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净栾
7 years ago
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1 專論 - 香港中藥材標準第二冊補充資料牛膝含量測定

3 1 cm 1 cm 圖 1 牛膝外觀圖 S-1

4 1. 名稱藥材正名 :Radix Achyranthis Bidentatae 中文名 : 牛膝漢語拼音名 :Niuxi 2. 來源本品為莧科植物牛膝 Achyranthes bidentata Bl. 的乾燥根冬季莖葉枯萎時採挖, 除去鬚根及泥砂, 捆成小把, 曬至乾皺後, 將頂端切齊, 曬乾 3. 性狀本品呈細長圓柱形, 挺直或稍彎曲, 長 cm, 直徑 4-10 mm 表面灰黃色或淡棕色, 有微扭曲的細縱皺紋橫長皮孔及稀疏的小根痕質硬而脆, 受潮則變軟, 易折斷, 斷面平坦, 淡黃棕色, 微呈角質樣而油潤中心維管束木質部較大, 黃白色, 外周散有多數點狀維管束, 排列成 2-4 輪氣微, 味微甜而稍苦澀 ( 圖 1) 4. 鑒別 4.1 顯微鑒別 ( 附錄 III) 橫切面木栓層為數列細胞皮層薄壁細胞數列, 切向延長, 維管束斷續排列成 2-4 輪 ; 最外輪維管束較小, 有時僅 1 至數個導管, 向內維管束較大最外輪的形成層幾連接成環木質部主要由導管及小的木纖維組成 ; 中心木質部聚合成 2-3 群薄壁細胞含草酸鈣砂晶 ( 圖 2) 粉末淡棕色至灰白色草酸鈣砂晶呈三角形箭頭形類方形或不規則形, 散在於薄壁細胞中, 偏光顯微鏡下呈多彩狀具緣紋孔及網紋導管直 S - 2

5 徑 8-93 µm 纖維多成束, 壁微增厚, 紋孔稀疏紋孔斜裂縫狀相交成十字形或人字形木栓細胞類方形類長方形類圓形或多角形 ( 圖 3) 4.2 理化鑒別操作程序取本品粉末 1.0 g, 置 50-mL 離心管中, 加二氯甲烷 10 ml, 超聲 (560 W) 處理 30 分鐘, 離心 5 分鐘 ( 約 3000 g), 用 0.45-µm 微孔濾膜 (RC) 濾過取濾液 0.5 ml 置試管中, 小心沿管壁加硫酸約 0.5 ml, 靜置 20 分鐘, 兩液接界處顯紅褐色或黃褐色環 4.3 薄層色譜鑒別 [ 附錄 IV(A)] 對照品溶液齊墩果酸對照品溶液取齊墩果酸對照品 ( 圖 4)1.0 mg, 溶解於 1 ml 甲醇中展開劑製備二氯甲烷 - 乙酸乙酯 (5 : 1, v/v) 的混合溶液顯色劑取 50%(v/v) 稀硫酸 1 ml 和 2%(w/v) 對 - 羥基苯甲醛甲醇溶液 10 ml 混合, 臨用配製供試品溶液取本品粉末 1.0 g, 置 100-mL 圓底燒瓶中, 加 75% 乙醇 30 ml 和鹽酸 3 ml, 加熱回流 1.5 小時, 放冷至室溫, 濾過, 濾液用旋轉蒸發器減壓蒸乾, 殘渣溶於 20 ml 水中, 轉移於分液漏斗, 以二氯甲烷 100 ml 提取, 提取液用旋轉蒸發器減壓蒸乾, 殘渣溶於 1 ml 甲醇中, 即得 S - 3

6 牛膝 A C 100 µm D 50 µm B 圖 2 牛膝橫切面顯微特徵圖 A. 簡圖 B. 橫切面圖 C. 最外輪維管束 D. 草酸鈣砂晶 1. 木栓層 2. 皮層 3. 形成層 4. 韌皮部 5. 木質部 S µm

7 牛膝 1a 1b 2a 3a 4a 5a 6a 50 µm 圖 3 牛膝粉末顯微特徵圖 1. 草酸鈣砂晶 2. 具緣紋孔導管 3. 網紋導管 4. 木栓細胞 5. 木纖維束 6. 木纖維 a. 光學顯微鏡下特徵 b. 偏光顯微鏡下特徵 S- 5

8 操作程序照薄層色譜法 [ 附錄 IV(A)] 進行分別吸取齊墩果酸對照品溶液 4 µl 和供試品溶液 1 µl, 點於同一高效硅膠 F 254 薄層板上用上述新製備的展開劑展開約 4 cm, 取出, 標記溶劑前沿, 晾乾均勻噴上顯色劑, 在約 100 加熱, 直至斑點或條帶清晰可見 ( 約 10 分鐘 ) 置可見光下檢視, 並計算 R f 值供試品色譜應顯出與齊墩果酸色澤相同 R f 值相應的特徵斑點或條帶 (i) (ii) 圖 4 化學結構式 (i) 齊墩果酸 (ii) 蛻皮甾酮 4.4 高效液相色譜指紋圖譜鑒別 ( 附錄 XII) 對照品溶液蛻皮甾酮對照品溶液 Std-FP (30 mg/l) 取蛻皮甾酮對照品 ( 圖 4)3.0 mg, 溶解於 100 ml 甲醇中 S - 6

9 供試品溶液取本品粉末 1.0 g, 置 50-mL 離心管中, 加甲醇 10 ml, 超聲 (560 W) 處理 30 分鐘, 離心 5 分鐘 ( 約 3000 g), 上清液用 0.45-µm 微孔濾膜 (RC) 濾過, 即得色譜系統液相色譜 : 檢測波長 270 nm; mm 十八烷基鍵合硅膠 (4 µm) 填充柱 ; 流速約 0.8 ml/min 色譜洗脫程序如下 : 時間水乙 ( 分鐘 ) (%, v/v) (%, v/v) 洗脫等度 g55 5g45 性梯度系統適用性要求吸取蛻皮甾酮對照品溶液 Std-FP 10 µl, 注入液相色譜儀, 至少重複 5 次系統適用參數的要求如下 : 蛻皮甾酮的峰面積相對標準偏差應不大於 5.0%; 蛻皮甾酮峰的保留時間相對標準偏差應不大於 2.0%; 理論塔板數按蛻皮甾酮峰計算應不低於供試品測試中 2 號峰與 3 號峰之間的分離度應不低於 1.0( 圖 5) 操作程序分別吸取蛻皮甾酮對照品溶液 Std-FP 和供試品溶液各 10 µl, 注入液相色譜儀, 並記錄色譜圖測定對照品溶液 Std-FP 色譜圖中蛻皮甾酮峰的保留時間, 及供試品溶液色譜圖中 5 個特徵峰 ( 圖 5) 的保留時間在相同液相色譜條件下, 與相應對照品溶液 Std-FP 色譜圖中蛻皮甾酮峰的保留時間比較, 鑒定供試品溶液色譜圖中蛻皮甾酮峰二色譜圖中蛻皮甾酮峰的保留時間相差應不大於 2.0% 按附錄 XII 公式計算特徵峰的相對保留時間牛膝提取液 5 個特徵峰的相對保留時間及可變範圍見表 1 S - 7

10 表 1 牛膝提取液 5 個特徵峰的相對保留時間及可變範圍峰號相對保留時間可變範圍 1( 指標成份峰, 蛻皮甾酮 ) ± ± ± ± 0.03 圖 5 牛膝提取液對照指紋圖譜供試品色譜圖中應有與對照指紋圖譜相對保留時間範圍內一致的 5 個特徵峰 ( 圖 5) 5. 檢查 5.1 重金屬 ( 附錄 V)..應符合有關規定 5.2 農藥殘留 ( 附錄 VI)..應符合有關規定 5.3 霉菌毒素 ( 附錄 VII)..應符合有關規定 5.4 雜質 ( 附錄 VIII)..不多於 1.0% S 灰分 ( 附錄 IX)

11 總灰分 : 不多於 9.0% 酸不溶性灰分 : 不多於 1.5% 5.6 水分 ( 附錄 X)..不多於 16.0% 6. 浸出物 ( 附錄 XI) 水溶性浸出物 ( 冷浸法 )..不少於 59.0% 醇溶性浸出物 ( 冷浸法 )..不少於 54.0% 7. 含量測定照附錄 IV(B) 進行對照品溶液齊墩果酸對照品儲備液 Std-Stock (1000 mg/l) 精密稱取齊墩果酸對照品 10.0 mg, 溶解於 10 ml 甲醇中齊墩果酸對照品溶液 Std-AS 精密吸取齊墩果酸對照品儲備液適量, 以甲醇稀釋製成含齊墩果酸分別為 mg/l 系列的對照品溶液供試品溶液精密稱取本品粉末 0.2 g, 置 50-mL 離心管中, 加 70% 乙醇 10 ml, 超聲 (560 W) 處理 30 分鐘, 離心 8 分鐘 ( 約 3000 g), 上清液用 0.45-µm 微孔濾膜 (RC) 濾過重複提取 2 次, 每次加 70% 乙醇 10 ml, 合併濾液, 轉移於 50-mL 量瓶中, 加 70% 乙醇至刻度精密吸取 10 ml 置 50-mL 試管內, 加 6 M 鹽酸 1 ml, 混勻, 置 75 水浴加熱 22 小時, 放冷至室溫, 溶液轉移於 50-mL 圓底燒瓶中, 用 70% 乙醇洗滌試管 3 次, 每次 5 ml, 合併洗液至圓底燒瓶中, 用旋轉蒸發器減壓蒸乾, 殘渣溶於甲醇, 轉移於 10-mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 用 0.45-µm 微孔濾膜 (RC) 濾過, 即得色譜系統液相色譜 : 檢測波長 208 nm; mm 十八烷基鍵合硅膠 (4 µm) 填充柱 ; 流速約 1.0 ml/min 流動相為 M 鹽酸 - 乙 (2 : 8, v/v) 的混合液 ; 流程約 15 分鐘系統適用性要求將齊墩果酸對照品溶液 Std-AS(100 mg/l)10 µl, 注入液相色譜儀, 至少重 S - 9

12 複 5 次系統適用性參數的要求如下 : 齊墩果酸的峰面積相對標準偏差應不大於 5.0%; 齊墩果酸峰的保留時間相對標準偏差應不大於 2.0%; 理論塔板數按齊墩果酸峰計算應不低於 6000 供試品測試中齊墩果酸峰與鄰近峰之間的分離度應不低於 1.5 標準曲綫將齊墩果酸系列對照品溶液 Std-AS 各 10 µl, 注入液相色譜儀, 並記錄色譜圖以齊墩果酸的峰面積與相應濃度作圖從相應 5 點的標準曲得斜率截距與相關系數操作程序將供試品溶液 10 µl, 注入液相色譜儀, 並記錄色譜圖與齊墩果酸對照品溶液 Std-AS 色譜圖中齊墩果酸峰的保留時間比較, 鑒定供試品溶液色譜圖中齊墩果酸峰二色譜圖中齊墩果酸相應峰的保留時間相差應不大於 5.0% 測定峰面積, 按附錄 IV(B) 公式計算供試品溶液中齊墩果酸的濃度 (mg/l), 並計算樣品中齊墩果酸的百分含量限度按乾燥品計算, 本品含齊墩果酸 (C 30 H 48 O 3 ) 不少於 1.1% S - 10

13 補充資料 S - 11

14 加入含量測定以供參閱 : 含量測定照附錄 IV(B) 進行對照品溶液蛻皮甾酮對照品儲備液 Std-Stock (1000 mg/l) 精密稱取蛻皮甾酮對照品 10.0 mg, 溶解於 10 ml 甲醇中蛻皮甾酮對照品溶液 Std-AS 精密吸取蛻皮甾酮對照品儲備液適量, 以甲醇稀釋製成含蛻皮甾酮分別為 mg/l 系列的對照品溶液供試品溶液精密稱取本品粉末 1.0 g, 置 50-mL 離心管中, 加甲醇 10 ml, 超聲 (560 W) 處理 30 分鐘, 離心 5 分鐘 ( 約 5000 g), 上清液用 0.45-µm 微孔濾膜 (RC) 濾過重複提取 2 次, 合併濾液至 100-mL 圓底燒瓶中, 用旋轉蒸發器減壓蒸乾, 殘渣溶於甲醇, 轉移於 10-mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 用 0.45-µm 微孔濾膜 (RC) 濾過, 即得色譜系統液相色譜 : 檢測波長 248 nm; mm 十八烷基鍵合硅膠 (5 µm) 填充柱 ; 流速約 0.8 ml/min 色譜洗脫程序如下 : 時間水乙 ( 分鐘 ) (%, v/v) (%, v/v) 洗脫等度 g0 20g100 性梯度 S - 12

15 系統適用性要求將蛻皮甾酮對照品溶液 Std-AS(100 mg/l)10 µl, 注入液相色譜儀, 至少重複 5 次系統適用性參數的要求如下 : 蛻皮甾酮的峰面積相對標準偏差應不大於 5.0%; 蛻皮甾酮峰的保留時間相對標準偏差應不大於 2.0%; 理論塔板數按蛻皮甾酮峰計算應不低於 8000 供試品測試中蛻皮甾酮峰與鄰近峰之間的分離度應不低於 1.5 標準曲綫將蛻皮甾酮系列對照品溶液 Std-AS 各 10 µl, 注入液相色譜儀, 並記錄色譜圖以蛻皮甾酮的峰面積與相應濃度作圖從相應 5 點的標準曲得斜率截距與相關系數操作程序將供試品溶液 10 µl, 注入液相色譜儀, 並記錄色譜圖與蛻皮甾酮對照品溶液 Std-AS 色譜圖中蛻皮甾酮峰的保留時間比較, 鑒定供試品溶液色譜圖中蛻皮甾酮峰二色譜圖中蛻皮甾酮相應峰的保留時間相差應不大於 5.0% 測定峰面積, 按附錄 IV(B) 公式計算供試品溶液中蛻皮甾酮的濃度 (mg/l), 並計算樣品中蛻皮甾酮的百分含量限度按乾燥品計算, 本品含蛻皮甾酮 (C 27 H 44 O 7 ) 不少於 0.034% S - 13

款冬花

款冬花 B A 0.5 cm C 1 cm 圖1 0.5 cm 外觀圖 A. B. 橫切面 C. 內表面密被白色茸毛紫蘇梗 Perillae Caulis Tritici Levis Fructus Zanthoxyli Radix 石菖蒲金錢草桃仁 Persicae Semen 兩面針 Acori Tatarinowii Rhizoma 浮小麥西紅花 Croci Stigma Eupatorii Herba