578 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2017,48(5): 第 48 卷 Keywords aspirin 牷 pyrosequencing 牷 singlenucleotidepolymorphism 牷 personalized
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1 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity 2017,48(5): 焦磷酸测序技术对阿司匹林个体化用药相关 SNP 位点分型 1, 邢晓清, 卜修民, 初亚男, 邹秉杰, 宋沁馨, 周国华 ( 1 中国药科大学药物质量与安全预警教育部重点实验室, 南京 ; 2 河北省人民医院药学部, 石家庄 ; 3 南京军区南京总医院药理科, 南京 ) 摘 要 阿司匹林的抗血小板作用在临床存在显著的个体差异, 而 rs5918 rs 和 rs 个单核苷酸多态性位点与 阿司匹林的药效和不良反应有着密切的联系 本文基于 PCR 结合焦磷酸测序技术, 建立了阿司匹林相关 SNP 位点的基因分 型方法 自主设计扩增引物和测序引物 ; 优化 PCR 扩增条件, 使 3 个位点能够在相同的条件下扩增并通过梯度稀释基因组 DNA 检测方法的灵敏度 ; 最后, 分别基于本文建立的新方法和 Sanger 测序技术对 20 例临床样本进行 3 个位点的基因分型, 验 证该方法的准确性 结果显示, 本文成功建立了阿司匹林个体化用药相关 SNP 位点的基因分型方法, 检测下限低至 0 4ng 基 因组 DNA, 用两种方法对 20 例临床样本进行 3 个位点的基因分型, 结果完全一致, 说明该方法有较高的准确性 关键词 阿司匹林 ; 焦磷酸测序技术 ; 单核苷酸多态性 ; 个体化用药 中图分类号 Q819 文献标志码 A 文章编号 (2017) doi: /j.isn 引用本文邢晓清, 卜修民, 初亚男, 等 焦磷酸测序技术对阿司匹林个体化用药相关 SNP 位点分型 [J]. 中国药科大学学报,2017,48 (5): Citethisarticleas:XINGXiaoqing,BUXiumin,CHUYanan,etal GenotypemethodforSNPsrelatedtoindividualizedaspirintreatmentbasedon pyrosequencingtechnology[j].jchinapharmuniv,2017,48(5): GenotypemethodforSNPsrelatedtoindividualizedaspirintreatmentbased onpyrosequencingtechnology XINGXiaoqing 1 牞 2 牞 BUXiumin 1 牞 CHUYanan 3 牞 ZOUBingjie 3 牞 SONGQinxin 1 牞 ZHOUGuohua 3 1 KeyLaboratoryofDrugQualityControlandPharmacovigilanceofMinistryofEducation 牞 ChinaPharmaceuticalUniversity 牞 Nanjing 牷 2 DepartmentofPharmacy 牞 HebeiGeneralHospital 牞 Shijiazhuang 牷 3 DepartmentofPharmacology 牞 NanjingGeneralHos pital 牞 Nanjing 牞 China Abstract Therearesignificantindividualdiferencesintheantiplateletefectsofaspirin.Threesinglenucleotide polymorphisms 牗 SNPs 牘牞 rs5918 牞 rs andrs 牞 arereportedtosignificantlycorelatewiththeeficacy andsideefectsofaspirin.inthepresentstudy 牞 thegenotypingmethodofthethreesnpswasestablishedbasedon thecombinationofpolymerasechainreactionandpyrosequencingtechnology Amplificationandsequencingprim ersweredesignedindependently 牷 theamplificationconditionswereoptimizedtoamplifythethreesnpsinthe samecondition ThesensitivityofthemethodwasdetectedusingoriginalgenomeDNA atdiferentconcentra tions Inordertotestifytheaccuracyofthemethod 牞 theproposedmethodandsangersequencingtechnologywere bothusedtogenotypethethreesnpsin20bloodsamples Theresultsdemonstratedthatthegenotypingmethodof aspirin relatedsnpswassuccesfulyestablished 牞 withthedetectionlimitbeingaslow as0 4nggenome DNA Thegenotyperesultsof20samplesbytheproposedmethodwereexactlythesameasthatofSangersequen cing Itisevidentthattheproposedmethodissensitiveandaccurate 收稿日期 通信作者 Tel: E mail:songqinxin@cpu edu cn 基金项目国家自然科学基金资助项目 (No ); 江苏省重点研发计划资助项目 (No BE ); 江苏省自然科学基金资助项目 (No BK ); 药物质量与安全预警教育部重点实验室资助项目 (No DQCP2015MS02); 中国药科大学药学基地科研训练及科研能力提高资助项目 (No J ); 江苏省 青蓝工程 资助项目
2 578 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2017,48(5): 第 48 卷 Keywords aspirin 牷 pyrosequencing 牷 singlenucleotidepolymorphism 牷 personalizedmedicine ThisstudywassupportedbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina 牗 No 牘牷 thekeyresearchanddevelopment ProgramofJiangsuProvince 牗 No BE 牘牷 thenaturalsciencefoundationofjiangsuprovince 牗 No BK 牘牷 theopen ProjectProgramofMOEKeyLaboratoryofDrugQualityControlandPharmacovigilance 牗 No DQCP2015MS02 牘牷 thecolegestudents InnovationProjectfortheR&DofNovelDrugs 牗 No J 牘牷 the Qing Lan ProjectofJiangsuProvince 阿司匹林在临床中的应用非常广泛, 是常用的非甾体抗炎药, 而小剂量阿司匹林可以抑制血小板和动脉血栓的形成, 发挥抗凝作用 研究证实, 阿司匹林的抗凝疗效存在较大的个体差异, 接受冠状动脉搭桥手术的患者 心肌梗死幸存者甚至健康的年轻志愿者中都存在阿司匹林抵抗的现象 [1-2], 30% ~40% 的脑卒中或外周血管疾病患者存在阿司匹林抵抗, 并且与非阿司匹林抵抗患者相比, 这些患者在 2 年内再次发生心血管事件的风险高达 80% [3-5] 目前, 尚不能完全解释造成这种个体差异的原因, 但基因多态性是其中一个非常重要的影响因素 [6] 糖蛋白 Ⅱb/Ⅲa 受体复合物 (GPⅢ) 的遗传多态性 (Pl A1 /Pl A2 ) 是阿司匹林抵抗的重要因子,GP Ⅲ 受体为血小板聚集最终通路上的关键受体, 故 GPⅢ 受体的任何变化均会引起包括阿司匹林在内的各类抗血小板药物反应性的变化 [7-8] 目前, 已发现多个 GPⅢ 受体多态性位点, 较为常见的是 rs5918(leu33pro), 编码 Leu 的位点称为 Pl A1, 编码 Pro 的位点称为 Pl A2[9-10] 研究表明, 携带有 Pl A2 等位基因的患者血小板的生成能力增强同时活化, 颗粒释放和纤维蛋白原结合的阈值降低, 需要服用更大剂量的阿司匹林才能够有效发挥抗凝作用 [11] 并且,Pl A2 /Pl A2 基因型携带者比 Pl A1 /Pl A1 和 Pl A1 /Pl A2 患者发生缺血性心脏病的风险高 4 倍 血小板内皮聚集受体 1(PEAR1) 的基因多态性 rs 与患者的抗血小板治疗反应性密切相关 其中, 与 GG 纯合子相比, 无论是单用阿司匹林还是阿司匹林联合氯吡格雷双抗治疗,A 等位基因携带者的心血管事件风险及死亡率均明显升高 [12] 荨麻疹是服用阿司匹林常见的不良反应, 研究证实, 白三烯 C4 合成酶 (LTC4S) 基因多态性 rs730012( 444A>C) 可以作为阿司匹林诱发荨麻疹的生物标记物 [13],C 等位基因携带者服用阿司匹林发生超敏反应的患者显著高于 A 等位基因携带者 [14-15] 阿司匹林给药方便, 价格便宜, 且在低剂量下几乎没有不良反应, 因此作为一线抗血小板聚集药, 阿司匹林难以被取代 阿司匹林临床应用广泛, 提高阿司匹林用药的安全性和有效性, 避免阿司匹林抵抗的发生, 降低荨麻疹不良反应的发生率具有非常重要的临床意义 本研究基于实验室已有的焦磷酸测序技术, 建立阿司匹林相关单核苷酸多态性位点的检测方法 自主设计扩增引物和测序引物, 建立能够同时扩增 rs5918 rs 和 rs 个位点的 PCR 方法并对方法灵敏度进行考察 ; 本文利用已建立的方法检测了 20 例临床样本, 并与 Sanger 测序的结果相比较, 结果完全一致, 说明本文成功建立了基于焦磷酸测序技术检测阿司匹林相关 SNP 位点的方法, 对指导临床阿司匹林的个体化给药有重要意义 材料 1 1 仪 器 A200 基因扩增仪 ( 杭州郎基科技仪器有限公司 ); 微量紫外分光光度计 ( 南京伍仪科技有限公司 ); 数码凝胶成像系统和水平电泳槽 ( 上海天能科技有限公司 );PyroMarkQ24 焦磷酸测序仪 ( 德国 Qiagen 公司 ) 1 2 试 剂 PCR 扩增试剂盒 ( 日本 Takara 公司 ); 焦磷酸测序试剂盒和结合缓冲液 ( 德国 Qiagen 公司 ); 其他试剂均为分析纯 ; 实验用水均为灭菌蒸馏水 所有引物由上海 Invitrogen 公司合成, 具体引物名称 [16] 及序列见表 1, 引物 G F2/R2 参考文献而引物 L F2/R2 根据 PPI 理论设计 [17], 其余引物均由 Pyromark 软件设计 方法 2 1 血液基因组 DNA 的抽提 本研究采用经典的酚 氯仿法抽提基因组
3 第 48 卷第 5 期 邢晓清, 等 : 焦磷酸测序技术对阿司匹林个体化用药相关 SNP 位点分型 579 DNA [18] 取静脉血 300μL 进行核酸抽提, 最后用 1 TE 缓冲液 30μL 洗脱 应用微量紫外分光光度计对 DNA 洗脱产物进行浓度测定, 质量浓度应大于 30ng/μL,A 260 /A 280 在 1 8~2 0 之间 2 2 PCR 反应条件 PCR 总反应体积为 50μL, 包括 PCR Mix 12μL, 上下游引物各 2μL,rTaq 酶 0 25μL, 无菌蒸馏水 32 75μL, 基因组 DNA1μL PCR 扩增条件为 :94 预变性 3min;94 变性 30s,65 退火 30s,72 延伸 30s, 共 35 个循环 ; 循环结束后 72 延伸 5min PCR 反应结束后, 利用 2% 的葡聚糖凝胶电泳进行产物分析,PCR 产物 3μL 和上样缓冲液 3μL 混合后加入胶孔,110V 电泳 10min 鉴定产物 2 3 焦磷酸测序分型检测 [19] 焦磷酸测序实验操作步骤与之前报道相一 致 (1) 单链的制备 : 取扩增产物 20μL 和亲和素修饰的微球 2μL, 与蒸馏水 18μL 结合缓冲液 40μL 混合, 振荡孵育 7min, 以制备所需单链 ;(2) 测序 : 加入测序引物 (10μmol/L)1μL 和退火缓冲液 24μL, 85 解链 1min, 室温退火, 放入焦磷酸测序仪中固定 ;(3) 测序碱基顺序 :1rs5918 位点 :CCCAGAC ( 下划线碱基为相关 SNP 碱基 ), 第 2 个碱基 A 为正常信号参考值, 根据第 1 个 A 碱基 ( 野生型 ) 和 G 碱基 ( 突变型 ) 的比例确定基因型 ;2rs 位点 :TCCGATC( 下划线碱基为相关 SNP 碱基 ), T 碱基为为正常信号参考值, 根据 G 碱基和 A 碱基的信号值比例确定基因型 ;rs 位点 : GACAGGG( 下划线碱基为相关 SNP 碱基 ), 第 1 个 G 碱基和第 1 个 A 碱基为正常信号参考值, 根据 C 碱基和第 2 个 A 碱基的信号值比例确定基因型 Table1 Sequencesofprimersforrs5918,rs andrs SNP Primers Sequenceofprimer(5 3 ) T m / C Lengthofproduct/bp GPⅢPlA(T>C)rs5918 G F1 Bio GAGAGTCGCCATAGCTCTGATT G R1 ATTCTGGGGCACAGTTATCCT 63 8 G F2 Bio GCTATTGGGAAGTGGTAGGGC G R2 TGTCTCCAGAGCCCTTGTCG 65 7 G Seq GTCACAGCGAGGTGAG 56 4 PEAR1(G>A)rs P F1 GTGCAGAGGTGAGGGGTTAT P R1 Bio GGTGGGGGGGATTAGAGTT 63 2 P F2 ATTCACACCCAGGCTTGAACTTG P R2 Bio GGTGGACAAGAGGATCCATTTCTA 64 0 P Seq 5 CCTTCTGCTGTCTCACT LTC4S(A>C)rs L F1 CGCTGGGACTCCATTCTGAAG L R1 Bio TGCAGACCCCCACATCATG 64 5 L F2 AAGGGCTTCCGCAGAGGAG L R2 Bio GCAGACCCCCACATCATGC 65 4 L Seq AGGAACAGCCTGGAT 50 5 F:forwardamplificationprimer;R:reverseamplificationprimer;Seq:sequencingprimer 结果与讨论 3 1 扩增引物的筛选本文根据每个位点的基因序列设计了两对扩增引物 ( 表 1), 从中筛选结果较好的引物序列 首先, 初步考察 6 对引物的扩增特性, 退火温度为 55 进行 PCR 反应, 扩增产物经电泳分析, 如图 1 所示 对于 rs5918 位点来说,G F1/R1 的扩增产物为单一而明亮的条带, 非特异性扩增产物较少, 优于 G F2/R2; 而扩增 rs 位点的 P F2/R2 引物优于 P F1/R1; 而 rs 位点的扩增引物, L F1/R1 和 L F2/R2 都存在非特异性扩增产物, 相对来说 L F1/R1 的非特异性扩增产物较少 因此, 本文通过退火温度的梯度考察, 对 L F1/R1 和 L F2/R2 进一步评价 3 2 退火温度的优化在 55~65 范围内考察 L F1/R1 和 L F2/R2 的扩增特异性, 共设置了 6 个温度梯度 :55,57, 59 4,60 6,63 和 65, 扩增产物电泳结果见图 2 图 2 A 是 L F1/R1 在不同退火温度的扩增产物电
4 学报 Ｊ Ｃ Ｐ ｍ Ｕ 第 卷 泳图结果表明当退火温度设置为 以上时 Ｂ是 Ｌ Ｆ Ｒ 电泳可见的非特异性产物消失 图 在不同退火温度的扩增产物电泳图当退火温度不 断升高时非特异性扩增产物逐渐减少但当退火 温度高达 时仍存在非特异性产物 因此本 文最终以 Ｌ Ｆ Ｒ引物对扩增 位点 Ｌ Ｆ Ｒ引物对的退火温度可选择 和 而理 论上退火温度越高非特异性扩增产物越少 并且 Ｇ Ｆ Ｒ和 Ｐ Ｆ Ｒ引物对在 退火温度条件 下都能够扩增出目的产物 本文最终选择 为 个位点的共同退火温度 综上所述本文筛选 ９ 位点的扩 出了扩增引物并优化了退火温度 Ｆ Ｒ 位点的扩增引物为 增引物为 Ｇ Ｐ Ｆ Ｒ而 的 扩 增 引 物 为 Ｌ Ｆ Ｒ 个位点的 ＰＣＲ退火温度均为 Ｆ Ｅ ＰＣＲ ｘ ｍ ＳＮＰ Ｆ Ｐ ｑ ＳＮＰｂ ｍ ＤＮＡ Ｔ ｂ ｍ ｋ ｂ ＳＮＰ ｂ ｗ ｑ 临床实际样本的检测结果 为了验证方法的准确性本研究同时采用建立 测序技术对 例临 的焦磷酸测序方法和 Ｓ 床样本的上述 个 ＳＮＰ位点进行 分 型 检 测 各 ＳＮＰ位点结果判读依据是根据模版碱基序列和信 号峰比例 个位点各基因型的典型测序结果见图 Ｆ Ｅ ＰＣＲ Ｌ Ｆ Ｒ Ａ Ｌ Ｆ Ｒ Ｂ ｍ 例样本的 个 ＳＮＰ位点分型结果见表 检 起始 ＤＮＡ浓度对测序信号的影响 突变纯和型 例而中国人群该位点野生型 杂合 测到 位点野生型 例杂合型 例和 稀释基因组 ＤＮＡ至质量浓 度 为 和 ９ 和 型和 突 变 型 的 比 率 分 别 为 焦磷酸测序分型 μｌ基于已建立的 ＰＣＲ ９ 本文检测到的突变比例与已报道的频率 方法对 个位点进行基因分型并且每个浓度平行 相近 位点野生型 例而杂合型 例 做 次考察方法的重复性 结果证实随着加入 ９位点杂合子 例其余为野生纯和型 在中 基因组 ＤＮＡ的浓度越来越大ＰＣＲ产物浓度越来 位 点 杂 合 型 的 基 因 频 率 为 国人 群 中 越高焦测序碱基信号值也越来越高当加入的基 ９ 位 点 杂 合 型 的 基 因 频 率 为 因组 ＤＮＡ质量浓度为 μｌ时仍然可以对 本文检测各位点的基因频率与已报道数据 个 ＳＮＰ位点进行基因分型即本方法可检测质量 相接近 综上所述两种方法的基因分型结果完全 浓度低至 μｌ 图 一致本方法具有较高的准确度
5 第 卷第 期 邢晓清等 焦磷酸测序技术对阿司匹林个体化用药相关 Ｓ ＮＰ位点分型 阿司匹林个体化给药的指导建议对提高该药的安 全性和有效性具有非常重要的意义 参考文献 Ｇ Ｊ Ｃ ＣＰ Ａ Ｃ Ｃ Ｐ Ｊ ＭＷ Ｊ ＣＢ ＢＳ Ｐ ｂ ｍ Ａ Ｐ Ｌ ｂｍ ９ ９ Ｇ ｍ ＫＨ Ｅ ｋ Ｅ ｂ Ｔ ｍｂｒ ９ ９ ９ Ｄ ｍ ｊ ＰＡＭ ｗ ＳＳ Ｌ ｍｓ Ａ ｗ ｍ ｋ Ｂ Ｃ Ｆ ｂ Ｂ ＡＤＫｚ ＮＬ ＧＹ Ｖ ｗ Ｅ Ｊ Ｃ ９ ９９ Ｗü ｚｍｎ ＰＨＧ ＥＬ Ｇ ｍ ＰＥＡＲ ＰＬ ＳＯＮＥ ９ Ｆ ＣＮ Ｆ Ａ Ｔ Ｐ Ａ Ａ ｍ ｍ ｍ ｗ ＢＪＣ Ｐ ｍ ｍ Ｆ ＣＮＭ ＡＦ Ａ Ｔ Ｐ Ａ Ａ ｍ ｍ ｋ ｍ ｍ ＰＬ ＳＯＮＥ ９ ９ Ｖ ＭＣ ＥＳ Ａ Ｐ Ｆ Ｔ ｍ ９ ｍ ｍ Ａ Ｐ ｑ Ｂ Ｓ ｑ Ｔｂ Ｇ Ｓ ＮＰ ｍ Ｐ ｑ ９ Ｔ Ｃ Ｇ Ａ Ａ Ｃ Ｗ Ｈ ｚ Ｍ Ｒ Ｌ Ｐ ｍ ｍ ｍ Ｐ Ｖ ＭＣ ＥＳ Ａ Ｒ ｂ ｗ ｍ ｍ Ａ ９ ９ Ｍ ＡＤＦ ｍ Ｍ Ｇ ｍ Ｃ ｍ Ｐ Ｐ ＧＰ Ｐ Ａ ｍ ｍ Ｃ ９ Ｌ ｗ Ｊ ＰＲ ＫＯ Ｃ Ｊ Ｒ Ｇ % 结 论 焦磷酸测序技术具有操作简便 灵敏度高和无 需荧光标记等优势 本文基于焦磷酸测序技术 成功建立了阿司匹林相关 ＳＮＰ位点的检测方法 ＰＥＡＲ ｗ Ｃ Ｃ Ｇ ９ ｍ Ｓá ｚ Ｂ ＭＡ ＮＶ Ｃ Ｔ Ａ Ｃ ｍ ｍ ｋ Ｃ Ｊ Ａ Ｃ ｍｍ ｗ ９ ９ 方法具有较高的灵敏度的准确性能够实现对临床 Ｋ ｍｓｈｙｙｍｌ Ｓ Ｋ Ｇ ｍ ｍ 样本的阿司匹林相关位点进行基因分型从而提供 ｍ Ｃ Ｏ Ａ Ｃ ｍｍ
6 582 学报 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2017,48(5): 第 48 卷 nol,2006,6(4): [15] ParkSM,ParkJS,ParkHS,etal.Unravelingthegeneticbasisof aspirinhypersensitivityinasthmabeyondarachidonatepathways [J].AlergyAsthmaImmunolRes,2013,5(5): [16]JakubowskaA,RozkrutD,AntoniouA,etal.TheLeu33Propoly morphismintheitgb3genedoesnotmodifybrca1/2 asociat edbreastorovariancancerrisks:resultsfromamulticenterstudy among15,542brca1andbrca2mutationcariers[j].breast CancerResTreat,2009,121(3): [17]PanW,Byrne SteeleM,WangC,etal.DNApolymeraseprefer encedeterminespcr primingeficiency[j].bmcbiotechnol, 2014,14:10 [18] LiXX,ZhaoHY,YangYT,etal.Comparingthethreemethodsto extracthumangenomicdna from wholeblood[j].progmod Biomed( 现代生物医学进展 ),2013,13(27): [19] ChuYN,ZhangJY,FengLY,etal.Establishmentofarapidand inexpensiveidentificationmethodforhla B 58:01genotype [J].ChinJAnalChem( 分析化学 ),2016,44(5): [20]ZhouG,SongQ.AdvancesandClinicalPracticeinPyrosequenc ing[m].newyork:springer,2016:14 新药信息 2017 年 1~9 月美国 FDA 批准新药 (1) 截止 2017 年 9 月 30 日, 美国 FDA 共批准 34 个原创新药 ( 表 1), 已远超过 2016 年全年 FDA 批准的 22 个新药 序号药品名活性成分批准日期适应证 1 Trulance plecanatide 成人慢性特发性便秘 (CIC) 2 Parsabiv etelcalcetide 成人慢性肾脏疾病透析引起的继发性甲状旁腺功能 亢进 3 Emflaza deflazacort 杜氏肌营养不良 (DMD) 4 Siliq brodalumab 成人中重度斑块性银屑病 5 Xermelo telotristatethyl 类癌综合征腹泻 6 Kisqali ribociclib 女性绝经后晚期乳腺癌细胞癌 7 Xadago safinamide 帕金森病 8 Bavencio avelumab 转移性默克尔 (Merkel) 9 Symproic naldemedine 阿片类药物引起的便秘 10 Zejula niraparib 用于先前接受过铂类化疗 并出现完全响应或部分响应 的复发性上皮卵巢癌 输卵管癌或原发性腹膜癌女性患 者的维持治疗 11 Dupixent dupilumab 成人中重度湿疹 12 Ocrevus ocrelizumab 复发和原发性多发性硬化症 13 Austedo deutetrabenazine 亨廷顿舞蹈病 14 Ingreza valbenazine 成人迟发性运动障碍 15 Brineura cerliponasealfa 罕见病巴藤病 ( 少年型家族性黑朦性痴呆 ) 16 Alunbrig brigatinib 对 crizotinib 耐药的间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 阳性非小 细胞肺癌 (NSCLC) 17 Rydapt midostaurin 急性骨髓性白血病 ( 美国 FDA 网站 )
福建农业学报 材料与方法 试验菌株 引物 主要仪器 主要试剂 细菌培养 模板的制备 反应条件 扩增产物的检测 特异性试验 敏感性试验 分离菌株检测 产物的克隆及序列测定 结果与分析
福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析
福建农业学报 林 甦 朱春华 陈 珍 刘斌琼 施少华 江 斌 蔡国漳 林 羽 黄 瑜 甦 男 硕士 助理研究员 主要从事病毒学和动物传染病学研究 福建农业学报 材料与方法 毒株 主要仪器 主要试剂 引物设计 的培养 反应条件的建立 荧光定量 检测临床样本 结果与分析 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 福建农业学报 讨 论 林 甦等 鸡 亚型白血病病毒荧光定量 检测方法的建立 责任编辑
材料! 方法! # 基因的扩增及其序列分析
生物技术通报 黄艳燕 黄靖华 卢福芝 孙靓 彭立新 周兴 黄日波 利用 的方法从鼠李糖乳杆菌基因组 中扩增到 乳酸脱氢酶基因 并连接到载体 上 构建表达质粒 将重组质粒 转化大肠杆菌 重组菌株经 诱导表达 电泳分 析表明 在大肠杆菌中实现了表达 表达产物的分子量约为 同时采用紫外分光光度法测定 乳酸脱氢酶的酶活 测得重组菌株的 乳酸脱氢酶活力为 最适反应温度为 最适 乳酸脱氢酶 克隆 表达 鼠李糖乳杆菌
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213456!"# $ % # %557;&/55/?5,/ @@@!88>>!"#!$% &'()*+ 武汉市疾病预防控制中心 武汉 /&55, % 华中科技大学同济医学院病原生物学系微生物教研室 武汉 /&55&5 & 武汉市第十一医院 武汉 /&5555,- O ' 0 ' =! 6!, 2 M*34!. 5 '2 ' 0 0* 6) 7 88^9:;0, 6! 89-4 O?@ 7%58
供 试 材 料 试 验 试 剂 和 仪 器 基 因 组 提 取 分 析 方 法 反 应 体 系 最 佳 配 比 的 筛 选 退 火 温 度 对 扩 增 效 果 的 影 响
生 物 技 术 通 报 胡 立 敏 陶 兴 林 侯 栋 朱 惠 霞 张 东 琴 选 取 温 敏 花 椰 菜 不 育 系 与 杂 交 组 合 的 高 可 育 和 高 不 育 单 株 构 建 基 因 池 利 用 对 随 机 引 物 对 其 进 行 标 记 同 时 采 用 正 交 设 计 对 其 反 应 体 系 及 扩 增 条 件 进 行 优 化 试 验 结 果 表 明 在 反 应 体 系 中 含 引 物
遗传性原发性心律失常综合征诊断与治疗中国专家共识 作者 : 中华心血管病杂志编辑委员会心律失常循证工作组 作者单位 : 刊名 : 中华心血管病杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Cardiology 年, 卷 ( 期 ): 2015,43(1) 引用本文格式 : 中华心血管病杂志编辑委员会心律失常循证工作组遗传性原发性心律失常综合征诊断与治疗中国专家共识 [ 期刊论 文 ]-
WHO ---- ---- , 200 5% 8.6% 18.8% 200, 140 , MS MS 60 80 X 1999 WHO MS (2004.12) 1. BMI>25 >24 >28 BMI kg / m 2 2. 6.1mmol/L, 2h 7.8mmol/L 3. BP 140/90mmHg ( ) 4. TG 1.7 mmol/l /L HDL-C C
材料 方法
生物技术通报 张发洲 杨慧兰 为了构建单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽 真核表达质粒 应用 技术从 株 的基因组中扩增 基因 并连接至真核表达载体 对阳性克隆进行菌落 酶切和测序鉴定后 成功构建了重 组质粒 用 转染试剂盒将重组质粒 转染至 细胞中 并用 及 检测其表达情况 结果显示 基因在 细胞中得到正确表达 真核表达质粒 的构建成功 为进 一步研究 对宿主细胞的影响奠定了基础 单纯疱疹病毒 型 感染细胞多肽
124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na
![124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na](/thumbs/91/105785327.jpg "124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na")
河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖 与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,
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立 法 會 CB(1)279/15-16(03) 號 文 件 立 法 會 工 商 事 務 委 員 會 加 強 香 港 與 內 地 合 作 關 係 在 政 制 及 內 地 事 務 局 下 保 留 1 個 首 長 級 職 位 目 的 我 們 建 議 把 政 制 及 內 地 事 務 局 下 的 1 個 首 長 級 丙 級 政 務 官 ( 首 長 級 薪 級 第 2 點 ) 的 職 位 由 編 外 職 位
:TGF-β bfgf 23 KEY WORDS:transforminggrowthfactor-β ;basicfibroblastgrowthfactor; bonemarrow mesenchymalstemcels;eukaryoticexpressionvector; liposomet
2 ( )208 58 JournalofNanchangUniversity(MedicalSciences)208,Vol.58No. TGF-β bfgf,, 2 (., 330006; 2., 5040) : -β (TGF-β ) (bfgf) (BMSCs), SD BMSCs Percol PCR TGF-β bfgf, pcdna3.(+), 3 BMSCs RT-PCR Westernblot
材料 方法
生物技术通报 姜燕 采用鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 和胶体金标记鼠抗人血红蛋白 单克隆抗体 及对照抗体羊抗鼠 利用双抗体免疫夹心反应原理特异性地结合人血红蛋白抗原 在 内可得到胶体金显色结果的原理研制便潜血单克 隆一步法胶体金检测试卡 用于诊断因各种原因引起的消化道出血疾病 应用杂交瘤技术制备两株鼠抗人血红蛋白 抗 体 方法检测 效价 免疫胶体金技术制备胶体金检测试卡 法检测 效价的结果显示 鼠抗人
中国急性缺血性脑卒中诊治指南 2014 作者 : 中华医学会神经病学分会, 中华医学会神经病学分会脑血管病学组 作者单位 : 刊名 : 中华神经科杂志 英文刊名 : Chinese Journal of Neurology 年, 卷 ( 期 ): 2015,48(4) 引用本文格式 : 中华医学会神经病学分会. 中华医学会神经病学分会脑血管病学组中国急性缺血性脑卒中诊治指南 2014[ 期刊论文 ]-
第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用!!!!!!!! 花茶冲泡方法 荧光扫描方法 # 稳定性试验方法 重复性试验方法
年 月 华南师范大学学报 自然科学版 年第 期 赵金莲 曾佑炜 李 宽 彭永宏 采用荧光光谱扫描法定性定量研究了 种花茶对羟自由基 诱导的 氧化损伤的保护作用 结果表明 桂花茶 复合花茶 绿茶和芍药花茶的保护作用要优于红玫瑰花茶和金莲花茶 且各花茶的保护作用在 范围内均随质量浓度的增加而增强 该方法的稳定性和重复性都较好 花茶 氧化损伤 荧光光谱扫描 第 期 赵金莲等 荧光光谱法分析花茶对羟自由基
第 卷 第 期 年 月 水 生 生 物 学 报 肠 丫 搔蒸霎 原 位杂 交 和 原 位 技 术在 鱼 类基 因 定位 中 的 应 用 黄 袁仕 取 梅 朱作言 中 国科 学 院 水 生 生 物 研 究 所 淡 水 生 态 与 生 物 技 术 国 家 重 点 实验 室 武 汉 陕 西 师 范 大学 生 命 科 学 院 西 安 # 万 尸 了夭 如 趾 郑 人 扭寿 卿 关 键词 艺 只 妙 毛山知
第 期 黄雪莲等 响应面优化绿色木霉菌培养基 材料与方法 菌种 仪器与试剂 菌种的活化 单因素试验 响应面优化试验 优化工艺的验证 数据处理 结果与分析
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 响应面优化绿色木霉菌培养基 黄雪莲 于新 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广东广州 利用响应面分析法对绿色木霉菌的培养基进行优化 通过测量不同营养条件下绿色木霉 菌落生长直径研究其生物学特性 在单因素实验的基础上 选定葡萄糖添加量 丙氨酸添加量和磷酸二氢钾添加量 个因素进行中心组合实验 建立二次回归方程 并应用响应面分析法进行优化 结果表明 绿色木霉菌最佳培养基为葡萄糖
自然科学版 预处理 视盘粗定位 视盘垂直坐标的粗定位 视盘水平坐标的粗定位
自然科学版 文章编号 视网膜图像中视盘的快速自动定位方法 赵晓芳 林土胜 李碧 摘 要 基于眼底视网膜血管的分布结构及视盘本身的特点 提出一种快速自动定位视盘的方法 首先根据视网膜血管的网络分布结构大致定位视盘的垂直坐标 然后根据视盘 的亮度信息及视盘与血管的关系来定位视盘的水平坐标 最后把视盘限定在以粗定位的视盘为中心的一个小窗口内 用 变换精确定位视盘中心 该方法不需要事先分割视网膜血管 也不需要对算法进行训练
Microsoft Word - 105YQ403試題分析
1 105 學 年 度 學 科 能 力 測 驗 自 然 考 科 物 理 試 題 分 析 建 國 中 學 物 理 科 教 師 / 高 君 陶 壹 前 言 今 年 的 學 科 能 力 測 驗 是 99 課 綱 課 程 實 施 後 第 四 次 測 驗 命 題 的 重 點 與 方 向 均 能 依 照 課 綱 的 精 神 與 內 容, 題 目 的 難 易 度 也 趨 於 穩 定, 結 合 物 理 觀 念 的
标题
第 35 卷第 期西南大学学报 ( 自然科学版 ) 3 年 月 Vol.35 No. JouralofSouthwestUiversity (NaturalScieceEditio) Feb. 3 文章编号 :673 9868(3) 69 4 一类积分型 Meyer-KiḡZeler-Bzier 算子的点态逼近 赵晓娣, 孙渭滨 宁夏大学数学计算机学院, 银川 75 摘要 : 应用一阶 DitziaṉTotik
福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果
福 建 农 业 学 报 律 海 峡 刘 建 华 潘 玉 善 胡 功 政 苑 丽 许 瑞 福 建 农 业 学 报 材 料 与 方 法 药 敏 纸 片 及 药 品 培 养 基 菌 种 来 源 仪 器 检 测 抗 菌 活 性 的 测 定 数 据 处 理 结 果 与 分 析 种 抗 菌 药 物 对 临 床 分 离 鸡 大 肠 杆 菌 的 结 果 律 海 峡 等 外 排 泵 抑 制 剂 对 鸡 源 大 肠 杆
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1. 2. 3. 2011 9 1-2013 8 31 4. 5. 1995 1997 2009 11 6 5 150 4 11 91% 1 1 1 1 1 2 3 4 5 6 2 1 (1) 2 08 32.1%09 25.9% (2) 2013 1 2 2012 4 9 2011 3 (3) 3 (4) 4 1 2012 2 2012 3 2011 4 2011 63Sn-37Pb 2012 2011
程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点
第 期 甘金华等 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 材料与方法 试剂及溶液
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 强力霉素人工抗原的合成与抗体制备 甘金华 邓薇 李进平 艾晓辉 中国水产科学研究院长江水产研究所 湖北荆州 武汉纺织大学环境与城建学院 湖北武汉 采用改进的碳二亚胺两步法将强力霉素半抗原与载体蛋白 连接制备强力霉素 牛血清白蛋白 人工免疫抗原 并用同样方法将强力霉素与载体蛋白 连接制备人强力霉素 卵清白蛋白 人工包被抗原 经紫外扫描分析和动物免疫试验证实 强力霉素人工抗原合成成功
中 南 大 学 学 报 医 学 版 D; -, + )- ) % % ) 8% % >- + ) ) &% >- % 54 )-) ) ) - ) + ) ) ;4 3 ; 5 ) - D; % &,, ) ) ) -) ) ) - % 54 ) - - ; / & + +, )) + >- + %
中 南 大 学 学 报 医 学 版 ) 基 因 多 态 性 与 胰 岛 自 身 抗 体 阴 性 酮 症 倾 向 糖 尿 病 的 关 系 周 敏 张 英 张 冬 梅 林 建 王 建 平 周 海 峰 周 智 广 中 南 大 学 湘 雅 二 医 院 代 谢 内 分 泌 研 究 所 糖 尿 病 中 心 长 沙 湘 雅 医 院 内 分 泌 科 长 沙 5 摘 要 目 的 探 讨 配 对 盒 ) 基 因 多 态
南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版!"# " < ABC DE c AB ^ " M F GE PQ M ""# = 摘要! "#$ %&' (!)*+,!-*.# /.01 # $ 89 :; /.012 # ' $ <= ABCD E /.01 F
南通大学学报 社会科学版 第 卷 第 期 双月刊 年 月出版 " < ABC DE c AB ^ " M F GE PQ M ""# = 摘要! "#$ %&' (!)*+,!-*.# /.01 # 234 567$ 89 :; /.012 # ' $ ?@ ABCD E /.01 F >GH >? I'J K ABCD > LMNO > > 0PQ RI'7 > S. KTUVW XY EN
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 列入我国 的植物多酚黄酮抗氧剂 防治高血脂和心血管疾病
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 植物多酚黄酮抗氧化剂与人体健康 尤新 中国食品添加剂和配料生产应用工业协会 北京 主要综述了对植物多酚黄酮类物质的生物活性和安全性 其内容包括 茶多酚 甘草黄酮 竹叶黄酮 大豆异黄酮以及从各种鲜果提取物的功能成分 如葡萄提取物 杨梅提取物 橄榄提取 物 乌饭树果提取物等 介绍了植物多酚黄酮的国际市场信息及相关的研究机构和生产单位 多酚 黄酮 健康 食 品 与
+$ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 ##(#-#./+"# +&&& )#(($ # ##"# ##.# +##& )*+,( +## ( *!# ##!)* 多药耐药是乳腺癌产生耐药的机制之一 紫杉类药物作为乳腺癌的基本化疗药物 也是 糖蛋白的转运底物 %&'& 编码的 糖蛋白通过增加肿瘤细胞
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&! 基础研究 基因多态性对乳腺癌紫杉类药物化疗疗效的影响 刘新兰 张海霞 赵岳阳 姜 敏 宁夏医科大学总医院肿瘤医院肿瘤内科 宁夏银川 $ 宁夏医科大学 宁夏银川 $ 宁夏医科大学总医院生物芯片中心 宁夏银川 $ 摘要 目的 检测乳腺癌患者多药耐药 %&'& 基因多态性 分析其与乳腺癌患者应用紫杉类药物化疗疗效的关系 方法 采用 '
期 王秀 兰 种 新 试荆 在 岩石 牡 含 量 测 定 中 的应 用 吸取 稀至 刻 度 舍 牡溶 液于 试 司 容量 瓶中 加 乙 放 置 却 分钟 在 验 盐酸 型 分 光 光度 计 上 于 欲 夕 草酸 及 处 侧定 其 吸 光 度 布 全 显 色 荆 用 蒸馏水 显色 吸 收 曲线 的侧
期 王秀 兰 种 新 试荆 在 岩石 牡 含 量 测 定 中 的应 用 吸取 稀至 刻 度 舍 牡溶 液于 试 司 容量 瓶中 加 乙 放 置 却 分钟 在 验 盐酸 型 分 光 光度 计 上 于 欲 夕 草酸 及 处 侧定 其 吸 光 度 布 全 显 色 荆 用 蒸馏水 显色 吸 收 曲线 的侧 定 按 照 操 作手 续 以水的 式剂 空 白 为 参 用 不 同 的 波长侧定 其吸 光 度 结 果
实 验 方 法 射 线 衍 射 鉴 别 差 示 扫 描 量 热 分 析 红 外 吸 收 光 谱 鉴 定 色 谱 条 件 测 定 法 结 果 与 讨 论 射 线 衍 射 鉴 别
药 学 实 践 杂志 年第 卷第 期 药理 学 大 承 气 汤 改 善 家 兔 实 验 性 肺 水 肿 及 多脏 器 损 害 的 病 理 学 研 究 摘要 目的 研 究 大 承 气 汤 改 善 阳 明 腑 实喘 满 证 中 肺通 气 功 能 和 肺组 织 病 变 的 机 制 朱 晓梅 时照 组 章 忱 陈列平 李 玉梅 曾兆 麟 和 大承 气汤 组 治 疗组 卫洪昌 上 海中 医 药 大 学病理教研
女 中医七 11 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医内科 神经系统疾病临床研究 女 中西七 111 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医内科 脾胃病临床研究 女 中医七 11 第一临床医学院 ( 江
2011 级七年制专业选择 5+3 培养模式学生录取结果 学号 性别 班级 录取医院 录取专业 录取专业名称 录取方向名称 032011142 女 中西七 111 南京市中医院 105701 中医内科 039011115 女 中医七 11 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科 肿瘤临床研究 032011108 女 中西七 111 江苏省省中西医结合医院 105709 中西医结合临床
材料导报 研究篇 年 月 下 第 卷第 期 种球的制备 单步溶胀法制备分子印迹聚合物微球 洗脱处理 种子溶胀聚合机理 种球用量的影响
水相中 组氨酸单分散分子印迹聚合物微球的合成 表征及其识别性能研究 李思平等 李思平 徐伟箭 较佳工艺条件下 在水性体系中选用无皂乳液聚合法制得的单分散微米级聚苯乙烯微球为种球 分别以组氨酸 甲基丙烯酸 或丙烯酸胺 乙二醇二甲基丙烯酸酯 为模板分子 功能单体和交联剂 合成了 组氨酸分子印迹聚合物微球 研究了形貌 粒径及其分布以及模板分子与功能单体之间的相互作用 分别以 激光粒度分析仪紫外分光光度法和红外光谱表征功能单体与交联剂之间的共聚情况
吉林大学学报 工学版 ２４４ 第 ４ 卷 复杂 鉴于本文篇幅所限 具体公式可详见参考文 献 ７ 每帧的动力学方程建立及其解算方法如图 ３ 所示 图４ 滚转角速度与输入量 η 随时间的变化波形 Ｆｉｇ ４ Ｗａｖｅｆｏｒｍ ｏｆ ｒｏｌｌ ｒａｔｅ ａｎｄ ｉｎｐｕｔ η ｗｉｔｈ ｔｉｍｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ 图５ Ｆｉｇ ５ 滚转角随时间的变化波形 Ｗａｖｅｆｏｒｍ ｏｆ ｒｏｌｌ ａｎｇｌｅ ｗｉｔｈ
大 学 化 学 第 卷 第 期 年 月 微 囊化技 术 在 生 物 医 学 中的 应 用 俞 耀 庭 陈 长 治 南 开 大学分 子 生物研 究 所 本 文 概 述 了微囊 固 定化技术基 本 应 用 原 理 摘要 的生 物 血液 相溶性 及 通透 性能 胞 在治 疗 肾 衰 肝 衰 及 清除 人体 内 中毒药物 般 性介 绍 微 囊 人 工 细 胞 的 一 般制 备方 法 各种 膜 材 料 对 人
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大 饑 荒 中 的 糧 食 食 用 增 量 法 與 代 食 品 高 華 從 1960 年 起 的 兩 年 多 時 間 ), 在 中 國 廣 大 地 區 先 後 開 展 了 兩 場 與 糧 食 問 題 有 關 的 群 眾 運 動 : 糧 食 食 用 增 量 法 和 代 食 品 宣 傳 推 廣 運 動 前 者 是 在 大 饑 荒 已 經 蔓 延, 當 政 者 仍 確 信 糧 食 大 豐 收, 由 地 方
第 卷第 期 月 年 电 压 与 声 光 邑 夹 心 式 压 电超 声 复 频 换 能 器 的 研 究 林 书 玉 陕西 师 范 大 学 应 用 声 学 研 究 所 西 安 摘要 对 具 有 多个 共 振 频 率 的 纵 向振 动 夹 心 式 压 电 超 吉 换 能 器 进 行 了 研 究 该 换 能 器 由 多 组 压 电陶 瓷 片及 金 属 棒 组 成 在 一 维 纵 向振 动 理 论 及 等
H N H CH 2 要 C要 COOH NH 2 H HN CH 2 要 C要 COOH N NH 2 R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 OH+H 要 N 要 C 要 COOH -H 2O R 1 O R 2 H 2 N 要 C 要 C 要 N 要 C 要 COOH H H H 氨基酸 H 肽键 H H 氧分压高 Hb-Fe 2+ +O 2 Hb-Fe 2+ -O 2
36 CHINESE NURSING RESEARCH January,2016Vol.30No.1A ; 273 ( ) , 1.2 [2-10] [3-7] :1 PubMed Medline 3 38
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國立中山大學學位論文典藏.PDF
國 立 中 山 大 學 中 國 文 學 系 ( 暑 期 專 班 ) 碩 士 在 職 專 班 碩 士 論 文 漢 初 異 姓 諸 侯 王 研 究 研 究 生 : 林 裕 斌 撰 指 導 教 授 : 劉 文 強 教 授 中 華 民 國 97 年 5 月 摘 要 本 篇 論 文 探 究 的 對 象 是 漢 朝 初 年 八 位 異 姓 諸 侯 王, 並 涵 蓋 與 操 縱 他 們 興 盛 殞 落 息 息 相
商 周 三 代 年 代 學 的 研 究 經 過 近 五 年 的 努 力, 完 成 夏 商 周 年 表 本 大 事 概 覽 中 夏 商 周 三 代 的 大 事 紀 年, 即 採 用 夏 商 周 斷 代 工 程 的 考 論 成 果 對 於 無 法 考 證 年 份 的 史 事 或 發 生 在 史 前 時
中 外 歷 史 大 事 概 覽 編 者 說 明 : 1. 傳 說 時 代 與 夏 商 周 年 表 : 人 類 在 未 有 文 字 記 事 之 前, 口 耳 相 傳 的 神 話 傳 說, 是 先 民 對 自 然 變 化 的 體 驗 與 歷 史 經 歷 的 口 述 這 些 傳 說, 或 者 存 有 誇 張 和 穿 鑿, 隨 著 考 古 文 物 的 出 土 與 歷 史 學 家 的 努 力, 汰 偽 存 真,
第 三 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 贯 彻 以 人 为 本 安 全 第 一 预 防 为 主 综 合 治 理 的 方 针 各 单 位 及 教 职 工 学 生 应 树 立 安 全 意 识, 履 行 安 全 义 务 承 担 安 全 责 任 第 四 条 实 验 室 技 术 安 全 工 作 坚 持
校 发 2015 28 号 北 京 科 技 大 学 实 验 室 技 术 安 全 管 理 规 定 第 一 章 总 则 第 一 条 为 加 强 学 校 实 验 室 安 全 管 理, 防 止 实 验 室 安 全 事 故 发 生, 保 障 教 职 工 及 学 生 的 人 身 财 产 安 全, 促 进 学 校 各 项 事 业 健 康 稳 定 发 展, 根 据 国 家 相 关 法 律 法 规, 结 合 学 校
2015年全国硕士研究生入学考试
2015 年 全 国 硕 士 研 究 生 入 学 考 试 佛 山 科 学 技 术 学 院 自 命 题 考 试 科 目 考 试 大 纲 ( 科 目 名 称 : 农 业 知 识 综 合 二 科 目 代 码 :340 ) 一 考 查 目 标 农 业 知 识 综 合 二 侧 重 于 动 物 生 产 类 综 合 知 识 的 考 查 考 试 内 容 应 主 要 涵 盖 动 物 遗 传 学 动 物 生 理 学 动
中国商人必胜宝典--各地商人性格特征剖析
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臺 北 縣 立 樟 樹 國 中 96 學 年 度 第 二 學 期 區 域 性 自 然 科 學 領 域 資 賦 優 異 教 育 方 案 實 施 計 劃 一 依 據 : ( 一 ) 特 殊 教 育 法 第 二 十 九 條 ( 二 ) 特 殊 教 育 法 施 行 細 則 第 四 條 第 二 項 ( 三 ) 身 心 障 礙 及 資 賦 優 異 學 生 鑑 定 標 準 二 目 的 : ( 一 ) 推 廣 資
图 对片剂累积释放度的影响
岳红坤 常明 游雅 邱树虹 王婧 乔宇 石家庄学院化工学院 河北石家庄 为筛选盐酸小檗碱胃漂浮片的处方并评价其漂浮和体外释放特性 根据辅料性质及制剂质量要求 通过单因素实验及正交试验确定影响盐酸小檗碱胃漂浮片性能的主要参数 确定了最优 处方 采用干粉直接压片制得盐酸小檗碱胃漂浮片 在人工胃液中考察其漂浮性能及溶出度 并用 紫外可见分光光度法检测其释药量 优选的处方为每片含 碳酸氢钠 羧甲基淀粉钠 聚乙二醇
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下 下 向康复方 向转化 把 心 肌 坏 死 限 制在最 小限 度 内 这 是 临床对 急性 心 肌 梗 死 治 疗 中 个 十 分 今 考 文 献 重 要 而 可 能解 决 的 问题 究 的 动向 之 七 公 毛 于 向心 肌 供 氧 与心 肌 耗 氧之 间 的 平 衡 取决 因此 损伤 措施 所 依据 的 基 础 少 论述 此处 不 再 赘 述 三 二 资料 生理 专机 赵 明伦 孙 希浩 生
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生 水 简 称 比 比 重 物 生 一 率值 制 作血 涂 片 用 曰 用 值 分 作 染液和 染 液 染 色 在 放大 短 径 值 全 部 数据 经 生 物 统 计 学 处 理 一 记录 了 测 定 日 以 上 午 体长 幅 值 为 材 料 鱼在 采 血 前 均 进 测 定 取 鳞片 作 了 年
!! 生 水 简 称 比 比 重 物 生 一 率值 制 作血 涂 片 用 曰 用 值 分 作 染液和 染 液 染 色 在 放大 短 径 值 全 部 数据 经 生 物 统 计 学 处 理 一 记录 了 测 定 日 以 上 午 体长 幅 值 为 材 料 鱼在 采 血 前 均 进 测 定 取 鳞片 作 了 年 龄 鉴定 同 时 一 为 测 定 时 间 室 外 气 温 池 水水 温 一 值 和测 定 简称
第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医内科学 04 肺脏病临床研究 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医内科学 05 肝脏病临床研究 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105
2011 级七年制选择 5+3 培养模式学生转段结果学号录取单位录取专业 方向 032011245 003 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科学 01 肾脏病临床研究 032011253 003 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科学 01 肾脏病临床研究 039011116 003 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科学 01
06 14 > 1986 p2762 1979 S4470 893 894 1963 s s f( nl + s) = f( nl) + ( 1 + 2 ) + ( 1 + 2 ) 2l l 2 s 2 ( 1 2 ), 2l s( s l) 2 f( n + s) = f( n) + s+, 2 1 + 2 1 2 f( f + s)
Microsoft Word - STEPS Standard Chinese Instrument.doc
WHO/NMH/CHP/SPP/05.01 发 行 : 限 量 慢 性 病 危 险 因 素 阶 梯 式 监 测 (STEPS) 问 卷 及 调 查 指 南 ( 核 心 内 容 和 扩 展 内 容 ) 世 界 卫 生 组 织 慢 性 非 传 染 性 疾 病 阶 梯 式 监 测 (STEPS) 非 传 染 性 疾 病 和 精 神 卫 生 处 世 界 卫 生 组 织 20 Avenue Appia, 1211
( 五 ) 知 情 权 ( 六 ) 参 与 权 ( 七 ) 表 达 权 ( 八 ) 监 督 权 四 少 数 民 族 妇 女 儿 童 老 年 人 和 残 疾 人 的 权 利 ( 一 ) 少 数 民 族 权 利 ( 二 ) 妇 女 权 利 ( 三 ) 儿 童 权 利 ( 四 ) 老 年 人 权 利 (
国 务 院 新 闻 办 公 室 14 日 公 布 国 家 人 权 行 动 计 划 (2012-2015 年 ) 实 施 评 估 报 告 全 文 如 下 : 国 家 人 权 行 动 计 划 (2012-2015 年 ) 实 施 评 估 报 告 中 华 人 民 共 和 国 国 务 院 新 闻 办 公 室 前 言 一 总 体 执 行 情 况 二 经 济 社 会 和 文 化 权 利 ( 一 ) 工 作 权
慈禧太后
... 3... 3... 4... 5... 8... 9... 10... 13... 17... 18... 19... 22... 23... 25... 32... 32... 38... 40... 42 ... 45... 47... 47... 48... 50... 52... 54... 57... 57... 62... 64... 67... 69 1901... 69...
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BBS...5... 11...23...26...31...46...49...54...55...57...59...62... 110... 114... 126... 132... 149 I "108" 1 2 3 4 BBS 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 M ( ) Kg S ( ) A ( ) K (
标准名称
ICS 11.100 C44 YY 中华人民共和国医药行业标准 YY/T XXXXX XXXX 人基因单核苷酸多态性 (SNP) 检测试剂盒 Human Gene Single Nucleotide Polymorphisms(SNP) Detection Kit ( 征求意见稿 ) ( 本稿完成日期 :2016-07-11) XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施
NY/T 772 一 2013 前言 本标准按照 GB/T 本标准代替 NY/T 给出的规则起草 772 二 2004(( 禽流感病毒 RT-PCR 试验方法 本标准与 NY/T 相比, 主要变化如下 : 一一将原标准名称中 " 试验方法 " 改为 " 检测方法
ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 772 一 2013 代替 NY/T 772-2 4 禽流感病毒 RT-PCR 检测方法 RT -PCR detection method for avian inf1uenza viruses 2013-09-10 发布 2014-01-01 实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T 772 一 2013 前言 本标准按照
生物技术通报 材料 方法
生物技术通报 高曰文 朱耀明 王艳林 朱晨宇 秦烨 胡汉卿 韩钰 旨在探讨盐酸普鲁卡因 对人结肠癌 细胞 基因甲基化及表达的影响 应用巢式双重 甲基化特异性聚合酶链反应 检测盐酸普鲁卡因处理前后 细胞中 基因启动子的甲基 化水平 逆转录 聚合酶链反应 和蛋白印迹技术观察 细胞内 基因表达情况 检测发现人结肠癌 细胞中 基因存在甲基化 经盐酸普鲁卡因处理能够使 基因甲基化水平下降 和蛋白印迹分析结果显
水资源管理（十七）
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第 期 王 兴 涛 等 猪 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 种 猪 精 液 分 离 株 的 鉴 定 及 进 化 分 析 病 料 毒 株 及 细 胞 试 剂 引 物 设 计 提 取 及 基 因 克 隆 及 测 序
河 南 农 业 科 学 王 兴 涛 罗 俊 滕 蔓 樊 剑 鸣 鄂 巍 禹 斌 刘 力 张 改 平 利 用 技 术 对 河 南 省 某 规 模 化 猪 场 乙 脑 疑 似 病 例 的 种 猪 精 液 进 行 分 析 从 部 分 样 本 中 扩 增 出 与 流 行 性 乙 型 脑 炎 病 毒 基 因 和 基 因 具 有 高 度 同 源 性 的 预 期 产 物 在 日 龄 乳 鼠 脑 内 接 种 种 猪
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附 件 : 湖 北 省 会 计 人 员 继 续 教 育 实 施 办 法 第 一 条 为 规 范 会 计 人 员 继 续 教 育 工 作, 加 强 持 有 会 计 从 业 资 格 证 书 人 员 ( 以 下 简 称 会 计 人 员 ) 继 续 教 育 的 管 理, 推 进 全 省 会 计 人 员 继 续 教 育 工 作 科 学 化 规 范 化 信 息 化, 培 养 造 就 高 素 质 的 会 计 队
2016 28 2016 2013 50 2013 69 2016 2016 10 2016 1 2016 24 2016 1 2016 2016 7 1 2017 6 30 1 2016 2 2012 17 2016 2016 24 2016 1 2016 1 2016 1 2016 1 2016 2016 24 2016 24 2016 24 24 12 2016 CN 24 24 12 2016
上海浦~1
上 海 浦 发 银 行 参 与 高 等 职 业 教 育 人 才 培 养 年 度 报 告 ( ) 一 校 企 合 作 概 况 ( 一 ) 企 业 简 介 上 海 浦 东 发 展 银 行 股 份 有 限 公 司 ( 以 下 简 称 : 浦 发 银 行 ) 是 1992 年 8 月 28 日 经 中 国 人 民 银 行 批 准 设 立 1993 年 1 月 9 日 开 业 1999 年 在 上 海 证 券
DOI: /j.cnki.bingduxuebao CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.34 No.1 January 2018 RT-PCR *,,,,,, (, ) : (ZIKV virus,zikv) (
34 1 2018 1 DOI:10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003304 CHINESEJOURNALOF VIROLOGY Vol.34 No.1 January 2018 RT-PCR *,,,,,, (, 102206) : (ZIKV virus,zikv) (Denguevirus,DENV) (Chikungunyavirus,CHIKV) ZIKV NS1
( ) ChinJJointSurg(ElectronicEdition), February, Vol., No. Totalkneearthroplastyinrheumatoidstiforankylosed knees SUN Tie-zheng, LU Hou-shan.Arthritis
孙铁铮吕厚山 孙铁铮, 副主任医师, 副教授, 硕士研究生导师 年毕业于北京大学, 获得医学博士学位, 在北京大学人民医院关节病诊疗研究中心工作 ; 年曾 赴美国纽约 BethIsrael 医学中心关节病诊疗研究中心进修学习人工关节置换和 关节镜技术 ; ~ 年赴美国哈佛大学麻省总医院骨科研修 目前在北京 大学人民医院关节病诊疗研究中心从事关节疾病的诊断和外科治疗 年和 年连续获得两项国家自然科学基金课题资助,
畢業典禮第一次籌備會議程
104 學 年 度 畢 業 典 禮 籌 備 會 會 議 紀 錄 開 始 時 間 :105 年 3 月 29 日 ( 星 期 二 )10:00~12:00 會 議 地 點 : 行 政 大 樓 3 樓 會 議 室 主 席 : 黃 俊 清 學 務 長 出 席 人 員 : 教 務 處 註 冊 組 李 佳 靜 學 務 處 課 指 組 陳 孝 範 教 務 處 註 冊 組 呂 昱 嬋 學 務 處 課 指 組 廖
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Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase P501-d1/d2/d3 Vazyme biotech co., ltd. 使用说明书 Version 7.1 目录 Contents 01/ 产品概述... 02 02/ 产品组分... 02 03/ 保存条件... 02 04/ 单位定义... 02 05/ 质量控制... 02 06/ 实验流程... 03 06-1/
第 6 期 杨琳红, 等 : 抑癌基因 PTEN 单核苷酸多态性与鼻咽癌的相关性 ad0.027respectively;adthealelefrequecyofCadTwas0.801ad0.198respectively.Thegeotypicfrequecy ofcc,cta
478 第 35 卷第 6 期 2018 年 6 月 新乡医学院学报 JouralofXixiagMedicalUiversity Vol.35 No.6 Ju.2018 欁欁 本文引用 : 杨琳红, 王维峰, 朱金玲, 等. 抑癌基因 PTEN 单核苷酸多态性与鼻咽癌的相关性 [J]. 新乡医学院学 报,2018,35(6):478 482.DOI:10.7683/xxyxyxb.2018.06.007.
第 期 曹 源 等 形式化方法在列车运行控制系统中的应用
第 卷 第 期 年 月 交通运输工程学报 曹 源 唐 涛 徐田华 穆建成 为了确保列车运行控制系统设计和开发的正确性 比较了仿真 测试和形式化 种能够验证 系统设计正确性的方式 根据列车运行控制系统对安全的苛求性 提出了 个与系统安全相关的重要特性 即实时性 混成性 分布 并发 性 反应性 并分析了与这些特性相关的具体形式化方法 通 过对每种形式化方法的数学基础和应用范围的分析和归类 给出了各种方法的优势和不足
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( 一 ) 方 剂 的 概 念 及 方 剂 与 治 法 的 关 系 方 剂 的 概 念 方 剂 是 在 中 医 理 论 的 指 导 下, 在 辨 识 临 床 病 证 的 基 础 上, 依 据 相 应 治 法 和 组 方 原 则, 确 定 适 当 的 药 物 剂 量 用 法, 以 防 治 疾 病 的 一 种 用 药 形 式 ( 二 ) 方 剂 学 的 发 展 简 史 先 秦 两 汉 时 期 (~ 220
第 1 期 丁艺, 等.Betatrophin 基因多态性与 2 型糖尿病的相关性 73 感基因的发现和相关机制研究, 以及对 T2DM 的早期预测和防治具有重要意义 Betatrophin 又名血管生成素样蛋白 8(Angptl8), 是一种主要在肝脏及脂肪组织表达的分泌蛋白, 在胰岛素抵抗 糖脂
第 29 卷第 1 期 2019 年 1 月 江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.29 No.1 Jan.2019 Betatrophin 基因多态性与 2 型糖尿病的相关性 丁艺, 李昊翔, 徐梦娇, 袁婧, 赵丽, 王东, 杨玲, 袁国跃 ( 江苏大学附属医院内分泌代谢科, 江苏镇江 212001) [ 摘要
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立 法 會 CB(2)2292/04-05(01) 號 文 件 ( 立 法 會 秘 書 處 撮 譯 本, 只 供 參 考 用 ) ( 香 港 律 師 會 用 箋 ) 民 政 事 務 局 許 鄔 芸 芸 女 士 : 閣 下 2005 年 7 月 5 日 來 函 收 悉 2005 年 收 入 ( 取 消 遺 產 稅 ) 條 例 草 案 律 師 會 遺 產 事 務 委 員 會 研 究 了 政 府 當 局
《美国名将全传——德怀特·戴维·艾森豪威尔》
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國 民 小 學 及 國 民 中 學 補 救 教 學 實 施 方 案 中 華 民 國 100 年 10 月 27 日 臺 國 ( 二 ) 字 第 1000193000 號 函 中 華 民 國 103 年 1 月 24 日 臺 教 國 署 國 字 第 1030004427 號 函 壹 方 案 緣 起 教 育 是 國 家 經 濟 社 會 發 展 的 重 要 投 資, 落 實 教 育 機 會 均 等 的 理
$$ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 #&0# " # +&4&4 "&4 # +#+# # &4&4 "&4 &&0# "+""""- "+ 0# "+" # #"#- &$&/1# +"%#()$*%+" # "<&%$4 &$$&$&& % #()$*%-" # "& -. /,' #- %
第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 临床研究 冠心病患者外周血人枯草溶菌素转化酶 基因 位点的多态性及其临床意义 张明明 刘 欣 高 伟 张翠改 赵 培 于悦卿 吴惠珍 李亚丽 $ 河北省人民医院 检验科 超声科 体检中心 药学部 $ 生殖遗传科 河北石家庄 $$ 摘要 目的 探讨外周血人枯草溶菌素转化酶 %&'% 基因 多态性与不同类型冠心病之间的关系及临床意义
股票代码：600401 股票简称： 海润光伏
股 票 代 码 :600401 股 票 简 称 : 海 润 光 伏 海 润 光 伏 科 技 股 份 有 限 公 司 2014 年 第 二 次 临 时 股 东 大 会 会 议 资 料 二 一 四 年 二 月 十 日 目 录 一 海 润 光 伏 科 技 股 份 有 限 公 司 2014 年 第 二 次 临 时 股 东 大 会 会 议 须 知 二 海 润 光 伏 科 技 股 份 有 限 公 司 2014
第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医外科学 -01 普通外科疾病研究 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 中医外科学 -02 肛肠外科疾病研究 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 )
2012 级七年制选择 5+3 培养模式转段结果 学号录取学院录取专业 方向 039012123 002 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科学 -01 肾脏病临床研究 032012310 002 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科学 -01 肾脏病临床研究 039012128 002 第一临床医学院 ( 江苏省中医院 ) 105701 中医内科学
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63 2002 7 ( ) ( 100871) [ ] K262. 81g. 82 [ ] A [ ] 058320214 (2002) 0720063211 ; [ 44 ] (p 202) 12 : ; ; ; : [ 42 ] (p 129 216) [ 11 ] [ 32 ] (1926 11 19 ) 1927 ( ) ; [ 45 ] (p108) [ 43 ] (p 5142515 5222523)
医学遗传学
What makes us different from each other? The answer is POLYMORPHISMS 突变类型 突变效应 点突变 序列重排 动态突变 有害突变 有利突变 中性突变 DNA 多态 (DNA polymorphism) 表型水平 : 单 / 双眼皮 左 / 右利手 多态 蛋白水平 :ABO 血型 MN 血型 染色体水平 : 随体有 / 无 大 / 小
食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷
第 卷第 期 年 月 食品与生物技术学报 山药多糖研究进展 王洪新 王远辉 江南大学食品学院 江苏无锡 山药是药食兼用植物 山药多糖被认为是山药中重要的活性物质 综述山药多糖的提取分离工艺 纯化方法 化学结构分析和生理活性研究的现状 为未来研究山药多糖的新提取工艺 探讨构效关系 作用机制提供参考 山药多糖 研究进展 提取与分离 食 品 与 生 物 技 术 学 报 第 卷 第 期 王洪新等 山药多糖研究进展
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南通大学杂志社 南通大学学报 医学版. */(& 0 1&( () (' / ' '-& -' (- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志
.*/& 0 1&) '/' '-& -'- 评价血清 %'8$ 在肝细胞肝癌诊断中的作用 张 玉 邵建国 陈 琳 卞兆连 管海涛 南京中医药大学 南京 江苏省南通市第三人民医院肝病研究所 摘 要 目的 探讨血清 %'8$ 作为一种新的生物标志物在肝细胞肝癌 2&-*&/ -&/-'%&3 44 诊断中 的作用 方法 采用实时定量聚合酶链式反应 /&$'% 9*&'&' 2%/& -&' /&-'3