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1 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2012, 39(2):188~193 小 鼠 对 量 子 点 的 透 皮 吸 收 和 代 谢 * 唐 蕾 张 春 玲 2)** 宋 光 明 徐 忠 伟 金 迅 ( 中 国 人 民 武 装 警 察 部 队 医 学 院, 天 津 ; 2) 南 开 大 学 物 理 科 学 学 院, 天 津 摘 要 皮 肤 是 身 体 的 最 大 器 官, 能 够 直 接 与 含 纳 米 材 料 的 防 晒 霜 化 妆 品 等 接 触, 但 是 人 们 对 纳 米 材 料 的 皮 肤 渗 透 性 却 了 解 不 多. 本 文 研 究 了 水 溶 性 硫 硒 化 镉 (CdSeS) 量 子 点 纳 米 颗 粒 的 皮 肤 渗 透 性 和 在 体 内 的 代 谢 情 况. 将 雄 性 ICR 鼠 背 部 脱 毛, 在 脱 毛 部 位 涂 抹 直 径 约 为 5nm 发 光 波 长 为 620 nm 的 量 子 点 0.32 nmol, 然 后 检 测 皮 肤 和 心 肝 脾 肺 肾 中 量 子 点 沉 积 量 随 时 间 的 变 化 情 况. 荧 光 显 微 像 显 示, 量 子 点 能 够 堆 积 在 皮 肤 的 表 皮 层 中 和 真 皮 层 的 毛 囊 和 腺 体 中, 电 感 耦 合 等 离 子 体 质 谱 (inductively coupled plasma-mass spectrometry,icp-ms) 结 果 表 明, 透 皮 吸 收 的 量 子 点 能 够 沉 积 在 器 官 中, 并 且 肝 和 肾 中 沉 积 的 量 子 点 代 谢 缓 慢, 涂 抹 量 子 点 5 天 之 后, 肾 脏 中 残 存 的 镉 离 子 浓 度 仍 超 过 14 ng/g. 这 些 结 果 表 明, 量 子 点 能 够 被 小 鼠 透 皮 吸 收, 而 且 对 肝 和 肾 产 生 严 重 影 响. 关 键 词 量 子 点, 纳 米 颗 粒, 透 皮 吸 收, 代 谢 路 径,ICP-MS 学 科 分 类 号 Q6,R36 DOI: /SP.J 半 导 体 量 子 点 是 直 径 介 于 2~ 100nm 的 半 导 体 纳 米 材 料, 通 常 由 芋 ~ 吁 族 或 者 域 ~ 遇 族 元 素 制 备 而 成. 量 子 点 具 有 激 发 光 波 段 范 围 宽 发 射 光 谱 宽 度 窄 荧 光 强 度 高 稳 定 性 好 而 且 寿 命 较 长 等 优 点, 与 传 统 的 有 机 染 料 相 比 具 有 明 显 的 优 越 性. 因 此, 目 前 量 子 点 在 生 物 学 和 医 学 领 域 中 最 具 前 景 的 [1-2] 应 用 是 作 为 荧 光 标 记 物. 但 是 量 子 点 中 常 含 有 Cd 2+ Se 2- 和 Te 2- 等 离 子, 对 机 体 的 肾 脏 和 肺 脏 都 有 毒 性. 通 过 在 量 子 点 外 包 覆 外 壳, 可 以 降 低 重 金 属 离 子 在 体 内 的 释 放, 还 可 以 结 合 某 些 功 能 基 团, 如 巯 基 亲 和 素 等, 使 量 子 点 能 够 与 生 物 分 子 结 合 并 有 较 好 的 生 物 兼 容 性. 但 是, 即 使 量 子 点 的 组 成 元 素 中 不 含 重 金 属 离 子, 量 子 点 自 身 的 小 尺 寸 对 生 物 [3] 体 的 危 害 性 仍 有 待 验 证, 量 子 点 的 潜 在 毒 性 研 究 引 起 了 人 们 越 来 越 多 的 重 视. 然 而, 目 前 多 数 量 子 [4-5] 点 毒 理 学 研 究 集 中 在 量 子 点 的 细 胞 毒 性 方 面, 对 活 体 动 物 的 毒 性 研 究 相 对 缺 乏. 皮 肤 是 身 体 最 大 的 器 官, 对 于 外 部 污 染 是 一 道 有 效 的 天 然 屏 障, 但 是 皮 肤 同 时 是 纳 米 多 孔 半 透 膜, 纳 米 颗 粒 有 可 能 穿 透 这 种 纳 米 多 孔 膜. 因 为 皮 肤 可 能 直 接 接 触 含 有 纳 米 材 料 的 药 膏 化 妆 品 等, 例 如 防 晒 霜 之 类 的 产 品 中 一 般 含 有 二 氧 化 钛 或 者 氧 化 锌 的 纳 米 颗 粒, 化 妆 品 口 红 中 含 有 氧 化 铁 纳 米 颗 粒, 因 此 纳 米 材 料 对 皮 肤 的 渗 透 性 是 判 定 纳 米 材 料 [6] 毒 性 的 重 要 依 据. 量 子 点 属 于 半 导 体 类 纳 米 颗 粒, 具 有 优 异 的 光 学 特 性, 当 涂 抹 于 皮 肤 上 后, 可 以 通 过 检 测 荧 光 进 行 量 子 点 皮 肤 渗 透 性 研 究. 扩 散 池 试 验 表 明, 直 径 4.6nm 的 球 形 量 子 点 QD655 和 8.4 nm 伊 5.78 nm 的 钉 状 量 子 点 QD621 都 能 够 穿 透 完 整 的 猪 皮, 而 包 覆 羧 酸 的 直 径 为 12 nm 伊 6nm 的 [6-7] 椭 球 形 量 子 点 QD655 无 法 穿 透 皮 肤. 在 本 文 中, 我 们 直 接 在 ICR 小 鼠 背 部 皮 肤 上 涂 抹 量 子 点 材 料, 分 析 量 子 点 材 料 对 活 体 小 鼠 皮 肤 的 渗 透 性 以 及 在 小 鼠 体 内 的 代 谢 路 径, 研 究 量 子 点 材 料 的 生 物 毒 性. 1 试 验 过 程 1 援 1 量 子 点 材 料 本 项 研 究 中 所 使 用 的 量 子 点 材 料 购 于 天 津 游 瑞 量 子 点 有 限 公 司. 量 子 点 的 核 为 硫 硒 化 镉 (CdSeS). * 中 国 人 民 武 装 警 察 部 队 医 学 院 重 点 项 目 (WYZ201003). ** 通 讯 联 系 人. Tel: , zhangchl@nankai.edu.cn 收 稿 日 期 : , 接 受 日 期 :

2 2012; 39 (2) 唐 蕾, 等 : 小 鼠 对 量 子 点 的 透 皮 吸 收 和 代 谢 189 在 碱 性 介 质 下, 硅 试 剂 在 量 子 点 外 形 成 硅 氧 网 络 结 构. 通 过 进 一 步 将 硅 氧 网 络 结 构 最 外 层 水 解 成 硅 羟 基, 油 溶 性 量 子 点 将 转 变 成 水 溶 性 量 子 点, 同 时 降 低 量 子 点 的 毒 性.Tecnai G2 F20 场 发 射 投 射 电 子 显 微 镜 (transmission electron microscope, TEM) 测 得 量 子 点 的 平 均 粒 径 为 5nm, 如 图 1 所 示. 荧 光 光 谱 仪 测 得 量 子 点 的 发 光 峰 值 为 620nm. 5nm Fig. 1 TEM picture of QDs used in this study The averagesize is5nm in diameter. 试 验 所 用 水 溶 性 量 子 点 的 浓 度 为 4 滋 mol/l, ph 值 为 8.0. 使 用 前 量 子 点 溶 液 放 置 在 4 的 冰 箱 中 避 光 保 存, 使 用 时 先 用 超 声 波 超 声 震 荡 2min, 以 保 证 量 子 点 的 分 散 性. 为 了 检 测 量 子 点 荧 光 强 度 的 稳 定 性, 将 40 滋 l 的 量 子 点 溶 液 滴 在 载 玻 片 上, 放 于 动 物 饲 养 室 的 饲 养 架 上, 每 天 对 相 同 位 置 进 行 一 次 荧 光 显 微 镜 拍 照, 并 且 拍 照 时 使 用 相 同 的 曝 光 时 间. 荧 光 图 片 显 示, 相 邻 2 天 的 荧 光 强 度 无 明 显 区 别. 直 接 比 较 滴 加 量 子 点 溶 液 6h 和 7 天 之 后 的 荧 光 图 像, 如 图 2a 和 b, 发 现 7 天 之 后 荧 光 强 度 和 6h 之 后 的 荧 光 强 度 相 比 略 有 减 少. 因 此 可 以 得 出 结 论, 在 动 物 饲 养 室 的 温 度 和 光 照 情 况 下, 载 玻 片 上 量 子 点 的 荧 光 强 度 比 较 稳 定. (a) (b) Fig. 2 Fluorescence images of aglass slide 6h(a) and 7days (b) after coating with QD solutions Thefluorescence imageswere takenwith the sameexposuretime. 员 援 2 活 体 动 物 准 备 实 验 中 所 用 动 物 为 雄 性 ICR 鼠, 体 重 约 25 g, 购 于 军 事 医 学 科 学 院 实 验 动 物 中 心. 试 验 前 用 戊 巴 比 妥 将 动 物 麻 醉, 小 心 地 用 弯 尖 手 术 剪 刀 剪 掉 小 鼠 背 毛, 然 后 用 温 水 浸 湿 的 医 用 纱 布 擦 拭 剃 毛 部 位, 在 剃 毛 部 位 涂 抹 高 级 脱 毛 膏,3 min 后 再 用 温 水 浸 湿 的 医 用 纱 布 仔 细 擦 掉 脱 毛 膏, 让 皮 毛 自 然 风 干 即 可 完 成 脱 毛 工 作, 脱 毛 皮 肤 面 积 约 为 1.5 cm 2. 在 光 学 显 微 镜 下 观 察 脱 毛 的 皮 肤 部 分 是 否 有 损 伤, 挑 选 没 有 损 伤 的 小 鼠 饲 养 在 装 有 消 毒 锯 末 的 饲 养 笼 中, 放 于 通 风 的 动 物 饲 养 室. 1 援 3 涂 抹 量 子 点 取 6 只 脱 毛 小 鼠 不 涂 抹 量 子 点 做 为 对 照 组, 剩 余 小 鼠 脱 毛 24 h 之 后 再 次 用 戊 巴 比 妥 麻 醉, 在 每 只 小 鼠 脱 毛 部 位 均 匀 涂 抹 80 滋 l 的 量 子 点 溶 液 ( 折 合 含 量 子 点 0.32 nmol), 让 其 自 然 风 干. 为 防 止 小 鼠 苏 醒 后 互 相 挤 蹭 涂 抹 量 子 点 的 部 位, 将 它 们 每 只 各 放 在 一 个 饲 养 笼 内 单 独 饲 养. 1 援 4 血 浆 和 器 官 采 样 取 涂 抹 量 子 点 后 和 120 h 做 为 观 察 时 间 点. 在 每 个 观 察 时 间 点 分 别 取 6 只 涂 抹 量 子 点 的 小 鼠, 在 荧 光 灯 下 拍 摄 照 片, 然 后 将 其 脱 颈 处 死. 从 每 只 小 鼠 眼 睛 静 脉 血 管 各 取 血 约 1.0ml, 混 合 后 放 入 肝 素 化 防 凝 血 试 管 中, 然 后 取 涂 抹 量 子 点 部 位 的 皮 肤 和 心 肝 脾 肺 肾. 最 后 6 只 对 照 组 小 鼠 也 进 行 脱 颈 处 死, 进 行 血 液 和 器 官 采 样. 1 援 5 组 织 定 位 为 了 评 估 量 子 点 在 皮 肤 和 器 官 中 的 沉 积 情 况, 对 皮 肤 和 器 官 进 行 病 理 检 查. 用 手 术 剪 刀 剪 下 涂 抹 量 子 点 部 位 皮 肤 后, 立 即 用 镊 子 展 平 放 入 预 先 滴 在 冰 块 上 的 包 埋 剂 中, 冷 冻 得 到 皮 肤 样 品 块. 将 心 肝 脾 肺 肾 每 种 器 官 切 成 两 半, 其 中 一 半 放 入 滴 在 冰 块 上 的 包 埋 剂 中, 冷 冻 得 到 器 官 样 品 块. 将 皮 肤 和 器 官 样 品 块 用 冷 冻 切 片 机 进 行 连 续 切 片, 切 片 厚 度 为 10 滋 m. 为 防 止 切 片 时 量 子 点 沾 污, 每 切 一 片 样 品 后 都 用 干 净 丝 绸 擦 拭 刀 片. 在 制 备 皮 肤 切 片 时, 每 次 都 让 切 片 刀 从 真 皮 层 向 表 皮 层 方 向 进 刀, 防 止 量 子 点 被 切 片 刀 从 皮 肤 表 面 拽 到 真 皮 层. 序 数 为 奇 数 的 切 片 进 行 HE 染 色, 用 光 学 显 微 镜 观 测 样 品 结 构. 序 数 为 偶 数 的 切 片 粘 到 载 玻 片 上 后 用 丙 酮 固 定, 通 过 荧 光 显 微 镜 观 察 切 片 上 量 子 点 的 荧 光.

3 190 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展 Prog. Biochem. Biophys. 2012; 39 (2) 1 援 6 DAPI 染 色 涂 抹 在 皮 肤 表 面 的 量 子 点, 一 部 分 可 能 被 透 皮 吸 收, 另 一 部 分 风 干 之 后 会 留 在 皮 肤 表 面. 为 了 确 定 皮 肤 表 面 的 荧 光 是 源 于 渗 透 进 入 皮 肤 的 量 子 点 还 是 风 干 后 停 留 在 皮 肤 表 面 的 量 子 点, 我 们 对 涂 抹 量 子 点 溶 液 1h 和 6h 之 后 的 皮 肤 切 片 进 行 了 DAPI 染 色. 因 为 通 过 DAPI 染 色 可 以 确 定 皮 肤 细 胞 的 位 置, 所 以 皮 肤 细 胞 以 上 的 荧 光 肯 定 是 源 于 风 干 后 停 留 在 皮 肤 表 面 的 量 子 点, 细 胞 之 间 的 荧 光 一 定 源 于 渗 透 进 入 皮 肤 的 量 子 点. 1 援 7 Cd 含 量 分 析 通 过 电 感 耦 合 等 离 子 体 质 谱 (ICP-MS) 测 定 各 种 器 官 中 Cd 离 子 含 量 随 时 间 的 变 化 情 况, 可 以 判 断 量 子 点 在 体 内 的 代 谢 路 径. 为 测 定 血 液 中 镉 含 量, 将 放 入 肝 素 化 防 凝 血 试 管 中 的 血 浆 以 2000 r/min 离 心 10 min, 取 上 清 液 得 到 血 清 样 品. 将 对 照 组 和 h 时 采 集 的 6 只 小 鼠 的 另 一 半 心 肝 脾 肺 肾 各 分 成 3 组, 每 组 2 只 小 鼠 的 相 同 器 官 分 别 合 在 一 起, 称 重 后 放 在 玻 璃 研 磨 器 中, 加 入 1ml 蒸 馏 水 研 磨, 得 到 器 官 样 品 的 匀 浆 液. 血 清 和 器 官 匀 浆 液 用 4 1 的 硝 酸 和 高 氯 酸 混 合 酸 溶 液 消 解, 制 成 ICP-MS 的 样 品, 然 后 放 入 ICP-MS 的 进 样 室 进 行 Cd 离 子 含 量 测 定. 2 结 果 和 讨 论 2 援 1 活 体 皮 肤 表 面 荧 光 观 测 涂 抹 量 子 点 溶 液 的 小 鼠 皮 肤 部 位 自 然 风 干 之 后, 在 日 光 下 和 未 涂 抹 量 子 点 的 皮 肤 部 位 颜 色 基 本 相 同, 但 是 在 荧 光 灯 下, 涂 抹 量 子 点 的 皮 肤 部 位 显 现 明 亮 的 红 色 荧 光. 图 3a 和 b 为 2 只 小 鼠 涂 抹 量 子 点 24 h 和 48h 之 后, 在 波 长 为 352nm 荧 光 灯 下 的 图 像, 它 们 的 脱 毛 部 位 都 可 见 明 亮 的 红 色 荧 光. (a) (b) 整 体 来 说, 涂 抹 量 子 点 后 较 长 时 间 内 红 色 荧 光 都 会 比 较 明 显, 但 是 荧 光 强 度 逐 渐 减 弱. 因 为 量 子 点 优 于 普 通 有 机 染 料 之 一 就 是 荧 光 不 易 淬 灭, 我 们 前 面 的 试 验 也 证 明 所 使 用 的 量 子 点 在 动 物 饲 养 室 的 温 度 和 光 照 条 件 下 荧 光 强 度 非 常 稳 定, 相 邻 2 天 量 子 点 荧 光 强 度 基 本 相 同. 因 此, 荧 光 强 度 减 弱 可 能 是 由 于 量 子 点 对 皮 肤 具 有 一 定 穿 透 性, 一 部 分 量 子 点 渗 透 到 体 内, 导 致 表 面 残 余 量 子 点 减 少, 致 使 荧 光 强 度 减 弱. 另 一 方 面, 在 饲 养 过 程 中, 小 鼠 皮 肤 与 鼠 笼 锯 末 接 触, 部 分 量 子 点 被 磨 擦 掉 也 会 导 致 荧 光 强 度 减 弱. 2 援 2 小 鼠 皮 肤 结 构 小 鼠 皮 肤 截 面 切 片 经 HE 染 色 后 置 于 光 学 显 微 镜 下 观 测. 图 4 所 示 为 涂 抹 量 子 点 溶 液 1h 和 6h 之 后 的 小 鼠 皮 肤 截 面 切 片. 可 见, 经 HE 染 色 之 后, 小 鼠 皮 肤 结 构 可 清 晰 分 辨. 在 图 4a 的 皮 肤 切 片 中 含 大 量 的 汗 腺, 包 括 汗 腺 分 泌 部 (1 ) 和 汗 腺 导 管 (2 ). 图 4b 中, 上 面 深 色 部 位 为 表 皮 层 (E), 其 中 细 胞 比 较 密 集, 下 面 浅 色 部 位 为 真 皮 层 (D), 最 下 面 脂 肪 颗 粒 (F) 清 晰 可 见. 真 皮 层 中 有 毛 囊 (H), 毛 囊 两 侧 为 皮 脂 腺 (S). 由 于 小 鼠 皮 肤 较 薄, 因 此 无 法 清 晰 判 断 角 质 层 的 厚 度. (a) 于 淤 Fig. 4 Optical microscopy images of skin slices of two mice after HE dyeing 1h(a) and 6h(b) after coating with QD solutions. Note the secretion sites 1 and catheters 2 of sweat glands in figure (a) and the epidermis (E), dermis (D), fat particles (F), hair follicles (H) and sebaceous glands (S)in figure (b). 淤 (b) 于 于 100 滋 m F 100 滋 m S H E D Fig. 3 Fluorescence images of two mice 24 h(a) and 48 h(b) after coating with QD solutions 2 援 3 组 织 中 量 子 点 荧 光 观 测 为 了 观 测 量 子 点 溶 液 涂 抹 到 皮 肤 上 之 后, 量 子 点 在 皮 肤 表 面 的 渗 透 情 况 和 在 器 官 中 的 沉 积 情 况, 对 皮 肤 和 器 官 的 冷 冻 切 片 进 行 荧 光 观 测. 而 且, 为 了 判 定 皮 肤 切 片 中 接 近 皮 肤 表 面 的 荧 光 到 底 来 自 渗 透 进 皮 肤 的 量 子 点 还 是 在 皮 肤 表 面 风 干 的 量 子 点, 对 1h 和 6h 的 皮 肤 切 片 还 进 行 了 DAPI 染 色, 图 5

4 2012; 39 (2) 唐 蕾, 等 : 小 鼠 对 量 子 点 的 透 皮 吸 收 和 代 谢 191 所 示 为 对 应 的 检 测 结 果. 图 5a1~ a4 为 1h 切 片 的 检 测 结 果, 图 5b1~ b4 为 6h 切 片 的 检 测 结 果, 两 行 中 1 为 明 场 像,2 为 DAPI 像,3 为 量 子 点 荧 光 像,4 为 DAPI 像 和 量 子 点 荧 光 像 的 叠 加 像. 由 于 观 察 荧 光 的 切 片 没 有 用 封 片 剂 封 片, 导 致 样 品 结 构 有 损 坏. 但 是 通 过 参 考 HE 染 色 的 皮 肤 结 构 图, 并 且 对 比 明 场 像 和 DAPI 像, 可 知 图 5a2 和 图 5b2 上 部 密 集 的 蓝 色 光 点 对 应 皮 肤 的 表 皮 层, 下 部 密 集 的 蓝 色 光 点 对 应 真 皮 层 中 的 毛 囊 和 腺 体, 因 此, 对 比 2 和 3 可 以 判 断 量 子 点 主 要 聚 集 在 皮 肤 表 层 附 近, 并 且 在 毛 囊 和 皮 脂 腺 汗 腺 附 近 有 少 量 的 聚 集. 为 了 更 清 楚 地 判 断 皮 肤 表 面 附 近 量 子 点 的 具 体 位 置, 对 图 5a4 和 b4 近 皮 肤 表 面 放 大 如 图 5c 和 d. 图 5c 中 上 部 密 集 的 蓝 色 光 点 为 皮 肤 表 皮 层 的 细 胞, 量 子 点 的 红 色 荧 光 主 要 位 于 密 集 的 蓝 色 光 点 之 上, 因 此 可 以 判 定, 涂 抹 量 子 点 溶 液 1h 之 后, 量 子 点 主 要 位 于 表 皮 层 的 上 部, 渗 透 进 入 表 皮 层 的 量 子 点 比 较 少. 图 5d 中 红 色 荧 光 已 经 和 蓝 色 光 点 大 范 围 交 叠, 因 此 可 以 判 定, 涂 抹 量 子 点 溶 液 6h 之 后, 大 量 的 量 子 点 已 经 进 入 表 皮 层. 通 过 对 比 两 幅 图, 可 知 随 着 时 间 延 长, 量 子 点 能 够 渗 透 进 入 完 整 的 皮 肤. 图 5a4 和 b4 的 中 下 部 显 示, 量 子 点 聚 集 在 毛 囊 附 近, 这 可 能 是 由 于 毛 囊 和 皮 脂 腺 汗 腺 在 皮 肤 表 面 有 开 口, 纳 米 尺 寸 的 量 子 点 材 料 容 易 通 过 它 们 在 皮 肤 表 面 的 开 口 进 入 并 堆 积 在 毛 囊 和 皮 脂 腺 汗 [8] 腺 中. 这 与 Alvarez-Roman 等 观 察 到 的 纳 米 颗 粒 聚 集 在 毛 囊 开 口 的 现 象 相 似. (a Optical image (a2) DAPIimage QDsfluorescence image (a3) DAPI+QDsimage (a4) 50 滋 m (b (b2) (b3) (b4) 50 滋 m (c) (d) Fig. 5 Microscopy images of skin slices 1h and 6hafter coating with QD solutions (a~(a4) 1hafter coating QD solutions. (b~(b4) 6hafter coating QDsolutions. In the two rows, 1is the optical microscopy image, 2is the DAPI image, 3isthe QDs fluorescence image, 4isthe overlay ofdapi image and fluorescence of QDs. (c) and (d) are the higher magnification of parts near skin surface in (a4)and (b4). 在 皮 肤 和 器 官 切 片 中 未 观 察 到 单 个 的 量 子 点, 这 可 能 是 由 于 量 子 点 的 尺 寸 为 纳 米 量 级, 普 通 的 荧 光 显 微 镜 无 法 达 到 纳 米 量 级 的 分 辨 率. 但 是 从 理 论 上 来 说, 在 皮 肤 和 器 官 中 必 定 存 在 量 子 点, 这 是 因

5 192 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展 Prog. Biochem. Biophys. 2012; 39 (2) 为 猪 皮 的 角 质 细 胞 的 间 距 是 19 nm [7], 虽 然 小 鼠 的 细 胞 间 距 会 略 小, 但 是 我 们 所 选 用 的 量 子 点 粒 径 约 为 5nm, 因 此, 量 子 点 完 全 有 可 能 扩 散, 通 过 细 胞 间 隙 穿 透 皮 肤, 进 而 通 过 血 液 循 环 进 入 体 内 脏 器. 2 援 4 Cd 离 子 含 量 在 固 定 时 间 点 取 小 鼠 血 液 和 心 肝 脾 肺 肾 制 备 样 品 液, 利 用 ICP-MS 进 行 镉 含 量 检 测, 检 测 结 果 如 图 6 所 示. 从 检 测 数 据 可 以 看 出, 涂 抹 量 子 点 后 心 和 肺 中 镉 离 子 含 量 变 化 不 大, 但 是 在 肝 脾 和 肾 中 镉 离 子 含 量 明 显 增 加, 经 过 120 h 之 后, 肝 肾 中 堆 积 量 最 大. 这 是 由 于 涂 抹 在 皮 肤 表 面 的 量 子 点 对 皮 肤 具 有 一 定 的 渗 透 性, 进 入 皮 肤 真 皮 层 的 量 子 点 通 过 血 液 循 环 进 入 体 内 脏 器, 但 是 各 种 脏 器 对 量 子 点 的 吸 收 和 代 谢 不 同, 堆 积 在 肝 和 肾 中 的 量 子 点 未 能 通 过 代 谢 有 效 排 出 体 外, 而 脾 内 堆 积 的 量 子 点 能 够 较 快 代 谢 减 少 Fig Serum Heart Liver Spleen Lung Kidney The average concentrations of Cd atoms in serum and the main organs at different time intervals :Control; :1h; :6h; :12 h; :24 h; :120h. 本 实 验 中, 肝 脾 和 肾 中 镉 的 含 量 随 时 间 缓 慢 增 加, 然 后 缓 慢 减 小, 这 与 Chen 等 [9] 报 道 的 器 官 中 镉 离 子 含 量 快 速 增 加 然 后 迅 速 减 少 的 趋 势 不 同. 分 析 认 为, 这 是 由 于 Chen 等 采 用 的 是 尾 部 静 脉 注 射 量 子 点 溶 液 的 方 式, 血 液 中 镉 离 子 含 量 随 着 注 射 迅 速 增 加. 然 而 在 我 们 的 研 究 中, 量 子 点 溶 液 涂 抹 在 小 鼠 皮 肤 上, 存 在 一 个 缓 慢 渗 透 的 过 程, 而 且, 量 子 点 溶 液 自 然 风 干 之 后, 小 鼠 皮 肤 上 分 泌 的 汗 液 和 皮 脂 也 会 促 进 量 子 点 的 进 一 步 渗 透. 因 此, 涂 抹 量 子 点 的 方 法 相 对 来 说 是 一 个 缓 释 的 过 程. 3 结 论 皮 肤 是 人 体 的 最 大 器 官, 对 外 界 污 染 物 具 有 天 然 屏 障 作 用. 但 是 量 子 点 等 纳 米 颗 粒 具 有 纳 米 量 级 的 小 尺 寸, 可 以 突 破 这 层 屏 障. 本 研 究 中 在 小 鼠 脱 毛 的 背 部 皮 肤 上 涂 抹 水 溶 性 CdSeS 量 子 点 溶 液, 发 现 量 子 点 可 以 渗 透 到 小 鼠 皮 下, 进 而 通 过 血 液 循 环 堆 积 在 心 肝 脾 肺 和 肾 等 器 官 中, 而 且 在 肝 和 肾 中 堆 积 严 重, 经 过 120h 仍 不 能 有 效 代 谢. 致 谢 感 谢 南 开 大 学 的 赵 焱 老 师 在 ICP-MS 检 测 上 的 帮 助. 参 考 文 献 [1] 李 步 洪, 张 镇 西, 谢 树 森, 等. 量 子 点 在 生 物 学 中 的 研 究 进 展. 激 光 生 物 学 报,2006, 15(2): Li BH, ZhangZX, Xie SS, et al. Acta Laser Biol Sin, 2006, 15(2): [2] 李 常 艳, 李 倩, 刘 海 涛, 等. 量 子 点 荧 光 标 记 技 术 的 研 究 热 点 及 面 临 的 挑 战. 生 物 化 学 与 生 物 物 理 进 展,2010, 37(: Li CY, Li Q, Liu HT, et al. Prog Biochem Biophys, 2010, 37(: [3] 林 道 辉, 冀 静, 田 小 利, 等. 纳 米 材 料 的 环 境 行 为 与 生 物 毒 性. 科 学 通 报,2009, 54(23): Lin DH, Ji J, Tian XL, et al. Chin Sci Bull, 2009, 54(23): [4] Chan WH, Shiao NH. Cytotoxic effect of CdSe quantum dots on mouse embryonic development. Acta Pharmacol Sin, 2008, 28(2): [5] 章 晨, 董 正 伟, 沈 筱 筠, 等. 量 子 点 540 诱 导 人 皮 肤 成 纤 维 细 胞 DNA 双 链 断 裂. 毒 理 学 杂 志,2008, 22(3): ZhangC, DongZW, ShenXY, et al. JToxicol, 2008, 22: [6] Zhang LW, Yu WW, Colvin VL, et al. Biological interactions of quantum dot nanoparticles in skin and in human epidermal keratinocytes.toxicapplpharm, 2008, 228(2): [7] Ryman-Rasmussen JP, Riviere JE, Nancy A. Monteiro-riviere, penetration of intact skin by quantum dots with diverse physicochemicalproperties.toxicsci, 2006, 91(: [8] Alvarez-Roman R, Naik A, Kalia, et al. Skin penetration and distribution of polymeric nanoparticles. JControl Release, 2004, 99(: [9] Chen Z, Chen H, Meng H, et al. Bio-distribution and metabolic paths of silica coated CdSeS quantum dots. Toxic Appl Pharm, 2008, 230(3):

6 2012; 39 (2) 唐 蕾, 等 : 小 鼠 对 量 子 点 的 透 皮 吸 收 和 代 谢 193 Transdermal Delivery Through in vivo Mouse Skin and Metabolic Path of Quantum Dots * TANGLei,ZHANGChun-Ling 2)**,SONGGuang-Ming,XUZhong-Wei,JINXun ( Medical College of Chinese People 忆 sarmedpolice Force, Tianjin ,China; 2) College of Physics Science, NankaiUniversity, Tianjin , China) Abstract Skin is the largest organ of the body and is apotential route of exposure to sunscreens and cosmetics containing nanoparticles, but the permeability of the skin to these nanoparticles is unknown. In this paper, we studied the transdermal deliverycapacitythrough mouse skin of water-soluble CdSeS quantum dots(qds) and the deposition of these QDs in the body. QD solution was coated on the dorsal hairless skin of male ICR mice. Fluorescence microscope was used to observe the deposition of QDs in mouse skin and heart, liver, spleen, lung and kidney. Inductivelycoupled plasma-mass spectrometry (ICP-MS) was used to measure the 111 Cdconcentration to indicate the concentration of QDs in plasma and organs. The fluorescence images show that QDs can penetrate into thedermallayer anddepositinthe organsthroughbloodcirculation. ICP-MS result indicatesthat QDs deposit seriouslyin liver and kidney, and theyare difficult to clear. 111 Cdconcentration isstill more than 14ng/g in kidney after 5days. These results suggest that QDs has in vivo transdermal delivery capacity through mouse skin and is harmfulto theliverandkidney. Key words quantumdots,nanoparticles,transdermaldelivery,metabolism,icp-ms DOI: /SP.J *Thiswork wassupported byagrantfrom MedicalCollege ofchinese People 忆 sarmed PoliceForce in 2010(WYZ201003). **Correspondingauthor. Tel: , zhangchl@nankai.edu.cn Received: July12,2011 Accepted: September27,2011

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