4 期 吕 武 兴 等 : 黄 曲 霉 毒 素 B 1 对 肉 鸭 生 长 肝 组 织 结 构 及 免 疫 相 关 基 因 表 达 的 影 响 813 基 础 饲 粮, 试 验 Ⅰ Ⅱ 和 Ⅲ 组 饲 喂 在 基 础 饲 粮 中 分 别 添 加 和 150μg/kgAFB 1 纯 品

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1 动 物 营 养 学 报 2013,25(4): ChineseJournalofAnimalNutrition doi: /j.issn x 黄 曲 霉 毒 素 B 1 对 肉 鸭 生 长 肝 组 织 结 构 及 免 疫 相 关 基 因 表 达 的 影 响 1,2 吕 武 兴 1 贺 建 华 1 宋 洪 国 1 刘 敏 敏 1 金 雪 丽 1,2 李 俊 波 (1. 湖 南 农 业 大 学 动 物 科 技 学 院, 长 沙 ;2. 唐 人 神 集 团 研 发 中 心, 株 洲 ) 摘 要 : 本 试 验 旨 在 研 究 饲 粮 黄 曲 霉 毒 素 B 1 (AFB 1 ) 对 肉 鸭 生 产 性 能 肝 组 织 结 构 及 免 疫 相 关 基 因 白 细 胞 介 素 -2(IL 2) 和 干 扰 素 -γ(ifn γ) 表 达 的 影 响 试 验 选 用 1 日 龄 健 康 双 鬼 头 肉 鸭 240 羽, 随 机 分 为 4 组, 每 组 6 个 重 复, 每 个 重 复 10 羽 试 验 期 4 周 (28d), 对 照 组 饲 喂 基 础 饲 粮, 试 验 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 组 饲 喂 在 基 础 饲 粮 中 分 别 添 加 和 150μg/kgAFB 1 纯 品 的 试 验 饲 粮, 记 录 采 食 量 和 增 重 数 据, 计 算 生 产 性 能 ; 试 验 结 束 时 屠 宰, 取 肝 脏 样 品, 分 别 进 行 切 片 及 实 时 荧 光 定 量 PCR 检 测 分 析 结 果 表 明 :1) 饲 粮 中 添 加 不 同 水 平 AFB 1 极 显 著 降 低 了 肉 鸭 的 平 均 日 增 重 和 平 均 日 采 食 量 (P<0.01), 与 对 照 组 相 比,3 个 试 验 组 肉 鸭 末 重 分 别 下 降 了 14.67%(P< 0.01) 30.38%(P<0.01) 和 31.83%(P<0.01), 且 μg/kgAFB 1 还 极 显 著 增 加 了 料 重 比 (P<0.01), 显 著 增 加 了 死 亡 率 (P<0.05);2) 随 着 AFB 1 添 加 水 平 的 增 加, 肉 鸭 肝 脏 组 织 病 变 程 度 逐 渐 增 加, 肝 脏 中 IL 2 和 IFN γ 基 因 mrna 表 达 水 平 呈 现 不 同 程 度 的 降 低, 其 中 μg/kgAFB 1 极 显 著 下 调 了 IFN γ 基 因 mrna 的 表 达 水 平 (P<0.01) 由 此 可 见, 饲 粮 中 添 加 AFB 1 可 导 致 肉 鸭 生 产 性 能 下 降 和 肝 脏 组 织 结 构 损 伤, 并 通 过 下 调 肝 脏 中 IL 2 和 IFN γ 基 因 的 表 达, 改 变 肉 鸭 机 体 的 免 疫 水 平 关 键 词 : 黄 曲 霉 毒 素 B 1 ; 生 产 性 能 ; 肝 组 织 ; 白 细 胞 介 素 -2 基 因 ; 干 扰 素 -γ 基 因 ; 肉 鸭 中 图 分 类 号 :S834 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 : X(2013) 黄 曲 霉 毒 素 (aflatoxin,af) 是 一 类 主 要 由 霉 菌 中 的 曲 霉 ( 黄 曲 霉 和 寄 生 曲 霉 ) 产 生 的 次 级 代 谢 产 物, 具 有 极 强 的 毒 性 AF 广 泛 存 在 于 谷 物 饲 料 和 食 品 中, 动 物 摄 入 被 AF 污 染 的 饲 料 后, 会 引 起 生 产 性 能 下 降, 免 疫 力 减 弱, 感 染 疾 病 甚 至 死 亡 所 有 动 物 对 AF 均 具 有 较 高 的 敏 感 性, 低 剂 量 会 导 致 动 物 肝 脏 及 其 他 器 官 组 织 受 损, 高 剂 量 则 造 成 肝 脏 病 变 甚 至 引 起 动 物 癌 变 致 死 [1] AF 对 家 禽 生 产 性 能 的 影 响 主 要 表 现 为 采 食 量 下 降 增 重 减 缓 生 长 发 育 受 阻 死 亡 率 增 加 等 [2-3] 但 有 关 AFB 1 纯 品 对 肉 鸭 肝 细 胞 发 育 及 细 胞 免 疫 的 影 响 鲜 见 报 道 本 试 验 旨 在 通 过 在 饲 粮 中 添 加 AFB 1 纯 品, 研 究 AFB 1 对 肉 鸭 生 产 性 能 肝 脏 组 织 结 构 及 白 细 胞 介 素 -2(IL 2) 和 干 扰 素 -γ(ifn γ) 基 因 表 达 水 平 的 影 响, 探 讨 AFB 1 对 肉 鸭 免 疫 机 能 影 响 的 作 用 机 理 1 材 料 与 方 法 1.1 试 验 材 料 试 验 材 料 选 用 AFB 1 纯 品 其 为 白 色 晶 体, 购 于 以 色 列 FERMENTEK Ltd., 高 效 液 相 色 谱 (HPLC) 法 检 测 纯 度 >98% 试 验 动 物 为 双 鬼 头 肉 鸭 ( 北 京 鸭 与 麻 鸭 杂 交 1 代 ) 1.2 试 验 设 计 选 用 1 日 龄 健 康 双 鬼 头 肉 鸭 240 羽, 随 机 分 为 4 组, 每 组 6 个 重 复, 每 个 重 复 10 羽 对 照 组 饲 喂 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 国 家 科 技 支 撑 计 划 项 目 (2011BAD26B03 5 2) 作 者 简 介 : 吕 武 兴 (1977 ), 男, 湖 南 常 德 人, 博 士 研 究 生, 从 事 家 禽 营 养 与 生 理 研 究 E mail:lvwuxing2006@163.com 通 讯 作 者 : 贺 建 华, 教 授, 博 士 生 导 师,E mail:jianhuahy@hunau.net

2 4 期 吕 武 兴 等 : 黄 曲 霉 毒 素 B 1 对 肉 鸭 生 长 肝 组 织 结 构 及 免 疫 相 关 基 因 表 达 的 影 响 813 基 础 饲 粮, 试 验 Ⅰ Ⅱ 和 Ⅲ 组 饲 喂 在 基 础 饲 粮 中 分 别 添 加 和 150μg/kgAFB 1 纯 品 的 试 验 饲 粮 试 验 于 唐 人 神 集 团 研 发 中 心 家 禽 试 验 场 进 行, 试 验 期 28d(1~28 日 龄 ), 采 用 网 上 平 养 方 式 饲 养, 饲 养 管 理 按 唐 人 神 集 团 研 发 中 心 家 禽 试 验 场 管 理 程 序 执 行 饲 粮 组 成 及 营 养 水 见 表 1 表 1 饲 粮 组 成 及 营 养 水 平 ( 风 干 基 础 ) Table1 Compositionandnutrientlevelsofdiets(air drybasis) % 项 目 对 照 组 试 验 Ⅰ 组 试 验 Ⅱ 组 试 验 Ⅲ 组 Items Controlgroup TestgroupⅠ TestgroupⅡ TestgroupⅢ 原 料 Ingredients 玉 米 Corn 小 麦 Wheat 油 糠 Ricebran 豆 粕 Soybeanmeal 棉 籽 粕 Cotonseedmeal 菜 籽 粕 Rapeseedmeal 磷 酸 氢 钙 CaHPO 石 粉 Limestone 食 盐 NaCl 赖 氨 酸 Lys 蛋 氨 酸 Met 矿 物 质 预 混 料 Mineralpremix 1) 维 生 素 预 混 料 Vitaminpremix 2) 合 计 Total 营 养 水 平 Nutrientlevels 3) 代 谢 能 ME/(MJ/kg) 粗 蛋 白 质 CP 赖 氨 酸 Lys 蛋 氨 酸 Met 蛋 氨 酸 + 胱 氨 酸 Met+Cys 钙 Ca 有 效 磷 AP 粗 纤 维 CF 粗 脂 肪 EE 黄 曲 霉 毒 素 B 1 AFB 1 /(μg/kg) 4) 0(<5) 50(47) 100(102) 150(148) 1) 矿 物 质 预 混 料 为 每 千 克 饲 粮 提 供 Themineralpremixprovidedthefolowingperkgofdiets:Cu(ascoppersulfate) 20mg,Fe(asferoussulfate)90mg,Mn70mg,Zn(aszincsulfate)60mg,I0.38mg,Se0.20mg 2) 维 生 素 预 混 料 为 每 千 克 饲 粮 提 供 Thevitaminpremixprovidedthefolowingperkgofdiets:VA5000IU,VD 3 800IU, VE10IU,VK 3 1mg,VB 1 1.5mg, 核 黄 素 riboflavin6mg, 烟 酸 nicotinicacid2.2mg,d- 泛 酸 D pantothenicacid20mg, VB 6 2mg,VB mg, 生 物 素 biotin0.8mg, 叶 酸 folicacid0.8mg 3) 计 算 值 Calculatedvalues 4) 括 号 内 为 实 测 值 Measuredvaluesinthebrackets 1.3 试 验 样 品 的 采 集 试 验 结 束 时 (28 日 龄 ), 从 每 个 重 复 中 选 取 1 羽 体 重 最 接 近 平 均 体 重 的 肉 鸭, 采 用 颈 部 脱 位 法 将 肉 鸭 致 死, 并 迅 速 打 开 腹 腔, 取 2 份 肝 左 内 叶 相 同 部 位 约 2cm 2,1 份 置 于 10% 福 尔 马 林 固 定 液 中 固 定, 用 于 制 作 肝 脏 病 理 切 片 ;1 份 用 锡 箔 纸 包 裹,

3 814 动 物 营 养 学 报 25 卷 迅 速 浸 入 液 氮 中, 再 转 入 -70 冰 箱 保 存, 用 于 总 RNA 的 提 取 1.4 测 定 指 标 及 方 法 生 产 性 能 指 标 生 产 性 能 指 标 主 要 包 括 平 均 日 增 重 (ADG) 平 均 日 采 食 量 (ADFI) 和 料 重 比 (F/G), 并 记 录 试 验 期 间 肉 鸭 死 亡 情 况, 计 算 死 亡 率 肝 脏 组 织 结 构 观 察 肝 脏 组 织 病 理 切 片 : 将 固 定 的 样 品 经 水 洗 脱 水 透 明 浸 腊 以 及 包 埋 等 处 理 后, 制 成 厚 度 为 6μm 的 切 片, 苏 木 精 - 伊 红 (HE) 染 色, 生 物 光 学 显 微 镜 观 察 肝 脏 IL 2 IFN γ 基 因 表 达 水 平 测 定 肝 脏 样 品 总 RNA 的 提 取 按 Trizol 试 剂 盒 (In vitrogen) 操 作 说 明 进 行, 提 取 的 总 RNA 经 紫 外 分 光 光 度 计 测 得 A 260 /A 280 值 在 1.8~2.0, 并 且 经 1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 RNA 的 质 量 取 1.0~ 5.0μg 总 RNA, 按 AMV FirstStrandcDNA Syn thesiskit(fermentas) 操 作 说 明 逆 转 录 合 成 cdna, 并 以 此 为 模 板 采 用 实 时 荧 光 定 量 PCR 方 法 测 定 IL 2 IFN γ 基 因 mrna 表 达 水 平 按 照 SYBR PremixExTaq TM 试 剂 盒 (TaKaRa,DRR041A) 说 明 书 配 制 PCR 反 应 体 系 :SYBR 染 料 混 合 物 5μL, 上 游 引 物 (10 μmol/l) 0.3 μl, 下 游 引 物 (10μmol/L)0.3μL,cDNA 模 板 2.5μL, 加 无 菌 双 蒸 水 1.9μL 至 反 应 体 系 总 体 积 为 10μL,IL 2 的 上 下 游 引 物 序 列 分 别 为 5 GCTAATGCCAA CAACTTCCC 3 和 5 TAAGAGCATACAGTG GTCCC 3,IFN γ 的 上 下 游 引 物 序 列 分 别 为 5 GAAGTTCAGAGACCTCGTGG 3 和 5 CTG GCTCCTTTTCCTTTTGG 3, 内 参 β- 肌 动 蛋 白 (β actin) 的 上 下 游 引 物 序 列 分 别 为 5 ACCAA CACCCACACCCTTG 3 和 5 CTGATACCTTCAC CATTCCAGTTTT 3 引 物 均 由 上 海 生 物 工 程 技 术 有 限 公 司 合 成 进 行 实 时 荧 光 定 量 PCR 的 反 应, 条 件 为 : 预 热 94,5min; 然 后 94,30s;58~ 64,30s;72,45s,35 个 循 环 (ABI7900HT 型 检 测 系 统 ) 以 β actin 作 为 内 参, 对 获 得 的 信 号 数 据 进 行 处 理, 根 据 2 -ΔΔCt 法 计 算 出 目 的 基 因 相 对 于 β actin 的 比 值 1.5 数 据 处 理 采 用 SAS8.2 软 件 的 一 般 线 性 模 型 程 序 对 数 据 进 行 方 差 分 析, 结 果 以 平 均 值 ± 标 准 差 表 示 不 同 组 间 的 显 著 性 检 验 采 用 Duncan 氏 法 多 重 比 较, 以 P<0.05( 差 异 显 著 ) P<0.01( 差 异 极 显 著 ) 作 为 差 异 显 著 性 判 断 标 准 试 验 肉 鸭 死 亡 率 进 行 χ 2 检 验 2 结 果 与 分 析 2.1 AFB 1 对 肉 鸭 生 产 性 能 的 影 响 饲 粮 中 添 加 AFB 1 对 肉 鸭 平 均 日 增 重 平 均 日 采 食 量 和 料 重 比 及 死 亡 率 均 有 一 定 影 响 ( 表 2) 与 对 照 组 相 比,3 个 试 验 组 肉 鸭 末 重 分 别 下 降 了 14.67%(P<0.01) 30.38%(P<0.01) 31.83% (P<0.01), 平 均 日 采 食 量 分 别 下 降 了 11.01% (P<0.01) 22.66% (P<0.01) 24.57% (P< 0.01), 料 重 比 分 别 上 升 了 3.77% (P>0.05) 11.32%(P<0.01) 10.85%(P<0.01) 在 添 加 AFB 1 的 3 个 试 验 组 中, 随 着 AFB 1 添 加 水 平 的 上 升, 肉 鸭 末 重 平 均 日 增 重 和 平 均 日 采 食 量 均 有 降 低 趋 势, 试 验 Ⅱ 组 均 极 显 著 低 于 试 验 Ⅰ 组 (P< 0.01), 但 与 试 验 Ⅲ 组 差 异 不 显 著 (P>0.05); 试 验 Ⅱ 组 料 重 比 极 显 著 高 于 试 验 Ⅰ 组 (P<0.01), 也 与 试 验 Ⅲ 组 差 异 不 显 著 (P>0.05); 试 验 Ⅱ 组 死 亡 率 显 著 高 于 试 验 Ⅰ 组 (P<0.05), 但 显 著 低 于 试 验 Ⅲ 组 (P<0.05) 2.2 AFB 1 对 肉 鸭 肝 脏 组 织 结 构 变 化 的 影 响 通 过 观 察 肝 脏 组 织 病 理 切 片 ( 图 1) 发 现, 对 照 组 肉 鸭 肝 细 胞 形 态 正 常, 排 列 成 管 腺 状, 肝 细 胞 无 坏 死 试 验 Ⅰ 组 肝 小 叶 形 态 不 清 晰, 且 出 现 少 量 肝 细 胞 坏 死 ; 肝 细 胞 中 央 静 脉 周 围 有 少 量 细 胞 增 生 和 少 量 纤 维 结 缔 组 织 增 生, 并 从 中 央 静 脉 向 周 围 延 伸 试 验 Ⅱ 组 肝 脏 组 织 出 现 大 量 肝 细 胞 颗 粒 变 性 水 泡 变 性 及 部 分 肝 细 胞 坏 死 试 验 Ⅲ 组 肝 脏 组 织 出 现 伪 小 叶 和 大 量 肝 细 胞 坏 死, 并 有 大 量 新 生 肝 细 胞 和 胆 管 增 生 及 大 量 结 缔 组 织 增 生 此 外, 随 着 饲 粮 中 AFB 1 添 加 水 平 的 增 加,3 个 试 验 组 肉 鸭 肝 脏 组 织 病 变 程 度 逐 渐 增 加 2.3 AFB 1 对 肉 鸭 肝 脏 组 织 中 IL 2 IFN γ 基 因 mrna 表 达 水 平 的 影 响 由 表 3 可 知, 各 组 间 肝 脏 IL 2 基 因 mrna 表 达 水 平 差 异 不 显 著 (P>0.05), 但 随 着 AFB 1 添 加 水 平 的 上 升,IL 2 基 因 mrna 表 达 水 平 呈 现 下 降 的 趋 势, 与 对 照 组 相 比,3 个 试 验 组 肝 脏 中 IL 2 基 因 mrna 表 达 水 平 分 别 降 低 了 9.23% 37.80% 51.49% 试 验 Ⅱ 组 和 试 验 Ⅲ 组 肝 脏 中 IFN γ 基

4 吕武兴等 黄曲霉毒素 B1对肉鸭生长 肝组织结构及免疫相关基因表达的影响 4期 因 mrna表达水平极显著低于对照组和试验 Ⅰ 组 815 05 和试验 Ⅰ 组之间差异不显著 P 0 P 0 05 但试验 Ⅱ 组和试验 Ⅲ 组之间及对照组 表 2 AFB1 对肉鸭生产性能的影响 T b 2 E oafb1 onp o m n om du k n 项目 I m 对照组 试验Ⅰ组 试验Ⅱ组 试验Ⅲ组 Con o oup T oupⅠ T oupⅡ T oupⅢ 初重 I n w h 75±0 94 75±0 94 58±1 32 83±0 82 末重 F n w h 1365 55±34 84A 1165 25±39 56Bb 950 73±55 01C 930 94±7 09C 平均日增重 ADG 平均日采食量 ADFI 48 75±1 24A 41 60±1 41Bb 33 94±1 96C 33 23± 57C A Bb C 77 93±5 44C A 35±0 07A 103 32±3 39 Bb 料重比 F G 12±0 10 91 94±4 24 20±0 04 0 死亡率 Mo y Bb 3 33 79 91±4 57 36±0 09 13 33b 16 67 同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著 P 0 05 不同小写字母表示差异显著 P 0 05 不同大写字母 01 下表同 表示差异极显著 P 0 I n h m ow v u w hno o h m up p m nno n nd n P 0 05 wh w h ndw hd n p up p m n x d n m up p m n n nd n P 0 05 m y n nd n P 0 01 Th m b ow 图 1 肉鸭肝脏病理组织切片 F 1 H op ho o om du k n v 100 食量和平均日增重显著下降 且饲粮中 AFB1 含量 3 讨 论 k时 能 引 起 肉 鸭 AFB1 中 毒 死 亡 高 于 75μ 3 1 AFB1 对肉鸭生产性能的影响 石达友等 5 通过对 1日龄肉用雏鸭按体重口服不 肉鸭是家禽中对 AF最敏感的种类 吕武 兴 同剂量 AFB1 结果发现 AFB1 导致了雏鸭的生长 等 4 选用自然霉变玉米 AFB1 超标 饲喂肉鸭发 受阻和死亡 且随着 AFB1 剂量的升高和口服时间 现 随着饲粮中 AFB1 水平的提高 肉鸭平均日采 的延长 其对生长的减缓作用越显著 雏鸭死亡情

5 816 动 物 营 养 学 报 25 卷 [6] 况 越 严 重 Han 等 选 用 含 有 不 同 剂 量 (20 40μg/kg)AFB 1 的 霉 变 稻 米 饲 喂 肉 鸭, 结 果 发 现, 肉 鸭 采 食 量 增 重 和 料 重 比 均 显 著 降 低 本 试 验 选 用 AFB 1 纯 品 饲 喂 肉 鸭, 结 果 表 明, 饲 粮 添 加 不 同 水 平 AFB 1 均 极 显 著 降 低 了 肉 鸭 的 平 均 日 增 重 和 平 均 日 采 食 量, 添 加 μg/kgAFB 1 极 显 著 增 加 了 料 重 比 和 死 亡 率, 这 与 上 述 研 究 报 道 基 本 一 致, 但 本 试 验 中 添 加 50μg/kgAFB 1 并 未 对 料 重 比 和 死 亡 率 产 生 显 著 影 响 同 时, 本 试 验 发 现, 试 验 Ⅱ 组 (100 μg/kg 组 ) 和 试 验 Ⅲ 组 (150μg/kg 组 ) 肉 鸭 末 重 平 均 日 增 重 和 平 均 日 采 食 量 无 显 著 差 异 ; 而 且, 试 验 Ⅱ 组 和 试 验 Ⅲ 组 肉 鸭 死 亡 率 较 吕 武 兴 等 [4] (AFB 1 :75μg/kg) 和 冯 光 德 [7] (AFB 1 :120μg/kg) 的 研 究 报 道 的 结 果 低, 分 析 其 原 因, 这 可 能 与 AFB 1 的 来 源 有 关 有 研 究 表 明, 饲 喂 自 然 污 染 霉 菌 毒 素 的 饲 料 产 生 的 中 毒 症 状 往 往 比 饲 喂 单 一 霉 菌 毒 素 纯 品 的 毒 性 效 应 要 大 得 多 [8] 以 往 大 多 数 试 验 采 用 自 然 发 霉 玉 米 (AFB 1 超 标 ) 为 AFB 1 的 来 源, 而 本 试 验 选 用 AFB 1 纯 品, 在 一 定 程 度 上 避 免 了 饲 粮 中 其 他 毒 素 对 肉 鸭 的 影 响 而 在 自 然 发 霉 玉 米 中 往 往 会 存 在 多 种 霉 菌 毒 素 的 协 同 效 应, 对 动 物 健 康 和 生 产 性 能 的 影 响 比 一 种 霉 菌 毒 素 单 独 作 用 时 的 影 响 更 大 表 3 AFB 1 对 肉 鸭 肝 脏 中 IL 2 IFN γ 基 因 mrna 表 达 水 平 的 影 响 Table3 EfectsofAFB 1 onmrnaexpresionofil 2andIFN γgenesinliverofmeatducklings 项 目 对 照 组 试 验 Ⅰ 组 试 验 Ⅱ 组 试 验 Ⅲ 组 Items Controlgroup TestgroupⅠ TestgroupⅡ TestgroupⅢ 白 细 胞 介 素 -2IL ± ± ± ±0.20 干 扰 素 -γifn γ 5.84±0.51 Bb 5.01±0.49 Bb 1.94±0.30 Aa 1.79±0.31 Aa 3.2 AFB 1 对 肉 鸭 肝 脏 组 织 结 构 变 化 的 影 响 AF 是 一 种 肝 毒 素, 肝 脏 是 其 作 用 的 靶 器 官 肉 鸭 长 期 摄 入 AF 会 在 肝 脏 内 积 累, 并 导 致 肝 脏 产 [9] 生 一 系 列 病 理 变 化 侯 然 然 等 给 艾 维 茵 肉 仔 鸡 饲 喂 0.1mg/kgAFB 1 后 发 现 其 肝 脏 发 生 严 重 病 变, 肝 脏 呈 黄 褐 色, 脂 肪 含 量 增 加, 多 灶 性 出 血 以 及 肝 被 膜 表 面 覆 盖 有 网 状 物 ; 且 通 过 肝 脏 组 织 切 片 观 察 到 肝 细 胞 胞 浆 形 成 脂 肪 空 泡 肝 细 胞 广 泛 [10] 性 坏 死, 胆 管 增 生 Yaru 等 在 给 1 日 龄 肉 鸡 饲 喂 2mg/kg 的 AFB 1 后 发 现,AFB 1 改 变 了 肝 脏 基 [7] 因 表 达 而 导 致 相 关 病 变 冯 光 德 选 用 已 污 染 多 种 霉 菌 毒 素 且 AFB 1 含 量 超 标 的 自 然 霉 变 玉 米 配 制 饲 粮 饲 喂 肉 鸭, 结 果 表 明,AFB 1 会 导 致 肉 鸭 内 脏 器 官 和 肝 组 织 发 生 病 变, 引 起 肝 组 织 出 现 灶 样 坏 死, 结 缔 组 织 增 生, 肝 脏 硬 化 呈 墨 绿 色 本 试 验 通 过 肝 脏 组 织 病 理 切 片 可 见, 对 照 组 肉 鸭 肝 细 胞 形 态 正 常, 排 列 成 管 腺 状, 肝 细 胞 无 坏 死 本 试 验 表 明, 随 着 饲 粮 中 AFB 1 添 加 水 平 的 增 加, 肉 鸭 肝 脏 组 织 病 变 程 度 逐 渐 增 加, 这 与 上 述 研 究 结 果 一 致 3.3 AFB 1 对 肉 鸭 肝 脏 免 疫 相 关 基 因 表 达 的 影 响 在 家 禽 生 产 中, 由 于 摄 入 霉 菌 毒 素 而 引 起 的 临 床 中 毒 症 状, 如 急 性 死 亡 生 产 性 能 下 降 和 免 疫 抑 制 已 为 人 所 知 事 实 上, 即 使 在 不 出 现 明 显 临 床 霉 菌 毒 素 中 毒 症 状 的 低 剂 量 情 况 下, 也 会 抑 制 免 疫 功 能, 降 低 动 物 对 疾 病 的 抵 抗 力 霉 菌 毒 素 是 动 物 饲 粮 中 最 易 引 起 免 疫 抑 制 的 因 素 之 一, 但 不 同 霉 菌 毒 素 的 免 疫 抑 制 能 力 也 有 所 不 同 AF 是 毒 性 最 大 的 霉 菌 毒 素 之 一,AF 主 要 通 过 细 胞 免 疫 和 噬 菌 细 胞 功 能 来 抑 制 免 疫 功 能 IL 2 和 IFN γ 是 Th1 细 胞 分 泌 的 主 要 细 胞 因 子, 二 者 主 要 参 与 细 胞 免 疫, 肿 瘤 免 疫 及 迟 发 型 超 敏 性 炎 症 的 形 成 IL 2 和 IFN γ 等 细 胞 因 子 表 达 的 变 化 常 被 作 为 评 [11] 价 免 疫 功 能 状 态 的 一 个 重 要 方 面 Jiang 等 研 究 结 果 表 明, 高 剂 量 的 AFB 1 在 对 人 细 胞 免 疫 的 影 响 中 也 可 以 诱 发 细 胞 免 疫 的 损 伤, 最 终 减 弱 宿 主 [12] 对 感 染 的 抵 抗 力 邢 凌 霄 等 研 究 探 讨 了 5 种 不 同 剂 量 ( mg/L) 杂 色 曲 霉 素 对 体 外 培 养 的 小 鼠 脾 细 胞 IL 2 及 IFN γ 基 因 表 达 水 平 的 影 响, 结 果 表 明, 杂 色 曲 霉 素 能 不 同 程 度 地 引 起 小 鼠 脾 细 胞 IL 2 及 IFN γ 基 因 表 达 的 改 变, 较 大 剂 量 (1 2mg/L) 组 显 著 抑 制 了 其 表 达 有 关 实 验 室 动 物 的 研 究 证 实, 单 端 孢 霉 烯 既 可 以 是 免 疫 抑 制 剂, 也 可 以 是 免 疫 促 进 剂, 这 取 决

6 4 期 吕 武 兴 等 : 黄 曲 霉 毒 素 B 1 对 肉 鸭 生 长 肝 组 织 结 构 及 免 疫 相 关 基 因 表 达 的 影 响 817 于 单 端 孢 霉 烯 摄 入 的 方 式 和 剂 量, 并 结 合 体 内 外 试 验 表 明, 采 食 含 有 低 水 平 单 端 孢 霉 烯 的 饲 粮 能 促 进 多 种 不 同 细 胞 因 子 和 促 炎 症 基 因 的 表 达 [13] 本 试 验 结 果 表 明, 随 着 AFB 1 添 加 水 平 的 增 加, 肝 脏 中 IL 2 和 IFN γ 基 因 mrna 表 达 水 平 均 在 一 定 程 度 上 下 降, 其 中 试 验 Ⅱ 组 和 试 验 Ⅲ 组 均 极 显 著 下 降, 这 可 能 是 由 于 肉 鸭 摄 入 一 定 量 的 AFB 1 后, AFB 1 抑 制 了 肝 脏 组 织 细 胞 免 疫 相 关 基 因 IL 2 和 IFN γ 的 表 达 4 结 论 1 饲 粮 中 添 加 不 同 水 平 AFB 1 极 显 著 降 低 了 肉 鸭 的 平 均 日 增 重 和 平 均 日 采 食 量, 造 成 了 肝 脏 组 织 病 变, 且 随 着 饲 粮 中 AFB 1 含 量 的 增 加, 肉 鸭 肝 脏 组 织 病 变 程 度 逐 渐 增 加 其 中 μg/kgAFB 1 也 极 显 著 增 加 了 料 重 比, 显 著 增 加 了 死 亡 率 2 AFB 1 在 一 定 程 度 上 下 调 了 肝 脏 中 免 疫 相 关 基 因 IL 2 和 IFN γ 的 表 达, 从 而 影 响 了 肉 鸭 机 体 的 免 疫 水 平 其 中 μg/kgAFB 1 极 显 著 下 调 了 IFN γ 基 因 mrna 的 表 达 参 考 文 献 : [1] 计 成, 赵 丽 红. 黄 曲 霉 毒 素 生 物 降 解 的 研 究 及 前 景 展 望 [J]. 动 物 营 养 学 报,2010,22(2): [2] CHENGYH,SHENTF,PANGVF,etal.Efectsof aflatoxinandcarotenoidsongrowthperformanceand immuneresponseinmuleducklings[j].comparative BiochemistryandPhysiology(PartC):Toxicology& Pharmacology,2001,128(1): [3] ZAGHINIA,MARTELLIG,RONCADA P,etal. MannanoligosaccharidesandaflatoxinB 1 infeedfor layinghens:efectsoneggquality,aflatoxinb 1 and M 1 residuesineggs,andaflatoxinb 1 levelsinliver [J].PoultryScience,2005,84(6): [4] 吕 武 兴, 汪 前 红, 贺 建 华, 等. 黄 曲 霉 毒 素 B 1 与 吸 附 剂 对 肉 鸭 生 长 及 禽 流 感 疫 苗 免 疫 的 影 响 [J]. 动 物 营 养 学 报,2010,22(2): [5] 石 达 友, 李 鹏 飞, 郭 铭 生, 等. 不 同 剂 量 黄 曲 霉 毒 素 B 1 对 雏 鸭 生 长 的 影 响 [J]. 中 国 兽 医 杂 志,2010,46 (4): [6] HANXY,HUANG Q C,LIW F,etal.Changesin growthperformance,digestiveenzymeactivitiesand nutrientdigestibilityofcheryvaleyducksinreponse toaflatoxinb 1 levels[j].livestockscience,2008, 119(1): [7] 冯 光 德. 自 然 霉 变 玉 米 对 肉 鸭 生 产 性 能 和 消 化 生 理 的 影 响 及 机 制 研 究 [D]. 博 士 学 位 论 文. 雅 安 : 四 川 农 业 大 学,2010: [8] SWAMYH V,SMITH TK,MACDONALD EJ,et al.efectsoffeedingablendofgainsnaturalycon taminatedwithfusarium mycoxinsonswineperform ance,brainregionalneurochemistry,andserum chem istryandtheeficacyofapolymericglucomannanmy cotoxinadsorbent[j].journalofanimalscience. 2002,80(12): [9] 侯 然 然, 郑 姗 姗, 张 敏 红, 等. 葡 甘 露 聚 糖 对 饲 喂 黄 曲 霉 毒 素 B 1 饲 粮 肉 仔 鸡 生 长 性 能 血 清 指 标 及 器 官 指 数 的 影 响 [J]. 动 物 营 养 学 报,2008,20(2): [10] YARRULP,SETTIVARIRS,ANTONIOUE.Toxi cologicalandgeneexpresionanalysisoftheimpactof aflatoxinb 1 onhepaticfunctionofmalebroilerchicks [J].PoultryScience,2009,88(2): [11] JIANGY,JOLLY PE,ELLISW O,etal.Aflatoxin B 1 albuminadductlevelsandcelularimmunestatusin Ghanaians[J].InternationalImmunology,2005,17 (6): [12] 邢 凌 霄, 张 祥 宏, 李 月 红, 等. 杂 色 曲 霉 素 对 小 鼠 脾 细 胞 IL 2 及 IFN γ 分 泌 和 表 达 的 影 响 [J]. 中 国 病 理 生 理 杂 志,2004,20(3): [13] BONDY G S,PESTKA JJ.Immunomodulationby fungaltoxins[j].journaloftoxicologyandenviron mentalhealth:partb,2000,3(2):

7 818 动 物 营 养 学 报 25 卷 AflatoxinB 1 AfectsGrowth,LiverTisueStructureandImmune RelatedGeneExpresionofMeatDucklings LVWuxing 1,2 HEJianhua 1 SONGHongguo 1 LIUMinmin 1 JINXueli 1 LIJunbo 1,2 (1.ColegeofAnimalScienceandTechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China;2.Researchand DevelopmentCenterofTangrenshenGroup,Zhuzhou412007,China) Abstract:TheobjectiveofpresentstudywastoresearchtheefectsofaflatoxinB 1 (AFB 1 )onthegrowth,liv ertisuestructure,andtheexpresionofinterleukin 2(IL 2)andinterferon γ(ifn γ)genesofmeatduck lings.a totalof240healthyshuangguitoumeatducklingsaged1daywererandomlyalotedto4groupswith 6replicatesineachgroupand10ducklingsineachreplicate.Theexperimentwasconductedforfourweeks. Theducklingsincontrolgroupwerefedabasaldiet,andthoseintestgroupsⅠ,Ⅱ andⅢ werefedthebasal dietwith50,100and150μg/kgafb 1,respectively.Theducklingswereweighedandtheconsumptionof feedwascalculated.atday28,ducklingsfrom eachgroupwererandomlysampledandslaughteredfordeter miningpathologicalsectionandtheexpresionofil 2andIFN γgenes.theresultsshowedasfolows:1)the supplementationofafb 1 significantlydecreasedaveragedailygain(adg)andaveragedailyfeedintake (ADFI)ofducklings(P<0.01).Comparedwiththecontrolgroup,thefinalbodyweightoftestgroupsⅠ, Ⅱ andⅢ wassignificantlydecreasedby14.67% (P<0.01),30.38% (P<0.01)and31.83% (P< 0.01).Thesupplementationof100and150μg/kgAFB 1 significantlyincreasedfeed/gain(f/g)(p< 0.01),andsignificantlyincreasedmortality(P<0.05).2)WiththeincreaseofAFB 1 supplementallevel, thepathologicalchangesinliverweremoreandmoreserious,andthemrna expresionofil 2andIFN γ genesinliverwasreducedtosomedegree,andthesupplementationof100and150μg/kgafb 1 significantly decreasedthemrnaexpresionofifn γgeneinliver(p<0.05).inconclusion,thesupplementationof AFB 1 candecreaseperformanceandinducepathologicalchangesinliver,anddecreasetheexpresionofil 2 andifn γgenesinliver,andthencausetheimmunosuppresionofducklings.[chinesejournalofanimal Nutrition,2013,25(4): ] Keywords:AFB 1 ;performance;livertisue;il 2gene;IFN γgene;ducklings Corespondingauthor,profesor,E mail:jianhuahy@hunau.net ( 编 辑 何 丽 霞 )

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