使用 Phenomenex Kinetex Biphenyl 2.6u(50 x 2.1mm) 色谱柱和由水 甲醇和 5mM 甲酸铵缓冲液组成的流速为 0.5mL/ min 的快速梯度 ( 见表 1 的梯度条件 ) 实现 LC 分离 表 1: 用于杀虫剂分离的梯度条件 结果与讨论灵敏度 重现性 线性

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1 食品与环境 使用 AB SCIEX Triple QuadTM 3500 系统分析食品样品中的杀虫剂 作者 :André Schreiber AB SCIEX( 加拿大安大略省康科德 ) 概览农业中广泛使用杀虫剂来保护农作物, 以提高农业生产效率 然而杀虫剂残留会给人体健康带来潜在威胁 LC-MS/MS 等现代分析技术能够以极佳的灵敏度和选择性快速 高效地筛查食品中的数百种杀虫剂残留, 以满足全球粮食贸易制度和规范的要求 1-3 质谱仪通常会被认为是复杂的高成本仪器 然而 AB SCIEX Triple Quad 3500 系统与信息丰富的化合物 MRM 列表相结合, 能够以实惠的价格为实验室提供稳健可靠的基础质谱仪技术和方法 在本文中, 我们将向您介绍一种行之有效的方法 : 先采用 Phenomenex roq 试剂盒进行 QuEChERS 提取, 然后使用 Thomson 滤瓶过滤, 随后利用 Kinetex Biphenyl 2.6u(50 x 2.1mm) 色谱柱进行分离, 最后用 AB SCIEX Triple Quad 3500 系统完成检测 该质谱仪以选择性和灵敏度均极为优异的多反应监测 (MRM) 模式运行 然后运用 Scheduled MRM Pro 算法获取最佳数据质量 通过监测每种杀虫剂的两个 MRM 离子对, 可对化合物进行鉴定与定量分析 MultiQuant 软件会自动对 MRM 离子比率进行评估 介绍 LC-MS/MS 是一种功能强大的分析工具, 能够对多种化合物的样品进行筛查 一般使用 MRM 是因为其具有极为出色的灵敏度 选择性和速度 将 QuEChERS 这样的通用提取流程 超高效 LC 系统与核 - 壳粒子色谱柱相结合, 可提供优秀的分辨率和极佳的峰形, 使得检测每种样品中的各种化合物的类别和化学性质成为可能 运用业界最先进的 LC-MS/MS 系统, 能够在单次运行中检测数百种杀虫剂及其它食品残留 AB SCIEX Triple Quad 3500 系统具有 API 3200 系统的最佳特性, 并使用先进的设计和电子技术加以强化 Turbo V 离子源和 Curtain Gas 接口采用业界经典的设计, 具有出众的可 靠性和耐用性 先进的 eq 电子系统和弯曲线性加速 LINAC 碰撞池设计用于超高速 MRM 检测和快速极性切换, 以实现综合而全面的多组分分析 Scheduled MRM Pro 算法等高级软件工具能智能地使用保留时间的信息, 自动优化每个离子对的 MRM 驻留时间和实验的总循环时间, 进而实现最佳数据质量 对于每种杀虫剂, 通过监测两个 MRM 离子对, 运用定性离子对和定量离子对比率来鉴定化合物 实验采用 SCIEX idquant 杀虫剂分析标准套件进行方法设置并配制标准溶液 4 根据欧洲标准 15662, 使用 Phenomenex 加有缓冲盐的 roq QuEChERS 提取试剂盒和 dspe 净化管套件, 对从商店购得的水果和蔬菜样品进行提取 5 将提取液在 Thomson 滤瓶中用水稀释 5 倍后, 再用 0.45μm PVDF 膜过滤, 然后直接放到 LC-MS/MS 分析的自动进样器中 进样体积设置为 2μL 1

2 使用 Phenomenex Kinetex Biphenyl 2.6u(50 x 2.1mm) 色谱柱和由水 甲醇和 5mM 甲酸铵缓冲液组成的流速为 0.5mL/ min 的快速梯度 ( 见表 1 的梯度条件 ) 实现 LC 分离 表 1: 用于杀虫剂分离的梯度条件 结果与讨论灵敏度 重现性 线性范围和精度图 2 所示的是使用 API 3200 和 Triple Quad 3500 分析 10 ng/ml 标准溶液的色谱图 可以观察到灵敏度有 3 倍以上的增益 阶段 时间 ( 分钟 ) A(%) B(%) 使用带有 Turbo V 离子源和 400 电喷雾 (ESI) 离子化方式的 AB SCIEX Triple Quad 3500 系统 在正模式监测到大约 400 个 MRM 离子对 通过 imethod 应用软件 Pesticide Screening 2.1 版的 MRM 列表可获得所有化合物的最佳离子对 图 2: 使用 API 3200 系统 ( 顶部 ) 和 AB SCIEX Triple Quad 3500 系统 ( 底部 ) 分析得到的 10ng/mL 标准溶液的灵敏度对比 平均灵敏度增益都在 3 倍以上 所有杀虫剂的检出限 (LOD) 均为 2ng/mL 或者更低, 而大多数杀虫剂在浓度低于 1ng/mL 的情况下都可以检测到 图 3 显示的是浓度为 5ng/mL 的样品的图谱 所得到的灵敏度允许将样品提取液稀释 5 倍, 以最大限度地降低基质效应 使用 Scheduled MRM Pro 算法, 循环时间为 0.5 秒, 以及化 合物相关的检测窗口和阈值 ( 图 1) 图 3: 使用 Triple Quad 3500 系统检测 5ng/mL 杀虫剂的灵敏度 图 1:Scheduled MRM Pro 算法可实现 : 灵活的窗口宽度 (F) 动态 窗口扩展 (T) MRM 触发的 MRM(M T) 驻留时间加权 (W) MultiQuant 软件 3.0 版用于定性和定量数据处理 对于大多数杀虫剂, 可将线性范围扩大 3 至 4 个数量级, 准确度达到 80%~120% 而对于部分弱电离或强电离的杀虫剂, 则分别排除最低或者最高标准数据点 使用浓度为 1ng/mL 和 10ng/mL(n=5) 的杀虫剂研究重现性, 变异系数 (%CV) 一般低于 10% 2

3 图 4 是乙酰甲胺磷的标准曲线 (calibration line) 两个 MRM 离子对的回归系数均 > 在 1ng/mL 和 10ngmL(n>5) 分别表 现出 2.9% 和 3.2% 的出色的重现性 图 5: 在过滤后的鳄梨 (A) 胡萝卜 (C) 葡萄 (G) 和菠菜 (S) 的 QuEChERS 提取物中检测到的杀虫剂 图 4:1ng/mL 的乙酰甲胺磷的定性离子与定量离子的离子比率, 标准曲线从 0.1 到 100ng/mL,1ng/mL 和 10ng/mL 对应的 %CV 分别为 2.9% 和 3.2% 图 5 显示的是不同类型的食品样品的色谱图及检测到的化合物 表 2 是对定性和定量分析结果的总结 化合物鉴定依据 SANCO/12571/2013 标准 ( 保留时间偏差为 ±0.02 分钟, 离子比率最大偏差为 ±30%) 在 MultiQuant 软件会对所有定性与定量分析结果自动进行计算 ( 图 6) 6 水果和蔬菜样品的分析结果将建立的方法应用于真实食品提取物的鉴定与定量分析 按照欧洲标准方法 的要求, 使用 Phenomenex(roQ KS ) 的不同分散 SPE 套件, 按基质的类型净化样品 提取物先用水稀释 5 倍, 以最大程度地降低基质效应 使用 Thompson 0.45μm PVDF 膜对稀释后的提取物进行过滤, 然后直接放到自动进样器中进行 LC-MS/MS 分析 图 6: 根据 MultiQuant 软件中的 MRM 离子比率计算出的鉴定与定量分 析结果 结果显示啶酰菌胺在葡萄和菠菜样品残留呈阳性 3

4 表 2: 杀虫剂残留浓度高于 1μg/kg 的店购食品总结表 样品 杀虫剂 浓度 RT 误差 MRM 比率 (μg/kg) ( 分钟 ) ( 预期 ) 鳄梨 嘧菌酯 (0.126) 吡虫啉 (0.818) 噻菌灵 (0.820) 胡萝卜 利谷隆 (0.742) 使用 Scheduled MRM Pro 算法改善数据采集质量图 7 和图 8 显示的是食品中杀虫剂的检测结果, 用于说明 Scheduled MRMTM Pro 算法的不同特性 根据 LC 峰值宽度和可能的保留时间变化, 检测窗口可针对不同化合物采取不同设置 这样可实现更有效的 MRM 离子对设置, 实现更优异的数据质量 图 7 所示的例子显示的是 45 秒窗口检测的啶酰菌胺, 而烯酰吗啉窗口设置为 120 秒, 用于同时检测两种同分异构体 噻菌灵 (0.820) 葡萄 啶酰菌胺 (0.242) 环酰菌胺 (1.053) 甲胺磷 (0.698) 腈菌唑 (0.830) 嘧霉胺 (0.435) 戊唑醇 (0.261) 葡萄柚 抑霉唑 (0.348) 吡虫啉 (0.993) 噻菌灵 (0.820) 柠檬 抑霉唑 (0.348) 噻菌灵 (0.820) 橙子 抑霉唑 (0.348) 噻菌灵 > (0.820) 菠菜 啶酰菌胺 (0.242) 烯酰吗啉 (0.541) 咪唑菌酮 (0.672) 吡虫啉 (0.993) 霜霉威 (0.336) 图 7:Scheduled MRM Pro 算法中使用灵活的窗口宽度的例子 啶酰菌胺窗口设置为 45 秒, 而烯酰吗啉使用更宽的窗口以同时检测两种同分异构体 Scheduled MRM Pro 算法还可以在出现定量离子对的时候自动触发定性离子对 ( 图 8) 这项特性能进一步优化 MRM 预置 如果 MRM 信号仍然出现在默认检测窗口的末端, 该阈值还可用于自动扩展检测窗口 噻菌灵 (0.820) 4

5 图 8 所示为橙子样品中噻菌灵检测所采用的动态窗口扩展示例 该样品中所含噻菌灵超过 3000 μg/kg, 引起峰拖尾现象 启用检测窗口自动扩展功能, 可捕获完整的峰值区域, 然后根据 MRM 离子比率实现精确的鉴定与定量分析 结论建立了全新的用于杀虫剂鉴定与定量分析的 LC-MS/MS 方法, 并成功应用于水果和蔬菜样品的检测 根据欧洲标准方法 15662, 使用 Phenomenex roq 套件进行 QuEChERS 提取 ; 将样品提取物用水稀释 5 倍, 以最大限度地降低潜在的基质效应, 然后使用 Thomson 滤瓶过滤 AB SCIEX Triple Quad 3500 系统在 MRM 模式下运行, 使用 Scheduled MRM Pro 算法进行检测 对每种分析物的两个离子对进行监测, 并使用定量离子对和定性离子的比率进行鉴定 在 MultiQuant 软件中进行定性与定量数据处理 根据 SANCO/12571/2013 标准进行鉴定 所有杀虫剂的 LOD 为 2ng/mL 或更低, 有 3~4 个数量级的良好线性范围, 重现性远低于 10% 参考资料 1. M. Anastassiades 等作者共同编撰 : 采用乙腈萃取/ 分隔和分散固相萃取鉴定农产品中杀虫剂残留的快速简便多重残留方法, 国际官定分析检测协会期刊 (J.AOAC Int.),2003 年第 86 期, 第 412 到 431 页 2. St. Lehotay, 使用乙腈萃取和硫酸镁分隔鉴定食品中的杀虫剂残留 : 联合研究, 国际官定分析检测协会期刊 (J.AOAC Int.),2007 年第 90 期, 第 485 到第 520 页 3. J. Wong 等作者共同编撰 : 用于多重残留杀虫剂分析的基于 QuEChERS 液谱串联质谱法的开发和实验室间验证, 农业食品化学期刊 (J. Agric. Food Chem.),2010 年第 58 期, 第 5897 到 5903 页 4. A. Schreiber 等作者共同编撰 : 将 idquant 标准套件用于杀虫剂分析, 以分析水果和蔬菜样品中的残留,AB SCIEX 应用指南 (2011 年版 ), 文件编号为 : 图 8:MRM 触发的 MRM 和动态窗口扩展示例 : 当定量 MRM 离子对超过 Scheduled MRM Pro 算法中设定的阈值时, 会自动触发定性 MRM 离子对 如果 MRM 信号在检测窗口结束时还高于阈值, 会自动扩展检测窗口 5. CSN EN 15662, 植物性食品 使用 GC-MS 和 / 或 LC-MS/ MS 在乙腈萃取 / 分割并用分散 SPE QuEChERS 方法清洗后判断杀虫剂残留 (2008 年版 ) 6. SANCO/12571/2013, 用于食品和饲料杀虫剂残留分析的分析质量控制和验证流程的指导性文件 2014 AB SCIEX. The trademarks mentioned herein are the property of AB Sciex Pte. Ltd. or their respective owners. AB SCIEX is being used under license. AB SCIEX 中国公司 北京分公司地址 : 北京市朝阳区酒仙桥中路 24 号院 1 号楼 5 层电话 : 传真 : 上海分公司及亚太区应用支持中心地址 : 上海市田林路 888 号科技绿洲一号楼 102 室电话 : 传真 : 广州分公司地址 : 广州市体育西路 109 号高盛大厦 15C 室电话 : 传真 : 全国免费垂询电话 : , 网址 : 微博 :@ABSCIEX

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