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1 分子生物学 第八章基因的表达与调控 ( 下 ) 真核基因表达调控模式 第二节真核基因表达的转录水平调控 夏玉琼

2 2 真核细胞的基因表达与原核细胞的不同点 一条成熟的 mrna 链只能翻译一条多肽链 DNA 与组蛋白和非组蛋白结合, 小部分裸露 DNA 大部分不转录 有序地根据生长发育阶段的需要进行 DNA 片段重排 基因转录的调节区很大 转录和翻译有严格的空间间隔 基因只有经过复杂的成熟和剪接过程, 才能顺利翻译成蛋白质

3 3 目录 真核基因的结构特征 增强子 反式作用因子

4 4 真核基因的一般结构特征 一个完整的真核基因 编码区 5 和 3 端长度不等的特异性序列 基因转录调节的基本要素 顺式作用元件反式作用因子 RNA 聚合酶

5 5 顺式作用元件 启动子和基因的调节序列 主要包括启动子 增强子 沉默子 /%E9%A1%BA%E5%BC%8F%E4%BD%9C%E7%94%A8%E5%85%83%E4%BB%B6.jpg

6 6 启动子 由核心启动子和上游启动子组成是基因转录起始位点 +1 及其 5 上游 bp 以内的一组具有独立功能的 DNA 序列每个元件长度 7~20bp 是决定 RNA 聚合酶 II 转录起始位点和转录频率的关键元件

7 7 启动子 核心启动子 TATA 盒单独起作用时, 确定转录起始位点并产生基础水平的转录 上游启动子元件 CAAT 盒 GC 盒能通过 TFIID 复合物提高转录效率

8 8 反式作用因子 指能够结合在顺式作用元件上调控基因表 达的蛋白质或 RNA /%E5%8F%8D%E5%BC%8F%E4%BD%9C%E7%94%A8%E5%9B%A0%E5%AD%90.jpg

9 9 RNA 聚合酶 真核生物有 3 种 RNA 聚合酶, 只有 RNA 聚合酶 II 能够转录 mrna 前体 RNA 聚合酶 II 能够直接或间接与启动子核心序列 TATA 区特异结合, 并启动转录的调节蛋白

10 10 RNA 聚合酶 II RNA 聚合酶 II 在转录因子的帮助下, 形成转录起始复合物 RNA 聚合酶 II 由至少 个亚基组成, 最大亚基的末端含有由 7 个氨基酸残基组成的多磷酸化位点重复序列, 称为羧基末端结构 域 (CTD) Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser

11 11 RNA 聚合酶 II 基础转录所需的蛋白质因子 TFII TFtranscriptionfactor II 与 RNA 聚合酶 II 对应 TFIID B F 形成最初级复合物 ;TFIIE H 形成完整复合物 ;TFIIA 提高转录效率 ; TFIIDA 滞留在转录起始位点, 其它的随 RNA 聚合酶 II 移动

12 12 转录模板 从转录起始位点到 RNA 聚合酶 II 转录终止处 的全部 DNA 序列

13 13 polya 位点 几乎所有的真核基因的 3 端都存在 polya 位点上游 15-30bp 处的保守序列 AATAAA 对于初级转录产物的准确切割及加 polya 是必需的 RNA 聚合酶 II 不在 polya 位点停止转录, 而是转录到 polya 位点下游 0.5-2kb 序列

14 14 转录水平调控的研究内容 RNA 聚合酶 II 的基因转录及其调控过程启动子 调节序列和调节蛋白通过 DNA- 蛋白质相互作用, 蛋白质 - 蛋白质相互作用影响 RNA 酶活性

15 15 目录 真核基因的结构特征 增强子 反式作用因子

16 16 增强子的概念 能使与它连锁的基因转录频率明显增加的 DNA 序列 最早发现于 SV40 早期基因的上游有两个长 72bp 的正向重复序列病毒 植物 动物和人类正常细胞中都发现有增强子存在

17 17 增强子的特点 增强效应十分明显 : 一般 倍增强效应与其位置和取向无关大多为重复序列有组织和细胞特异性没有基因专一性许多受外部信号的调控

18 18 增强子的作用机制 影响模板附近 DNA 双螺旋结构, 形成增强子和启动子之间的 成环 连接, 活化基因转录 有利于 DNA 拓扑异构酶改变 DNA 双螺旋结构, 促进 RNA 聚合酶 II 在 DNA 链上的结合和滑动 作为反式作用因子或者 RNA 聚合酶 II 进入染色质结构的 入口

19 19 目录 真核基因的结构特征 增强子 反式作用因子

20 20 反式作用因子的分类 具有识别启动子元件功能的基本转录因子能识别增强子或沉默子的转录调节因子不需要通过 DNA- 蛋白质相互作用的共调节因子

21 21 反式作用因子 基本转录因子和转录调节因子统称为转录因子 TF 包括转录激活因子和转录阻遏因子 能识别启动子或增强子, 通过 DNA- 蛋白质相互作用调节转录活性, 决定不同基因的时间 空间特异性表达 共调节因子 无 DNA 结合活性, 主要通过蛋白质 - 蛋白质相互作用影响转录因子的分子构象, 调节转录活性对应的, 包括共激活因子和共阻遏因子

22 22 反式作用因子 结构域 DNA 识别或结合域 ( 直接 ) 转录活化结构域 ( 间接 )

23 23 酵母双杂交系统 只有转录激活域 AD 不 能激活报告基因表达 只有转录结合域 BD 不 能激活报告基因表达 AD 和 BD 同时存在时, 才能激活报告基因表达 merases.html

24 24 酵母双杂交系统 BD AD Bait Prey DNA 结合域 DNA 转录激活域诱饵猎物

25 25 DNA 识别或结合域 螺旋 - 转折 - 螺旋结构锌指结构碱性 - 亮氨酸拉链结构碱性 - 螺旋 - 环 - 螺旋结构

26 26 螺旋 - 转折 - 螺旋结构 (HTH) 至少两个螺旋, 中间由短侧链氨基酸残基形成转折第三个螺旋与双链 DNA 大沟结合控制酵母交配型 MAT 基因座以及果蝇体节发育的调节基因等同源盒基因所编码的蛋白都具有 HTH 结构

27 27 同源域 指编码 60 个保守氨基酸序列的 DNA 片段广泛存在于真核生物基因组内许多含有同源转换区的基因具有转录调控的功能同源转换区蛋白之所以具有转录调节功能, 与这些蛋白 C 末端的 HTH 结构有关

28 28 锌指结构 (zincfinger) 特有的半胱氨酸和组氨酸 有锌时才具备转录调控活性 Cys2/His2 α 螺旋和 β 片层 以锌原子为中心 Cys2/Cys2

29 29 锌指结构 类固醇激素受体家族含该结构 有锌参加才有转录活性 通过碱性氨基酸与 DNA 结合

30 30 碱性 - 亮氨酸拉链结构 (bzip) 亮氨酸间的疏水作用使蛋白形成二聚体 通过 N 端的碱性氨基酸与 DNA 结合

31 31 碱性 - 螺旋 - 环 - 螺旋结构 bhlh 在免疫球蛋白的增强子结合蛋白中 结合 DNA 特性类似 bzip

32 32 转录活化结构域 不与 DNA 直接结合的转录因子, 依赖于 DNA 结合结构域以外的 个氨基酸残基结构 带负电的螺旋结构 : 稳定转录起始复合物富含谷氨酰胺的结构 e.g.sp1 蛋白结合启动子 GC 盒 富含脯氨酸的结构

33 33 小结 顺式作用元件 : 启动子 增强子 RNA 聚合酶 II CTD 反式作用因子 : 转录因子和共调节因子 ; 包括 DNA 结合结构域和转录激活结构域

34 34 作业二十 在 CTD 中,7 个氨基酸残基的结构有何相似之处? 简述反式作用因子和转录因子的概念和关系

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