAT)

76 启动子区的基本结构启动子是一段位于结构基因 5 端上游区的保守的 DNA 序列, 能活化 RNA 聚合酶, 使之与模板 DNA 准确地相结合并具有转录起始的特异性

77 启动子与转录起始大肠杆菌 RNA 聚合酶与启动子的相互作用主要包括 : 启动子区的识别 ; 酶与启动子的结合 ; σ 因子的结合与解离

78 原核生物的启动子

79 -10 区 (Pribnow 区 ) 的发现 1975 年,Pribnow 和 Schaller 将 RNA 聚合酶全酶与模板 DNA 结合后, 用 DNaseI 降解 DNA, 得到 41~44 个核苷酸对的 DNA 片段序列分析发现, 在被保护区内有一个由 5 个核苷酸组成的保守序列, 是聚合酶结合位点, 称为 Pribnow 区, 其中央大约位于起点上游 10bp 处, 所以又称为 10 区

80 -10 序列 (Pribnow 框盒 ) 其保守序列为 TATAAT, 位于 -10bp 左右, 其中 3 端的 T 十分保守 A.T 较丰富, 易于解链它和转录起始位点 I 一般相距 5bp 功能 : (1) RNA pol 紧密结合 ; (2) 形成开放启动复合体 ; (3) 使 RNA pol 定向转录

81 如果把 Pribnow 区从 TATAAT 变成 AATAAT 就会使该启动子发生下降突变 (down mutation); 如果增加 Pribnow 区的共同序列, 将乳糖操纵子的启动子中的 TATGTT 变成 TATATT, 就会提高启动子的效率, 称为上升突变 (up mutation)

82 提纯被保护的片段后却发现,RNA 聚合酶并不能重新结合或并不能选择正确的起始点, 表明在保护区外可能还存在与 RNA 聚合酶对启动子的识别有关的序列?

83 -35 区的发现科学家又从噬菌体的左右启动子 P L 及 P R 和 SV40 启动子的 35 bp 附近找到了另一段共同序列 :TTGACA

84 -35 序列 (Sextama 盒 ) 其保守序列为 TTGACA, 与 -10 序列相隔 16-19bp 功能 : (1) 为 RNA pol 的识别位点 (2)RNA Pol 的核心酶只能起到和模板结合和催化的功能, 并不能识别 -35 序列, 只有 σ 亚基才能识别 -35 序列, 为转录选择模板链

85 100 个 E.coli 的不同启动子的序列测定结果 35 区 10 区 T 85 T 83 G 81 A 61 C 69 A 52 T 89 A 89 T 50 A 65 A 100 大部分启动子都存在这两段共同序列, 即位于 10 bp 处的 TATA 区和 35 bp 处的 TTGACA 区它们是 RNA 聚合酶与启动子的结合位点, 能与 σ 因子相互识别而具有很高的亲和力

86 -10 区和 -35 区的最佳距离在原核生物中, -10 区和 -35 区的最佳距离大约是 16~19 bp 过大或过小都会降低转录活性这可能是因为 RNA Pol 本身的大小和空间结构有关

87 promoter 40-80bp gene TTGACA AACTGT Recognition site TATAATPu ATATTAPy Binding site Pribnow box transcribed initiation site (1) 结构典型, 都含有识别 (R), 结合 (B) 和起始 (I) 三个位点 ; (2) 序列保守, 如 -35 序列,-10 序列结构都十分保守 ; (3) 位置和距离都比较恒定 ; (4) 直接和多聚酶相结合 ; (5) 常和操纵子相邻 ; (6) 都在其控制基因的 5 端 ; 的共同的特点 (7) 决定转录的启动和方向原核生物启动子

88 真核生物启动子的结构特点

89 真核生物 RNA 聚合酶 II 所识别的启动子区 Hogness 等发现类似 Pribnow 区的 Hogness 区, 在转录起始点上游 25~ 30 bp 处, 保守序列为 TATAAA, 也称 TATA 区在起始位点上游 70~ 78 bp 处还有另一段共同序列 CCAAT, 称为 CAAT 区 (CAAT box)

90 1. 核心元件真核基因的启动子 TATA box: 25~ 30 bp 区启始子 (initiator,inr) : 转录起始位点附近 2. 上游启动子元件 (UPE) CAAT box : 70~ 80 区 CCAAT 序列 GC box: 80~ 110 含有 GCCACACCC 或 GGGCGGG 序列

91 上游启动子元件 (upstream promoter element,upe): 将 TATA 区上游的保守序列称为上游启动子元件或称上游激活序列 (upstream activating sequence,uas)

92 真核生物启动子对转录的影响 TATA 区 -- 使转录精确地起始 : 如果除去 TATA 区或进行碱基突变, 转录产物下降的相对值不如 CAAT 区或 GC 区突变后明显, 但发现所获得的 RNA 产物起始点不固定 CAAT 区和 GC 区主要控制转录起始频率 : 基本不参与起始位点的确定

93 研究 SV40 晚期基因启动子发现, 上游激活区的存在与否, 对该启动子的生物活性有着根本性的影响若将该基因 5' 上游 21~ 47 核苷酸序列切除, 基因完全不表达

94 远端调控区增强子 (enhancer) 1981 年由 Benerji, Rusconi 小组和 Chambom 等发现的, 又称远上游序列 (far upstream sequence) 已在 SV40 的转录单元上发现其转录起始位点上游约 200bp 处有两段 72bp 长的重复序列, 它们不是启动子的一部分, 但能增强或促进转录的起始, 因此, 称这种能强化转录起始的序列为增强子或强化子 (enhancer)

95 增强子 (Enhancer ) 增强子很可能通过影响染色质 DNA- 蛋白质结构或改变超螺旋的密度而改变模板的整体结构, 从而使得 RNA 聚合酶更容易与模板 DNA 相结合, 起始基因转录

96 An enhancer can activate a promoter from upstream or downstream locations, and its sequence can be inverted relative to the promoter.

97 增强子特点 1 具有远距离效应常在上游 -200bp 处, 但可增强远处启动子的转录, 即使相距十几 Kb 也能发挥其作用 ; 2 无方向性无论在靶基因的上游, 下游或内部都可发挥增强转录的作用 ; 3 顺式调节只调节位于同一染色体上的靶基因, 而对其它染色体上的基因无作用 ; 4 无物种和基因的特异性, 可以接到异源基因上发挥作用 ; 5 具有组织的特异性 SV40 的增强子在 3T3 细胞中比多瘤病毒的增强子要弱, 但在 HeLa 细胞中 SV40 的增强子比多瘤病毒的要强 5 倍增强子的效应需特定的蛋白质因子参与 6 有相位性其作用和 DNA 的构象有关 7 有的增强子可以对外部信号产生反应如热体克基因在高温下才表达编码重金属蛋白的金属硫蛋白基因在镉和锌存在下才表达某些增强子可以被固醇类激素所激活

98 真核生物的启动子特点 promoter gene GC box CAAT box TATA box Hogness box (1) 有多种元件 :TATA 框,GC 框,CATT 框,OCT 等 ; (2) 结构不恒定有的有多种框盒, 如组蛋白 H2B; 有的只有 TATA 框和 GC 框, 如 SV40 早期转录蛋白 ; (3) 它们的位置序列距离和方向都不完全相同 ; (4) 有的有远距离的调控元件存在, 如增强子 ; (5) 这些元件常常起到控制转录效率和选择起始位点的作用 ; (6) 不直接和 RNA pol 结合转录时先和其它转录激活因子相结合, 再和聚合酶结合

99 谢谢!

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