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1 分子生物学 第二章染色体与 DNA 2.3 DNA 的复制 2.4 原核生物和真核生物复制的特点 9/20/2017

2 2 目录 DNA 的复制 DNA 的半保留复制 DNA 复制的基本概念 DNA 复制的几种主要方式 原核生物和真核生物 DNA 复制的特点 原核生物 DNA 复制的特点 真核生物 DNA 复制的特点 DNA 复制的调控

3 3 DNA 的半保留复制 Waltson 和 Crick 提出半保留复制假说 DNA 在复制过程中首先氢键断裂, 两条链被分开 每条链分别作为模板合成新链, 产生互补的两条链 每个子代的 DNA 的一条链来自亲代 DNA, 一条是新合成的

4 DNA 的半保留复制 : 利用大肠杆菌 DNA 实验验证 半保留复制 氯化铯密度梯度离心 西安电子科技大学生命学院 4 第一代 15 N 15 N 第二代 第三代 15 N 14 N 14 N 14 N 15 N 14 N duct_list.asp?id=50&mycl ass=27

5 5 思考 DNA 具体是如何复制的? 需要完全解开双螺旋再开始复制吗? 还是边解螺旋边复制吗? 复制方向是 3-5 还是 5-3 还是都可以? 复制起点在哪? 中间还是边上还是固定序列? 复制速率怎样?

6 6 目录 DNA 的复制 DNA 的半保留复制 DNA 复制的基本概念 DNA 复制的几种主要方式 原核生物和真核生物 DNA 复制的特点 原核生物 DNA 复制的特点 真核生物 DNA 复制的特点 DNA 复制的调控

7 7 复制子与复制叉 复制起点 复制叉 复制子 复制子 (replicon) 生物体内能独立进行复制的单位 从复制起始点到终止点的区域 真核生物多个复制子, 原核生物一般就一个 复制叉 双链 DNA 解成双股链后形成的叉子状

8 8 复制起始点与复制终止点 复制起始点 (oric) 含有丰富的 AT 序列 可能有利于复制启动时双链的解开 复制终止点 (terminus) 复制子中控制复制终止的位点

9 9 复制方向 双向复制 ( 主要方式 ) 一个复制起始点 双向等速复制 : 两个复制叉相反方向等速移动 复制起点 复制叉 复制子

10 10 复制方向 ( 放射性标记实验证明 ) a) 把非放射性的 DNA 在含有 H 3 - 胸腺嘧啶核苷酸培养基中培养, 中间稀, 两边密 b) 继续放到非放射性培养基中培养, 两边又变稀

11 11 复制速率 真核生物 复制叉的移动速率 bp/min 复制时需要解开核小体, 复制后要重新形成核小体, 因此速度慢 原核生物 复制叉移动速率 bp/min 满足其快速生长的需要

12 12 大肠杆菌复制速率的计算 大肠杆菌平均长度 4200 kb, 每个细胞内复制子数一个, 复制子移动速度为 bp/min, 计算培养大肠杆菌时它们需要多长时间数量可以翻一番?

13 13 冈崎片段与半不连续复制 DNA 聚合酶只能从 5-3 合成 DNA 广泛认可 复制叉 只有一个复制起点实验中观察到许多片段 DNA 冈崎片段 存在争议

14 14 冈崎片段与半不连续复制 冈崎片段 后随链 冈崎片段 在 DNA 半不连续复制中产生的长度为 个碱基的短 DNA 片段 前导链 合成 5-3 方向 后随链 与复制叉相反的方向按 5-3 合成冈崎片段 半不连续复制 前导链的连续复制和后随链的不连续复制 前导链

15 15 RNA 引物 DNA 聚合酶 脱氧核糖核苷酸 其它小分子 不能引发 DNA 复制 因为 DNA 聚合酶不能引发起始的 DNA 合成 同时 RNA 聚合酶能引发起始的 RNA 合成 RNA 引物 RNA 聚合酶先合成一段 RNA 引物, 在此基础上,DNA 聚合酶再接着合成 DNA

16 16 目录 DNA 的复制 DNA 的半保留复制 DNA 复制的基本概念 DNA 复制的几种主要方式 原核生物和真核生物 DNA 复制的特点 原核生物 DNA 复制的特点 真核生物 DNA 复制的特点 DNA 复制的调控

17 17 线性双链 DNA 的复制 DNA 的复制是从固定的起始点双向等速进行的

18 18 线性双链 DNA 复制子末端的复制 母链 3 子链 5 RNA 引物 3 5 RNA 引物切除后, 子链短于母链 5 3 解决方法 如 T4 和 T7 噬菌体 DNA DNA 末端形成发卡结构, 没有游离的末端, 如草履虫线粒体 DNA

19 19 线性双链 DNA 复制子末端的复制 3 末端蛋白引发 DNA 的复制如 Phi29 噬菌体 DNA 当复制叉到达末端, 单链被取代 末端碱基配对形成双链体起始点 释放的单链继续 DNA 合成

20 20 环状 DNA 的复制 :θ 型 大肠杆菌基因组 起初 低放射性的核苷酸 双向等速复制 双复制叉 :X 和 Y 继续低放射性的核苷酸方向? 速度? 高放射性的核苷酸 复制叉处强放射信号 复制原点 : 弱放射信号 高放射性的起点

21 21 环状 DNA 的复制 : 复制起点 大肠杆菌的复制起点 OriC 全长 245 bp 富含 AT, 含有多个短重复序列

22 环状 DNA 的复制 :θ 型 西安电子科技大学生命学院 22

23 23 环状 DNA 的复制 : 滚环型 (σ 型 ) 噬菌体 ΦX174 单链环状 DNA σ 环按逆时针方向滚动形似倒着的 σ 单向复制

24 24 环状 DNA 的复制 :D- 环型 动物线粒体高等植物叶绿体 L 链起始点 H 链起始点 L 链 H 链 单向复制 L 链富含嘧啶 H 链富含嘌呤 以 H 链为模板, 合成互补 L 链 以 H 链为模板, 继续合成互补 L 链 以 L 链为模板, 合成互补 H 链 ealth/biology/buckley/replicati on/sld076.htm

25 25 目录 DNA 的复制 DNA 的半保留复制 DNA 复制的基本概念 DNA 复制的几种主要方式 原核生物和真核生物 DNA 复制的特点 原核生物 DNA 复制的特点 真核生物 DNA 复制的特点 DNA 复制的调控

26 26 原核生物 DNA 复制 : 复制起始点 oric 全长 245 bp 3 个 13bp 的串联重复保守序列 GATCTNTTNTTTT 4 个 9bp 的结合 DnaA 蛋白的保守序列 TTATNCANA

27 27 原核生物 DNA 复制 :DNA 双螺旋的解旋 DNA 解链酶 通过水解 ATP 获得能量解开双链 DNA 单链结合蛋白 SSB 蛋白 以四聚体的形式存在于复制叉处 保证 DNA 单链的存在 DNA 拓扑异构酶 消除解链造成的正超螺旋的累积

28 28 原核生物 DNA 复制 :DNA 复制的引发 DNA 聚合酶都从 3 羟基端起始 DNA 合成 引发酶 ( 特殊的 RNA 聚合酶 ) 在 DNA 模板上合成一段 RNA 链, 称为引物 DNA 聚合酶从 RNA 引物的 3 端开始合成新的 DNA 链 最后 Rnase H 降解 RNA 引物 缺口由 DNA 聚合酶 I 将其补齐 DNA 连接酶连接冈崎片段

29 29 原核生物 DNA 复制 : 复制的延伸 前导链持续合成 后随链的合成分段进行 形成中间产物冈崎片段 共价连接成一条连续完整的新 DNA 链

30 30 原核生物 DNA 复制 : 复制的终止 主要蛋白 :Tus 蛋白 重复性终止子序列 Ter:22 个碱基 Ter-Tus 复合物 能使 DnaB 不再将 DNA 解链 阻挡复制叉的继续前移 等到相反方向复制叉到达后停止复制 DNA 拓扑异构酶 IV 使复制叉解体, 释放子链 DNA

31 复制的终止 西安电子科技大学生命学院 31

32 32 原核生物 DNA 复制 :DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 I C 端 DNA 聚合酶 3-5 核酸外切酶 N 端 5-3 核酸外切酶活性 除去冈崎片段的 5 端 RNA 引物 DNA 聚合酶 II 5-3 聚合酶活性, 但活性低 3-5 核酸外切酶修复 DNA DNA 聚合酶 III 5-3 聚合酶活性 3-5 核酸外切酶 主导聚合酶 DNA 聚合酶 IV V SOS 修复

33 33 原核生物 DNA 复制的特点 5 3 解旋引发复制 拓扑异构酶 I 引发酶 3 DNA 聚合酶 I DNA 连接酶冈崎片段 5 DNA 聚合酶 III 3 合成方向 后随链 5 3 解链酶 3 前导链 单链结合蛋白 3 5

34 34 目录 DNA 的复制 DNA 的半保留复制 DNA 复制的基本概念 DNA 复制的几种主要方式 原核生物和真核生物 DNA 复制的特点 原核生物 DNA 复制的特点 真核生物 DNA 复制的特点 DNA 复制的调控

35 35 真核生物 DNA 复制的特点 每条染色质上有多个复制起始点 ( 原核生物只有一个 ) 染色体全部完成复制之前, 各个起始点上 DNA 的复制不能再开始 ( 原核生物的起始点上可以连续开始新的 DNA 复制 ) DNA 复制只是细胞周期的一部分只在 S 期进行

36 36 真核生物 DNA 复制 : 复制起始点 自主复制序列 ARS 最早在酿酒酵母的核外 DNA 发现, 可自主复制 存在于所有的真核生物中 都具有一个被称为 A 区的 11 个 A-T 碱基对的保守序列 需要起始点识别复合物 ORC 参与

37 37 真核生物复制的特点 复制叉移动速率 50bp/s DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 α: 引物合成 DNA 聚合酶 β:dna 损伤的修复 DNA 聚合酶 δ:dna 复制 DNA 聚合酶 ε: 后随链合成 核苷切除和碱基切除修复 DNA 聚合酶 γ: 线粒体 DNA 复制

38 38 真核生物 DNA 复制过程 DNA 聚合酶 α/ 引发酶复合体引发 DNA 复制 DNA 聚合酶 δ 负责延伸前导链 DNA 聚合酶 δ 或 ε 负责延伸后随链 冈崎片段的 RNA 去除 RNA 酶 H1 切开 RNA 和 DNA 的连接处 FEN1 蛋白降解 RNA 片段 DNA 连接酶 I 连接相邻的冈崎片段

39 39 真核生物 DNA 复制的特点 前导链 后随链 DNA RNA DNA 聚合酶 α PCNA RFC 复制因子 C DNA 聚合酶 δ 复制叉的方向 FEN1 蛋白 DNA 连接酶 I

40 40 5 端部分 DNA 的复制问题 母链 3 子链 5 RNA 引物 RNA 引物切除后, 子链短于母链 5 3 解决方法 3 5 端粒酶合成一段 DNA, 补上

41 真核生物 DNA 复制的特点 复制起始 单个起始点 原核生物 不依赖于细胞分裂 起始区 : 4 个 9bp 和 3 个 13bp, 富含 AT 序列 引发酶 : RNA 聚合酶 复制延伸 复制叉移动速度 bp/s 聚合酶 DNA 聚合酶 III 复制起始 真核生物 多个起始点 只在细胞周期 S 期进行 起始区 : 含有 11 个 AT 碱基对的保守序列 A 引发酶 : DNA 聚合酶 α/ 引发酶复合体 复制延伸 复制叉移动速度 50bp/s 聚合酶 DNA 聚合酶 δ

42 42 目录 DNA 的复制 DNA 的半保留复制 DNA 复制的基本概念 DNA 复制的几种主要方式 原核生物和真核生物 DNA 复制的特点 原核生物 DNA 复制的特点 真核生物 DNA 复制的特点 DNA 复制的调控

43 43 大肠杆菌染色体 DNA 的复制调控 调节蛋白 大肠杆菌染色体 DNA 的调控依赖于复制起点和调节蛋白的相互作用 起始物位点编码复制调节蛋白 起始物位点突变使复制停止并导致细胞死亡

44 44 ColE1 质粒 DNA 的复制调控 引物 RNA:RNA 2 RNase H DNA 复制方向 反义 RNA 1 起始点 ColE1 质粒 DNA 的复制依赖于宿主 DNA 聚合酶 I 调控依赖于 Rop 蛋白和反义 RNA 加强 RNA 1 的作用 Rop 蛋白和反义 RNA 控制起始 DNA 复制所必需的引物合成 反义 RNA 和引物 RNA 分子可逆结合控制复制起始频率 Rop 蛋白提高 RNA1 和引物 RNA 的相互作用 Rop 蛋白 Rop 基因

45 45 真核细胞 DNA 的复制调控 细胞周期水平 G1 S 染色体水平 不同染色体上 同一染色体不同部位的复制子有序复制 复制子水平 决定复制的起始

46 46 小结 DNA 的复制 半保留复制 复制子 复制叉 复制起始点 复制终点 复制方向 冈崎片段与半不连续复制 线性双链 DNA 的复制 环状 DNA 复制 : θ- 型, 滚环型 D 环型 DNA 复制的特点 oric DNA 拓扑异构酶 DNA 解链酶 SSB RNA 引物 RNA 引物酶 Tus 蛋白 Ter 序列 DNA 聚合酶 III( 原核 ) 和 δ( 真核 )

47 47 思考题 DNA 复制 ( 原核生物环状 DNA) 通常采取哪些方式 简述下列酶的功能 : 原核生物 DNA 聚合酶 (DNA 聚合酶 I II 和 III) 以及真核生物 DNA 聚合酶 (DNA 聚合酶 α 和 δ)

48 48 下次课的内容 第二章染色体与 DNA DNA 的修复 DNA 的转座

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